全 文 ：地胆草中去氧地胆草内酯的定性和定量方法研究
吴 静1，孙 莉1，汪剑飞1，李药兰2，3
( 1．安徽省芜湖市食品药品检验所，安徽 芜湖 241000; 2．暨南大学中药及天然药物研究所;
3．暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省重点实验室，广东 广州 510632)
摘要:目的 建立地胆草中有效成分去氧地胆草内酯的定性和定量分析方法。方法 采用薄层色谱法进行定性鉴别，薄层板
为硅胶 G板，展开剂为石油醚(60 ～ 90℃)－乙酸乙酯(2∶3)，展开后喷以 10%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点清晰;采用反
相高效液相色谱法测定含量，色谱柱为 Kromasil C18色谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 －水(35∶ 65)，流速:1． 0
mL·min －1，检测波长 208 nm，柱温:30℃。结果 供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色
的斑点;去氧地胆草内酯在 0． 005 915 ～ 0． 059 15 g·L －1范围内线性关系良好(r = 1． 000)，平均回收率(n = 6)为 98． 75%，样
品含量范围为 0． 072% ～0． 15%。结论 所建立的方法简单灵敏，准确可靠，重复性好，可用于地胆草的质量控制。
关键词:地胆草;去氧地胆草内酯;薄层色谱法;高效液相色谱法;质量控制
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2014． 10． 016
Qualitative and quantitative analysis of deoxyelephantopin
in Elephantopus scaber L．
WU Jing，SUN Li，WANG Jian-fei，et al
(Wuhu Institute for Food and Drug Control，Wuhu，Anhui 241000，China)
Abstract:Objective To establish qualitative and quantitative methods for the quality evaluation of deoxyelephantopin in Elephanto-
pus scaber L．Methods Qualitative analysis was performed on the thin-layer per － coated TLC-plates silia gel G，with petroleum ether
(60 ～ 90℃)-ethyl acetate(2∶ 3)，after spraying with 10% vanillin sulfuric acid solution，heated at 105℃ until the spots were clear．
Quantitative analysis was performed on Kromasil C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)． The mobile phase was acetonitrile-water(35∶65)at the
flow rate of 1． 0 mL·min －1，the detection wavelength was 208 nm，and the column temperature was 30℃ ． Ｒesults Test products had
the same color blotches on relative location of chromatography with Chinese herbal medicine． Deoxyelephantopin showed good linear re-
gression (r = 1． 000)within test ranges of 0． 005 915 ～ 0． 059 15 g·L －1 ． The average recovery(n = 6)was 98． 75%，and the range of
contents in the samples were 0． 072% ～0． 15% ． Conclusions The methods developed are sensitive，reliable and useful for the analy-
sis of samples purchased from different areas and can be used for the quality control of Elephantopus scaber L．
Key words:Elephantopus scaber L．;deoxyelephantopin;TLC;HPLC;quality control
地胆草为菊科地胆草属植物地胆草 Elephanto-
pus scaber L． 的干燥全草，产于广东、广西、浙江、福
建、江西、贵州及云南等地，为我国传统民间草药，
是岭南凉茶以及著名中成药“妇炎净”的主要原料。
具有清热、凉血、解毒、利湿的功效，主要用于治疗
感冒、扁桃体炎、眼结膜炎、黄疸、肾炎水肿、湿疹等
症。地胆草的化学成分主要为倍半萜类、酚酸类及
黄酮类成分［1 － 2］。现代药理研究表明，地胆草具有
抗肿瘤、抗糖尿病、解热和降血压、保肝、抗菌等活
性［3 － 4］。其中去氧地胆草内酯是该药材的主要特征
活性成分，也是对地胆草进行质量控制的主要指标
性成分。
《中国药典》1977 年版一部［5］曾以“苦地胆”之
名正式收录地胆草，标准内容规定了其来源、性状、
炮制方法、性味、功能与主治及用量与用法等项，此
后各版《中国药典》均未再收载;地胆草现亦收录于
多个地方标准中(如 2009 版的《湖南省中药材标
准》［6］和 2010 版的《广东省中药材标准》第二
册［7］)，虽然收录性状鉴别项，但均缺少薄层鉴别和
含量测定项，不能有效地控制其质量，为了完善地
胆草质量标准，提高其质量控制方法，本文研究采
用薄层色谱法和高效液相色谱法，以去氧地胆草内
酯为指标成分进行定性、定量，方法准确可靠，重复
性好。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 梅特勒 －托利多 MS105 电子分析天平
(感量:0． 01 mg 德国);梅特勒 －托利多 AB304 电
子分析天平(感量:0． 1 mg 德国)。薄层色谱自动点
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样器(CAMAG LINOMAT5)，液相色谱仪(安捷伦
1260)。
1． 2 试剂和材料 地胆草对照药材(121147 －
201003，中国药品生物制品检定所)，去氧地胆草内
酯对照品(暨南大学药学院提供)，硅胶 G薄层板购
于烟台大学生物科学与工程研究所，甲醇和乙腈为
色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。共收
集地胆草药材 15 批。
2 鉴别
取本品粉末 2 g(过二号筛)，加甲醇 30 mL，超
声提取 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣用水 30 mL 使
溶解，用乙酸乙酯提取 2 次［8］，每次 20 mL，合并乙
酸乙酯液，挥干，残渣加甲醇 1 mL 使溶解，作为供
试品溶液。取地胆草对照药材 2 g，同法制成对照
药材溶液。另取去氧地胆草内酯对照品，加甲醇制
成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄
层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液、对照
药材溶液和对照品溶液各 8 μL，分别点于同一硅胶
G薄层板上，以石油醚(60 ～ 90℃)－ 乙酸乙酯
(2∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，再喷以 10%香草
醛硫酸溶液，在 105℃加热至斑点清晰。供试品色
谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置
上，显相同颜色的斑点，结果见图 1。
图 1 地胆草薄层鉴别图
注:由左至右分别为:样品 1 ～ 15、16 地胆草对照药材、17 去氧
地胆草内酯对照品。
3 含量测定
3． 1 溶液制备
3． 1． 1 对照品溶液的制备 精密称取去氧地胆草
内酯对照品 11． 83 mg，置 20 mL 量瓶中，加甲醇使
溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精
密量取储备液 5 mL，置 50 mL 量瓶中，用甲醇稀释
至刻度，摇匀，即得。
3． 1． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过 2 号
筛)0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲
醇 20 mL，密塞，精密称定，超声处理(功率 250 W，
频率 40 kHz)20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足
减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3． 2 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅
烷键合硅胶为填充剂;以乙腈 －水(35 ∶ 65)为流动
相［9］;检测波长为 208 nm。理论板数按去氧地胆草
内酯计算不低于 3 000;去氧地胆草内酯与相邻峰
的分离度应符合要求(＞ 1． 5)，见图 2、3。
图 2 0． 05 g·L－1去氧地胆
草内酯对照品溶液的色谱图
图 3 地胆草(批号 20130205)
供试品溶液色谱图
3． 3 方法学考察
3． 3． 1 线性关系考察 吸取 3． 1． 1 项下去氧地胆
草内酯对照品储备液溶液(0． 5915 g·L －1)0． 1、0．
2、0． 3、0． 5、0． 7、0． 9、1 mL，分别置于 7 个 10 mL 容
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到标准工作溶
液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦，分别注入高效液相仪，
按3． 2项下色谱条件测定峰面积。以峰面积 A 为
纵坐标，去氧地胆草内酯的浓度 C 为横坐标，绘制
标准曲线，得回归方程:A = 11． 352 + 47069C(r =
1)，见图 4。
图 4 线性回归方程
表明去氧地胆草内酯在 0． 005 915 ～ 0． 059 15 g
·L －1范围内线性关系良好。
3． 3． 2 精密度试验 取同一供试品溶液，按“3． 2”
项下色谱条件连续进样测定 6 次，测得去氧地胆草
内酯色谱峰面积的 ＲSD(n = 6)为 0． 90%。
3． 3． 3 稳定性试验 取同一供试品溶液分别在
0、2、4、6、8 及 12 h 按“3． 2”项下色谱条件进样测
定，结果供试品溶液中去氧地胆草内酯在 12 h 内色
谱峰面积无明显变化，ＲSD(n = 6)为 0． 90%，表明
供试品溶液在 12 h内稳定。
3． 3． 4 重复性试验 取样品(批号 20130205)0． 5
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g，精密称定，按“3． 1． 2”项下方法制备供试品溶液，
在“3． 2”项下色谱件下进样测定，测得去氧地胆草
内酯的平均含量(n = 6)为 0． 118%，ＲSD为1． 99%，
表明所考察方法重复性良好。
3． 3． 5 回收率试验 精密称取已知含量的样品
(批号 20130205，去氧地胆草内酯含量为 0． 118%)
约 0． 25 g，6 份于具塞锥形瓶中，精密加入去氧地胆
草内酯对照品溶液(0． 03075 g·L －1)10 mL，再精
密加入甲醇至 20 mL，密塞称定重量，超声处理(功
率 250 W，频率 40 kHz)20 min，放冷，称定重量，用
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，吸取供试品溶液
10 μL进样，在“3． 2”项下色谱条件下分析测定，计
算回收率。结果样品中去氧地胆草内酯回收率在
95% ～ 105%之间，平均回收率为 98． 75%，ＲSD 值
为 1． 94%，符合含量测定的要求。
3． 4 样品测定 按上述确定的试验方法，分别制
备 15 批地胆草供试品溶液。精密吸取对照品溶液
与供试品溶液各 10 μL，依“3． 2”项下色谱条件测
定。扣除相应的水分后，最终测定结果见表 1。
表 1 15 批地胆草含量测定结果表
批号
水分
/%
去氧地胆草内酯
含量 /%
去氧地胆草内酯
平均含量 /%
20130512 11． 7 0． 0854 0． 0852 0． 085
20130527 12． 3 0． 118 0． 118 0． 12
20130205 10． 4 0． 152 0． 156 0． 15
20130321 12． 4 0． 0570 0． 0580 0． 058
20130402 12． 1 0． 0882 0． 0868 0． 087
20130413 11． 4 0． 0237 0． 0240 0． 024
20130517 11． 8 0． 0692 0． 0701 0． 070
20100422 10． 6 0． 119 0． 116 0． 12
20130510 11． 1 0． 136 0． 138 0． 14
20130513 9． 5 0． 149 0． 155 0． 15
20100615 9． 2 0． 0894 0． 0893 0． 089
20120701 10． 4 0． 114 0． 110 0． 11
130101 12． 5 0． 0717 0． 0717 0． 072
130505 11． 4 0． 122 0． 122 0． 12
12010078 10． 5 0． 123 0． 123 0． 12
4 讨论
4． 1 薄层色谱鉴别
4． 1． 1 提取溶剂的选择 分别选择了乙酸乙酯、
石油醚来萃取已经醇提过的供试品溶液，结果发现
用乙酸乙酯萃取效果较好。
4． 1． 2 展开剂的选择 分别选择了石油醚(60 ～
90℃)－乙酸乙酯(2∶3)，甲苯 －乙酸乙酯 －甲酸(8
∶1∶1)以及三氯甲烷 －环己烷(5∶ 1)为展开剂，结果
表明以石油醚(60 ～ 90℃)－乙酸乙酯(2∶ 3)为展开
剂的分离效果好，斑点清晰，Ｒf值适中。
4． 1． 3 耐用性试验 分别采用三个不同厂家的硅
胶 G薄层板(青岛海洋化工厂分厂，上海上邦实业有
限公司，烟台德信生物有限公司)，在温度:室温 10 ～
30℃，湿度:30% ～ 75%，对薄层色谱的结果影响不
大，均可对地胆草中去氧地胆草内酯进行定性鉴别。
4． 2 高效液相色谱含量测定
4． 2． 1 检测波长的选择 取去氧地胆草内酯对照
品，加甲醇制成每 mL 约含 4 μg 的溶液，经紫外分
光光度计，在 210 ～ 400 nm进行波长扫描，图谱显示
208 nm 处有最大吸收(图 5)，故选择 208 nm 作为
测定波长。
图 5 对照品溶液的WTH2 图谱
4． 2． 2 流动相的选择 考察流动相，先后选用了
不同比例的甲醇 －水(40 ∶ 60)、(55 ∶ 45)、乙腈 －水
(30∶70)、(35∶65)、(40∶60)。结果发现以乙腈 －水
(35∶65)时保留时间适中，在该流动相条件下去氧
地胆草内酯对照品色谱峰峰形对称性较好，样品中
去氧地胆草内酯色谱峰与相邻峰完全分离。故选
择流动相为乙腈 －水(35∶65)。
4． 2． 3 供试品溶液制备方法 为了尽可能提取目
标成分，考察样品前处理方法，包括提取溶剂(甲
醇、50%甲醇、乙酸乙酯、稀乙醇)及比例，提取方法
(超声提取、冷浸提取及回流提取)，提取时间(15、
20、30 及 40 min)，结果表明用甲醇 20 mL，超声处
理(功率 250 W，频率 40 kHz)20 min基本可以提取
完全。
4． 2． 4 耐用性试验 本文采用同一根 Kromasil
(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱柱考察了 Agi-
lent1260、Agilent1100 和岛津 LC －20AT三台高效液
相色谱仪，以及采用 Agilent1260 高效液相色谱仪考
察了 Kromasil C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)、Ageli-
net Eclipse XDB C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)和
Waters Symmetry C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)三根
色谱柱，结果发现峰形均能达到良好分离，表明本
文选择的色谱条件耐用性良好。
4． 3 结论 对 15 批不同来源的样品进行分析，结
果表明各样品中均可检出去氧地胆草内酯，其含量
范围在 0． 024% ～ 0． 15%，品种的差异可能与药材
产地、加工、贮藏等因素有关，因此有必要对其进行
质量控制［10］。本文以去氧地胆草内酯为指标成分，
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ＲP-HPLC法测定香连胶囊中盐酸小檗碱的含量
徐庆辉
( 安徽省黄山市食品药品检验研究所，安徽 黄山 245000)
摘要:目的 建立香连胶囊中的盐酸小檗碱含量测定方法。方法 用 ＲP-HPLC法，分析色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为
填充剂(Shim － Pack VP － ODS，250 L × 4． 6)，柱温 25 ℃，0． 05 mol·L －1磷酸二氢钾溶液 －乙腈(50∶50，每 1 000 mL流动相含
十二烷基硫酸钠 1． 7 g)为流动相，检测波长为 265 nm。结果 盐酸小檗碱与其它各组分基线分离良好，在所试浓度 5． 104 ～
127． 595 mg·L －1范围内与峰面积值呈良好的线性关系，回归方程为 Y = 100 147X － 16 995，r2 = 1(n = 5);中间精密度试验
(n = 6)ＲSD为 0． 17%、0． 23%;重复性试验(n = 6)ＲSD为 0． 17%;平均回收率(n = 6)为 99． 58%，ＲSD为 0． 83%;三批香连胶
囊中盐酸小檗碱的含量为 48． 04 ～ 48． 79 mg /粒。结论 该法样品处理简单，准确性高，精密度好，适合香连胶囊中盐酸小檗
碱的含量测定。
关键词:ＲP-HPLC法;香连胶囊;盐酸小檗碱
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2014． 10． 017
香连胶囊由黄连(吴茱萸制)及木香提取加工制
成，用于湿热痢疾，里急后重，腹痛泄泻;菌痢，肠
炎。其中黄连清热燥湿，泻火解毒。用于湿热痞
满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心
烦不寐，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮;外
治湿疹，湿疮，耳道流脓。黄连主要成分为盐酸小
檗碱，主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感
染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。我们以盐酸
小檗碱为对照品，参照有关文献［1 － 10］，采用 HPLC
法测定了香连胶囊中盐酸小檗碱含量，并以此作为
质量控制指标，试验结果表明，该法简便快速，稳定
可靠。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 高效液相色谱仪，日本岛津 LC-10AT
高效液相色谱仪;SPD-10A紫外检测器;N2000 色谱
工作站;AB135-S 十万分之一电子天平;ADVEN-
TUＲEＲ(AＲ1140)万分之一电子天平。
1． 2 试药 盐酸小檗碱对照品:中国药品生物制
品检定所，批号:110713 － 200911(供含量测定用，
含量为 86． 8%);香连胶囊三批样品:由本公司提
供，批号:201202016，201202018，201202020。乙腈
为色谱纯，美国天地公司。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件系统适用性试验
2． 1． 1 色谱条件 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅
胶柱(Shim － Pack VP － ODS，250 L × 4． 6);流动相
为 0． 05 mol·L －1磷酸二氢钾溶液 －乙腈(50∶50，每
1 000 mL流动相含十二烷基硫酸钠 1． 7 g);检测波
长:在 200 ～ 400 nm波长进行扫描对照品溶液，盐酸
小檗碱的最大吸收波长在 265 nm，选择其为检测波
长;柱温:25 ℃，流速:1． 0 mL·min －1。
2． 1． 2 系统适用性试验 在此条件下分别精密吸
建立的薄层色谱鉴别方法基本代表了地胆草中的
主要活性成分，且专属性强;高效液相色谱含量测
定方法简便，准确可靠，重复性好，可用于地胆草药
材的质量控制。
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·5681·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2014 Oct; 18( 10)