全 文 ：北方药学 2016年第 13卷第 3期
时间（min） 20 30 50 先 30后 15 先 30后 30
含量（mg/g） 2.4653 2.7452 2.8956 3.0023 3.2456
HPLC测定土木香五味汤散中氧化苦参碱的含量
田利明（乌兰察布市食品药品检验所 乌兰察布 012000）
摘要：目的：探索土木香五味汤散中氧化苦参碱的含量测定方法。方法：用 A11tech C18色谱柱，以乙腈—无水乙醇-3%磷酸溶液
（80∶10∶10）为流动相，检测波长为 220nm。结果：氧化苦参碱在 0.1562～0.7812μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为 Y=
1629481.2X+10.6，r=0.99978，加样回收率为 98.48%，RSD为 0.48%。结论：用 HPLC法测定土木香五味汤散中氧化苦参碱的含量，
简便易行，准确可靠。
关键词：HPLC 土木香五味汤散 苦参 氧化苦参碱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2016）03-0013-01
土木香五味汤散是传统的蒙药制剂，由土木香、悬钩子木、
苦参、干姜、马钱子五味药组成的复方制剂。该药具有调“赫依”
血、止痛、消喘之功效。苦参主要成分为苦参碱、氧化苦参碱。选
择该蒙药方中苦参的主要成分氧化苦参碱作为测定指标，通过
摸索实验，建立了高效液相色谱检测方法。该方法操作比较简
单，重现性良好，专属性强，制剂中其他组分对氧化苦参碱的含
量测定没有干扰。
1 仪器与试药
1.1 仪器：LC-20AT 型高压双泵、SIL-20A 自动进样阀、SPD-
20AT紫外-可见检测器、CTO-20A柱箱、LCsolution色谱数据工
作站；KQ-100型超声波清洗器；电子天平 BS210S（d=0.1mg）。
1.2 试剂与试药：氧化苦参碱对照品（批号：110749-201012）；中
国药品生物制品检定所提供；乙腈、无水乙醇选用色谱纯，其他
试剂均为分析纯，水为高纯水。制剂由包头市达茂旗蒙医院提供。
2 方法与结果
2.1色谱条件
2.1.1 色谱柱：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶（250mm×
4.6mm，5u）。
2.1.2 流动相：参考《中国药典》2015 年版一部苦参项下，以乙
腈—无水乙醇—3%磷酸溶液（80∶10∶10）为流动相。
2.1.3 柱温 30℃。
2.1.4 测定波长的选择：在 180～320nm范围内用紫外分光光度
计对氧化苦参碱对照品溶液进行光谱扫描，发现氧化苦参碱在
波长为 200.7nm处有最大吸收峰值，为了排除杂质峰的影响，参
考《中国药典》2015年版苦参项下检测波长，选定 220nm作为检
测波长。
2.1.5 理论板数：参考《中国药典》2015年版一部苦参项下，理论
板数按氧化苦参碱峰计算不得低于 2000。
2.2提取条件的选择
2.2.1 本实验参考《中国药典》2015年版苦参项下提取方法。经
过不同实验研究，发现加氯仿 25mL、浓氨试液 1mL，经过超声
处理半小时，放置过夜，再超声 15min，提取被检测成分完全。提
取方法比较结果见表 1。
表 1 提取条件比较结果
2.3专属性：阴性对照实验：取按处方比例并以相同工艺制备的
（缺苦参）的阴性对照供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对
照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对
照溶液和供试品溶液各 10μL，分别注入高效液相色谱仪，检测
所得结果是：阴性对照供试品色谱图中在与氧化苦参碱对照品
以及供试品色谱图对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他
组分对氧化苦参碱的含量测定无干扰。
2.4线性关系考察：取氧化苦参碱对照品，精密称定，配制溶液
（浓度为 31.25μg/mL），精密吸取上述溶液 5、10、15、20、25μL分
别进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对氧化苦参碱的进样量
进行回归分析，回归方程为 Y=1629481.2X+10.6，r=0.99978。结
果表明氧化苦参碱在 0.1562～0.7812μg范围内呈良好的线性关
系。标准曲线见表 2。
表 2 标准曲线测定结果
2.5 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于 0h、2h、4h、6h、
8h、12h分别进样测定，结果表明，氧化苦参碱在 12h内的峰面
积积分值基本保持稳定不变，见表 3。
表 3 稳定性试验结果（n=6）
2.6精密度重复性试验：取同一批次供试品 6份，各精密称定，分
别按供试品含量测定项下方法操作，测定每份供试品含量，结果
样品测定重现性良好，见表 4。
表 4 精密度重复性试验结果（n=6）
2.7样品含量测定：取本品按照供试品含量测定项下的方法处理
并测定，三批样品的测定结果见表 5。
表 5 样品中氧化苦参碱含量测定结果
2.8小结：土木香五味汤散作为蒙药制剂，暂无含量检测，因此，
通过建立高效液相色谱法，准确测定苦参中氧化苦参碱的含量，
可以真实反映该制剂的质量。
参考文献
[1]国家药典委员会.《中国药典》.2015年版.一部.
对照品量（μg）
峰面积积分制
0.1562 0.3124 0.4686 0.6248 0.9372
254525 508848 762375 1017882 1287625
时间（h）
峰面积积分制
0 2 4 6 8 12 RSD（%）
856232 856345 860213 857635 854652 861245 0.48
样品
号
样品量
（g）
供试品含
量（mg）
对照品加
入量（mg）
测得总量
（mg）
回收率
（%）
平均
（%）
RSD
（%）
1
2
3
4
5
6
0.5012
0.5004
0.4986
0.4956
0.5010
0.4985
1.5149
1.5154
1.5148
1.5221
1.5026
1.5086
1.50
1.50
1.50
1.50
1.50
1.50
3.0092
2.9998
3.0056
2.9845
2.9945
3.0012
99.56
98.38
98.36
97.65
98.65
99.23
98.48 0.62
批号 样品量（g） 峰面积值 含量（mg/g） 平均含量（mg/g） RSD（%）
20120602 1.0321 856548 2.9804
1.0285 854213 2.9778 2.9782 1.25
20120603 1.0542 861203 3.0012
1.0423 859632 2.9945 2.9973 1.54
20120604 1.0782 871215 3.0848 3.0213 0.46
1.0548 865454 2.9565
13