全 文 :第40卷 第8期
2012年8月
西北农林科技大学学报(自然科学版)
Journal of Northwest A&F University(Nat.Sci.Ed.)
Vol.40 No.8
Aug.2012
网络出版时间:2012-07-18 11:27
网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20120718.1127.035.html
天名精内酯酮对小麦白粉病的药效及
病菌生长发育的影响
*
任双喜,许 丹,韩立荣,冯俊涛,张 兴
(西北农林科技大学 无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心,陕西 杨凌712100)
[摘 要] 【目的】明确天名精内酯酮对小麦白粉病的药效及其对白粉病菌生长发育的影响。【方法】采用温室
盆栽试验,测定天名精内酯酮对小麦白粉病的药效;采用离体叶段法,测定天名精内酯酮对小麦白粉病菌孢子萌发及
其菌落扩展的影响;利用生物电镜技术,观察天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌丝形态和超微结构的影响。【结果】当
质量浓度为1 000mg/L时,天名精内酯酮灌根和喷雾处理的保护效果与治疗效果分别为80.43%和88.03%与
82.69%和88.05%,且2种施药方式处理的防治效果与150mg/L三唑酮处理差异不显著。天名精内酯酮对小麦白
粉病菌孢子萌发无明显的抑制作用,但对菌落扩展存在明显的控制作用,并呈现明显的质量浓度依赖性,有效中浓度
(EC50)为105.431 4mg/L。扫描电镜观察发现,经天名精内酯酮处理后,小麦白粉病菌菌丝和分生孢子形态均发生
异常变化,表现为菌丝稀疏、表面皱缩和畸形。透射电镜观察发现,经天名精内酯酮处理后,细胞质发生紊乱;电子致
密度明显增大,菌丝坏死;细胞内各种细胞器解体,液泡明显增大,且出现空腔;线粒体肿胀,脊变短,部分脊消失。
【结论】天名精内酯酮对小麦白粉病有较高的防效,具有较优的内吸传导性能,兼具保护和治疗双重效果;天名精内酯
酮对小麦白粉病的防治作用主要是抑制菌丝的生长;天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌丝形态和超微结构的影响不同
于常用杀菌剂品种。
[关键词] 天名精内酯酮;小麦白粉病菌;药效;超微结构
[中图分类号] S435.121.4+6 [文献标识码] A [文章编号] 1671-9387(2012)08-0077-06
Efects of Carabrone on the development of Blumeria graminis
REN Shuang-xi,XU Dan,HAN Li-rong,FENG Jun-tao,ZHANG Xing
(Research and Development Center of Bionational Pesticide,Technology and Engineering Center of Biopesticide,
Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China)
Abstract:【Objective】The research tested controling effects of Carabrone against Blumeria graminis,
influence of Carabrone on spore germination and mycelial growth of B.graminis,effects of Carabrone on
morphology and ultrastructures of mycelial cel.【Method】The control effects of Carbrone against B.gra-
minis were examined by means of the pot culture experiment.The effects of Carabrone on spore germina-
tion and mycelial growth of B.graminis were examined by means of leave fragment method in vitro.The
effects of Carabrone on morphology and ultrastructure of mycelial cel of B.graminis were investigated by
means of electronic microscopy techniques.【Result】Under the 1 000mg/L concentration,the protective
effect and the curative effect of Carabrone treating was 80.43%and 82.69%by irrigation,respectively;the
protective effect and the curative effect of Carabrone treating was 88.03%and 88.05%by spraying,tre-
spectively.There was no significant inhibitory effect of Carabrone on spore germination,but it had obvious
* [收稿日期] 2012-01-04
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30971934);国家“863”计划项目(2011AA10A202-1)
[作者简介] 任双喜(1952-),男,山东济阳人,在读硕士,主要从事生物农药及植物保护研究。
[通信作者] 冯俊涛(1967-),男,河南登封人,教授,博士,主要从事生物农药及植物保护研究。E-mail:jtfeng@126.com
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2012.08.012
inhibition on mycelial growth and showed a certain degree of concentration dependence.The scanning elec-
tronic microscope study revealed that Carabrone not only inhibited the hyphal growth,but also caused a se-
ries of the shape of hyphae and conidium.These changes were generaly displayed as irregular sweling,
malformed,and shrinkage of hyphae surface.Besides,the transmission electronic microscope study caused a
series of marked structural alterations of hyphae,after treated with Carabrone,the sweled part of hyphae
and vacuoles of mycelial cel mitochondrion were swolen,the electron dense bodies increased,the mito-
chondrion irregularly sweled,the sweled part of mycelium was malformed and configuration of mycelial
cel was destroyed,etc.【Conclusion】Carabrone has certain control efficiency to B.graminis,including both
protective effect and curative effect.Carbrone mainly inhibits the growth of mycelium.Compared with other
fungicides,the changes of morphology and ultrastructures to mycelial cel induced by Carabrone is supposed
to be unique.
Key words:Carabrone;Blumeria graminis;control effect;ultrastructure
白粉病是小麦生产中最重要的病害之一,目前
生产上用于防治小麦白粉病的药剂主要是甾醇生物
合成抑制剂,而且90%以上是三唑类。近年来的研
究表明,小麦白粉病菌对三唑类杀菌剂的敏感性下
降,病菌的抗性有逐渐增强的趋势[1]。因此,开展高
效、新型防治剂的筛选、研制与应用研究,是当前小
麦白粉病治理的重要内容。天名精内酯酮是从菊科
天名精属植物大花金挖耳(Carpesium macroceph-
alumFranch.Et Sav)中分离得到的、具较强杀菌活
性的倍半萜内酯类化合物,前期研究基本明确了其
杀菌活性强度和杀菌谱,初步评价了该化合物的应
用前景[2-3]。
为进一步明确天名精内酯酮对小麦白粉病的控
制效果,本试验采用盆栽试验法和小麦离体叶段法,
结合电镜观察,较为系统地研究了天名精内酯酮对
小麦白粉病的药效及病菌生长发育的影响,旨在为
天名精内酯酮杀菌作用的进一步研发和应用提供依
据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试药剂:天名精内酯酮从大花金挖耳中分离
得到(纯度为96%),制备成10%天名精内酯酮微乳
剂待用,由西北农林科技大学无公害农药研究服务
中心提供;15%三唑酮可湿性粉剂,四川国光农化有
限公司生产。
供试病原菌:小麦白粉病菌(Blumeria grami-
nis f.sp.tritici),由西北农林科技大学无公害农药
研究服务中心提供。
供试植物寄主材料:小麦品种为“辉县红”,由西
北农林科技大学小麦中心提供。
1.2 试验方法
1.2.1 天名精内酯酮防治小麦白粉病的盆栽试验
将无菌土装至总体积为220mL纸杯的3/5处,
播种小麦,播种后18d,待小麦长至二叶期时,进行
试验。试验设天名精内酯酮1 000和500mg/L 2
个剂量处理,同时以清水和150mg/L三唑酮可湿
性粉剂作为对照。分别以手持喷雾器进行常量喷雾
或灌根(每盆10mL)进行施药,采用孢子抖落法接
菌,将处理后的小麦置于温室中培养。保护作用试
验,对小麦苗先进行天名精内酯酮喷药或灌根处理,
24h后接种小麦白粉病菌。治疗作用试验,对小麦
先接种白粉病菌,24h后再进行天名精内酯酮喷药
或灌根处理。每处理设6次重复,温室培养7d后,
用分级法调查各处理的发病情况,小麦白粉病的分
级标准参考方中达[4]的方法进行,并用下式计算病
情指数和防治效果[5]。
病情指数=(∑(各级病株数或叶数×对应发病
级数))/(调查总株数或叶数×最高发病级数)×100;
防治效果=
对照病情指数-处理病情指数
对照病情指数 ×100%。
1.2.2 天名精内酯酮对小麦白粉病菌孢子萌发及
其菌落扩展的影响 采用离体叶段法测定天名精内
酯酮对小麦白粉病菌孢子萌发及其菌落扩展的影
响。保绿保湿培养基的制作:苯并咪唑(50mg/L)
作保绿剂,琼脂(5g/L)作保湿剂和浮载剂。温室隔
离培养小麦至二叶期时,剪取叶片中段(长2.5
cm),分别用31.25,62.5,125,250,500,750mg/L
的天名精内酯酮和清水(对照,CK)浸泡叶段20min
后,将叶片正面朝上摆放在保绿保湿培养基上。为
使接菌均匀和消除误差,在同一培养皿内,同时摆放
不同药剂处理的叶段,即每皿摆放7个叶段,设10
87 西北农林科技大学学报(自然科学版) 第40卷
个重复(10皿),置于培养箱(温度18℃,光照14h、
黑暗10h交替)中进行培养,24h后接种新鲜小麦
白粉病菌孢子。分别于接种后2,8,12h取样观察
白粉病菌孢子的萌发情况。
培养7d后,参考方中达[4]的方法,分级调查各
处理的发病情况,计算病情指数和室内药效,用机率
值分析法求出毒力回归方程,对方程进行χ
2 检验,
并求出有效中浓度(EC50)及其95%置信限。
1.2.3 天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌丝形态和
超微结构的影响 无菌土育苗,待小麦长至二叶期
时采用孢子抖动法接种后,放入人工光照培养箱(18
℃,光照14h、黑暗10h交替)中培养,24h后用
1 000mg/L天名精内酯酮进行常量喷雾处理,7d
后取病健交界部位的一小块组织用于电镜样品的制
备。以喷清水作为对照。扫描电镜和透射电镜样品
的加工按康振生[6]的方法进行。
1.3 数据处理
试验数据采用DPS分析软件[7]处理。
2 结果与分析
2.1 天名精内酯酮防治小麦白粉病的盆栽试验结
果
由表1可见,通过灌根和喷雾2种施药方式处
理发现,天名精内酯酮对小麦白粉病均有较好的控
制效果。当质量浓度为500mg/L时,天名精内酯
酮灌根处理的保护效果为66.30%,治疗效果为
74.36%;喷雾处理的保护效果为74.13%,治疗效
果为84.16%,且2种施药方式的防治效果均显著
低于150mg/L三唑酮处理。当质量浓度为1 000
mg/L时,天名精内酯酮灌根和喷雾处理的保护效
果与治疗效果分别为80.43%和88.03%与82.69%
和88.05%,且2种施药方式的防治效果与150
mg/L三唑酮处理差异不显著。比较可知,天名精
内酯酮喷雾处理和灌根处理对小麦白粉病的控制效
果相当,说明天名精内酯酮具有较强的内吸传导性
能,这有待进一步深入研究。
表1 天名精内酯酮对小麦白粉病的防治效果 (7d)
Table 1 Control effects of Carabrone against B.graminis(7d)
施药方式
Application mode
供试药剂
Tested compounds
质量浓度/
(mg·L-1)
Concentration
保护作用Protective effect
病情指数
Disease index
防治效果/%
Control effect
治疗作用Curative effect
病情指数
Disease index
防治效果/%
Control effect
灌根
Irrigation
清水 Water - 86.42 - 87.38 -
天名精内酯酮
Carabrone
500 28.76 66.30b 22.38 74.36b
1 000 17.05 80.43a 15.46 82.69a
三唑酮Triadimefon 150 18.85 78.17a 14.24 83.33a
喷雾
Spraying
清水 Water - 88.20 - 85.12 -
天名精内酯酮
Carabrone
500 22.84 74.13b 13.51 84.16b
1 000 10.46 88.03a 10.16 88.05ab
三唑酮Triadimefon 150 10.14 88.51a 8.47 90.06a
注:表中数据为6次重复的平均值;同列数值后标不同小写字母者表示在P=0.05水平上差异显著。
Note:The data of the table was the average of 6groups;Data in a column with the different normal letters means significant difference at
P=0.05leve1.
2.2 天名精内酯酮对小麦白粉病菌孢子萌发及其
菌落扩展的影响
采用离体叶段法测定了天名精内酯酮对小麦白
粉病菌孢子萌发的影响,2h后进行观察发现,天名
精内酯酮处理与对照孢子均未出现萌发现象;8h
后观察发现,对照小麦白粉病菌孢子萌发率为
65.3%,天名精内酯酮不同剂量处理孢子的萌发率
为50%~60%;12h后观察发现,不同剂量的天名
精内酯酮处理与对照的孢子萌发率均在85%以上,
各处理间无明显差异。说明天名精内酯酮对小麦白
粉病菌孢子萌发无明显的抑制作用。
天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌落扩展的影响
见表2。
表2 天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌落扩展的影响
Table 2 Effects of Carabrone on mycelial
growth of B.graminis
天名精内酯酮质量浓度/
(mg·L-1)
Fungicide dosages
病情指数
Disease index
防治效果/%
Effectiveness
750 14.3 85.7
500 27.0 73.0
250 30.2 69.8
125 46.0 54.0
62.5 58.7 41.3
31.25 74.6 25.4
CK 100.0 -
表2表明,天名精内酯酮对白粉菌菌落的扩展
具明显控制效应,且呈明显的质量浓度依赖关系。
97第8期 任双喜,等:天名精内酯酮对小麦白粉病的药效及病菌生长发育的影响
经拟合可得天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌落扩展
的抑制毒力曲线Y=2.653 7+1.159 8x,r=
0.987 8,χ
2=8.37,EC50=105.431 4mg/L,其95%
置信限为83.610~132.948mg/L。
2.3 天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌丝形态和超
微结构的影响
天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌丝形态和超微
结构的影响见图1和图2。
图1 天名精内酯酮对小麦白粉病菌菌丝形态的影响
A、C.对照;B、D.天名精内酯酮处理;My.菌丝;Co.孢子
Fig.1 Effect of Carabrone treatment on the mycelial shape of B.graminis
A,C.Control;B,D.Carabrone treatment;My.mycelia;Co.Conidia
图2 天名精内酯酮处理对小麦白粉病菌菌丝超微结构的影响
A.对照;B,C.天名精内酯酮处理;Mi.线粒体;Va.液泡;Cy.细胞质
Fig.2 Effect of Carabrone treatment on the ultrastructure of B.graminis
A.Control;B,C.Carabrone treatment;Mi.Mitochondria;Va.Vacuole;Cy.Cytoplasm
2.3.1 对小麦白粉病菌菌丝形态的影响 扫描电
镜观察发现,未经天名精内酯酮处理(对照)的小麦
白粉病菌丝体粗细均匀,表面光滑,纤长;菌丝生长
点表面光滑无异常(图1-A);其分生孢子饱满、椭圆
形,表面光滑,呈串产生于分生孢子梗顶端(图1-
C)。经天名精内酯酮处理后,小麦白粉病菌菌丝生
长稀疏、表面皱缩,菌体出现不规则扭曲,畸形(图1-
B);分生孢子数量减少,表面皱缩、塌陷,孢子形状
不规则(图1-D)。
2.3.2 对小麦白粉病菌超微结构的影响 透射电
08 西北农林科技大学学报(自然科学版) 第40卷
镜观察发现,未经天名精内酯酮处理(对照)的小麦白
粉病菌菌丝,其各种细胞结构完整,细胞壁、核和核膜
清晰可见;细胞内电子致密物均匀而清晰,囊泡小而
数量较多;内质网发达,线粒体均匀(图2-A)。经天
名精内酯酮处理后,小麦白粉病菌菌丝细胞内各种细
胞器解体,细胞内液泡明显比对照大,且出现空腔(图
2-B);电子致密度明显增大,菌丝坏死(图2-C)。
透射电镜观察发现,未经天名精内酯酮处理(对
照)的小麦白粉病菌吸器内原生质电子致密度均匀
一致,囊泡少,吸器外壁光滑,外质膜厚度均匀、平
展;各种细胞结构完整,细胞壁、细胞核和核膜均清
晰可见,且结构正常(图3-A)。但经天名精内酯酮处
理后,细胞质发生紊乱,吸器内原生质电子致密度明
显增加,且液泡内有电子致密度高的沉积物(图3-B);
细胞内出现大量的液泡(图3-C);线粒体肿胀,脊变
短,部分脊消失,吸器液泡化现象严重(图3-D)。
图3 天名精内酯酮处理对小麦白粉病菌吸器超微结构的影响
A.对照;B,C,D.天名精内酯酮处理;Cy.细胞质;Mi.线粒体;Va.液泡
Fig.3 Effect of Carabrone treatment on the haustelum of B.graminis
A.Control;B,C,D.Carabrone treatment;Cy.Cytoplasm;Mi.Mitochondria;Va.Vacuole
3 小结与讨论
本试验中,离体叶段法测定结果表明,天名精内
酯酮对小麦白粉病菌菌落的扩展具明显控制效应;
盆栽试验结果表明,天名精内酯酮对小麦白粉病具
有保护和治疗双重效果,且灌根处理对小麦白粉病
有较好的防效,说明天名精内酯酮具有较优的内吸
传导性能。
本试验结果表明,天名精内酯酮对小麦白粉病
菌的菌丝形态和超微结构具有明显的影响,主要表
现为:1)可致小麦白粉病菌菌丝体和分生孢子形态
发生异常变化,表现为菌丝扭曲、畸形,孢子表面皱
缩,分生孢子形状不规则;2)可导致病菌菌丝细胞内
液泡明显增大,且出现空腔,电子致密度明显增大;
3)使吸器内电子致密度增高,线粒体肿胀、瓦解,吸
器严重液泡化,且液泡内有电子致密度高的沉积物。
杀菌剂对病菌菌丝形态的影响和其作用机理有
着密切的联系。三唑类杀菌剂是目前生产和应用最
多的一类杀菌剂品种,主要通过阻碍真菌麦角甾醇
的生物合成而影响真菌细胞壁的形成[8]。三唑类杀
菌剂对植物病原菌菌丝形态和超微结构的影响主要
表现在:使菌丝不规则肿胀,分枝明显增多,菌丝细
胞壁不规则加厚,形成不均匀的隔膜[9-11]。其他类
杀菌剂因其作用机理不同,对病菌细胞形态的影响
也不同。例如苯并咪唑类杀菌剂首先与构成纺缍丝
的微管蛋白结合,使微管的形成受阻,从而破坏纺缍
18第8期 任双喜,等:天名精内酯酮对小麦白粉病的药效及病菌生长发育的影响
丝的功能,阻碍细胞正常的有丝分裂,使病菌不能正
常生长[12];苯酰胺类杀菌剂可引起病菌细胞核的退
化,使细胞质中核糖体数量减少,从而抑制了病菌细
胞核糖体的合成[12];而甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂是
通过干扰病原真菌的呼吸作用来发挥杀菌作用的,
它是一种真菌细胞色素bc1的呼吸抑制剂[13]。本
研究结果表明,经天名精内酯酮处理后,其可致小麦
白粉病菌菌丝体和分生孢子形态发生异常变化,使
线粒体肿胀、瓦解。可见天名精内酯酮的作用方式
和抑菌机理与现有的杀菌剂有较大差异。
冯俊涛等[2]研究表明,天名精内酯酮对多种病
原菌的菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作
用[2]。一般认为,杀菌剂抑制菌丝生长是其影响了
病原菌的生物合成;孢子萌发受抑则是病原菌的生
物氧化或生物呼吸受到了影响,而使其能量供应受
阻[14]。本研究结果表明,天名精内酯酮对小麦白粉
病菌孢子的萌发无明显抑制作用,但对小麦白粉病
菌菌落扩展具明显的控制效应,并可致小麦白粉病
菌菌丝体形态发生异常变化,使线粒体肿胀、瓦解,
这可能是由于经天名精内酯酮处理后,对小麦白粉
病菌的生物合成和生物氧化过程均有不同程度的影
响,使得菌丝体内的合成代谢或能量代谢受到抑制,
进而影响细胞的生理生化过程,使细胞的代谢紊乱,
最终导致病菌细胞死亡,对此尚需通过进一步的生
理生化研究来证明。下一步工作重点是通过对天名
精内酯酮这一天然产物杀菌作用机制的深入探讨,
希望发现新的作用靶标,并开发出新类型杀菌剂。
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