全 文 ：毛蕊花糖苷标准品 熟地样品
图 2 熟地黄炮制样品中毛蕊花糖苷含量测定色谱图
表 3 工艺优选条件
序号 炮制时间 /h
还原糖
吸光度(A) 含量(%)
毛蕊花糖苷
含量测定(%)
1 24 0． 554 56． 85 0． 022
2 26 0． 560 57． 47 0． 022
3 28 0． 568 58． 29 0． 022
4 30 0． 571 58． 60 0． 024
5 32 0． 610 62． 60 0． 023
6 34 0． 430 44． 10 0． 021
7 36 0． 527 54． 10 0． 020
8 38 0． 485 49． 80 0． 022
9 40 0． 508 52． 10 0． 018
10 42 0． 514 52． 75 0． 019
11 44 0． 496 50． 90 0． 020
12 46 0． 480 49． 26
13 48 0． 478 49． 06
3 讨论
本实验采用专利设备进行熟地黄的炮制，通过对不同炮制品
中还原糖含量的测定，优选炮制工艺，并对产品进行毛蕊花糖苷
的测定验证产品的质量。从而确立专利设备连续蒸制 32 h为最
佳炮制工艺，还原糖含量高于普通工艺，且收率远高于普通工艺，
体现了新设备新工艺的优越性。且新工艺产品通过检测符合
《中国药典》2010 年版的规定，说明此炮制工艺可行。此工艺缩
短的熟地黄的炮制时间，从而减低了成本和消耗，并提高了收率，
为企业生产创造了价值。
参考文献:
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国药鉴别
收稿日期:2012-10-30; 修订日期:2013-03-29
基金项目:广东省自然科学基金团队项目 ( No． 8351063201000003)
作者简介:吴 春( 1985-) ，女( 汉族) ，江西赣州人，现为暨南大学博士研
究生，学士学位，主要从事生物医药工程研究工作．
* 通讯作者简介:李药兰( 1963-) ，女( 汉族) ，广东广州人，现任暨南大学
药学院教授，博士生导师，博士学位，主要从事天然产物有效成分研究工
作．
地胆草指纹图谱研究和 3 种活性成分的含量测定
吴 春1，2，肖嘉棠1，2，吴 霞1，2，王国才1，2，周光雄1，2，李药兰1，2*
(1．暨南大学中药及天然药物研究所，广东 广州 510632;
2．暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省重点实验室，广东 广州 510632)
摘要:目的 建立地胆草药材 HPLC指纹图谱，并同时测定地胆草中 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸、3，4 － O －二咖啡酰基
奎宁酸及去氧地胆草内酯 3 种主要活性成分的含量。方法 采用WELCH XB － C18柱( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm) 色谱柱，以
乙腈 － 0． 2%酸水( 乙酸) 进行梯度洗脱，流速 1． 0 ml /min，柱温为 25 ℃，检测波长为 235 nm，记录 10 批地胆草色谱图数
据并同时测定了其中 3 种主要活性成分的含量。结果 建立了地胆草指纹图谱，并成功测定其 3 种主要活性成分的含量。
结论 该方法可靠、稳定，指纹图谱结合活性成分的含量测定能够更好地控制地胆草药材的质量。
关键词:地胆草; 指纹图谱; 咖啡酰基奎宁酸; 去氧地胆草内酯
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 07． 043
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 07-1643-03
地胆草 Elephantopus scaber L．为菊科地胆草属植物，别名土
公英、苦地胆、地胆头等，主要分布于我国南方各省。始载于明代
《救荒本草》，后被收于《本草纲目》，被 1977 年版《中国药典》收
录［1］。该植物在民间应用广泛，主要以根部入药，具有清热、凉
血、利湿的功效，主治感冒、百日咳、咽炎、结膜炎、肝炎等症［2］，
并被广泛应用于各种复方制剂中［3 ～ 5］。地胆草所含化学成分类
型较多，包括倍半萜内酯、有机酸、黄酮、三萜和甾醇等［6］，其中
咖啡酰基奎宁酸类衍生物和倍半萜内酯类化合物为主要活性成
分［7 ～ 10］。由于产地较多、药材的采收混乱，又缺乏相应的质量控
制手段，导致市场上的地胆草质量良莠不齐，本实验应用 HPLC
法，系统的对 10 批不同产地、不同来源的地胆草药材的指纹图谱
进行了研究，首次建立了地胆草药材的特征指纹图谱，并对 3，5
－ O －二咖啡酰基奎宁酸、3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸及去氧地
胆草内酯 3 种主要活性成分的含量进行比较研究。指纹图谱结
合含量测定可以更好地鉴定地胆草药材的真伪优劣，为地胆草的
质量评价提供科学依据。
1 仪器、试剂和样品
Agilent － 1200 型高效液色谱系统;KQ － 250DE 超声波清洗
仪(昆山市超声仪器有限公司) ;德国赛多利斯 BS 224S 型天平。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期
试剂:乙腈(色谱纯，迪马公司) ，水为纯净水(怡宝食品饮料有限
公司) ，乙酸(分析纯，广州化学试剂厂)。
3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸(自制) ;3，4 － O －二咖啡酰基
奎宁酸(自制) ;去氧地胆草内酯(自制) ，经 HPLC 分析，以峰面
积归一法计算，纯度均大于 98． 0%。
收集不同批次、不同产地的地胆草全草样品 10 批，经广东省
高级工程师麦振球先生鉴定为地胆草 Elephantopus scaber L．。见
表 1。
表 1 地胆草药材来源
编号 来源 编号 来源
S1 广东揭阳 S6 广东湛江
S2 广东东莞 S7 广东珠海
S3 广东韶关 S8 广东广州
S4 广西玉林 S9 广东清远
S5 广东从化 S10 广东茂名
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 WELCH XB － C18柱(4． 6 mm × 250
mm，5μm) ;流动相 A相为乙腈，B相为 0． 2%的乙酸水溶液;梯度
洗脱:0 ～ 15 min，5% ～ 20% A;15 ～ 25 min，20% A;25 ～ 65 min，
20% ～60% A，流速为 1． 0 ml /min，检测波长为 235 nm，柱温 25
℃。
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸
1． 41 mg，3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸 2． 91 mg，去氧地胆草内酯
0． 56 mg，置于 5 ml容量瓶中，加 70% 甲醇超声溶解并定容至刻
度，摇匀，即得对照品溶液(其中每毫升含 3，5 － O －二咖啡酰基
奎宁酸 0． 282 mg，3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸 0． 582 mg，去氧地
胆草内酯 0． 112 mg)。
2． 3 供试品溶液的制备 取干燥地胆草全草粉碎，过 60 目筛，混
匀，精确称定约 10 g，置 100 ml锥形瓶中，精确加入 70%甲醇 100
ml，称重，超声处理 2 次，每次 30 min，取出，放冷，再次称定重量，
用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤纸过滤，滤液用 0． 45 μm
微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度试验 精密吸取同一批地胆草 S1 供试品溶液，连
续进样 7 次，考察色谱峰保留时间和峰面积的一致性，以 3，5 － O
－二咖啡酰基奎宁酸为对照峰，结果表明主要色谱峰的相对保留
时间 ＲSD小于 0． 4%，相对峰面积比值 ＲSD 小于 2． 8%，表明仪
器精密度良好。
2． 4． 2 稳定性试验 精密吸取同一批地胆草 S1 供试品溶液，分
别在 0，2，4，8，12，24 h连续进样 6 次，以 3，5 － O －二咖啡酰基奎
宁酸为对照峰，结果表明主要色谱峰的相对保留时间 ＲSD 小于
0． 6%，相对峰面积比值 ＲSD小于 2． 9%，表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
2． 4． 3 重现性试验 取地胆草 S1 样品 6 份，按“2． 3”项中所述的
方法平行制备供试品溶液 6 份，以 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸
为对照峰，结果表明主要色谱峰的相对保留时间 ＲSD 小于
0． 4%，相对峰面积比值 ＲSD 小于3． 0%。结果表明，该方法重现
性良好。
2． 5 地胆草指纹图谱的建立 取 10 批不同产地地胆草全草药材
按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取 10 μl，按“2． 1”项
下色谱条件分析得到地胆草药材的指纹图谱。见图 1。
采用国家药典委员会编写的“中药色谱指纹图谱相似度评
价系统 2004 A版”软件生成地胆草药材共有模式的对照指纹图
谱，得到 9 个共有峰，见图 2。通过与对照品图谱对照，指认其中
的 3 号峰为 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸，4 号峰为 3，4 － O －二
咖啡酰基奎宁酸，6 号峰为去氧地胆草内酯。其中 3 号峰分离良
好，保留时间适宜，故选此峰为参照峰。
图 1 10 批地胆草全草药材指纹图谱
图 2 地胆草全草药材 HPLC图
地胆草药材指纹图谱相似度评价 采用国家药典委员会编写
的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004 A 版”软件对上述
10 批药材的指纹图谱进行相似度分析，得 10 批药材的相似度分
别为 0． 459，0． 534，0． 866，0． 933，0． 825，0． 474，0． 881，0． 944，
0． 899，0． 459。结果表明不同来源的 10 批地胆草样品指纹图谱
中的特征指纹峰的相对保留时间一致，但各共有峰相对峰面积有
一定的差异，说明各批次药材之间的质量存在差异。结合含量测
定结果，表明地胆草药材指纹图谱的相似度与其主要成分的含量
存在一定的相关性，可为地胆草药材的真伪鉴别及品质评价提供
重要的参考依据。
2． 6 地胆草中 3 种活性成分的含量测定
2． 6． 1 系统适用性实验 在“2． 1”色谱条件下进行检测，以 3，5
－ O －二咖啡酰基奎宁酸，3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸，去氧地
胆草内酯色谱峰计算理论板数，均不低于 3 000，分离度大于1． 5，
拖尾因子在 0． 95 ～ 1． 05 之间，达到基线分离。见图 3。
2． 6． 2 线性关系考察 精密吸取按“2． 2”方法配制的对照品混
合溶液 0． 4，0． 8，1，2，6，12，18 μl注入高效液相色谱仪，以进样质
量为横坐标(X) ，峰面积为纵坐标(Y) ，计算得回归方程(见表
2)。结果表明 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸进样量在 0． 112 8 ～
5． 076 μg(Ｒ2 = 0． 999 7)内线性关系良好，3，4 － O －二咖啡酰基
奎宁酸进样量在 0． 232 8 ～ 10． 476 μg(Ｒ2 = 0． 999 4)内线性关系
良好;去氧地胆草内酯进样量在 0． 044 8 ～ 2． 016 μg(Ｒ2 =
0． 999 9)内线性关系良好。
2． 6． 3 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10 μl，连续进样 6
次，按照”2． 1“项中的色谱条件进行检测，记录保留时间和峰面
积，结果 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸、3，4 － O －二咖啡酰基奎宁
酸和去氧地胆草内酯峰面积 ＲSD 分别为 1． 8%、1． 0%和 2． 5%，
保留时间 ＲSD均在小于 0． 6%，结果表明仪器精密度良好。
2． 6． 4 稳定性试验 精密吸取同一批地胆草 S1 供样品，按“2． 2”
项中所述的方法制备供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h 连续
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7
进样 6 次，记录保留时间和峰面积，结果 3，5 － O －二咖啡酰基奎
宁酸、3，4 － O － 二咖啡酰基奎宁酸和去氧地胆草内酯峰面积
ＲSD分别为 1． 1%、1． 7% 和 3． 3%，保留时间 ＲSD 均在小于
0． 8%，结果表明供试品 24 h内测定稳定。
图 3 地胆草供试品 HPLC图
(1 为 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸，2 为 3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸，
3 为去氧地胆草内酯)
表 2 地胆草中 2 种咖啡酰基奎宁酸和去氧地胆草内酯的标准曲线
成分 标准曲线 Ｒ2 线性范围 /μg
3，5 －O －二咖啡酰基奎宁酸 Y =478．55 X －2． 359 2 0． 999 7 0． 112 8 ～5． 076
3，4 －O －二咖啡酰基奎宁酸 Y =458．49 X +110． 71 0． 999 4 0． 232 8 ～10． 476
去氧地胆草内酯 Y =515．06 X －0． 857 7 0． 999 9 0． 044 8 ～2． 016
2． 6． 5 重现性试验 取同一批地胆草 S1 样品 6 份，按“2． 3”项中
所述的方法平行制备供试品溶液 6 份，分别精密吸取 10 μl 进
样，记录保留时间和峰面积，结果 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸、
3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸和去氧地胆草内酯峰面积 ＲSD分别
为 1． 8%、2． 7%和 3． 1%，保留时间 ＲSD均在小于 0． 5%，该方法
重现性良好。
2． 6． 6 加样回收率试验 精密称取已知含量的地胆草样品(S1)
6 份，分别精密加入一定量的 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸、3，4
－ O － 二咖啡酰基奎宁酸和去氧地胆草内酯对照品溶液，按
“2． 2”项下制备对照品溶液，依法测定，结果三个对照品的平均
回收率分别为 96． 2%、98． 6% 和 96． 7%，ＲSD 分别为 1． 9%、
1． 5%和 2． 0%。
2． 6． 7 样品测定 分别精密吸取各批药材供试品溶液 10 μl，按
“2． 1”项下色谱条件进行测定，平行测三次，计算 3，5 － O －二咖
啡酰基奎宁酸、3，4 － O －二咖啡酰基奎宁酸和去氧地胆草内酯
的平均含量。结果见表 3。
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸、3，4 － O －
二咖啡酰基奎宁酸和去氧地胆草内酯的紫外最大吸收波长不同，
参考相关文献，采用 DAD 检测器考察了 205，220，235，254，280，
330 nm的色谱图，结果发现在 235 nm处，不但 3 种主要成分有较
强吸收，而且所洗脱的其余组分有较高的响应值，分离度高，故选
择 235 nm作为检测波长。
3． 2 样品提取条件的选择 考虑不同提取溶媒(甲醇、70%甲醇、
95%乙醇、无水乙醇)、不同提取时间(30，45，60，80 min)对提取
效率的影响，结果表明用 70%甲醇溶液，超声处理 60 min，即能
提取完全，且含量稳定。
表 3 地胆草中 3 种主要活性成分的平均含量
产地
3，5 － O －
二咖啡酰基奎宁酸
平均含量 /
mg·g － 1
ＲSD
(%)
3，4 － O －
二咖啡酰基奎宁酸
平均含量 /
mg·g － 1
ＲSD
(%)
去氧地胆草
内酯
平均含量 /
mg·g － 1
ＲSD
(%)
揭阳 S1 8． 51 0． 3 2． 50 0． 3 0． 95 1． 6
东莞 S2 2． 96 1． 2 1． 17 1． 4 0． 32 2． 2
韶关 S3 1． 73 2． 8 1． 19 3． 6 1． 00 2． 2
广西 S4 0． 88 3． 3 0． 72 0． 8 1． 38 3． 2
从化 S5 9． 98 3． 9 2． 80 2． 3 0． 83 3． 1
湛江 S6 2． 73 1． 8 1． 24 2． 0 1． 36 2． 3
珠海 S7 1． 81 1． 9 0． 92 1． 7 0． 69 1． 1
广州 S8 4． 81 3． 3 2． 08 0． 7 0． 62 1． 8
清远 S9 0． 56 3． 2 0． 42 2． 2 0． 40 1． 8
茂名 S10 2． 63 1． 1 0． 96 3． 4 1． 13 1． 1
n =4
该研究采用 HPLC法对不同产地地胆草药材指纹图谱进行
了研究并且对该药材中 3 种主要活性成分的含量进行了测定。
结果表明不同来源的 10 批地胆草样品指纹图谱中的共有峰在数
目以及相对保留时间上保持一致，差异主要表现为各共有峰相对
峰面积有一定的差异，说明各批次药材之间的质量存在优劣。初
步推测可能与药材不同生长年限、不同采收期有关，这些因素所
引起的含量变化有待进一步研究。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期