全 文 ：现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 27 卷 第 4 期 2012 年 7 月 • 363 •
高速逆流色谱法从多花蒿中分离制备阿格拉宾
刘 钫 1，陈卫平 1，李清娟 1，李 健 2
1. 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 河北省制剂工程技术研究中心，河北 石家庄 050051
2. 石家庄市第二医院，河北 石家庄 050051
摘 要：目的 采用高速逆流色谱法分离制备多花蒿中阿格拉宾。方法 多花蒿乙醇提取物经硅胶柱色谱分离，所得组份
Fr. 1 用高速逆流色谱进一步分离，采用正己烷–醋酸乙酯–甲醇–水（1.2∶0.8∶1.5∶0.5）为两相溶剂系统，上相为固定
相，下相为流动相，主机转速 850 r/min，体积流量 2.0 mL/min，检测波长为 254 nm。采用波谱法对所得化合物进行结构鉴
定，HPLC 法测定产品的纯度。结果 从 500 mg 组分 Fr. 1 中得到 260 mg 质量分数为 99.5%的阿格拉宾。结论 该方法操作
简单，可用于阿格拉宾化学对照品的分离制备。
关键词：多花蒿；阿格拉宾；高速逆流色谱；对照品
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2012)04 - 0363 - 03
Separation and preparation of arglabin from Artemisia myriantha by high speed
counter-current chromatography
LIU Fang1, CHEN Wei-ping1, LI Qing-juan1, LI Jian2
1. Hebei Pharmaceutical Technology and Engineering Research Center, Shijiazhuang Pharm. Group Zhongqi Pharmaceutical
Technology (Shijiazhuang) Co. Ltd., Shijiazhuang 050051, China
2. The Second Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang 050051, China
Abstract: Objective To establish a method for the isolation and preparation of arglabin from Artemisia myriantha by high speed
counter-current chromatography (HSCCC). Methods The ethanol extract of A. myriantha was separated with silica gel column
chromatography, and the obtained Fr. 1 was further separated by HSCCC with a two-phase solvent system composed of
n-hexane-ethylacetate-methanol-water (1.2:0.8:1.5:0.5). The lower phase was used as mobile phase, and the upper phase was used as
the stationary phase. Main engine speed was 850 r/min, and the detection wavelength was 254 nm at a flow rate of 2.0 mL/min. The
obtained fraction was identified by spectral analysis and analyzed by HPLC. Results A total of 260 mg arglabin with the purity of
99.5% was successfully obtained from 500 mg Fr. 1. Conclusion The results indicate that HSCCC is a simple and rapid method for
the separation and preparation of arglabin reference substance.
Key words: Artemisia myriantha Wall. ex Bess.; arglabin; high speed counter-current chromatography (HSCCC); reference substance

多花蒿 Artemisia myriantha Wall. ex Bess.又名
蒿枝、苦蒿、黑蒿，为菊科蒿属多年生草本植物，
产于我国山西中条山、甘肃南部、青海、四川、贵
州、云南及广西，常见生于山坡、路旁和灌丛中。
民间认为多花蒿具有清热、祛暑、凉血止血的功效，
用于治疗夏季感冒、中暑发热、骨蒸、潮热、吐血、
衄血[1]。研究发现多花蒿含有的倍半萜内酯类化合
物阿格拉宾（arglabin）具有抗肿瘤活性，可用于肝
癌、乳腺癌等多种癌症的治疗[2]。阿格拉宾的结构
式见图 1。高速逆流色谱是近几十年来迅速发展起
来的一种连续高效的液–液分配色谱分离技术，其
特点是被分离物质在两液相中进行分配分离，不需
任何固相支撑体，克服了固相载体不可逆吸附而引
起样品的损失、失活和变性，具有适用范围广、操
作灵活、高效快速、制备量大、费用低的优点，已
被广泛应用于天然产物分离等领域[3-6]。本实验采用
高速逆流色谱从多花蒿中分离、制备活性成分阿格
拉宾，为制备阿格拉宾化学对照品提供了一种简捷、

收稿日期：2012-05-17
基金项目：科技部“十一五”重大新药创制项目（2010ZX09401-402）
作者简介：刘 钫（1969—），女，河北省张北县人，工程师，硕士，主要从事新药研发工作。E-mail: fangl1121@126.com
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图 1 阿格拉宾的化学结构
Fig. 1 Chemical structure of arglabin
实用的方法。
1 仪器与材料
TBE—300B 型高速逆流色谱仪（上海同田生化
技术有限公司）；Agilent 1200 高效液相色谱仪（美
国安捷伦科技公司）；X—4 数字显示显微熔点测定
仪（北京泰克仪器有限公司）；API 4000 型 LC/MS
（美国 ABI 公司 )；AM— 500 型核磁共振仪
（Bruker）；BS323S 电子天平（北京赛多利斯仪器
系统有限公司）。
柱色谱用硅胶（100～200 目，青岛海洋化工集
团公司）；GF254 薄层硅胶板（烟台信德化学有限
公司）。多花蒿药材购于云南省昆明市郊区，经中国
科学院华南植物园刘焕芳博士鉴定为菊科蒿属植物
多花蒿 Artemisia myriantha Wall. ex Bess.。阿格拉宾
对照品（实验室自制，质量分数为 99.7%）；乙腈（色
谱纯，Fisher 试剂公司）；其他试剂均为分析纯；
水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 样品的制备
多花蒿药材晒干，粉碎，过 60 目筛，取 100 g
药材粉末，乙醇加热回流提取 2 次，每次 1 h，合并
提取液，减压回收乙醇，得稠膏 15 g。以二氯甲烷
溶解，与 100 目硅胶搅拌均匀，挥干溶剂，上于 100
目硅胶柱，以石油醚–醋酸乙酯（8∶2）洗脱，根
据薄层色谱检测结果合并相同流份，蒸干，共得 6
个组分 Fr. 1～Fr. 6，对组分 Fr. 1 进行减压浓缩、干
燥，得 1.2 g 干膏。
2.2 高速逆流色谱分离
2.2.1 溶剂体系的选择 结合阿格拉宾的化学性
质，选择氯仿–甲醇–水和正己烷–醋酸乙酯–甲
醇–水两种体系通过薄层色谱法进行筛选。分别按
不同比例配制上述两个体系，取上、下相各 10 mL
于 50 mL 具塞量瓶中，加入干膏 20 mg，振摇，转
移至分液漏斗中，静置分层，分别吸取上、下两层
溶液各 10 μL，另取阿格拉宾对照品溶液 10 μL，分
别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚–醋酸乙酯
（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%
硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。薄层色谱的
结果表明：溶剂体系为氯仿–甲醇–水（4∶3∶2、
4∶3∶1、4∶3∶1）时，阿格拉宾基本集中在下相
中，不符合溶剂体系选择的要求；溶剂体系为正
己烷–醋酸乙酯–甲醇–水（1∶1∶1∶1、2∶1∶
2∶1、1.2∶0.8∶1.2∶0.8、1.2∶0.8∶1.5∶0.5）时，
阿格拉宾在上、下相溶剂体系中都有不同程度地出
现，其中以正己烷–醋酸乙酯–甲醇–水（1.2∶
0.8∶1.5∶0.5）时分配系数最接近 1，体系的分层时
间为 15 s，符合溶剂体系选择的要求。因此通过薄
层色谱对溶剂体系的试验，确定正己烷–醋酸乙酯
–甲醇–水（1.2∶0.8∶1.5∶0.5）为高速逆流色谱
分离多花蒿中阿格拉宾的溶剂体系。
2.2.2 分离操作 将正己烷–醋酸乙酯–甲醇–
水（1.2∶0.8∶1.5∶0.5）溶剂系统加入分液漏斗中，
充分振摇后，静置 24 h 分相，以上相为固定相，下
相为流动相，采取正相洗脱方式进行分离。取 Fr. 1
组分干膏 500 mg，用溶剂体系的上相和下相各 l0
mL 溶解样品，备用；将上、下相超声脱气 60 min，
先将固定相以 20 mL/min 灌满分离柱，待有上相流
出后，停泵，缓慢调节高速逆流色谱仪的转速至 850
r/min，以 2 mL/min 泵入流动相，设定检测波长为
254 nm，分离温度为 25 ℃，待基线平稳后进样 20
mL，采集数据，根据色谱图手动收集各色谱峰组分，
分别进行浓缩、干燥。结果固定相保留率为 57.7%，
分离时间 2 h，进样后 40 min 开始出峰，共 3 个峰，
其中 1、2 号峰成分复杂，有待于进一步分析研究；
得到 3 号峰的流份质量为 260 mg。高速逆流色谱图
见图 2。

图 2 组分 Fr. 1 的高速逆流色谱图
Fig. 2 HSCCC chromatogram of Fr. 1
2.3 结构鉴定
白色针状结晶（正己烷），mp 100～102 ℃，
ESI-MS m/z：515.9 [2M＋Na]+，269.7 [M＋Na]+，

0 25 50 75 100 125
t /min
1
2
3
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247.1 [M＋H]+，确定其相对分子质量为 246。
1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：1.35（3H，s，H-14），
1.97（3H，s，H-15），2.18（2H，H-2），2.73（1H，
d，J=2.2 Hz，H-7），2.95（1H，d，J=10 Hz，H-5），
4.00（1H，t，J=10 Hz，H-6），5.58（1H，s，H-3），
6.1（1H，s，H-13），5.42（1H，s，H-13）。13C-NMR
（150 MHz，CDCl3）δ：18.2（C-15），21.4（C-8），
22.7（C-14），33.4（C-9），39.7（C-2），51.0（C-7），
52.8（C-5），62.6（C-10），72.3（C-1），82.96（C-6），
118.2（C-13），124.8（C-3），139.1（C-11），140.4
（C-4），170.4（C-12）。以上波谱数据与文献报道[7]
一致，确定其为阿格拉宾。
2.4 纯度分析
色谱条件：Angilent Zorbax C18 色谱柱（250
mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：水–乙腈（38∶62）；
体积流量：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；进样
量：10 μL。对 3 号峰阿格拉宾进行 HPLC 检测，结
果保留时间为 6.80 min。采用峰面积归一化法计算
其质量分数为 99.56%。
3 讨论
溶剂体系选择是高速逆流色谱法分离的关键环
节，通常在上下两相分层时间小于 30 s，待分离组
分的分配系数在 0.6～1.5 时分离效果较好。本实验
所确定溶剂体系分层时间为 15 s，阿格拉宾上下两
相的分配系数接近 1，取得了较好的分离效果。
试验前期曾试图从多花蒿乙醇提取物中直接分
离阿格拉宾，但由于多花蒿化学成分复杂，阿格拉
宾紫外吸收较弱，难以实现分离，后采用硅胶柱色
谱结合高速逆流色谱分离，可以有效地对阿格拉宾
进行分离。
本实验建立了高速逆流色谱从多花蒿中分离、
制备阿格拉宾的方法，该方法具有操作简便快速、
重复性好、样品制备量大且纯度高等特点，可作为
阿格拉宾化学对照品的制备方法。
参考文献
[1] 中国科学院中国植物志编委会. 中国植物志 [M]. 第
76 卷第 2 分册. 北京: 科学出版社, 1991: 164.
[2] Appendino G, Gariboldi P, Menichini F. The
stereochemistry of arglabin, a cytotoxic guaianolide from
Artemisia myriantha [J]. Fitoterapia, 1991, 62: 275-276.
[3] 曹学丽. 高速逆流色谱分离技术及应用 [M]. 北京: 化
学工业出版社, 2005: 1.
[4] 陈小芬, 黄新异, 郑媛媛, 等. 高速逆流色谱分离纯化
天然产物中生物碱类成分的应用进展 [J]. 中草药 ,
2011, 42(5): 1026-1032.
[5] 韩利文, 陈锡强, 袁延强, 等. 高速逆流色谱在中药现
代化研究中的应用 [J]. 现代药物与临床, 2010, 25(4):
241-246.
[6] Wan J Z, Chen X X, Qiu C M, et al. Isolation and
purification of isoaloeresin D and aloin from Aloe vera by
high-speed counter-current chromatography [J]. Chin
Herb Med, 2010, 2(2): 148-152.
[7] Wong H F, Brown G D. Dimeric guaianolides and a
fulvenoguaianolide from Artemisia myriantha [J]. J Nat
Prod, 2002, 65(4): 481-486.