全 文 ：各取 50mL 标准 GSH 溶液(50mg 100mL)分别调成 pH2 、
pH3 、pH4、pH5 、pH6 、pH7、pH8、pH9 八种不同的 pH 值 , 将各种
pH 的 GSH 溶液于室温下放置 5w , 分别测定各种 pH 条件下溶
液中GSH 的含量 ,其结果见图 4。
从图 4 可知 , 当GSH 存在的环境 pH 为 5.0-6.0 时 , GSH
损失率最低。
2.2 对羟基苯甲酸酯法和其他提取方法的比较
试验中对各种提取方法进行了比较(表 1)。
表 1　各种提取方法的比较
Table 1 Compare of several methods
方　法 GSH(mg 100mL)
破壁率
(%)
温度
(℃)
时间
(min)
对羟基苯甲酸丙酯法 96.71 66.80 30 180
超声波法 不加 SiO2添加 SiO2
7.33
14.34
61.84
79.93
30
30
40
40
变温法 pH 3.5
pH 6.0
5.43
4.08
49.76
48.95
95
95
10
10
自溶法 自溶一自溶二
13.87
16.92
56.65
41.88
55
57
2880
480
通过比较可以看到 , 几种方法都可以提取啤酒废酵母细
胞中的 GSH。超声波法破壁较完全 , 加入 SiO2 粉末后破壁率
和GSH 含量要明显高于未加入 SiO2 粉末时的情况 , 其原因在
于SiO2 粉末在破壁过程中起到了增大其与啤酒酵母细胞之间
的摩擦 ,加大了破壁力度。虽然其破壁率最高 , GSH 提取率却
明显低于对羟基苯甲酸酯法的 GSH 提取率。 变温法的 GSH
提取率是这几种方法最低的 , 其原因可能是反复冻结使得
GSH 损失严重[ 8] 。自溶法虽然条件较温和 , 但是 GSH 提取率
和破壁率均明显低于对羟基苯甲酸酯法的 GSH 提取率和破壁
率 ,其原因在于自溶法的破壁温度为 55-57℃, 而当温度超过
40℃后GSH 的稳定性急剧下降(见图 3)从而导致 GSH 提取率
较低。对羟基苯甲酸酯法在较短的时间内 , 达到较高的 GSH
提取水平。 GSH 为小分子物质且在水中的溶解度很大 , 在细
胞不完全破碎的条件下 ,只要细胞表面产生一些裂缝 , GSH 就
可以顺利地扩散到溶剂中 , 所以利用一些条件相对温和的方
法在提取GSH 等小分子物质方面是可行的[9] 。
3　讨论
3.1.1　试验结果表明:对羟基苯甲酸酯法抽提啤酒废酵母菌
细胞中的谷胱甘肽(GSH), 最佳抽提条件为:按菌体与破壁液
比例 1∶2(W V)加入 0.5%的对羟基苯甲酸丙酯 , 30℃, pH5-
pH6 , 搅拌 3h。在最适抽提条件下 , 谷胱甘肽(GSH)在破壁离
心后上清液中平均含量可达 96.71mg 100mL , 平均破壁率 66.
80%;说明此方法是可行的。
3.1.2　对羟基苯甲酸酯是食品及药品制造过程中广泛使用的
辅料[10] ,用此来破壁时对羟基苯甲酸酯在破壁后离心上清液
中的含量低于 0.05%(重量 体积比), 低于其作为食品防腐剂
的添加量 0.1%[ 11] ,是安全无毒的;且此方法作用条件温和 、时
间短 、不需要复杂和贵重的仪器 , 易于放大 ,因此可以应用于
工业化大规模生产。用它从啤酒废酵母细胞中提取还原型谷
胱甘肽的方法目前未见文献报道。
参考文献:
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白叶蒿挥发油成分研究
张燕1 ,张洪斌2(1.琼州大学生命科学系 ,海南 五指山 572200;2.琼州大学体育系 ,海南 五指山 572200)
摘要:目的:分析白叶蒿的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取 ,运用毛细管气相色谱-质谱联用法对白叶蒿挥发性化
学成分进行了分析 ,用气相色谱面积归一化法测定了各成分的相对百分含量。结果:经毛细管色谱分离出 31 个峰 , 并鉴定出峰
所对应的化合物。其主要化学成分为 2 , 5-辛二烯(41.41%);(z , z)-3 , 5辛二烯(17.87%);桉油醇(6.75%);3 , 3 , 6-三甲基-
1 , 5-庚二烯-4-酮(3.26%);1-甲氧基-4-(2-丙烯基)-苯(2.79%);3 , 3 , 4 , 4 -四甲基己烷(2.71%);1R-α-蒎烯(2.67%);(1-甲基-1 , 2-丙二烯基)环丙烷(2.61%);7 , 11-二甲基-3-亚甲基-1 , 6 , 10-十二碳三烯(2.30%)等。结论:报
道了白叶蒿的化学成分 ,为进一步开发利用提供了科学依据。
关键词:白叶蒿;挥发油;气质联用
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2005)04-0052-03
Studies on the Chemical Constituents of the Essential
Oil of Artemisia leucophylla(Turcz.ex Bess.)Clarke
ZHANG Yan
1 ,ZHANG Hong-bin2
(1.Department of Life and Science Qiongzhou University , Wuzhishan 572200;2.Department of Physical Exercise Qiongzhou University ,Wuzhishan 572200 , China)
Abstract:Objective:To analyse the chemical constituents of Artemisia leucophylla (Turcz.ex Bess.)Clarke.Methods:The essential oil from Ar-
temisia leucophylla(Turcz.ex Bess.)Clarke was extracted by steam distillation and the chemical constituents were analysed by capillary GC-MS
method。 The relative content of each component was calculated by area normalization.Results:31 peaks were separated and all of them were
identified.The main chemical components were 2 , 5-Octadiene(41.42%),(Z , Z)-3 , 5-Octadiene(17.87%), Eucalyptol(6.75%), 1 , 5-
Heptadien-4-one , 3 , 3 , 6-trimethy l-(3.26%), Benzene , 1-methoxy-4-(2-propenyl)-(2.79%),Hexane , 3 , 3 , 4 , 4-tetramethyl-
(2.71%), 1R-alpha-Pinene(2.67%), Cyclopropane , (1-methyl-1 , 2-propadienyl)-(2.61%), 1 , 6 , 10-Dodecatriene , 7 , 11-dimethyl-3-methy lene(2.30%), etc.Conclusion:The results were reported for the first time.The study provided solid and scientific proof for the further
exploitation and utilization of Artemisia leucophylla (Turcz.ex Bess.)Clarke。
第 15卷第 4 期:52
2005 年 8 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.15 , No.4:52
Aug.2005
DOI :10.16519/j.cnki.1004-311x.2005.04.024
Key words:Artemisia leucophylla(Turcz.ex Bess.)Clarke;essential oil;GC-MS
收稿日期:2005-04-20;修回日期:2005-05-28
作者简介:张燕(1968-),女 ,甘肃西和县人 , 讲师 ,硕士 , 研究方向为
资源植物化学 ,发表论文 10余篇。
　　白叶蒿[ Artemisia leucophylla(Turcz.Ex Bess.)Clarke] 为菊
科蒿属多年生草本植物 ,分布于我国东北 、华北 、西北 、西南省
区[ 1 , 2] , 多生于山坡 、林缘 、草地 、路边 、湖岸边。白叶蒿全草药
用 ,有温气血 、逐寒湿 、止血 、消炎的作用[ 1] 。有关白叶蒿挥发
性成分研究至今尚未见到报道 ,本文采用 GC—MS 法对其化学
成分进行了初步研究 ,以期为白叶蒿的进一步研究和开发奠
定基础。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验材料
白叶蒿于 2002年 10 月采自新疆喀什地区 , 经西北师范大
学生命科学学院植物所鉴定。
1.1.2　仪器
挥发油提取器;气相色谱-质谱-计算机联用仪(HP6890
5973型 ,美国 Hewlett-Packark 公司)。气相色谱条件:石英毛
细管柱HP-5MS , 30m×0.25mm , 膜厚 0.33μm。升温程序:从
45℃开始(保持 3min),以 3℃ min升温到 210℃, 再以 10℃ min
升到280℃,载气为He , 柱流量 0.3ml min , 进样口温度 260℃,
进样量 0.1μl , 分流比 50:1。质谱条件:EI源;电离电压 70eV;
离子源温度 230℃;扫描范围 10-550aum。
1.2　方法
取白叶蒿阴干的果实 、叶 40g 放在挥发油提取器中 , 采用
水蒸气蒸馏法进行蒸馏 ,用乙醚做溶剂 , 每 2h 取一次精油 , 蒸
馏时间为 6h , 挥去溶剂得淡黄色油状液体 , 具浓郁蒿香味 , 得
油率为 0.30%(V W)。
2　结果与分析
本实验通过GC-MS 法对白叶蒿挥发性化学成分进行了
分析 ,共分离出 31 个组分 , 经气相色谱处理机用面积归一化
法测定了各组分的百分含量 , 并用气相色谱-质谱联用技术
做挥发性成分的GC-MS 总离子流色谱检测 , 所得质谱图经计
算机质谱数据库检索 ,并按各峰的质谱裂片图与文献资料
核对[3-5] , 确定了白叶蒿的挥发性成分 。 分析鉴定结果见表
1 , 总离子流图见图 1。
图 1　白叶蒿挥发性成分 GC-MS总离子流图
Fig.1　The total ion chromatogram of the essential constituents of Artemisia leu-
cophylla(Turcz.ex Bess.)Clarke
3　讨论
由表 1 可知 ,白叶蒿挥发油的主要化学成分为 2 , 5-辛二
烯(41.41%);(Z , Z)-3 , 5-辛二烯(17.87%);桉油醇(6.
75%);3 , 3 , 6-三甲基-1 , 5-庚二烯-4-酮(3.26%);1-甲
氧基-4-(2-丙烯基)-苯(2.79%);3 , 3 , 4 , 4-四甲基己烷
(2.71%);1R-α-蒎烯(2.67%);(1-甲基-1 , 2-丙二烯基)
环丙烷(2.61%);7 , 11-二甲基-3-亚甲基-1 , 6 , 10-十二
碳三烯(2.30%)等 ,上述 9 种化合物的含量占总量的 82.37%,
化合物类型以烯 、烷 、醇 、酮 、芳香化合物为主。α-蒎烯有明
显的镇咳和祛痰作用 , 并有抗真菌作用[6] ;桉油醇有解热 、消
炎 、抗菌 、平喘和镇痛作用 ,与樟脑等成分组成复方制剂治疗
头疼[6] ;α-水芹烯对支气管有温和的刺激作用 , 制成吸入剂
用作祛痰剂[ 6] ,这为进一步开发利用提供了科学依据。
表 1　白叶蒿挥发性化学成分气-质联用分析结果
Table 1　The result of the essential chemical constituent from Artemisia leucophylla(Turcz.ex Bess.)Clarke analyzed by GC-MS
峰号
Peak No
化合物
Name of compound
分子式
Molecular formular
保留时间
Retain time(min)
相对含量(%)
Relative content
1 甲酸乙酯(Formic acid , ethyl ester) C3H6O 2 2.49 0.63
2 3-甲基己烷(Hexane , 3-methyl-) C7H16 2.60 0.66
4 乙氧基甲基-环氧乙烷〔Oxirane ,(ethoxymethyl)-〕 C5H10O2 3.47 0.47
5 2-甲基庚烷(Heptane , 2-methyl-) C8H18 4.17 0.83
6 2 , 4-二甲基己烷(Hexane , 2, 4-dimethyl-) C8H18 4.36 0.67
7 3 , 3-二甲基己烷(Hexane , 3, 3-dimethyl-) C8H18 5.08 1.18
8 庚醛(Heptanal) C7H14O 8.75 0.71
9 莰烯(Camphene) C10H16 9.85 0.49
10
6 ,6-二甲基-2-亚甲基-(3 , 1 , 1)二环庚烷〔Bicyclo
(3 , 1, 1)heptane ,6 , 6-dimethyl-2-methylene-〕 C10H16 10.06 0.50
11
3 , 7-二甲基-2 , 6-辛二烯-1-醇(2 , 6-octadien-1-
ol ,3 , 7-dimethyl-) C10H18O 12.79 1.05
12 a-水芹烯(alpha-Phellandrene) C10H16 13.34 0.81
13
1-甲基-4-(1-甲基亚乙基)-环己烯〔Cyclohexene , 1
-methyl-4-(1-methylethylidene)〕 C10H16 13.92 0.52
14
1-甲基-2-(1-甲基乙基)-苯〔Bezene , 1-methyl-2
-(1-methylethyl)-〕 C10H14 14.33 1.44
15 桉油醇(Eucalyptol) C10H18O 14.58 6.75
532005 年 8 月　　　　　　　　　　　　　　　　　白叶蒿挥发油成分研究　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
16 1R-a-蒎烯(1R-alpha-Pinene) C10H16 15.04 2.67
17
(1-甲基-1 , 2-丙二烯基)环丙烷〔Cyclopropane ,(1-methyl-1 , 2-
propadienyl)-〕 C7H10 15.54 2.61
18
1-甲基-4-(1-甲基乙基)-1 , 4-环己二烯〔1 , 4-Cyclohexa-
diene , 1-methyl-4-(1-methylethyl)-〕 C10H16 15.98 0.48
19
3 ,3 , 6-三甲基-1 , 5-庚二烯-4-酮(1 , 5-Heptadien-4-one , 3 ,
3 , 6-trimethyl-) C10H16 16.16 3.26
20 (Z , Z)-3 , 5-辛二烯〔3 , 5-Octadiene ,(Z ,Z)-〕 C8H14 18.24 17.87
21 2 , 5-辛二烯(2 , 5-Octadiene) C8H14 18.81 41.41
22
2-甲酰基 -3-甲基 -a -亚甲基 -环丙烷乙醛)Cyclopenta-
neacetaldehyde , 2-formyl-3-methyl-alpha-methylene-) C10H14O2 20.04 0.90
23
1-甲氧基-4-(2-丙烯基)-苯〔Benzene , 1-methoxy -4-(2-
propenyl)-〕 C10H12O 22.76 2.79
24 3-羟基-4-丙烯腈(4-Pentenenitri le , 3-hydroxy-) C5H7ON 23.09 0.48
25 4-(1-甲基乙基)-苯甲醛〔Benzaldehyde , 4-(1-methylethyl)-〕 C10H12O 24.68 0.83
26 2-环戊烯-1-酮(2-Cyclopenten-1-one) C5H6O 25.30 1.18
27
4 ,7-环氧三环[ 4, 1 , 0 , 0 , (3, 5)] 庚烷{4 , 7-Epoxyt ricyclo[ 4, 1, 0, 0 ,
(3 , 5)] heptane} C7H8O 26.68 0.35
28
1-甲氧基-4-(1-丙烯基)-苯〔Benzene , 1-methoxy -4-(1-
propenyl)-〕 C10H12O 26.83 0.83
29
7 , 11-二甲基-3-亚甲基-1 , 6, 10-十二碳三烯(1 , 6, 10-Dodeca-
triene ,7 , 11-dimethyl-3-methylene) C15H24 34.12 2.30
30
1R , 3Z ,9S-4, 11 ,11-三甲基-8-亚甲基二环(7, 2 , 0)-3-十一碳
烯〔1R , 3Z ,9S-4, 11 ,11-Trimethyl-8-methylenebicyclo(7 , 2 , 0)undec
-3-ene〕
C15H24 35.29 1.88
31 3 , 3, 4 , 4-四甲基己烷(Hexane , 3 ,3 , 4 , 4-tet ramethyl-) C10H22 39.66 2.71
参考文献:
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高效液相色谱法测定保健食品中的大豆异黄酮
苏菊1 ,肖白曼1 ,刘宁1 ,刘应竹2(1.黑龙江省疾病预防控制中心 ,黑龙江 哈尔滨 150030;2.黑龙江省科学院自然资源研究所 , 黑龙江 哈尔滨 150040)
摘要:目的:为保证保健食品的质量 ,在比较了现有大豆异黄酮的检测方法的基础上 ,建立了长期用于日常测定食品中大豆
异黄酮的HPLC 方法。方法:采用Waters Spherisorb★R ODS2 色谱 , 柱温 50℃, 以甲醇—冰醋酸水溶液(40:60)为流动相 , 1.2ml min
的流速 ,在 254nm 用紫外检测器进行检测。结果:其重复测定结果的相对偏差在 2.25%,回收率在85%-110%范围内。 结论:该
法简便 、快速 、灵敏度高 、重现性及稳定性均较好 , 适用于保健食品中大豆异黄酮的测定。
关键词:大豆异黄酮;测定;HPLC 法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1004-311X(2005)04-0054-03
收稿日期:2005-07-08;修回日期:2005-08-03
作者简介:苏菊(1962-),女 ,学士 ,副主任技师 ,从事科研管理和食品
卫生检验工作 ,发表论文 10余篇 , Tel:0451-55153651, E-mai l:lyz.mgt
@163.com。
　　大豆异黄酮(Soybean isoflavones , ISO)是大豆中的一类重要
的非营养素成分 ,主要活性成分为金雀异黄素(又称染料木素
genistein ,Gen)和大豆素(daidzein , Dai)及其相应的葡萄糖甙-
金雀异黄甙(genistin)和大豆甙(daidzin)[ 1] 。这些异黄酮类化
合物能降低乳腺癌 、前列腺癌等疾病的发病率 ,缓解更年期因
雌激素分泌减少而引起的停经期综合症和骨质疏松症 , 调节
血脂 、降低胆固醇预防心血管疾病 , 因此 , 国内外对大豆黄素
和金雀异黄素进行了广泛的关注和研究 , 以大豆异黄酮作为
食品添加剂的食品和保健食品也逐渐增多。为保证保健食品
的质量 ,迫切需要建立一个简便 、快捷 、高准确度 、高灵敏度并
能长期用于日常大豆异黄酮检测的方法。
对于大豆异黄酮的检测 ,国家尚未制定统一的标准。目前
大豆异黄酮的检验方法有很多种 ,高效液相色谱法是在众多方
法中最佳的检测方法[ 2-6] 。《保健食品检验与评价技术规范》
(2003)中就有用 HPLC 法测定金雀异黄素的方法[7] 。本文在大
豆异黄酮的检测方法中对色谱柱、流动相选择 、梯度洗脱 、样品
前处理等方面进行了改进 ,能够达到快速、准确的效果。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验材料
大豆异黄酮片:哈高科大豆食品有限责任公司;天赐康牌
孕而美胶囊:黑龙江省天赐康制药有限公司;大豆异黄酮片:
哈药集团世一堂制药厂;骨青春胶囊:哈尔滨渴康生物工程制
品有限公司。
1.1.2　试剂
大豆甙 、染料木甙 、大豆苷元 、金雀异黄素均为 Sigma公司
产品 , 纯度99%。甲醇:色谱纯 , 含量 99.8%,上海陆都化学试
剂厂;水:去离子水;冰醋酸:优级纯 , 含量≥99.5%, 天津化学
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2005 年 8 月 　　　　　　　　　　　　　　　　
生　物　技　术
BIOTECHNOLOGY
　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol.15 , No.4:54
Aug.2005