全 文 ：174 Acta Nutrimenta Sinica,Apr.,2008, Vol.30 No.2

刺儿菜提取物抗 BEL-7402 肿瘤细胞活性的研究

李桂凤，马吉祥 1，李传胜 2，李瑞菊，万春燕，李慧冬
（山东省农业科学院中心实验室，济南，250100；1 山东省疾病预防控制中心，济南 250014；2 山东省
潍坊市妇幼保键医院, 潍坊 260000）

【摘 要】目的 研究刺儿菜提取物对 BEL-7402 肿瘤细胞生长的抑制作用，观察提取物作用下肿瘤
细胞的凋亡情况。方法 利用 MTT 比色法测定提取物对 BEL-7402 肝癌细胞生长的抑制率；采用透射
电镜观察法和 TUNEL 染色法研究了刺儿菜提取物诱导肝癌细胞凋亡。结果 刺儿菜提取物 10，20，40，
80 mg/L 对肝癌细胞有明显的抑制作用，随提取物浓度的增加和培养时间的延长，抑制作用逐渐增强；
对该提取液处理培养 24，48，72，96h 的细胞凋亡指数有显著差异。结论 刺儿菜提取物对肿瘤细胞生
长有抑制作用。[营养学报，2008，30（2）：174－176 ]

关键词：刺儿菜； 提取物； BEL-7402 肿瘤细胞
中国分类号：R151 文献标识码：A 文章编号： 0512-7955（2008）02-0174-03

INHBITION OF CEPHALANOPLOS (BUNGE) KITAM EXTRACT
ON LIVER BEL-7402 CANCER CELLS

LI Gui-feng，MA Ji-xiang，LI Chuan-sheng，LI Rui-ju，WAN Chun-yan，Li Hui-dong
(The Central Laboratory,Shandong Academy of Agriculture Science,Jinan 250100；Shandong Center Control and Prevention,Jinan 250014；The
Hospital of Mother and Child Care,Shandong Province,Weifang,260000, China)

【Abstract】 Objective To study the inhibition of Cephalanoplos(Bunge) kitam extract on human
liver cancer cells. Method The inhibition of Cephalanoplos(Bunge) kitam extract on human liver cancer
cells was measured with MTT colorimetic method, The human liver cancer cell apoptosis was studied by
transmission electron microscope and TUNEL staining. Results The inhibition was enhanced with
concentration increase of Cephalanoplos(Bunge) kitam extract and time of culture. With Cephalanoplos
(Bunge) kitam extract 10, 20, 40, 80 mg/L for 24 ,48, 72 ,96h ,the cell apoptosis was significant by T test.
Conclusion Cephalanoplos(Bunge) kitam extract can inhibit the growth of BEL-7402 cancer cells.[ACTA
NUTRIMENTA SINICA, 2008, 30(2)：174－176]

Key word: Cephalanoplos(Bunge) kitam； extract； BEL-7402 cancer cells

刺儿菜[Cephalanoplos9（Bunge）]，菊科，
别名：小蓟、刺牙菜是一种最为常见的野生蔬菜,
很易采到，食药皆优[1]。其性凉血、止血、活血
化淤、消炎、解毒[2]。有抗肿瘤作用[3]。经我们
用反相 HPLC 测定每 100g 新鲜的刺儿菜，含维生
素 K1 6.6 mg%、Se 36 μg%、VB2 0.39 mg%还含有
胆碱、皂甙、儿茶酚胺类、生物碱等[3,4]。VK1 含
量比菠菜[5]高十几倍。最近匹兹堡大学癌症研究
所肝癌中心的科学家发现维生素 K 能抑制肝癌细
胞生长，因此本研究主要探讨刺儿菜提取物抗
BEL-7402 肿瘤细胞的活性。

1 材 料 与 方 法
1.1 材料

收稿日期 2008-01-03
基金项目 山东省自然科学基金（No.Y2006B27）
作者简介 李桂凤（1953-），女，研究员，E-mail：tianshu1858@sina.com
DOI:10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2008.02.017
营养学报2008年第30卷第2期 175
1.1.1 刺儿菜：从千佛山采集，取其可食部分，
洗净擦干备用。
1.1.2 刺儿菜提取物：称取洗净擦干的刺儿菜
1000g，加入 75%的食用乙醇 1000 ml，放入搅拌
机搅匀，再加入 1000 ml 75%食用乙醇，在 50℃
的水浴上回流提取 2 h，趁热过滤,得 1 号滤液备
用；滤渣加入 2000 ml 三氯甲烷，加 200 ml 氨水，
加入（3:20=硅藻土:无水硫酸钠）10%氢氧化钾
50 ml，20 kHz 频率下超声 45 min 后过滤，得 2
号滤液，50℃的水浴上减压蒸馏回收溶剂，浓缩
至干；加入 1 号滤液在 55℃的水浴上减压蒸馏回
收溶剂，得绿色浸膏。主要成分为生物碱、皂甙、
黄酮甙，挥发油，VK1，儿茶酚胺类等物质[3]。
1.1.3 细胞株：人肝癌细胞株 BEL-7402（中国科
学院上海细胞生物研究所），用含高糖的 DMEM 培
养液培养，补充胎牛血清(12%)、链霉素（100 μg/ml）
及青霉素（100U/ml），生长于 37℃含 5%的 CO2孵
箱中。细胞凋亡原位检测试剂盒、SABC 试剂盒（中
山生物公司）。
1.2 方法
1.2.1 MTT 比色法测定人肝癌细胞株的生长抑制
率：将 BEL-7402 细胞以 105/ml 浓度接种于 96 孔
板，每孔 100 μl ,24h 后更换培养液，实验组分
别加入含 10、20、40 及 80 mg/L 浓度的刺儿菜提
取液，阴性对照不加药，空白对照只加培养液，
每组设 3 个复孔，将培养板置 37℃、5%CO2、饱
和湿度下分别培养 24、48、72、96 h,将培养后
的 96 孔板每孔加入 5 g/L 的 MTT20 μl，继续放
入培养箱孵育 4h 后，以 1200 r/min 离心 10 min，
小心吸出上清，加入 DMSO 150 μl/孔，微量振荡
器振荡 5 min 后，在全自动酶标仪读取试验波长
570 nm，参考波长 620 nm 的吸光值（OD），计算
细胞生长抑制率。
抑制率(％)＝对照组 OD 值－实验组 OD 值／
对照组 OD 值－空白组 OD 值×100
1.2.2 刺儿菜提取物诱导肝癌细胞凋亡的研究：
（1）透射电镜观察：将 BEL-7402 细胞以 105/ml，
共 3 ml 铺入培养瓶中，37℃孵育，待细胞贴壁生
长。另加含刺儿菜提取液（40 mg/L）培养液 3 ml ，
孵育 24h 。洗下瓶内细胞，以 1000 r/min 离心
10 min，PBS 洗 2 次，细胞沉淀用 4%戊二醛固定
过夜。2000 r/min 离心 10 min，加入 2%琼脂糖
搅匀，冷却后切成 1 mm3小块，用 1%四氧化锇固
定 3 h，PBS 充分清洗，梯度乙醇脱水，包埋剂包
埋，切片，醋酸双氧铀-柠檬酸铅双重染需色透射
电镜观察。（2）TUNEL 染色法：在检测中，据细
胞凋亡的形态特征与细胞坏死的形态特点不同，
进行严格区分，确保细胞凋亡判断的正确性。
置盖玻片于 6 孔细胞培养板内。取对数生长
期的 BEL-7402 细胞（细胞数为 105/ml）0.4 ml
铺于盖玻片上。37℃孵育，待细胞贴壁生长。各
孔内另加含刺儿菜提取液（40 mg/L）培养液 3 ml，
与细胞共育，时间分别为 24、48、72、96h。每
个时间组均设 PBS 对照孔，倒去孔内培养液，10%
甲醛固定。0.1mmol/L PBS 缓冲液洗涤后，0.3%
过氧化氢-甲醇溶液及预冷的 0.1% Triton-X100
处理细胞。后面步骤按中山生物公司试剂盒操作
说明进行，最后 DAB-H2O2显色，光镜下观察凋亡
细胞并计数。
实验对照：阴性对照用去掉 TdT 酶的标记体
系处理标本；阳性对照以 TACS 核酶处理、蛋白酶
消化后的标本，人为导致 DNA 断裂，通过此方法
使一份标本上所有细胞均能低强度显弱棕黄色。
凋亡指数（AI）计算方法：染色后细胞核呈
棕褐色的细胞被判为凋亡细胞。随机选取 5 个高
倍镜视野（＞1000 个细胞），分别计数凋亡细胞
数和总细胞数。AI 值按公式计算：
AI(%)=凋亡细胞数/总细胞数×100
1.3 统计方法
利用 SPSS 14.0 统计软件，采用 t 检验方法
进行统计分析。

2.结 果
2.1 对肝癌细胞的生长抑制作用（表 1）

Table 1 Inhibition effect of Cephalanoplos (Bunge)
kitam extract on the growth of liver human cancer cells
(inhibition rate,%)
Cephalanoplos kitam extract（μg/L）
Time（h）
10 20 40 80
24 7.6a 18.9b 25.7b 34.7b
48 16.8b 26.4b 38.9b 45.9b
72 25.9b 37.4b 45.5b 58.6b
96 37.9b 46.3b 59.1b 85.4b
a：P＜0.01，b：P＜0.001 compared with control

10、20、40 及 80 mg/L 浓度的刺儿菜提取液
对肝癌细胞均有明显抑制作用，抑制率与对照组
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比差异非常显著（P＜0.01），且随刺儿菜提取液
浓度增加和培养时间的延长，抑制作用逐渐增强。
2.2 诱导肝癌细胞凋亡
2.2.1 透射电镜观察：经刺儿菜提取物（40 mg/L）
处理 24 h 后，部分肝癌细胞出现典型的凋亡细胞
形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜
呈新月形小体（图 1）。



apoptotosis cells as disruption of cell nucleus,forming
plasmalemma bullule

Fig.1 BEL-7402 cancer cell changes after treatment
with Cephalanoplos (Bunge) kitam extract
(transmission electron microscope，×8000)

2.2.2 TUNEL 染色：光镜下检查可见，经刺儿菜
提取物（40 mg/L）处理 24、48、72、96 h 后，
肿瘤 BEL-7402 细胞凋亡数明显增加。棕褐色染色
颗粒定位于细胞核内。染色阳性的肿瘤细胞出现
细胞核碎裂，核质固缩，细胞膜突出形成质膜小
泡等凋亡细胞形态学变化(图 2)。



Fig. 2 Apoptosis was show in weak brown by TUNEL
staining method under light microscope (×200)

细胞凋亡指数(%)：刺儿菜提取物未处理组为
1.15±1.04，刺儿菜提取物处理24 h组的为6.94±
2.17；处理 48h 组的为 18.46±1.78；处理 72h
组的为 29.49±3.23；处理 96h 组的为 38.67±
3.67。经 t 检验，差异均有显著性（P＜0.01，表
2）。
Table 2 Apoptotic index of Cephalanoplos (Bunge)
kitam extraction（40mg/L）on (BEL-7402)cancer-cells
in diffrerent times
AI（％）
0h 24h 48h 72h 96h
Average
1.15
±1.04
6.94
±2.17
18.46
±1.78
29.49
±3.23
38.67
±3.67
Difference 5.79a 17.31a 28.34a 37.52a
P ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01
a：compared with untreat ment

3 讨 论
研究发现 10、20、40 及 80 mg/L 浓度刺儿菜
提取物对肝癌细胞均有明显抑制作用，抑制率与
对照组比较有显著性差异（P＜0.01），且随刺儿
菜提取物浓度增加和培养时间延长，抑制作用逐
渐增强。经刺儿菜提取物（40 mg/L）处理 24h
后，部分肿瘤 BEL-7402 细胞的超微结构出现典型
的凋亡细胞形态，证实刺儿菜提取物（40 mg/L）
对肝癌细胞具有诱导凋亡作用；刺儿菜提取物处
理 24、48、72、96 h 后，TUNEL 染色法发现肿瘤
BEL-7402 细胞凋亡数明显随着时间的延长而增
加，进一步证实诱导细胞凋亡是刺儿菜提取物杀
伤肝癌细胞作用机制之一。因此，探讨刺儿菜提
取物诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制有重要意义。

[参 考 文 献]
[1] 李桂凤.50 种野菜的营养价值与食疗[M].北京：金盾
出版社，2006.1－4.
[2] 扬景俊.食物药用指南[M].北京：知识出版社，1991.
310.
[3] 张秀成. 现代实用抗癌中药[M].北京：北京科学技
术出版社，1999.92－93.
[4] 李桂凤，郝征红，董淑敏,等.反相高效液相色谱法
分析刺儿菜中维生素 K1[J].色谱，1997,15.
[5] 中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所.食物
成分表[M].北京：人民卫生出版社，1991.12－15.