全 文 ：201 0年 1 月第 l期 中闯民族医药杂志 45
香青兰药材 H PC L指纹图谱的研究△
买买提 ·努尔艾合提 ,
( 1
. 新疆维吾尔医学专科学校 , 新疆
吐尔洪 ·艾 买尔’ 罗光明 2 徐丽芳2
和 田 斜 8X( X) ; 2 . 江西 中医学院 , 江西 南昌 3 0以科
摘 要 : 目的 : 建立香青兰药材反相高效液相 色语 (RP 一 Hp LC )指纹 图谱分析方 法 , 为有效控制香青兰 药材的质量莫定基
拙 。 方法 :采用 RP 一 H卫L C , 色谱柱为 狂km a 一 C l: , 甲醇 一 0 . 2 %磷酸水梯度洗脱 , 紫外检测波长为 犯 s unr , 流速为 0 . 8 一 0 . 5耐
而n , 分析时 间为 50 而 n , 分析了 1 批香青兰药材的 I IP LC 指纹图语 。 结果 :在选定的色谱条件下 以 田蓟普为参照峰 , 通过相
似度分析确定 1 个色谱峰构成香青兰药材指纹图谱的特征峰 。 结论 :采用 RP 一 HP【尤 所建立的指纹图谱具有稳定 、 重复性
好的特点 , 可用于香青兰药材的质量控制 。
关键词 :香青兰 ;指纹图谱 ;反相高效液相色谱法
中图分类号 二IU约 1 . 5 文献标识码 : B 文章编号 : l以巧 一 6 8 10( 20 10) 01 一以拜5 一 。
香青兰为维吾尔医常用药材 , 为唇形科 ( Z砧 王`“ 口刃 )植物 水为高纯水 。
香青兰 (肠以况哪功川二 mD I成邓 l纪 a L . )的干燥全草 ,维吾尔语
名为 Badr anj ivbu 呵 in ,主产于新疆 , 目前在新疆各地有栽培 。
该药材在维吾尔医和民间主要用于治疗冠心病及血液质旺
盛 (高血压 ) 、 心悸心痛 、 头晕脑胀 、 反应迟钝 、感觉低下 、 寒
性神经性头疼 、寒性感冒 、 气管炎等疾病 〔` 〕 ,有数百余年的
用药历史 。
香青兰 主要含有挥发油 2jt 、 黄酮类 3t, `川 、 氨基酸 、 多
糖 、微量元素圈等成分 , 有保护心肌缺血川 、 改善血液流变
性及血小板功能 8j[ 、 提高机体抗氧化酶活性图 等药理作用 。
目前为止一直缺乏综合评价和分析香青兰药材品质的方
法 。 中药材指纹图谱是近年来被国际公认的控制中药或天
然药物质量的有效方法 ,其优点在于可全面反映中药复杂
的化学成分及其相对比例 。 本研究采用反相高效液相色谱
法 (RP 一 HP LC ) ,建立了新疆和田地区栽培的香青兰药材的
指纹图谱 ,为香青兰药材的质量评价提供了依据 。
1 实验材料
1
.
1 仪器 : A刘 e in 12X() 高效液相色谱仪 (紫外检测器 , 四元
梯度泵 ) ;众anI a 一 C l: 柱 ( oZ m x 4
.
6m
,
5胭 ) ; B砚 l l D 电子
天平 ( Saxot ir us , 万分之一 ) 。
1
.
2 药材与试剂 : 1 批香青兰药材的来源见表 1 ,经新疆
维吾尔自治区药物研究所张彦福研究员鉴定为唇形香青兰
肠配优eP ha unz mD 以哪正忆 a L . 的干燥全草 。 将上述药材经常
温干燥后 ,粉碎成粗粉 (过 so 目筛 ) ,备用 。 田蓟昔对照品
( 自备 ) ,经 壬护L C 归一化法检测 ,含量达到 98 . 0% 以上 。 高
效液相用甲醇为色谱纯 ,皿刃IA 公司 ;其余试剂为分析纯 ;
表 1 香青兰药材的来源
编号 播种期 采收期 采集地点
01 刃刀年 3月底 期 ,年7月中 新疆墨玉县芒来乡达汗村2组
位 Z切年 3月底 么刀,年 7月中 新疆墨玉县芒来乡达汗村2组
叮 欲刀年3月底 溯 7年7月中 新疆墨玉县芒来乡达汗村4组
以 胡 7年3月底 2切年 7月中 新疆墨玉县芒来乡达汗村5组
仍 岌切年 3月底 划 7年 7月中 新疆墨玉县芒来乡达汗村6组
肠 欲刀年 6月中 拟刀年 9月底 新疆墨玉县芒来乡阿克塔木村 l组
价 划 7年6月中 期 ,年 9月底 新疆墨玉县芒来乡阿克塔木村 2组
倪 么功 年6月中 刀刀年9月底 新疆墨玉县芒来乡阿克塔木村 4组
伪 期 7年 3月底 2刀7年 7月中 新疆洛浦县纳瓦乡卜热客村1组
10 翎 ,年 3月底 Z刃,年 7月中 新疆洛浦县纳瓦乡卡热客村3组
△国家十一五科技支撑计划项目 (子课题编号 2X() 7 B习 30 B(汤 一 4)
作者简介 : 买买提 ·努尔艾合提 ( 1叨 3 ) , 在职硕士 ,从事维吾尔药
材资源开发研究。 E - m 函1: , n叮毗 一 un r@ 163 . co m
1 轰旧7年3月底 划 ,年 7月中 新疆洛浦县纳瓦乡卡热客村3组
2 方法与结果
2
.
1 参照物溶液的配置 : 精密称取 田蓟昔对照品 l m g , 置
于 25 而 容量瓶中 , 甲醇溶解并稀释至刻度 。
2
.
2 供试品溶液的制备 : 取香青兰药材粉末 (过 30 目筛 )
0
.
5 9
,精密称定 ,置 10 而 的锥形瓶中加甲醇 20 d ,称重 , 加
热回流 hl ,放冷 ,补失重的甲醇 ,滤过 , 再 0 . 45 脚微孔滤膜
滤过 ,取续滤液作为供试品溶液 。
2
.
3 色谱条件 : 色谱柱 : 场肠旧 a 一 lC 。柱 (4 . 6~ x Z印~ ,
5阿 ) ;流动相 : 甲醇 0 . 2% 磷酸水 ;洗脱方式 : 梯度洗脱 , 甲
醇 : 0 一 8而 n ( 25 一 4() % , 流速 0 . 8耐而 n ) , 10 一 3 5而 n ( 4D -
65 %
,流速 0 . 5耐~ ) ; 50 而 n (停止 ) ;检测波长 : 328 nl ; 进样
量 1卿 ,手动进样 。
DOI : 10. 16041 /j . cnki . cn15 -1175. 2010. 01. 031
4 6 中闯民族 医药杂志 0 210 年 1 月第 l 期
2
.
4 测定方法 : 吸取 田蓟昔对照 品溶液和供试品溶液各
10沁, 按 2 . 2 项下的色谱条件进行分析 ,结果见图 1 、 图 2o
同 n 批香青兰药材的指纹图谱 , 结果如图 2 所示 。 将这 n
批供试品药材的指纹图谱数据输人药典委员会制定的用于
生成共有模式的《中药指纹图谱相似度计算软件》 A 版中 ,
进行时间窗宽度的设定 、 多点校正 、 谱峰匹配 ,最后生成了
对照图谱 (R 见图 3 , 图 4) , R 含有 1 个共有色谱峰 , 基保 9
号峰为已知成分 田蓟昔的色谱峰 , 并峰面积较大 , 且较稳
定 。 根据《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南 (试
行 )》 , 选择 9号峰作为参照峰 。 各峰相对保留时间 、 相对峰
图 2 香青兰药材提取物的 PH 一 HP LC 色谱图 (样品 3)
2
.
5 方法学考察
2
.
5
.
1 精密度试验 :取同一批药材 ( 3 号药材 ) ,按 2 . 1项下
方法制备供试品 ,按 2 . 2 项下色谱条件连续进样 5 次 ,测定
其 RI, 一 I护 LC图谱。 选出 1 个共有指纹峰进行考察 , 以 9
号峰为参照峰 , 结果表明各共有峰相对保留时间的 B S D 值
< 0
.
07 %
, 相对峰面积的 F S D 值 < 1 . 25 % (见表 2 ) 。 表明仪
器精密度良好 。
2
.
5
.
2 重复性试验 : 取同一批药材 5 份 , 按 2 . 1 项下方法
制备供试品 ,按 2 2 项下色谱条件分别进样 , 测得各共有峰
的相对保留时间的 RS D 值 < 1 . 25 % ,相对峰面积的 RSD 值
< 3
.
42 % (见表 3) ,结果表明本试验方法的重现性良好 。
2
.
5
.
3 稳定性试验 :取同一批药材 ,按 2 . 1项下方法制备
供试品 ,按 2 . 2 项下色谱条件分别在 0 , 4 , 8 , 12 , 24 h 进样 ,测
得各共有峰的相对保留时间的 RS D 值 < 1 . m % ,相对峰面积
的 RSD 值 < 3 . 4 % (见表 4) ,表明样品溶液在撕 内稳定 。
2
.
6 指纹图谱及各项技术参数 : 按上述方法检测表 1 中不
表 2
各色谱峰的相对保留时间的 RS D < 0 . 26 % ,相对峰面
积的 RSD 较大 。 对表 6 进行仔细分析 , 可看出在 1 个样品
中 ,所有 n 个特征峰中 9S 的相对峰面积 比较明显的偏离
平均值 ,因此导致相对峰面积的 ES D 较大 ,说 明这 1 批药
材个别批次的成分含量差异较大 。
2
.
7 指纹图谱相似度计算 :将 1 批香青兰 样品指纹图谱
的 A IA数据文件导入国家药典委员会制定的用于生成共有
模式的《中药指纹图谱相似度计算软件》A 版 ,计算各样品
指纹图谱与生成的对照图谱 R 的相似度 ,结果见表 7 。
精密度试验
峰号
10 1 1
RS D 相对保留时间 肠 0 . 05 0 . 03 07 0 . 02 0 .肠 0 .肠 0 .以 0 . 03
RS D相对峰面积 0 . 46 0 . 6 1 0 . 62 8 1 0 . 5 3 0 . 14 0 . 67 0 . 34
表 3 重复性试验
峰号
0360239
0
.
32
2
.
82
0
.
25 0
.
20 0
.
03
3
.
42 2
.
5 5 2
.
83
4620
ù
6QU一、ù口ORS D 相对保留时间
RS D 相对峰面积
25 0
.
7 0
9 3
,
42
加10 年 l 月第 l 期 中目民族 医药杂志 4 7
表 4 稳定性试验
峰号 10
1
.
m
2
.
47
0
. 男
2
.
53
0
.
7 20
.
1 50
.
39 0
.
3 1 0
.仍 0 . 以
0
.
76 3
.
4 3
.
4 2 2
。
0 2
0
. 肠
3
_
3 8 2
.工 3 。 13
0l7 5R SI」相对保留时间
R S D相对峰面积
表 5香青兰样品共有峰的相对保留时间
峰号 l 0 1诌 D
2
ù七6习内j几,卫4口. .…0
0 25 8
4Qù97气à J咔3954867…0onù八U
0
.
7 83 0
.
0 85
0
.
8 5 5 0
.
0 57
1
.
(减刀 0 . 以刀
1
.的 9 0 . m 9
39548671溯0拼54789631咖039547862溯0飞é夕匕n6咤àú月ù山24R内,ùn6月乡5ùf6`1U1…00
0
.
7 82
854哪咖
3954786溯脚39546872姗039546872咖闻nà001内jùb只Uō内名2月竹no声3954867团0..…0nU12朔546837003945867
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.
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.
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611
853溯854 09姗0398910
1 1 1
.
1 14 1
.
1 14 1
.
11 3 1
.
1 14 1
.
113 1
.
1 14 1
.
11 1 1
.
1 14 1
.
114 1
.
114 1
.
1 14 0
. 的 l
表 6 香青兰样品共有峰的相对峰面积
峰号 l 0
0
.
1 10 0
嘟075183伽200
468心92翔053姗
21,ùō212-682549脚1溯7
0
.
30 1 0 0
.
0 18
0
.
0 12
0
.
81 6 0
.
0 1 1
0
.
0 34
0
.
0 17
0
.
0 1 1
0
.
lm
0
.
3 0 1
0
.
0 17
溯421057323519068咖姗哪,人一牡nl嗯.
30542167姗8
05162870
.
125
óUOǎU00413脚哪850 . 12 8
5378珊62
0020
.
37 1
0
.
43 9 0
.
36 1 0 0
.
35 8 0
.
35 2
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.男 1
0
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0
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23154溯69
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10238745叫溯9onù0,口n01
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叫2160839溯a70OCù,一0CIn
23456789101
艺 8 2 . 2 8 8 6 . 13 3 8 1 . 5 03 84 . 2 1 84 . 18 8 1 . 5 2 8 1 . 7 9 8 3 . 15 刀 . 8 5 87 . 5 9 84 . 10
艺为共有峰面积百分比 %
表 7 相似度分析结果
产地及栽培
时间
样品编号
相似度
平均相似度
墨玉县忙来乡大汉村 7 月中采收 墨玉县忙来乡阿克塔木村 9月底采收
新疆洛浦县纳 瓦乡
卡热客村 7 月中采收
10734
0
.
9 8 0
.肠 7 9 5 0 . 95 5
97 7
0
.
1书艘5 0 . 8 87 0 驯万 0 . 897 0 . 75 6 0
8 97 0
1 l
0
.
70 1
3 讨 论
3
.
1 提取方法的选择 : 通过对提取方式 (超声 、 冷浸 、加热
回流提取 )的考察 ,发现超声与冷浸的提取效果相当 ,但所
得色谱图的总峰面积远小于热回流提取所得色谱图的总峰
面积 。 而对提取溶剂 ( 甲醉 、 50 % 甲醇水溶液 、 75 % 乙醇水
溶液 )考察后发现 ,与后 2 种溶剂 比较 , 甲醇提取物所得色
谱峰的信息量最多 ,且总峰面积最大 。 同时也对不同提取
时间 ( 30 、 o 、 90 而n) 对提取物的影响进行了考察 ,发现甲醇
4 8 中闯民族医药杂志 20 10 年 1月第 l 期
热回流提取 60 ~ 后色谱图的总峰面积最高
。 所以综合以
上因素最终选用纯甲醇为提取溶剂 ,热 回流提取 印而 n 为
香青兰药材的提取方法 。
3
.
2 参照物的选择 : 香青兰主要有效成分为黄酮 类化合
物 , 据文献报道以 `川 香青兰含有青兰 黄酮 A , 青兰黄酮 B ,
洋芹素 (ian ge in ) , 洋芹素 一 7 一 o 一 p 一 D 一 葡萄毗喃糖昔 ,
田蓟昔 ( t il 画 n ) , a g as t a e )l o s id e , 木犀草素 ( lu t浏 in ) , 山奈酚
(ka
e m p fe
r o
l )
, 异鼠李素 ( is o r ll aZ l l~ )等十几种黄酮类成分
,
其中含量较多而且稳定 , 并对抗动脉粥样硬化 的成分为田
蓟昔 〔`。〕 ,故以田蓟昔选择为参照物 。
3
.
3 色谱条件的选择 :分别用 甲醇 一 0 . 2% 磷酸水 、 甲醇 -
水 、 乙睛 一 水为流动相 , 以不同梯度进行试验 ,结果表明用
甲醇 一 0 . 2% 磷酸水梯度洗脱效果最好 。 同时采用紫外检
测器对指纹图谱 的检测波长进行 了选择 , 首先从中选 出
31 0
、
32 0
、
32 8
1翻召 个分离度较好的波长 , 然后进一步通过分
析比较这 3 个波长下的指纹图谱 ,发现检测波长为 328 lun
时色谱图所包含的信息量最大 ,且各色谱峰分离较好 ,基线
较平稳 。 后采用实验选定的色谱条件对 n 批香青兰药材
进行指纹图谱研究 ,实验证明选定的色谱方法可操作性强 ,
重量现性好 ,可作为香青兰药材指纹图谱研究的基础 。
3 4 指纹图谱的评价 : 由表 7 可见 ,除 9 号 、 10 号 、 n 号样
品外其他 8批药材的相似度均在 0 . 8 以上 ,相似度高 ,说
明这 8批药材的质量是相对稳定的 。 而 9 号 、 10 号 、 1 号
药材相似度较低 ,分别为 0 . 75 7 , 0 . 7 73 , 0 . 701 。 表 6 的数据
说明 , 除了 9 号样品的含量与平均值差别较大 (7 . 8 % )外 ,
其他 10 批样品的平准含量都在 81 . 5 一 87 . 5% 之间 ,说 明选
取的 n 个峰的总含量上没有多大的差异 ,但每一个峰之间
存在含量的差异 ,说明这 1 批药材之间存在各成分含量的
差异 。
对相似度结果进人深人分析 ,发现其中 9 、 10 、 1 号香
青兰药材多为药材的杆子 ,基本上不带叶 , 可能在药材采收
过程中不注意采收期或药材干燥不 当导致叶片的损失 , 一
方面可能是因为采收 、 产地加工不当导致了其成分的变化 ;
当然另一方面也可能是由于产地和栽培时期不同造成各成
分的含量不同而相似度的较低 。 从本试验的相似度计算结果
可知 ,产地相同栽培时期不同的香青兰药材相似度也存在差
异 ,说明本文建立的分类方法更强调样品的内在化学特征 。
3
.
5 结论 : 本试验采用 RP 一 HP以二色谱法 , 建立了香青兰
药材的指纹图谱分析方法 。 结果表明方法稳定 、 可靠 、 重现
性好 ,为香青兰药材质量的分析与控制提供了可靠的依据 。
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2X( 为年 7 月 6 日收稿
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201 0年 1 月第 1 期 中闯民族 医药杂志 49
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w a s e s lab l i s h e d
.
K e y 巧. r ds : 刀叹。 c eP ha luln lon 记d` ic a L ; ifn ge rp ir nt ; RP 一 H P LC
反相 HP L C 法测定嘎 日西胶囊中大黄酚的含量
田 申武 , 韩塔娜 , 旭 红 ,
’
( 1
. 内蒙古食品药品检验所 , 内蒙古 呼和浩特 01 叨 20 )
摘 要 : 目的 : 建立反相高效液相色谱法测定嘎 日西胶囊中盐酸小架碱含量的方 法 。 方法 : 选用 残km a CI : 色谱柱 ( 2 50 ~ x
4
.印~ , 5动及 pha
~
lC
: 色谱柱 (25 0~ x 4
.印~ , 5动 。 甲醉 一 0 . 1%磷酸溶液 ( 78 : 2 )为流动相 ,紫外检测波长 25 4 nm ,
柱温 30 ℃下对大黄酚进行含量测定 。 结果 : 大黄酚在 34 . 28 0鸿 一 342 . 80 滩 范围内呈良好的线性关系。 R 二 o 一 99 9 ( n 二
6)
,平均回收率 98 . 78 % , RS D 为 0 . 92 8( % ) 。 结论 : 本法 简便 、 准确 , 可 以作为该制剂的质量控制方 法 。 也可为含 大黄类蒙
成药制剂的定量作参考。
关键词 :反相高效液相色谱法 ;大黄酚 ;含量测定 ;嘎 日西胶囊
中图分类号 : IU 9 1 . 2 文献标识码 : B 文章编号 : 111拓 一 68 1以20 10 ) 01 一 以科9 一 舰
嘎日西胶囊是由寒水石 、 诃子 、 大黄 、 山奈 、 面碱 、黑冰
片 、 牛胆膏粉 、 革羞 、石榴 、 豆范 、 连翘等 14 味药组成的复方
制剂 。 具有泻热通肠 、 凉血解毒 、 实热便秘等功效 , 用于食
积不消 、 胃酸 、 暖胃 、 消食 、 止痛等病症 。 大黄为处方主味
药 ,所以对其进行了含量测定方法研究 。 实验以大黄酚为
测定指标 ,采用高效液相色谱法进行含量测定 ,获得满意的
结果 。
1 仪器与试药
1
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1 仪器 : 岛津优 一 20 A SP D 一 N口OA 型检测器 ,优 s of iut on
色谱工作站 。 岛津优 一 2550 型紫外分光光度计 。
1
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2 试剂与试药及样品 : 大黄酚对照 品 (批号 · : 0’7 % -
2X( 犯0 8) 中国药品生物制品检定所 ; 甲醇为色谱纯 , 水为高
纯水 ,其它试剂均为分析纯 。 样品有内蒙古中蒙医院提供 。
2 实验方法与结果
2
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1 色谱条件 : 采用 压幻m a CI : 色谱柱 ( 25 0~ x 4
.
60 ~
,
5拌)及 vhe
~
lC
。色谱柱 ( 25 0~ x 4
.
60 ~
,
5闪 。 流动
相 : 甲醇 一 0 . 1%磷酸溶液 ( 78 : 2 ) ; 流速 : 1 . 0耐而;n 检测波
长 : 25 4 lun ;理论板数按大黄酚峰计 ,应不低于 3《X ) o
2
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2 供试品溶液的制备 :取本品内容物 19 ,研细 ,精密称
定 , 置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 50词 ,称定重量 ,加热
回流 1 . 5h ,放冷 ,再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇
匀 ,滤过 。 精密量取续滤液 10 d , 置烧瓶 中 ,挥去溶剂 ,加
8 %盐酸溶液 10 祖 ,超声处理 2 分钟 ,再加三氯甲烷 10 而 , 加
热回流 1小时 , 放冷 , 置分液漏斗 中 , 用少量三氯 甲烷洗涤
容器 ,并人分液漏斗中 ,分取三氯甲烷层 , 酸液再用三氯甲
烷提取 3 次 ,每次 10 而 ,合并三氯甲烷液 , 减压回收溶剂至
干 ,残渣加甲醇使溶解 , 转移至 10而 量瓶 中 ,加 甲醇至刻
度 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得 。
2
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3 对照品溶液的制备 : 精密称取大黄酚对照品适量 , 加
甲醇制成每 l d 含 20 鸿 的溶液 ,即得 。
2
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4 阴性对照试验 : 取按处方量比例以相同工艺制备的阴
性对照 (缺大黄 ) g ,按含量测定项下方法操作 , 进样量 10拜 ,
测得结果为 : 阴性对照溶液的 H P L C 色谱中在与大黄酚对
照品色谱中相对应的保留时间处无色谱峰出现 。 表明处方
中其他组分对大黄酚的测定无干扰 。 I习刁￡ 图谱见图 1、 2 、 3o
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-一 ,而 一几 。 ’ 。 亩` 一茄。 — , 。 ~ 孟品
图 1 大黄酚对照品 HP LC图谱
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