全 文 ：2010年
第 2期 　　　　　　
青海师范大学学报(自然科学版)
Journal o f Qinghai N ormal University(Natural Science)　　　　　　
2010
No .2
收稿日期:2010-03-10
作者简介:路朋(1979-),男 ,山东泰安人 ,青海师范大学生命与地理科学学院 07届研究生 ,研究方向为药用植物资源的开发利用.
丝毛飞廉总黄酮对 CCL4 肝损伤的保护作用
路　朋 ,曾　阳 ,郭凤霞 ,马祥忠 ,康　敏
(青海师范大学 生命与地理科学学院 ,青海 西宁　810008)
摘　要:目的　研究丝毛飞廉总黄酮对 CCL4 所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法　以小鼠为实验对象 ,腹腔注射 0.1%
CC l4 造模 ,丝毛飞廉总黄酮为实验药物,最后测定小鼠脏器指数 、血清中丙氨酸氨基转移酶(A LT)、天门冬氨酸氨基转移酶
(AST)含量以及小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果　模型组脏器指数明显高于空白组 ,
且血清 A LT 与 AST 均明显增高 ,表明 CCl4造成的小鼠化学性肝损伤实验模型建立成功;丝毛飞廉总黄酮给药组与造模组
比较 ,小鼠脏器指数 、血清中 AST 、ALT 含量以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量均有显著性差
异.结论　丝毛飞廉总黄酮对 CCL4所致小鼠急性肝损伤具有很好的保护作用.
关键词:丝毛飞廉;CCL4 肝损伤;丙氨酸氨基转移酶;天门冬氨酸氨基转移酶;超氧化物歧化酶;丙二醛
中图分类号:R285.5　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1001-7542(2010)02-0042-04
丝毛飞廉(Carduus nutans L.)为菊科飞廉属植物 ,一般全草或根入药 ,分布全国各地.其性平味
苦 ,具祛风 、清热 、利湿 、凉血止血 、活血消肿 、凉风散瘀的功效 ,主要用于治疗风热感冒 、头风晕眩 、皮肤
瘙痒 、尿路感染 、跌打瘀肿 、疗疮肿毒 、烫火伤等.现代研究表明飞廉含有降压生物碱飞廉碱和去氢飞廉
碱 ,对心血管系统有重要作用[ 1] ,还具有降压和抗炎的作用[ 2] .目前国内外学者对飞廉属植物的黄酮类
物质的研究文献报道较少.由于黄酮类有效成分对治疗冠心病 、老年性痴呆 、脑血栓 、神经系统疾病和消
除自由基 、抑菌 、抗癌等方面有显著效果 ,且副作用低[ 3] .因此提取其有效部位丝毛飞廉总黄酮 ,观察其
对 CCL4 复制的化学性肝损伤的保护作用 ,并初步探讨其保肝降酶的作用机制.
1　材料与方法
1.1　实验动物
昆明种小鼠 60只 ,雌雄各半 , 6-8周龄 ,体重 20±2g ,由青海省地方病研究所提供(批号:青医动字
第 01号).实验前于动物实验室内正常喂养一周 ,以适应实验室环境.
1.2　实验药品与试剂
丝毛飞廉总黄酮由本实验室提取[ 4] ,临用时加入蒸馏水配制成飞丝毛飞廉总黄酮高 、中 、低剂量组
分别为 200mg/ml ,100mg/ml和 50mg/ml ,给药剂量相当于总黄酮含量分别为 56g/kg 、28g/kg 、14g/
kg .4℃保存备用.阳性药物联苯双酯给药剂量为 150mg/kg .
联苯双酯滴丸:规格:1.5mg/丸 ,购自德州德药制药有限公司 ,批号:090505;
四氯化碳(CCL4):广东合山化工厂产品 ,分析纯 ,批号:091203;
超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒:南京建成生物工程研究所 ,批号:20090526;
丙二醛(MDA)检测试剂盒:南京建成生物工程研究所 ,批号:20090526;
丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒:南京建成生物工程研究所产品 ,批号:20090526;
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒:南京建成生物工程研究所产品 ,批号:20090526;
1.3　小鼠化学性肝损伤模型的制备及给药方案
将 60只小鼠随机分为六组 ,每组 10只 ,分别为正常组 、模型组 、丝毛飞廉总黄酮高剂量组 、丝毛飞
廉总黄酮中剂量组 、丝毛飞廉总黄酮低剂量组 、联苯双酯组.全部小鼠在实验期间均正常饮水 、饮食.实
DOI :10.16229/j.cnki.issn1001-7542.2010.02.015
第 2期 路朋 ,等:丝毛飞廉总黄酮对 CCL4 肝损伤的保护作用
验开始的第 1天 ,各给药组按小鼠体重 0.1ml/10g 剂量灌胃给药 ,每天一次 ,空白对照组和模型组给予
相应体积的生理盐水 ,连续灌胃给药 14d.于末次给药后 1h ,除正常对照组腹腔注射(ip)等量生理盐水
外 ,其余各组均 ip0.1%CCL4 色拉油溶液 10mg/kg[ 5] .禁食 16h 后 ,进行称重 ,眼眶采血 ,脱颈处死小
鼠 ,并摘取肝脏 、脾脏 、胸腺快速称重 ,计算小鼠脏器指数(每 10g 体重的肝脏毫克数).分离血清进行
ALT 、AST 相关指标的测定.取部分肝组织 ,用冷生理盐水漂洗后制成 1%和 10%的肝匀浆 ,离心 ,取上
清液 ,检测 SOD 、MDA 各项指标.A LT 、AST 、MDA 、SOD测定均按照试剂盒说明书进行.
1.4　数据统计处理
本实验所有数据均采用平均数±标准差( x ±SD)表示 ,由计算机用 SPSS13.0统计软件包中的
ANOVA法进行单因素方差分析处理 ,组间比较采用 t检验处理 ,P >0.05认为无显著性差异 , P<0.05
认为有显著性差异 , P<0.01认为有极显著性差异.
2　结果
2.1　飞廉总黄酮对 CCL 4所致化学性肝损伤小鼠脏器指数的影响
实验数据经统计分析表明:与空白组相比 ,模型组中肝脏指数 、脾脏指数 、胸腺指数均有显著性差异
(P<0.05),说明造模成功;与模型组相比较 ,高 、中剂量组肝脏指数和脾脏指数均有显著降低;胸腺指
数高剂量组与模型对照组比较 ,胸腺指数有显著降低(P<0.05).结果见表 1.
表 1　药物等对 CCl4 引起肝损伤小鼠脏器指数的影响( x±SD , n=10)
Table1　The effec t o f drug on activities of Viscer al index of acute liver injured mice induced by carbon tetr achloride
组别 给药剂量(g/ kg) 肝脏指数(mg/ g) 脾脏指数(m g/ g) 胸腺指数(mg/ g)
空白组 - 47.24±7.15 4.03±1.07 3.44±1.29
模型组 - 58.19±8.95＊ 5.95±0.62＊ 3.84±0.74＊
联苯双酯组 0.15 46.91±8.49# 3.81±0.51＊ 3.43±0.35
丝毛高剂量组 56 46.68±13.88# 3.78±0.39# 2.12±0.38＊#
丝毛中剂量组 28 49.10±3.35# 4.09±0.50# 3.53±0.63
丝毛低剂量组 14 51.63±5.34＊ 4.46±0.66 3.07±0.56
　　注:与空白组比较＊P<0.05;与模型组比较#P<0.05.
2.2　丝毛飞廉总黄酮对 CCL 4所致化学性肝损伤血清指数的影响
实验数据经统计分析表明:与空白组相比 ,模型组的小鼠血清中 ALT 、AST 活性升高非常明显
(P<0.01),表明 CCL4 致小鼠肝损伤造模成功.各给药组分别与模型组比较 ,联苯双酯阳性药物组及丝
毛飞廉总黄酮高 、中 、低剂量组小鼠血清中 ALT 、AST 的水平均有极显著差异(P <0.01);与空白组相
比 ,丝毛飞廉总黄酮高剂量组小鼠血清中 AST 有极差异显著(P<0.01),中剂量组小鼠血清中的 AST
的差异显著(P <0.05),结果见表 2.
表 2　药物等对 CCl4 引起肝损伤小鼠血清中 AST 、ALT 的影响(±SD , n=10)
Table2　The effect of drug on activities of ALT and AST in serum of acute liver injured mice induced by carbon tetrachloride
组别 数量(n) 给药剂量(g/ kg) AST(OD) A LT(OD)
空白组 10 — 0.135±0.019 0.074±0.010
模型组 10 — 0.319±0.067＊＊ 0.862±0.131＊＊
联苯双酯组 10 0.15 0.248±0.029＊＊# 0.183±0.074##
丝毛高剂量组 10 56 0.193±0.032＊＊## 0.105±0.026##
丝毛中剂量组 10 28 0.169±0.039＊## 0.212±0.078##
丝毛低剂量组 10 14 0.155±0.025## 0.170±0.075##
　　注:与空白组比较＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;与模型组比较#P<0.05 , ##P<0.01;
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2.3　丝毛飞廉总黄酮对 CCL 4肝损伤小鼠肝组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的影响
实验数据经统计分析表明:与空白组相比 ,模型组的小鼠肝组织中的 SOD含量显著降低 、MDA 含
量显著升高(P <0.05),表明 CCL4 致小鼠肝损伤造模成功.各给药组分别与模型组比较 ,联苯双酯阳性药
物组及丝毛飞廉总黄酮高、中 、低剂量组小鼠肝组织中的 SOD含量及 MDA 含量均有显著性差异(P<0.05);
其中丝毛飞廉总黄酮高剂量组 SOD与 MDA的含量均有极显著性差异(P<0.01),结果见表 3.
表 3　药物对 CCl4 引起肝损伤小鼠肝组织中 SOD及 MDA 的影响(±SD , n=10)
Table 3　The effect of drug on activities of SOD and MDA in mice liver of acute liver injured mice induced by carbon tetrachloride
组别 数量(n) 给药剂量(g/ kg) SOD(U ·mg -1 pro) MDA(nmol·mg -1 pro)
空白组 10 — 122.1±6.1# 0.85±0.07#
模型组 8 — 76.8±5.1＊ 1.81±0.02＊
联苯双酯组 10 0.15 100.2±6.2# 1.34±0.04＊#
丝毛高剂量组 10 56 106.7±5.8## 1.23±0.05＊##
丝毛中剂量组 10 28 94.2±6.1＊# 1.36±0.01＊#
丝毛低剂量组 10 14 89.9±5.0＊# 1.59±0.03＊
　　注:与空白组比较＊P<0.05;与模型组比较#P<0.05 , ##P<0.01;
3　讨论
卫生部颁布的《中药药理肝损实验指导原则》中明确指定应用四氯化碳肝损伤动物模型进行保肝降
酶新药的药理实验[ 6] .本模型条件要求低 ,技术易于掌握 ,可靠性强 ,重复性好.CC l4 是一种很强的亲肝
毒物 ,过氧化损伤是其肝毒性的重要机理[ 7] .其引起肝损伤的机制是:一方面 ,CCl4 在体内经肝微粒体
细胞色素 P450酶依赖的单加氧酶系代谢后 ,分子中的 C-CL 键均裂 ,生成三氯甲烷自由基(·CCl3)和
氯自由基(·CI),它们攻击肝细胞膜上磷脂分子引起脂质过氧化;另一方面 , ·CC13在体内能以最快
的速度与分子氧形成三氯甲基过氧自由基(·CC l3O2),后者具有更强的脂质过氧化作用 ,不仅可直接
引发肝细胞脂质过氧化作用 ,诱发细胞死亡[ 8] ,且其脂质过氧化物可诱导炎症反应[ 9] 、激活 KuPf fer 细
胞和肝星状细胞 ,促进肝纤维化的发生[ l0] ;这些自由基还可与细胞内大分子发生共价结合 ,也可攻击膜
不饱和脂质 ,引起脂质过氧化 ,从而引起肝细胞的损伤 ,导致肝细胞膜结构和功能的破坏 ,最终引起肝损
伤[ 11 、12] .此外 , CCL4 还抑制细胞膜上 Ca2+泵活性 ,大量 Ca2+内流 ,堆积于细胞内 ,引起细胞内 Ca2+增
多[ 13] ,破坏线粒体的结构和抑制其功能 ,磷脂酶活性被激活 ,致使膜磷脂被分解 ,溶酶体膜被破坏 ,释放
出蛋白水解酶 ,黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶 ,导致产生大量的氧自由基 ,引起肝细胞膜结构和功
能的损伤.
血清转氨酶的测定目前被认为是反映肝细胞损害程度的标准试验指标[ 14] .SOD 和 MDA 含量的
测定也是细胞氧化损伤的一个重要检测指标[ 15-16] .SOD 是细胞内主要的防御性抗氧化酶 ,能够清除自
由基 ,并可抑制自由基启动的脂质过氧化反应 ,从而起到保护细胞膜结构与功能的完整作用.SOD 对机
体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用 ,此酶能清除超氧阴离子自由基(O -2 ﹒)保护细胞免受损
伤.MDA 是机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基 ,后者能攻击生物膜中的不饱和脂肪酸 ,引发脂
质过氧化作用 ,并因此形成脂质过氧化物.如:醛基 、酮基 、羟基 、羰基 ,以及新的氧自由基等.MDA 的测
定常常与 SOD的测定相互配合 ,SOD活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力 ,而 MDA 的高
低又间接地反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度.
在本实验研究中 ,模型组小鼠的脏器指数 ,血清A LT 、AST 的含量 ,肝组织中 SOD 、MDA 的含量相
对空白对照组都有显著差异 ,说明肝损伤造模成功;飞廉总黄酮给药组与模型组比较 , ALT 、AST 的含
量显著降低 ,SOD 、MDA 的含量也有显著差异 ,说明飞廉总黄酮对 CCl4 复制的化学性肝损伤有较好的
保肝 、降酶作用.本实验结果为临床上进一步了解丝毛飞廉药理作用奠定基础 ,为利用丝毛飞廉这一宝
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贵植物资源 、开发新药及保健品 ,提供一定的药理学依据.
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Protective effect on CCl4 -induced acute liver injury
flavonoids from Garduus crispus L.in mice
LU Peng ,ZENG Yang ,GUO Feng-x ia ,MA X iang-Zhong ,K ANG Min
(College o f Biolo gic and Geographic Science Qinghai Normal University , Xining 810008 ,China)
Abstract:Objective Research the protect ion of to tal flavonoids f rom Garduus crispus L for mice
liver injury by CCl4 -induced models.Methods This experiment use mice as experimental object and
make the model by int raperi toneal injection 0.1%CCl4.This experiment use flavonoids f rom Garduus
crispus L as experimental drug.At last through the mice viscera index , biochemical , ALT levels as
well as the AS T mouse liver super o xide dismutase SOD activi ty o rganizat ion and malondialdehyde
MDA content determination , to observe the influence of liver damage wi th the f lavonoids in mice.Re-
sults Chemical liver injury in comparison w ith the contro l model group , the model g roup w as obvious-
ly higher than placebo visceral index and ALT and w ere significant ly higher , show the AS T carbon
tet rachlo ride(CCl4)copy mice chem ical liver damage test model success , Each medicine group of vis-
ceral index significant ly bet ter model g roup(P <0.05), the t reatment group than in the model group ,
the AS T A LT decreased signif icant ly (P<0.05), live r SOD in model group , MDA content increased
significant ly in model g roup significant ly reduced.Flavonoids f rom the plant can ef fectively resist the
mice liver damage caused by CCl4.Conclusion Flavonoids f rom the plant Garduus crispus.L can ef fec-
tively resist the mice liver damage caused by CCl4.
Key words:Garduus crisp us L;CCl4 ;A LT ;AST ;SOD;MDA
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