全 文 ：中国组织工程研究与临床康复 第 15 卷 第 23 期 2011–06–04 出版
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research June 4, 2011 Vol.15, No.23
ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 4287
1Department of
Orthopaedics, Wuxi
Hospital of TCM,
Nanjing University of
Chinese Medicine,
Wuxi 214001,
Jiangsu Province,
China; 2Life School of
Nantong University,
Nantong 216001,
Jiangsu Province,
China

Zhang Ai-guo☆,
Doctor, Associate
chief physician,
Master’s supervisor,
Department of
Orthopaedics, Wuxi
Hospital of TCM,
Nanjing University of
Chinese Medicine,
Wuxi 214001,
Jiangsu Province,
China
hazag@163.com

Correspondence to:
Cai Jian-ping, Master,
Chief physician,
Department of
Orthopaedics, Wuxi
Hospital of TCM,
Nanjing University of
Chinese Medicine,
Wuxi 214001,
Jiangsu Province,
China
hazag@163.com

Supported by:
Specific Fund for
Traditional Chinese
Medicine Research,
State Administration
of Traditional Chinese
Medicine of China,
No. 06-073921*

Received: 2010-12-11
Accepted: 2011-02-14






四种中药煎剂和雪莲花醇提液对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响*☆
张爱国1，蔡建平1，许宝满1，谭湘陵2
Effect of four traditional Chinese medicine decoctions and ethanolic extract from Saussurea
involucrata on bone marrow mesenchymal stem cell proliferation activity in vitro
Zhang Ai-guo1, Cai Jian-ping1, Xu Bao-man1, Tan Xiang-ling2
Abstract
BACKGROUND: Recent medical literature reports indicate Chinese medicine can promote bone mesenchymal stem cells
(BMSCs) proliferation.
OBJECTIVE: To explore the effect of single herb Radix Astragali, Salvia, Herba Epimedii, and compound Youguiyin decoction
and ethanolic extract of Saussurea involucrata on rat BMSCs proliferative activity in vitro.
METHODS: BMSCs were isolated and cultured from rat femur and humerus by conventional method. Through high pressure
sterilization, the ethanolic extract of Saussurea involucrata and other single herb and compound herb decoction were
administered to the third passage BMSCs with 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 concentrations. The cell proliferative activity was determined
by MTT method 3 days after culture.
RESULTS AND CONCLUSION: The herb decoction of Radix Astragali, Youguiyin and the ethanolic extract of Saussurea
involucrata promoted BMSCs proliferation with all four concentrations (P < 0.01). The ethanolic extract of Saussurea involucrata
and the herb decoction of Radix Astragali and Youguiyin showed the positive effect on rat BMSCs proliferative activity in vitro.

Zhang AG, Cai JP, Xu BM, Tan XL.Effect of four traditional Chinese medicine decoction and ethanolic extract from Saussurea
involucrata on bone marrow mesenchymal stem cell proliferation activity in vitro.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu
Linchuang Kangfu. 2011;15(23): 4287-4290. [http://www.crter.cn http://en.zglckf.com]

摘要
背景：中药可能具有促进骨髓间充质干细胞增殖的作用。
目的：观察单味中药黄芪、丹参、仙灵脾和复方右归饮煎剂及雪莲花醇提液对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的
影响。
方法：雪莲花乙醇浸泡后定容，其他单味和复方中药水煎定容，高压灭菌。取大鼠股骨和肱骨，分离骨髓间充质干细胞，
常规培养传代 3 次后，加入煎剂及雪莲花醇提液。其浓度分为 10-2，10-3，10-4及 10-5，作用 3 d 后用四甲基偶氮唑盐法测
定细胞活力。
结果与结论：黄芪煎剂和右归饮煎剂及雪莲花醇提液 4 个浓度组均可促进骨髓间充质干细胞增殖(P < 0.05)。提示雪莲花醇
提液、右归饮煎剂和黄芪煎剂均具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。
关键词：黄芪；丹参；仙灵脾；雪莲花；右归饮；煎剂；醇提液；骨髓间充质干细胞
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.23.024

张爱国， 蔡建平，许宝满，谭湘陵. 四种中药煎剂和雪莲花醇提液对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响[J].中国组织工程研
究与临床康复，2011，15(23):4287-4290. [http://www.crter.org http://cn.zglckf.com]


0 引言

骨 髓 间 充 质 干 细 胞 (bone marrow
mesenchymal stem cells, BMSCs)是来源于中
胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能
的成体干细胞，广泛存在于全身结缔组织和器
官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富。
BMSCs不仅能够向多种组织和细胞分化，而且
易于分离、培养、扩增，易于外源基因的导入
和表达，遗传背景相当稳定。因此，BMSCs已
经成为组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面
的研究热点。
中药有两千多年的历史，资源丰富，中药
中可能有大量的能够促进BMSCs增殖、分化的
药物[1-4]。为了探讨补益类单味中药黄芪、丹参、
仙灵脾、雪莲花及复方右归饮对骨髓间充质干
细胞的影响，本文通过体外实验分析了4种中药
的煎剂及雪莲花醇提液对BMSCs体外增殖活
性的影响。

1 材料和方法

设计：细胞学体外实验。
时间及地点：于2010-05/09在江苏省南通
大学生命科学学院实验室完成。
材料：清洁级成年SD大鼠，雌雄不拘，4~6
月龄，体质量(230±20) g，由南通大学实验动
物中心提供，许可证号：SYXK(苏)2002-0019。
实验中对动物的处置符合中华人民共和国科学
技术部颁布的《关于善待实验动物的指导性意
见》的相关要求[5]。

张爱国，等.四种中药煎剂和雪莲花醇提液对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响
P.O. Box 1200, Shenyang 110004 cn.zglckf.com 4288
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1 南京中医药大学
无锡附属医院，无
锡市中医医院骨
伤科，江苏省无锡
市 214001；2南
通大学生命科学
学院，江苏省南通
市 216001

张爱国☆，男，
1968 年生，江苏
省淮安市人，汉
族，2005 年苏州
大学毕业，博士，
副主任医师，硕士
生导师，主要从事
创伤与关节骨科
以及小儿骨科和
中医骨伤的基础
与临床研究。
hazag@163.com

通讯作者：蔡建
平，硕士，主任中
医师，南京中医药
大学无锡附属医
院，无锡市中医医
院骨伤科，江苏省
无锡市 214001
hazag@163.com

中图分类号:R394.2
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2011)23-04287-04

收稿日期：2010-12-11
修回日期：2011-02-14
(20101109012/G·W)


主要试剂及仪器：








黄芪、仙灵脾、丹参、雪莲花以及复方右
归饮中的熟地、炒山药、山茱萸、枸杞、炙甘
草、杜仲、肉桂、制附子等药材均由无锡市中
医医院中药房提供，符合《中华人民共和国药
典》1995年版的有关规定。
实验方法：
煎剂和醇提液的制备：黄芪、仙灵脾、丹参
等单味中药的熬制：分别称取黄芪90 g、仙灵
脾27 g、丹参45 g(以上为3帖药的量)分别加适
量冷水浸泡40 min，大火烧开后，文火继续熬
1 h，最后定容体积为60 mL。此浓度为大鼠服
药的10倍浓度。
单味中药雪莲花的制备：取雪莲花1支，称得
其质量为5.2 g，剪碎后加适量体积分数75%乙
醇浸泡30 d，随后用2层纱布过滤液体，取所得
液体在74 ℃挥发乙醇直至无明显酒精味，定容
体积为60 mL。
复方右归饮的熬制：按《景岳全书》称取熟
地18 g、炒山药18 g、山茱萸9 g、枸杞18 g、
炙甘草9 g、杜仲18 g、肉桂9 g、制附子9 g(以
上为3帖药的量)加适量冷水浸泡40 min，大火
烧开后，文火继续熬1 h，最后定容体积为
60 mL。此浓度为大鼠服药的10倍浓度。
以上中药煎剂和醇提液后高压灭菌备用。
大鼠BMSCs的分离与培养：颈椎脱臼处死大
鼠，医用乙醇浸泡3~5 min，无菌条件下取出双
侧股骨、肱骨、胫骨，剔除肌肉和脂肪组织，
暴露骨骺端，经0.01 mol/L PBS冲洗干净后减
去两端干骺端，暴露骨髓腔，吸取L-DMEM完
全培养液冲洗骨髓腔，收集细胞，直至冲出的
液体发白为止。
加入适量新鲜培养液，用吸管轻轻吹打制
成细胞悬液，接种于25 mL培养瓶内，置体积
分数5%CO2、37 ℃饱和湿度培养箱内培养。
24 h后半量换液，72 h后全量换液，去除未贴
壁细胞。此后每两三天换液1次。
原代细胞培养六七天，待细胞生长至
80%~90%汇合时进行消化传代。取出含贴壁细
胞的培养瓶，吸出培养液，PBS缓冲液冲洗2
次，用3 mL 0.4%左右的胰蛋白酶于37 ℃下消
化3~5 min，显微镜下观察，待细胞形态开始皱
缩变圆时，用等量的完全培养液终止消化，吸
管反复轻轻无气泡吹打，制成细胞悬液，按
1∶2传代培养。
中药煎剂和醇提液干预：将第3代细胞浓度调
整为2 ×108 L-1，接种于96孔板(100 μL/孔)，培
养24 h，吸去上清，加不含血清的DMEM溶液
100 μL/孔。
培养24 h后，吸去上清，加100 μL/孔含体
积分数7%小牛血清的DMEM培养液，同时加入
黄芪、丹参、仙灵脾、右归饮煎剂及雪莲花醇
提液(浓度梯度为10-2，10-3，10-4，10-5)，70 μL/
孔药液，每个浓度5个重复孔，阴性对照孔为空
白。
培养3 d后，隔天换液，第7天加入50 g/L
的MTT 20 μL/孔，孵育4 h 后，吸去上清液后，
加DMSO 200 μL/孔，10 min后在酶标仪上测吸
光度值(A)，波长为492 nm。
MTT法检测：MTT是一种淡黄色唑氮盐，是
线粒体脱氢酶的作用底物，经活细胞内线粒体
脱氢酶的消化作用，被还原成不溶于水的蓝紫
色(formazan)结晶并沉积在细胞中，而死细胞
无此功能。
DMSO能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用
酶联免疫检测仪在492 nm波长处测定其A值，
可间接反映活细胞数量。
主要观察指标：各种药物煎剂和雪莲花醇
提液促细胞活性MTT A值，波长为492 nm。
统计学分析：统计学处理由第四作者完成，
采用 SPSS 12.0软件包进行统计学分析，资料
以x
_
±s表示，样本均数间的两两比较行t 检验，
P < 0.05认为差异有显著性意义。

2 结果

4种药物煎剂和雪莲花醇提液促细胞活性结果：
MTT检测结果显示，丹参煎剂呈现抑制细胞增
殖趋势，在10-4和10-5浓度组差异有非常显著性
意义(P < 0.01)。
仙灵脾煎剂在10-2和10-3浓度组呈现抑制
细胞增殖趋势，差异具有显著性意义 (P <
0.05)；
黄芪煎剂和右归饮煎剂及雪莲花醇提液4
个浓度组均显著促进细胞增殖(P < 0.01)，见图
1~5及表1。
试剂及仪器 来源
淋巴细胞分离液
L-DMEM
胰蛋白酶、四甲基偶氮唑盐(MTT)
酶标仪
二甲基亚砜(DMSO)
戊巴比妥钠(分析纯)
上海试剂二厂
GIBCOBRL 公司
Sigma USA
美国
-
-

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3 讨论

BMSCs的研究已成为干细胞研究领域的热点和前
沿。作为博大精深的祖国医学，种类繁多和成分复杂的
中草药能否对BMSCs的增殖有所影响，本文选择了单
味中药黄芪、丹参、仙灵脾和复方右归饮的煎剂以及单
味中药雪莲花的醇提液，观察其对体外培养BMSCs增
殖的影响。
黄芪有效成分具有保护和修复红细胞变形能力，降
低血液黏度，减轻血小板黏附率及抑制血小板聚集，扩
张血管，降低血脂，改善微循环和清除自由基等作用[6]。
王明宁等[1]使用黄芪注射液未见其对BMSCs有增殖作
用，也有研究提出黄芪具有诱导BMSCs向神经干细胞分
化的作用[7-14]。本实验结果显示在黄芪煎剂在4个浓度组
均显著促进BMSCs增殖(P < 0.01)。丹参主要成分有脂
溶性成分丹参酮、丹参酮A、丹参酮B、隐丹参酮、二
0.20
0.16
0.12
0.08
0.04
0
A
Blank control
group
aP < 0.01, vs. blank control group
10-2 10-3 10-4 10-5
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0
A
aP < 0.01, vs. blank control group
10-2 10-3 10-4 10-5
a
a
a
a
a
a
0.18
0.16
0.14
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0
A
aP < 0.01, vs. blank control group
10-2 10-3 10-4 10-5
a
a
a
a
0.24
0.20
0.16
0.12
0.08
0.04
0
A
aP < 0.01, vs. blank control group
10-2 10-3 10-4 10-5
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0
A
aP < 0.01, vs. blank control group
10-2 10-3 10-4 10-5
a
a
a
a
a
a
a
a
Figure 1 Stctistic chart of Radix Astragali decoction in
promoting cell activity
图 1 黄芪药物煎剂促细胞活性统计图
Blank control
group
Figure 2 Stctistic chart of Salvia decoction in promoting
cell activity
图 2 丹参药物煎剂促细胞活性统计图
Blank control
group
Figure 3 Stctistic chart of Herba Epimedii decoction in
promoting cell activity
图 3 仙灵脾药物煎剂促细胞活性统计图
Blank control
group
Figure 4 Stctistic chart of Saussurea involucrata alcohol
extract in promoting cell activity
图 4 雪莲花醇提液促细胞活性统计图
Blank control
group
Figure 5 Stctistic chart of Youguiyin decoction in promoting cell
activity
图 5 右归饮药物煎剂促细胞活性统计图
表 1 各种药物煎剂和雪莲花醇提液促细胞活性 A 值比较
Table 1 Comparison of four drug decoctions and Saussurea
involucrata alcohol extract in promoting cell activity A
value (x
_
±s, n=5)

Foundation of the culture medium: low sugar DMEM + 7% bovine serum;
aP < 0.05, bP < 0.01, vs. control group
Concentration
Drug Control group
10-2 10-3

Radix Astragali

0.074±0.003

0.177±0.015b

0.145±0.018b
Salvia 0.194±0.013 0.178±0.016 0.176±0.031
Herba Epimedii 0.139±0.015 0.131±0.016a 0.120±0.007a
Saussurea involucrata 0.062±0.001 0.146±0.025b 0.185±0.021b
Youguiyin 0.066±0.004 0.173±0.039b 0.187±0.037b

Concentration
Drug
10-4 10-5

Radix Astragali

0.120±0.021b

0.143±0.017b
Salvia 0.136±0.015b 0.116±0.012b
Herba Epimedii 0.135±0.026 0.138±0.027
Saussurea involucrata 0.126±0.017b 0.140 ±0.021b
Youguiyin 0.170±0.013b 0.193±0.023b


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氢丹参酮等，水溶性成分丹参素等[15-20]。有研究证明
丹参有促进人成骨细胞增殖和分化的作用[21]。本实验
结果显示丹参煎剂呈现抑制BMSCs增殖，在10-4和10-5
浓度组差异有非常显著性意义(P < 0.01)。仙灵脾具有
增强机体免疫力作用，可不同程度减轻肾脏组织学改
变，并可通过下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴调节皮质类固
醇激素含量 [22]。本实验结果显示仙灵脾煎剂在10-2和
10-3浓度组抑制BMSCs增殖，差异具有显著性意义(P <
0.05)。雪莲花中的黄酮成分之一高丰前素(hispidulin)具
有消除自由基及抗疲劳作用。雪莲黄酮总甙可增强机体的
免疫功能。祖国医学认为，雪莲具有补肾壮阳、强壮筋骨、
扶正固本等提高机体免疫功能。本实验结果显示，雪莲花
醇提液在4个浓度组均显著促进BMSCs增殖(P < 0.01)。
研究表明右归饮能促进骨髓基质干细胞向软骨细
胞分化。沈自尹提出右归饮可以有效保护皮质酮对下丘
脑-垂体-肾上腺-胸腺轴的抑制。右归饮还可以通过增
加碱性磷酸酶的活性促进钙沉积，从而引起成骨。同时
右归饮含药血清可以促进成骨细胞增殖，从而进一步引
起成骨作用。本实验结果显示，右归饮煎剂在4个浓度
组均显著促进BMSCs增殖(P < 0.01)。
本实验中雪莲花醇提液、黄芪煎剂和复方右归饮煎
剂在所选择的4个浓度组中均呈现显著的促进BMSCs
增殖趋势，这种结果目前尚未见其他相关报道，有关其
中具体作用机制或其产生作用的有效成分等有待进一
步深入研究。

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岑洁,王怡.温补肾阳法治疗慢性肾衰竭[J].上海中医药杂志,2007,
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来自本文课题的更多信息--
基金资助：国家中医药管理局中医药科学技术研究专项
基金资助(06-073921)“补益类中药对软骨损伤修复机制作
用研究”。
致谢：对江苏省南通大学生命科学学院提供的帮助和工
作方便表示衷心的感谢。
作者贡献：实验设计由第一作者完成，实施由第一、二、
三、四作者完成，评估由第二作者完成。
利益冲突：课题未涉及任何厂家及相关雇主或其他经济
组织直接或间接的经济或利益的赞助。
伦理批准：实验中对动物的处置符合中华人民共和国科
学技术部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》的相关
要求。
本文创新性：检索 HighWire、PubMed、CHKD 期刊全
文数据库的相关文献，使用右归饮和黄芪药物煎剂以及雪莲
醇提液观察其对骨髓间充质干细胞的作用尚未见报道。文章
旨在观察单味中药黄芪、丹参、仙灵脾和复方右归饮煎剂及
雪莲花醇提液对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的
影响，结果提示雪莲花醇提液、右归饮煎剂和黄芪煎剂均具
有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。