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[基金项目] 国家“十一五”科技支撑计划重点项目“中药复方质量控制与评价方法研究”子课题(编号:2006BA108B03-05)　[ 作者简介] 郭兆
荣 ,男 , E-mail:gz r1985@163.com 　[ 通讯作者] 许琼明,男 ,博士 ,讲师 ,电话:0512-65880301 , E-mail:xu qion gming@suda.edu.cn
高效液相色谱-蒸发光散射法测定雪胆
胃肠丸中黄芪甲苷的含量
郭兆荣1 , 2 ,李笑然1 ,杨世林1 , 2 , 3 ,许琼明1 ,高红伟1 ,
董更婷1 　(1.苏州大学药学院 , 江苏 苏州 215123;2.江西
中医学院 ,江西 南昌 330004;3.中药固体制剂制造技术国家
工程研究中心 ,江西 南昌 330006)
[ 摘要] 　目的:建立雪胆胃肠丸中黄芪甲苷含量测定的方
法。方法:采用 HPLC-ELSD 法 , ODS2 柱(250 mm ×4.6
mm , 5 μm , Hype rsil), 乙腈-水(35∶65)为流动相;流速 1.0
mL·min -1 ;柱温:25 ℃;检测器:SHIMADZU ELSD-LT Ⅱ型
检测器;检测温度:40 ℃;ELSD 载气:高纯氮气:载气压力:
0.35 M Pa。对黄芪甲苷峰面积值的常用对数值采用外标二
点法计算其含量。结果:黄芪甲苷在50.4～ 252.0 mg·L-1范
围内与其峰面积线性关系良好 , 其平均回收率为100.78%,
RSD为0.93%(n=6)。结论:所建方法简便易行 、准确可靠 ,
可用于雪胆胃肠丸中黄芪甲苷的含量测定。
[ 关键词] 　雪胆胃肠丸;黄芪甲苷;高效液相色谱-蒸发光散
射法;含量测定
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2010)01-0088-02
　　雪胆胃肠丸是从苗族民间传统秘方中开发出来的中药
复方 ,含有雪胆 、吴茱萸 、木香 、白及 、黄芪等十多味中药材。
经临床研究表明 ,雪胆胃肠丸对胃炎 、萎缩性胃炎 、十二指肠
溃疡等疾病有独特的疗效。黄芪是雪胆胃肠丸(国家药品食
品监督管理局试行标准:WS-10312(ZD-0312)-2002)中
一味重要的药材 ,具有补脾益气的功能。黄芪甲苷(astrag a-
loside Ⅳ)是黄芪的主要活性成分之一 ,具有降压 、镇痛 、镇惊
等作用[ 1] ,可以作为黄芪的指标成分。目前 , 黄芪甲苷的含
量测定方法主要有薄层扫描法(TLCS)[ 2] 、比色法(colo rime-
try method)[ 3] 、高效液相-紫外检测法(HPLC-UVD)[ 4] 、高效
液相-示差折光检测法(HPLC-RID)[5]和高效液相-蒸发光散
射检测法(HPLC-ELSD)[ 6] 法。由于复方中药制剂组分复
杂 ,用薄层扫描法 、比色法测定时受实验条件的影响较大 ,重
现性也较差;在用高效液相-紫外检测法测定时 , 由于黄芪甲
苷只在紫外末端有吸收 ,若采用低波长(200～ 210 nm)检测 ,
则溶剂背景难以消除 ,难以得到理想的测定结果。示差折光
检测器是基于样品组分的折射率与流动相溶剂折射率有差
异原理;蒸发光散射检测器是基于把从色谱柱分离的组分雾
化为小颗粒 ,在其穿过光束时导致光散射而被检测。这 2 种
检测器均能够避免紫外检测时末端吸收的缺陷。但是考虑
到示差折光检测器对环境要求极为苛刻 , 而且灵敏度低 ,而
利用蒸发光散射检测器可以利用黄芪甲苷分子量大 , 熔点较
高的优点 ,有效避免因为末端吸收而带来的杂质峰干扰 ,是
测定黄芪甲苷较理想的方法。因此本实验采用 H PLC-
ELSD法测定雪胆胃肠丸中黄芪甲苷的含量。
1　材料
日本 SH IMADZU LC - 20A 高效液相色谱仪 , SH I-
M ADZU ELSD-LT Ⅱ型检测器 , LC So lution 化学工作站;
S E-93自动双重蒸馏水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂);黄
芪甲苷对照品(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ,
批号 1083-050414 , 供含量测定用), 使用前置硅胶干燥器中
干燥至恒重;甲醇 、乙腈为色谱纯 , 其余试剂为分析纯 , 水为
注射用水;雪胆胃肠丸(批号 070401 , 070402 , 070403 , 规格:
4.5 g/袋 ,昆明生达制药有限公司)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:ODS2 柱(250 mm ×4.6 mm , 5
μm , H ypersil);柱温:25 ℃;流动相:乙腈-水(35∶65);流速:
1.0 mL·min -1 ;检测温度:40 ℃;灵敏度:7;ELSD载气:高纯
氮气:载气压力:0.35 M Pa。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液　精密称取黄芪甲苷对照品 12.60 mg ,
置于 50 mL 量瓶中 , 加甲醇溶解并定容 , 制成质量浓度为
252.0 mg·L -1的对照品储备液。精密量取该储备液 5.0
mL , 置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得。
2.2.2　供试品溶液　参照中国药典 2005 年版一部[ 7] 中黄
芪药材含量测定项下供试品的制备方法 , 取本品 120 丸 , 切
碎 ,取粉末约6.0 g , 精密称定 , 精密加入等量的硅藻土 , 研
匀 ,精密称取约 10 g , 置索氏提取器中 , 加入甲醇 50 mL , 浸
泡过夜 ,再加入适量甲醇 ,加热回流 4 h , 提取液回收溶剂并
浓缩至干 ,残渣加水 10 mL ,微热使溶解 , 用水饱和的正丁醇
提取 3 次 ,每次 40 m L , 合并正丁醇液 , 用氨试液充分洗涤 2
次 ,每次 40 m L ,合并正丁醇液 , 减压浓缩至干 , 加适量甲醇
溶解 ,转移至 2 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2.2.3　阴性样品溶液　按处方比例称取不含黄芪的阴性样
品 ,按上述方法制备阴性样品溶液。
2.3　系统适用性试验　分别取对照品溶液 , 供试品溶液及
阴性对照溶液各 20 μL 进样测定。在选定色谱条件下 , 黄芪
甲苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离 ,分离度大于 1.5 ,
按黄芪甲苷峰计算 , 理论板数在 8 000以上 , 拖尾因子为
0.97;阴性对照溶液在黄芪甲苷色谱峰位置处无相应色谱峰
出现。色谱图见图 1。
图 1　雪胆胃肠丸色谱图
A.对照品;B.样品;C.阴性;1-黄芪甲苷
Fig 1　Chromatogram s of Xuedan Weichang pil l
A.referen ce su bstance;B.sample;C.negative sample;1-ast ragalo-
side Ⅳ
2.4　线性关系考察　分别精密量取“2.2” 项下的对照品溶
液2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 , 10.0 mL 置于 10 mL 量瓶中 , 用甲醇稀
释至刻度 , 摇匀 , 分别吸取上述溶液 20 μL 注入高效液相色
·88· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 1期 Chin H osp Pharm J , 2010 Jan , Vol 30 , No.01
谱仪 ,记录色谱图 , 测定其峰面积 , 以质量浓度(C)的常用对
数值(X)为横坐标 , 峰面积值(A)的常用对数值(Y)为纵坐
标 ,进行线性回归 , 得黄芪甲苷的回归方程:Y =1.460 4X +
3.137 5 , r2 =0.999 5。黄芪甲苷在 50.4 ～ 252.0 mg·L-1范
围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　精密吸取上述对照品溶液 , 重复进样 6
次, 每次 20μL ,结果黄芪甲苷的峰面积 RSD为0.79%(n=6)。
2.6　稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液 20 μL , 分别于
0 , 3 , 6 , 12 , 24 h 进样 ,结果计算得黄芪甲苷的 RSD为 1.75%
(n=5)。
2.7　重复性试验　取同一批(批号 070401)样品 6份 , 分别
精密称定 , 制备供试品溶液 , 20 μL 进样测定 , 结果计算得
黄芪甲苷的 RSD为1.63%(n=6)。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的样品(每克含黄芪甲
苷0.046 96 mg)约6.0 g 共 6 份 ,精密称定 , 每份分别加入黄
芪甲苷对照品适量 , 按上述供试品溶液制备方法 , 制备加样
回收供试品溶液 ,并注入高效液相色谱仪 , 记录峰面积 ,计算
黄芪甲苷的回收率。结果见表 1。
表 1　加样回收率测定结果(n=6)
Tab 1　Results o f determination of recove ry ra te after addi-
tion of sample(n=6)
样品中含量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/ %
平均回收率
/ %
RSD
/ %
0.281 7 0.226 0.505 6 99.67
0.284 2 0.226 0.517 2 101.29
0.279 5 0.283 0.560 1 99.56 100.78 0.93
0.280 4 0.280 0.569 4 101.65
0.279 4 0.338 0.623 4 100.95
0.282 5 0.336 0.628 5 101.55
[基金项目] 十一五国家科技支撑计划重大项目(编号:2006BAK03A16);国家科技型中小企业技术创新基金项目(编号:03C26216500443)　
[作者简介] 姚军 ,男 ,硕士 ,讲师 ,电话:0991-5070259 , E-mail:xydyaoju n@163.com
2.9　样品测定　分别精密吸取对照品溶液 20 , 8 μL 及供试
品溶液 20 μL , 注入液相色谱仪 , 测定黄芪甲苷峰面积 , 对峰
面积值的常用对数值以外标两点法计算含量 ,测定了 3 批样
品中黄芪甲苷的含量 , 按每袋(标示质量4.5 g)计算结果见
表 2。
表 2　样品测定结果
Tab 2　Results of samples
批号 含量/mg/袋 RSD/ %
070401 0.211 3 1.19
070402 0.236 1 1.81
070403 0.198 0 0.98
3　讨论
雪胆胃肠丸目前是执行国家药品监督管理局颁布的WS
-10312(ZD-0312)-2002 试行标准。在该标准方案中 ,以
阿魏酸为对照品 ,选择当归作为含量测定项目。 由于当归对
胃肠道疾病方面目前尚无药理作用方面的文献资料 , 以其为
质控指标难以反映该制剂的内在质量。 黄芪在该复方中是
一味重要的药材 , 其主要成分在胃肠道疾病方面有显著疗
效[ 8] 。因此 ,以黄芪甲苷为对照品 ,选择黄芪作为含量测定
项目 ,更为合适。
供试品溶液的制备主要参照中国药典 2005 年版一部[ 7]
中黄芪药材含量测定项下供试品溶液的制备方法 , 结合文
献[ 9] 报道采用索氏提取器提取的方法。在药典的制备方
案[ 7] 中 ,样品在用氨试液除去一些杂质后继续上大孔树脂柱
以进一步纯化样品 ,除去干扰杂质。而本实验在样品前处理
方案的摸索过程中发现 ,雪胆胃肠丸样品在未经大孔树脂柱
纯化处理的情况下其黄芪甲苷的峰能够完全与干扰杂质峰
分开。因此 ,本实验简化了样品处理过程 , 采用氨试液除去
杂质后直接用甲醇定容 ,供分析用。
蒸发光散射检测器的响应不依赖样品的化学性质 , 任何
挥发性低于流动相的样品均能被检测 , 且响应因子一致。本
实验使用的 SH IMADZU ELSD-LT Ⅱ型检测器是低温型的
检测器 ,当漂移管的温度为 40 ℃时可以把沸点为 100 ℃的
水完全雾化 ,能够把基线噪音控制在较低的水平。实验中发
现载气压力为0.35 M Pa 时基线噪音最小 ,故采用该条件进
行测定。
本法以黄芪甲苷为指标成分 ,测定雪胆胃肠丸中的黄芪
的含量 , 重现性好 , 无杂质峰干扰 , 简便易行 ,准确可靠 ,因
此可作为质量标准的控制指标。
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[收稿日期] 2009-02-23
六通道紫外光纤传感仪直接监测盐酸
小檗碱片溶出度
姚军1 ,沈静2 ,王岩1 ,李新霞1 ,陈坚1 　(1.新疆医科大
学药学院 ,新疆 乌鲁木齐 830054;2.新疆医科大学第五附属
医院 ,新疆 乌鲁木齐 830011)
[ 摘要] 　目的:建立盐酸小檗碱片体外溶出行为的原位 、在
线分析方法。方法:用自制六通道紫外光纤传感仪与溶出仪
联用 ,在线监测盐酸小檗碱片溶出度。结果:方法的回收率
95.8%～ 101.9%,日内 、日间精密度均小于 5%。盐酸小檗
碱片的溶出参数与中国药典方法对照差异无显著性。结论:
本法无需取液 、稀释等手工操作 , 能反映药物溶出全过程 ,为
药物内在质量的检测提供良好的手段。
[ 关键词] 　盐酸小檗碱片;光纤传感;溶出度
·89·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 1期 Chin H osp Pharm J , 2010 Jan , Vol 30 , No.01