全 文 ：第 25卷第 1期 西　南　农　业　大　学　学　报 Vol.25 ,No.1
2003年 2月 Journal of Southwest Agricultural University Feb.2003
文章编号:1000-2642(2003)01-0004-03
利用 RAPD技术对碧桃种质资源的分析
程中平
(中国科学院 武汉植物研究所 ,湖北 武汉　430074)
摘要:利用 RAPD技术 , 采用从 200 个随机引物中筛选的 22 个随机引物对 8个碧桃类型的基因组 DNA 进行扩增 , 通过
扩增的 180个位点的谱带的聚类 ,分析供试碧桃的系统发育 , 并运用特殊谱带 ,建立了碧桃的分子检索表 ,并提出了重
点保存的碧桃种质。
关　键　词:碧桃;RAPD;系统发育;分子检索表;重点种质保存
中图分类号:S 685.99;S 602.4　　　　　　文献标识码:A
RAPD ANALYSIS OF THE GERMPLASMS OF
AMGDALUS PERSICA VAR.DUPLEX
CHENG Zhong-ping
(Wuhan Institute of Botany , CAS , Wuhan Hubei 430074 , China)
Abstract:Genomic DNAs of 8 accessions of Amygdalus persica var.duplex were amplified by RAPD with 22 selected primers selected from 200
arbitrary 10-decamer primers.The bands of one hundred and eighty loci amplified were clustered so as to analyze the phylogenetic relationship of
the species.A molecular checking index was established with the specific bands , and proposals for the conservation of its key germplasms are of-
fered.
Key words:Amygdalus persica var.duplex;RAPD;polygenetic relationship;molecular checking index;conservation of key germplasms
　　桃原产中国 ,其观赏桃的种类 、变种 、变型和品种
较多 。碧桃作为观赏桃一类 ,其花为重瓣 ,变形很多 ,
花有颜色之分 ,是极具观赏的一类 ,许多人将其划分
为普通桃中的变种。张秀英等[ 1]在孢粉学方面对桃
花种质的亲缘演化关系作了研究;而在分子生物学的
研究上 ,关于桃花种质遗传多样性的报道不多 。仅张
春英等[ 2]进行了桃花种质资源亲缘演化关系的研究
—RAPD分析 ,但未见将桃花分成类群进行讨论。本
研究则是采用 RAPD技术对碧桃类群的基因组 DNA
扩增 ,并加以分析。从分子生物学的角度 ,探讨碧桃
类群内的发育关系 ,进行品种(类型)的识别 ,提出重
点保存的碧桃种质。
1　材料与方法
1.1　材料
笔者对桃属(Amygdalus)植物 203个材料的 DNA
进行了扩增 。本文着重对其中的碧桃(A.Persica var.
duplex)试材分析。供试桃树材料取自郑州果树研究
所 。见表 1(沿用原全部供试桃属植物材料编号)。
表 1　供试材料
编号 J01 J02 J03 J04 J05 J06 J07 J08
名称 绛桃 洒红桃 五宝桃 人面桃 绯桃 红花碧桃 碧桃 红碧桃
1.2　方法
DNA的提取及其扩增 、观察记录 、分析等方法在
繱收稿日期:2002-01-19基金项目:中国科学院方向项目(KSCX 2-SW-104),武汉市晨光计划项目(985003074),华中农业大学国家作物改良重点实验室资源项目作者简介:程中平(1963-),男 ,湖北武汉人 ,中国科学院武汉植物研究所副研究员 ,从事品种资源研究。
DOI :10.13718/j.cnki.xdzk.2003.01.002
已发表的论文中作了报道[ 3～ 4] 。
2　结果与分析
2.1　碧桃的带型识别
本研究搜集 8个碧桃 ,经对其 DNA扩增 ,表现出
了多态。用 Gene RulerTM 100 bp DNA Ladder Plus 和
Lambda DNA/EcoR Ⅰ +Hind Ⅲ作分子量标记(寿星
桃 、红叶桃 、垂枝桃 、碧桃 、硬肉桃 、蜜桃 、水蜜桃 、蟠
桃 、油桃 、黄肉桃等类群各取 1 ～ 2个品种参与 Gene
RulerTM 100 bp DNA Ladder Plus电泳 ,对每 1引物扩出
桃中各类群这些代表品种比较准确确定主要带的分
子量 ,对其他用 Lambda DNA/EcoRⅠ+Hind Ⅲ作标记
电泳的样品可参照 100 bp Ladder 分子量标记的主要
带及 Lambda DNA/EcoRⅠ +Hind Ⅲ分子量标记带来
综合确定分子量范围)。例如经 S459扩出的带中(图
1)人面桃 、红花碧桃在 S459-930 bp 处较其他碧桃少
1条带 ,五宝桃 、洒红桃 、绯桃 、碧桃在 S459-1 000 bp
处有带;绛桃 、红碧桃在 S459-930 bp有带 ,而在 S459
-1 000 bp处无带;在 S17引物扩出的带中(图 2),人
面桃 、碧桃在S17-950 bp处比其他碧桃多出 1条带 ,
碧桃在S17-900 bp处较其他碧桃少 1条带 ,经S341引
物扩带中(图 3),红花碧桃比其他碧桃多出 1条 S341
-850 bp带。综合其他引物的 RAPD标记带 ,建立分
子标记检索表如下:
1.有S464-650 bp带 人面桃…………………………
1.无S464-650 bp带
　2.有 S68-1 400 bp带 红碧桃……………………
　2.无 S68-1 400 bp带
3.有S51-700 bp带 碧桃………………………
3.无S51-700 bp带
　4.有 S341-850 bp带 红花碧桃………………
　4.无 S341-850 bp带
　　5.无S459-1 000 bp带 绛桃………………
　　5.有S459-1 000 bp带
　　　6.有 S17-950 bp带 五宝桃……………
　　　6.无 S17-950 bp带
　　　　7.有S29-1 400 bp带 洒红桃………
　　　　7.无S29-1 400 bp带
2.2　碧桃的聚类分析
将聚类图(图 4)的相似度在 0.851处作为结合
线 ,则分为两类 ,一类为人面桃 ,另一面为洒红桃 、绛
桃 、绯桃 、红碧桃 、红花碧桃 、碧桃。如在 0.879处作
一结合线 ,将上面第 2类分为 2个亚类 ,第 1亚类含
洒红桃 、五宝桃 、绯桃 、红碧桃;第 2亚类含绛桃 、红花
碧桃 、碧桃 。
2.3　多态带数和特殊位点及重点保存种质
从 8个碧桃的多态带来看(表 2),绛桃最低 ,洒
红桃多态带数倒数第 3 ,且均无自己的特殊位点 ,说
明它们的位点均被别的碧桃包含 。人面桃的多态带
数虽位居倒数第 2 ,但它的特殊位点却最多。其他红
花碧桃 、碧桃 、红碧桃均有自己的独占 1 ～ 3个位点 ,
且红碧桃的多态带最多。供试的8个碧桃中 ,重点保
存的种质应是人面桃 ,红碧桃 、红花碧桃 、碧桃也要纳
入种质保存之列 。
M1:DNA分子量标记 Lambda DNA/ EcoR Ⅰ +Hind Ⅲ;J编号见表 1;
G07:白花山碧桃;F01:GF 655;F02:GF 677;0编号:水蜜桃品种;R编
号:黄肉桃品种;H 编号:桃砧木类型。
5第 25卷第 1期　　　　　　　　程中平　利用 RAPD技术对碧桃种质资源的分析
表 2　多态带数及特殊位点
编号 名　称 多 态带 数
特　殊　位　点
S454 ～ 650bp S68 ～ 1400bp S167 ～ 500bp S341～ 850bp S341～ 1000bp S65 ～ 1100bp S21 ～ 1200bp S60 ～ 600bp S51～ 700bp S444～ 1500bp
该样独
占位点
J01 绛　桃 98 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
J02 洒红桃 103 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
J03 五宝桃 107 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
J04 人面桃 100 1 0 1 0 1 1 0 0 0 0 4
J05 绯　桃 109 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
J06 红花碧桃 106 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 2
J07 碧　桃 104 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1
J08 红碧桃 110 0 1 0 0 0 0 1 1 0 0 3
3　讨论
本研究对 8个碧桃类型作 RAPD分析 ,所采用的
筛选 22个引物 ,每个引物都能扩出 1个或几个供试
材料的特殊带 ,利用此特殊带可以建立分子检索表 ,
从分子生物学方面为碧桃的类型识别提供了又一方
法。对于碧桃类型的遗传背景不十分清楚的情形 ,可
从聚类分析提示其系统发育关系 。对过去仅凭外观
形态 ,提出重点保存种质的方法 ,在分子生物学方面
得到了进一步的补充。为碧桃种质的保存和利用提
供了分子生物学依据 。
(本研究承蒙中国农业科学院郑州果树所朱更瑞
先生 、 江苏省园艺所郭　洪先生 、 北京市林果所
姜　全先生及其他同仁提供试材和资料 , 在此一并
致谢。)
参考文献:
[ 1] 　张秀英 , 王　雁 ,王桂萍.桃花种质资源花粉形态的观察
与比较[ J] .北京林业大学学报 , 1997 , 19(2):58-62.
[ 2] 　张春英 , 林同香 , 戴思兰 , 等.桃花种质资源亲缘关系的
研究———RAPD分析[ J] .北京林业大学学报 , 1999 ,(21):
26-31.
[ 3] 　程中平 , 陈志伟 , 胡春根 , 等.利用 RAPD 技术对新疆桃
分类地位的探讨[ J] .园艺学报 , 2001 , 28(3):211-217.
[ 4] 　程中平 , 陈志伟 , 胡春根 , 等.亲缘关系相近的桃品种的
RAPD分析[ J] .湖北农业科学 , 2001 ,(3):41-43.
6 西　南　农　业　大　学　学　报　　　　　　　　　　　2003年 2月