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覆瓦蓟根部挥发油成份及抗氧化活性的初步研究



全 文 :收稿日期:2014 - 05 - 12;修回日期:2014 - 06 - 07
基金项目:教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET - 11 - 0926) ;贵州省优秀青年科技人才培养对象专项[黔科合人字(2011)34 号];贵州
省高校工程技术研究中心建设项目“贵州省中药民族药创制工程中心”[黔教合 KY字(2012)018 号];贵州省药用植物繁育与种
植人才基地[黔人领发(2013)15 号];贵州大学大学生“SRT计划”项目“苗药 CL 对实验性烧烫伤的治疗作用及活性部位研究”
[贵大 SRT字(2012)69 号]
* 通讯作者:E - mail:ftt0809@ 163. com
覆瓦蓟根部挥发油成份及抗氧化活性的初步研究
杨周洁1,2,周 英1,2,3,陈 琳1,2,赵 致1,2,3,俸婷婷1,2 *
(1. 贵州大学 药学院,贵州 贵阳 550025;2. 贵州省中药民族药创制工程中心,
贵州 贵阳 550025;3. 贵州省药用植物繁育与种植重点实验室,贵州 贵阳 550025)
摘 要:为了研究覆瓦蓟 Cirsium leducei (Franch.)Levl. 根部挥发油化学成分及其抗氧化活性,采用水蒸气蒸馏
法,从覆瓦蓟根部提取挥发油,结合 GC - MS联用技术进行化学成分分析,利用铁氰化钾还原法和水杨酸法初步
探讨其抗氧化活性。结果表明,从覆瓦蓟根部挥发油中共分离出 13 个化合物,鉴定出其中 11 个成分,随着浓度
增加,覆瓦蓟根部挥发油的还原能力和对 OH·自由基的清除能力逐渐增强。结果揭示,覆瓦蓟根部挥发油主要
成分为脂肪烃类和萜类及其衍生物,具有一定的抗氧化能力。
关键词:覆瓦蓟;挥发油;气质联用;抗氧化性
中图分类号:R248. 1 文献标识码:A 文章编号:1008 - 0457(2014)05 - 0032 - 03
A Preliminary Study on Chemical Constituents and Antioxidant Activity of the Volatile Oil from
the Root of Cirsium leducei (Franch.)Levl.
YANG Zhou-jie1,2,ZHOU Ying1,2,3,CHEN Lin1,2,ZHAO Zhi1,2,3,FENG Ting-ting1,2* (1. School of Phar-
maceutical Sciences,Guizhou University,Guiyang Guizhou 550025,China;2. Guizhou Engineering Center for
Innovative Traditional Chinese Medicine and Ethnic Medicine Guizhou University,Guiyang Guizhou 550025,
China;3. Key Laboratory of Chinese Herbal Medicine Planting and Breeding of Guizhou Province,Guiyang
Guizhou 550025,China)
Abstract:To analyze the chemical constituents and the antioxidant activity of the volatile oil from the root of
Cirsium leducei (Franch.)Levl.,the essential oil were extracted by steam distillation and analyzed by gas
chromatography - mass spectrometry. The antioxidant activity was measured by potassium ferricyanide
reduction method and salicylic acid assay,respectively . Thirteen compounds were separated and eleven of
them were identified. The reducing capacity and scavenging capacity against OH· enhanced with the
increase of the concentration of the volatile oil. The results indicated that the main components of the essen-
tial oil were aliphatics,terpenes and their derivatives. The volatile oil has potential antioxidation ability.
Key words:Cirsium leducei(Franch.)Levl.;Volatile oil;GC - MS;Antioxidant activity
覆瓦蓟 Cirsium leducei (Franch.)Levl. 为菊
科植物,多年生草本。主要分布贵州、广东、广西和
云南等地。常生长于山坡林下或林缘、草地,海拔
500 ~ 1 500 m。覆瓦蓟根具有清热、解毒、止痛、抗
菌消炎等功效,民间常用于烧烫伤的治疗。目前尚
未有关于覆瓦蓟根部挥发油化学成分的研究报道。
山 地农业生物学报 33(5) :032 ~ 034,2014
Journal of Mountain Agriculture and Biology
本研究利用水蒸气蒸馏法提取其挥发油成分,结合
GC - MS联用技术进行成分分析,并采用铁氰化钾
还原法和水杨酸法初步探讨其抗氧化活性。
1 材料与方法
1. 1 供试材料
HP 6890 / 5975 C GC / MS 联用仪(美国安捷伦
公司) ;色谱柱为 Zebron ZB - 5MSI 5% Phenyl -
95% DiMethylpolysiloxane (30 m × 0. 25 mm × 0. 25
μm)弹性石英毛细管柱(美国安捷伦公司) ;挥发
油提取器(油比水轻型) ;覆瓦蓟采自贵州省遵义
市余庆县,由贵州大学生命科学学院熊源新教授鉴
定为 Cirsium leducei (Franch.)Levl.。正己烷(南
京海悦化工有限公司) ;维生素 C;其它试剂均为分
析纯。
1. 2 方法
1. 2. 1 挥发油提取 将干燥的覆瓦蓟根部粉碎,
取 100 g加 10 倍量的水,浸泡 20 h。连接好挥发油
提取器,水蒸气蒸馏提取 6 h,得挥发油 0. 2 mL。向
提取器中加入 1 mL正己烷,分取正己烷层,用无水
硫酸钠脱水过滤,定容至 2 mL备用[1 - 3]。
1. 2. 2 挥发油的气质联用分析 气相色谱条件:
色谱柱为 Zebron ZB - 5MSI 5 % Phenyl - 95%
DiMethyl polysiloxane (30 m × 0. 25 mm × 0. 25 μm)
弹性石英毛细管柱;柱温 45 ℃(保留 2 min) ,以 5
℃ / min升温至 310 ℃,保持 2 min;汽化室温度 250
℃;载气为高纯 He(99. 999%) ;柱前压 7. 62 psi,载
气流量 1. 0 mL / min;进样量 1 μL(样品浓度 0. 001
mL / mL,溶剂为正己烷) ;无分流进样。
质谱条件:EI 离子源电子能量 70veV;离子源
温度 230 ℃;质谱扫描范围 m/ z 20 - 500;溶剂延
迟时间 5 min。
1. 2. 3 铁氰化钾还原法测定抗氧化性 取不同
质量浓度挥发油溶液 1. 2 mL,加入 2. 5 mL PBS 溶
液(pH 7. 5) ,2. 5 mL 1%K3Fe(CN)6。上述混合物
于 50 ℃恒温反应 20 min后,加入 2. 5 mL 10% TCA
溶液,静置 20 min。取上清液 2. 5 mL,加入 2. 5 mL
蒸馏水,1%0. 5 mL FeCl3混匀。以蒸馏水为参比,
在波长 700 nm条件下测定 A,A 越大,则样品的还
原力越强[4]。以维生素 C为阳性对照。
1. 2. 4 水杨酸法测定抗氧化性 采用 Fenton 反
应法[5]。移取不同质量浓度的挥发油溶液各 1. 0
mL于试管中,加入 0. 007 5 mol /L 硫酸亚铁铵溶液
1 mL,0. 007 5 mol /L水杨酸 -乙醇溶液 1. 0 mL 和
0. 3% H2O2 1. 0 mL,于室温下反应 30 min。以蒸馏
水调零,于 510 nm处测定 A(n = 3) ,结果 OH·清
除率 = A0 -(A1 - A1')/ A0 × 100%式中 A0 为溶剂
代替样品液的吸光度;A1 为样品组的吸光度;A1'为
蒸馏水代替 H2O2 的空白对照组吸光度。同样维
生素 C为阳性对照。
2 结果及分析
2. 1 挥发油化学成分分析
将初始峰宽(initial peak width)设置为 012,检
出的色谱峰数达 13 个。其总流离子图如图 1 所
示。利用 NIST05 质谱库(美国)进行计算机检索,
并查对有关质谱资料及文献[6],综合各项分析,确
定了其中 11 个化学成分,结果见表 1。利用面积
归一化法计算出有关成分的相对含量。已鉴定出
的化学成分占挥发油总量的 34. 092%。覆瓦蓟根
部挥发油中主要含脂肪烃类和萜类及其衍生物。
其中已鉴定出来的化学成分中含量相对较高的 3
种成 分 为 亚 油 酸 (10. 473%)、棕 榈 酸 乙 酯
(7. 498%)、α -甜没药萜醇(7. 028%)。其他成分
含量则相对较低。
图 1 覆瓦蓟根部挥发油 GC - MS总离子流图
Fig. 1 The total ion chromatogram of the volatile oil
from the root of Cirsium leducei(Franch.)Levl.
2. 2 抗氧化活性
2. 2. 1 还原能力 如图 2 所示,与空白对照相
比,随着挥发油样品浓度逐渐升高,吸光度逐渐增
大。在最高浓度 1. 0 g /L时,挥发油样品表现出的
还原能力最强。结果表明,挥发油还原能力与挥发
油的浓度表现出一定的相关性,但还原能力不及阳
性对照维生素 C。
2. 2. 2 对 OH·自由基的清除能力 如图 3 所示,
与空白对照相比,随着挥发油样品浓度增加,对自
由基的清除率明显升高。当浓度达到 1. 0 g /L 时,
样品对自由基清除能力最强,清除率为 34. 15%。
结果表明,不同浓度的挥发油样品对自由基均具有
一定的清除能力,其清除能力与浓度表现出一定的
比例关系,但还原能力不及阳性对照维生素 C。
33第 5 期 杨周洁,等:覆瓦蓟根部挥发油成份及抗氧化活性的初步研究
表 1 覆瓦蓟根部挥发油化学成分 GC -MS分析
Tab. 1 Chemical constituents of the volatile oil from the root of Cirsium leducei(Franch.)Levl.
编号
保留时间
(min)
化合物 分子式 分子量 相对含量(%) 相似度
1 19. 67 Z -柠檬醛(Z - Citral) C10H16O 152 0. 315 99. 35%
2 20. 47 E -柠檬醛(E - Citral) C10H16O 152 0. 471 98. 71%
3 25. 91 1 -十四碳烯(1 - Tetradecene) C14H28 196 0. 215 98. 92%
4 27. 81 十六碳三烯酸甲酯(Methyl 7,10,13 - Hexadecatrienoate) C17H28O2 264 0. 638 99. 13%
5 29. 87 十七烷三烯(1,E - 11,Z - 13 - Heptadecatriene) C17H30 234 1. 280 99. 25%
6 30. 68 α - 甜没药萜醇(α - Bisabolol) C15H26O 222 7. 028 98. 98%
7 31. 35 桔利酮(Zierone) C15H2 2O 218 0. 336 99. 16%
8 36. 24 棕榈酸(Palmitic acid) C16H32O2 256 3. 432 98. 56%
9 36. 45 棕榈酸乙酯(Ethyl palmitate) C18H36O2 284 1. 893 99. 45%
10 38. 36 亚油酸(Linoleic acid) C18H32O2 280 10. 473 99. 75%
11 39. 52 亚油酸乙酯(Ethyl linoleate ) C20H36O2 308 7. 948 98. 69%
图 2 覆瓦蓟根部挥发油还原能力
Fig. 2 Reducing capacity of the volatile oil from
the root of Cirsium leducei(Franch.)Levl.
图 3 覆瓦蓟根部挥发油对 OH·自由基清除能力
Fig. 3 Scavenging capacity against OH· of the volatile
oil from the root of Cirsium leducei(Franch.)Levl.
3 讨 论
覆瓦蓟根具有清热、解毒、止痛、抗菌消炎等功
效,覆瓦蓟根部挥发油成分种类较多。本研究共分
出 13 种化学成分,鉴定出 11 种成分。表 1 中各种
化合物均是首次从该植物中首次分离得到。经
GC - MS对覆瓦蓟根部挥发油化学成分分析表明,
其主要化学成分为脂肪烃和萜类及其衍生物为主。
已鉴定出的化学成分占挥发油总量的 34. 032%。
其中亚油酸(10. 473%)、棕榈酸乙酯(7. 498%)、
α -甜没药萜醇(7. 028%) ,以上 3 种成分的相对
含量较高。其中亚油酸具有降低人体血液中胆固
醇和血脂的作用,α -甜没药萜醇明显的抗炎、抗
痉、抗消化、抗菌等作用。除此之外,α -甜没药萜
醇对皮肤无刺激性,常用于皮肤及口腔保健用品。
研究结果表明,覆瓦蓟根部挥发油成分抗氧
化活性不及维生素 C 效果明显,但还是具有一定
的铁氰化钾还原能力和对 OH·自由基的清除能
力,其它相关抗氧化活性还有待深入研究。通过
对覆瓦蓟根部挥发油化学成分分析及其抗氧化活
性的初步探讨,为其进一步研究与开发提供了科
学依据。
参 考 文 献:
[1] 符 玲,王海波,王 健,等.中药大蓟地上部位的 GC - MS分析[J].中国民族民间医药,2010,2:11 - 12.
[2] 韩丽娜,张书文,罗文军,等.济菊挥发油化学成份 GC - MS分析[J].中草药,2011,42(7) :1 297 - 1 298.
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[5] 丁 勇,王新风,杨 芳.葎草的黄酮含量测定及抗氧化性研究[J].江苏中医药,2009,41(2) :55 - 56.
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