全 文 ：TheeffectofCuscutachinensisL.oncytokinessecretioninovarianhyperstimulatedrats
XieGuangmei
(InstituteforReproductiveMedicine, GansuProvincialMaternityandChild-careHospital, Lanzhou 730050)
Objective:TostudytheeffectofaqueousextractsofCuscutachinensisL.onIL-1, IL-6, IL-10andTNF-αsecretioninovarianhypers-
timulatedrats.Methods:Ratswereinjectedwithregnancy-mareserumgonadotropin+humanchorionicgonadotropintoinduceovarianhy-
perstimulationsyndron(OHSS).AqueousextractsofCuscutachinensisL.at300mg/kgor600mg/kgwereadministratedintragastricto
OHSSrats, thenovarianweight, EvansBluelevelsintheovarieandtheperitonealirrigatedfluidwereinvestigated, moreover, IL-1, IL-6,
IL-10 andTNF-αinserumandovarianweredetermined.Results:AqueousextractsofCuscutachinensisL.aleviatedOHSS, andreduced
IL-1 andIL-6 concentrationsinserumandovariansignificantly, furthermore, lowlevelofovarianIL-10 inducedbyOHSSwasrecovered.
Conclusion:AqueousextractsofCuscutachinensisL.wasshowntobeabletoregulatethesecretionofcytokines, itmightmediatetheanti-
OHSSeffectoftheextractant.
Keywords CuscutachinensisL;ovarianhyperstimulationsyndron;interleukins;TNF-α
蜘蛛香对惊厥小鼠行为学及脑组织 γ-氨基丁酸和甘氨酸含量的影响＊
闫智勇 ,彭 佳 ,秦晋之 ,潘玲珍 ,肖 婷 ,张占平 ,左长英
(西南交通大学生命科学与工程学院 ,成都 610031)
摘 要 目的:观察蜘蛛香提取物对惊厥小鼠的抗惊厥作用。方法:采用腹腔注射戊四氮(PTZ)建立小鼠惊厥模型 , 用蜘蛛香
乙醇提取物进行抗惊厥治疗 ,观察蜘蛛香对惊厥小鼠的行为学及脑组织氨基酸类神经递质 γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)含量
的影响。结果:行为学观察表明 ,蜘蛛香提取物对小鼠惊厥潜伏期有一定延长作用 、对惊厥率的发生无明显影响 , 但高剂量组能明
显降低惊厥小鼠的死亡率。与模型对照组比较 ,蜘蛛香提取物还可显著提高脑组织 GABA的含量。结论:蜘蛛香提取物对小鼠惊
厥潜伏期有一定延长作用 ,可明显降低惊厥小鼠的死亡率 , 作用机制可能和升高脑组织抑制性神经递质 GABA含量有关。
关键词 蜘蛛香;惊厥;行为学;γ-氨基丁酸
蜘蛛香(ValerianajatamansiJones)系败酱科缬草属植物蜘
蛛香的根茎 , 本课题前期研究发现蜘蛛香有明显抗焦虑作用 ,
作用机制和调节脑组织 5-羟色胺(5-HT)等兴奋性神经递质含
量有关 [ 1] 。本文进一步观察了蜘蛛香乙醇提取物对惊厥小鼠
的抗惊厥作用 , 并通过对脑组织抑制性神经递质 GABA和 Gly
的考察探讨其作用机制 。
1 材料与方法
1.1 试验药物 蜘蛛香乙醇提取物:蜘蛛香药材分别加 12倍
量 95%乙醇 , 30℃超声提取 3次 , 每次 50分钟 , 合并提取液 ,旋
蒸挥去乙醇 , 用生理盐水配制为分别含生药 0.05、0.075、0.1g/
ml的低 、中 、高剂量的药液提取率。艾司唑仑(Estazolam):常州
四药制药有限公司 , 批号 071020, 经研钵粉碎后 , 用生理盐水配
制为浓度 0.075 mg/ml的混悬液。以上药物避光 4℃保存 ,使用
前混摇均匀。
1.2 动物 清洁级昆明种小鼠 , 雌雄各半 , 体重 18 ～ 22g, 四
川大学实验动物中心提供 , 所有动物常规饲养一周后 , 进行实
验。
1.3 试剂 戊四氮(PTZ):美国 Sigma公司 , 批号 P6500, 按
85mg/kg/d的剂量计算 , 取 PTZ212.5mg定容至 50ml, 冷藏备
用 。 2, 4-二硝基氟苯:成都科龙化工试剂厂;γ-氨基丁酸(GA-
BA)对照品 、甘氨酸(Gly)对照品:中国药品生物制品检定所。
1.4 方法 小鼠随机分为正常对照组 、模型对照组 、艾司唑仑
组 、蜘蛛香低 、中 、高三个剂量组共 6组 ,每组 8只。其中蜘蛛香
低 、中 、高三个剂量组分别按 1.0g/kg/d、 1.5g/kg/d、 2.0g/kg/d
给予蜘蛛香乙醇提取物灌胃 0.5ml, 艾司唑仑组按 1.5mg/kg/d
给予艾司唑仑灌胃 0.5ml, 模型对照组和正常对照组分别灌服
等体积的生理盐水 ,各组连续给药 6天。
1.5.1 戊四氮致小鼠惊厥模型的建立及行为学测试 [ 2] 各组
连续给药 6天 , 于第 6天给药后 1小时分别给模型对照组 、艾司
唑仑组 、蜘蛛香高 、中 、低剂量组小鼠腹腔注射 PTZ(85mg/kg)
0.5ml。观察并记录 15分钟内每组小鼠惊厥潜伏期 、惊厥率(以
发生点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛为观察指标)及死
亡的只数。
1.5.2 脑组织 GABA和 Gly神经递质检测 [ 3 , 4] 小鼠抗惊厥
实验完成后 ,立即断头处死 , 迅速在冰盘上剪开颅盖和脑膜 , 取
小鼠全脑 ,称重 , 用甲醇制备脑组织匀浆液 ,然后于 6000rpm离
47中药药理与临床 2010;26(1)
＊ 四川省中医药管理局项目(No.200674);成都市十一五重大科技专项(No.09GGZD060SF-012);西南交通大学科学基金(No.2006A10)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2010.01.018
心 10min, 收集上清液 ,再用乙腈离心沉淀 , 除去蛋白 , 所得上
清液即用来测定 GABA和 Gly的含量。 对照品溶液的配制:取
GABA0.0046g、Gly0.0054g,置于 50ml容量瓶 , 用甲醇 /水(30:
70)的溶液定容。 2, 4-二硝基氟苯溶液的配置:用乙腈配成 0.
5%的溶液 ,避光保存。对照品与样品预处理和衍生:取对照品
溶液 0.2ml,加入 2, 4-二硝基氟苯溶液 、0.5mol/L的 NaHCO
3
溶
液各 0.2ml,混匀后 , 于 60℃烘箱暗中衍生 60min。取样品溶液
0.2ml, 加入 2, 4-二硝基氟苯溶液 、 0.5mol/L的 NaHCO
3
溶液各
0.2ml, 混匀后 ,于 60℃烘箱暗中衍生 60min。色谱条件:色谱柱
Mcsphere-C18(200mm×4.6mm, 5μm);流动相:A为 0.05mol/L
的醋酸钠缓冲液(pH=6.5), B为乙腈-水(1:1, V/V), 梯度洗
脱程序 B由初始时的 16%经 10min增至 45%, 35min至 85%;
柱温:30℃;流速:1.0ml/min;检测波长:360nm。
2 结果
2.1 对戊四氮致小鼠惊厥的影响 对戊四氮致小鼠的惊厥潜
伏期 、惊厥率和死亡率的影响见表 1。
表 1 对戊四氮致小鼠惊厥的影响( x±s, n=8)
组别 剂量(g/kg)
惊厥潜伏期
(s)
惊厥率
(%)
死亡率
(%)
模型对照 112.8±23.8 100 50
艾司唑仑 0.0015 486.5±31.6＊＊ 50＊ 0＊
蜘蛛香 1.0 106.4±34.2 100 12.5
蜘蛛香 1.5 153.2±34.9 100 12.5
蜘蛛香 2.0 194.3±11.1 100 0＊
与模型对照组相比＊P<0.05, ＊＊P<0.01(下同)
表 1结果表明 , 艾司唑仑组小鼠的惊厥潜伏期 、惊厥率和死
亡率与模型对照组相比皆有非常显著性差异。蜘蛛香中 、高剂
组惊厥潜伏期与模型对照组相比有延长趋势 , 但没有统计学差
异;蜘蛛香三个剂量组的小鼠死亡率均低于模型对照组 , 其中
高剂组与模型对照组相比有显著差异。
2.2 对小鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的影响 对 γ-氨基
丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)含量的影响见表 2。
表 2 各组小鼠 GABA和 Gly含量的比较( x±s, n=8)
组别 剂量(g/kg)
GABA
(μmol/g)
Gly
(μmol/g)
空白对照 0.417±0.045 0.290±0.036
模型对照 0.416±0.069 0.276±0.020
艾司唑仑 0.0015 0.384±0.051 0.218±0.040＊＊
蜘蛛香 1.0 0.679±0.162＊＊ 0.250±0.030
蜘蛛香 1.5 0.567±0.186＊ 0.265±0.035
蜘蛛香 2.0 0.595±0.074＊＊ 0.279±0.038
表 2结果表明 , 蜘蛛香低 、中 、高剂量组脑组织 GABA含量
均显著高于模型对照组。艾司唑仑组的脑组织 Gly含量与模型
对照组比较有非常显著性差异 , 但蜘蛛香三个剂量组与模型对
照组相比没有明显差异。
3 讨论
戊四氮(PTZ)是一种中枢神经兴奋药物 , 单次给予一定剂
量戊四氮能迅速引起动物惊厥 , 目前戊四氮诱导动物惊厥模型
广泛应用于抗惊厥药物的研究中 [ 5] 。本研究经前期预试 ,选择
一次性腹腔注射 PTZ(85mg/kg)0.5ml诱导小鼠惊厥模型 , 以
小鼠发生点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛为惊厥发作
指标。发现蜘蛛香提取物对小鼠出现点头并伴随更严重的面部
肌肉抽动阵挛性惊厥的潜伏期有一定延长作用 , 对惊厥率的发
生无明显影响 ,但高剂量组能明显降低惊厥小鼠的死亡率。
γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)是两种重要的中枢神
经抑制性神经递质 ,和睡眠障碍 、焦虑 、惊厥等病症的发生有非
常密切的关系。其中 GABA是中枢神经系统分布最广泛的抑
制性神经递质 ,大脑中 40%突触是 GABA能突触 , GABA通过激
动 GABA受体发挥其抑制作用 [ 6] 。 研究发现 , GABA在阻断兴
奋的扩散和传导过程中起决定性作用 , GABA的合成减少 , 可使
神经元的抑制降低 ,从而和惊厥的发生和扩散密切相关 [ 7] 。本
研究结果发现 , 蜘蛛香三个剂量组均能明显升高小鼠脑组织
GABA的含量 ,但对 Gly的含量却没有明显影响 , 提示增强 GA-
BA抑制系统功能可能是其延长小鼠惊厥潜伏期 , 降低惊厥死亡
率的重要机制之一。
参考文献
1 闫智勇 ,张天娥 ,彭佳 ,等.蜘蛛香对焦虑模型大鼠行为学及脑组织
神经递质含量的影响.中药药理与临床 , 2008;24(3)∶ 67～ 69
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7 DichterMA.Emerginginsightsintomechanismsofepilepsy:implications
fornewantiepilepticdrugdevelopment.Epilepsia, 1994;35(4)∶S51～ 57
EffectofValerianajatamansiJonesontheethologyandGABA,
Glyinthebrainintheconvulsionmodelofmice
YanZhiyong, PengJia, QinJinzhi, PanLingzhen, XiaoTing, ZhangZhanping, ZuoChangying
(SchoolofLifeScienceandEngineering, SouthWestJiaioTongUniversity, Chengdu 610031)
Objective:ToobservetheeffectsoftheextractofValerianajatamansiJonesontheconvulsionmodelofmice, andinvestigatethepharma-
cologymechanism.Methods:Theconvulsionmodelofmicewasmadebyintraperitonealinjectionofpentetrazole(PTZ).Comparedwithes-
48 中药药理与临床 2010;26(1)
tazolamasthecontrolmedicine, convulsivemiceweretreatedbytheextractofValerianajatamansiJones.Theethologyandaminoacidneuro-
transmitersinthebrainsuchasGABAandGlywereobserved.Results:TheobservationofethologyindicatedthattheextractofValeriana
jatamansiJonescouldprolongtheconvulsionlatentperiodinsomedegree, furthermoreobviouslydecreasedthedeathrateoftheconvulsive
miceinhigedosegroup(P<0.05).Comparedwithmodelgroup, theextractofValerianajatamansiJonesmayhaveefectonimprovingthe
contentofGABAinthebrain.Conclusion:TheextractofValerianajatamansiJoneshasthedistinctefectofdecreasingthedeathrateofthe
convulsivemice, andmayprolongtheconvulsionlatentperiodinsomedegree.Themechanismsarerelatedwithimprovingthecontentofin-
hibitoryneurotransmitterGABAinthebrain.
Keywords ValerianajatamansiJones;convulsion;GABA;Gly
独一味巴布膏抗炎作用研究
汪 茜1 ,孙秋艳 1 ,杨 婷 2 ,包 旭1＊ ,许银德 2 ,余军桥 2
(1四川大学华西药学院 ,成都 610041;2甘肃独一味生物制药股份有限公司 ,康县 746500)
摘 要 目的:观察独一味巴布膏的抗炎作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀 、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性 、角叉菜胶
诱导大鼠足肿胀 、佐剂致大鼠足肿胀的试验模型观察抗炎作用。结果:独一味巴布膏抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高 , 减
轻小鼠耳肿胀和大鼠足肿胀反应。结论:独一味巴布膏具有显著的抗炎作用。
关键词 独一味;抗炎
独一味(Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo)含有生物活性
强的黄酮类(木犀草素 、槲皮素 、芹菜素)、环烯醚萜类及独一味
素等化学成分 , 具有止血止痛 、活血化瘀 、抑菌消炎 、提高免疫力
等功效 [ 1] 。临床主要用于治疗软组织损伤 、关节扭伤 、骨折的
镇痛 , 效果显著。独一味巴布膏是在原剂型独一味胶囊的基础
上改制成的新型制剂 , 本文对独一味巴布膏进行抗炎作用的研
究 , 为临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验药物 独一味巴布膏:为棕褐色膏体 , 0.727g(生
药)/1g(巴布膏), 批号:070601, 由甘肃独一味生物制药股份有
限公司提供。赋形剂:为白色膏体 ,由甘肃独一味生物制药股份
有限公司提供。扶他林:白色乳胶剂 , 20g/支 , 由北京诺华制药
有限公司生产。
1.2 动物 昆明种小鼠 , SPF级 ,体重 18.0 ～ 22.0g;SD大鼠 ,
SPF级 ,体重 160 ～ 200g,均由四川大学实验动物中心提供 ,许可
证号:第 9号。实验动物使用设施许可证号:第 113号(IVC屏
障系统)。
1.3 试剂 伊文思蓝:25g/瓶 , 上海化学试剂采购供应站经
销 , 行知中学办工厂分装。角叉菜胶:25g/瓶 , 美国 sigma公司;
完全弗氏佐剂:10ml/瓶 ,美国 sigma公司。
1.4 方法
1.4.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 [ 2 , 3] 小鼠 60只 , 给药
前 24h剪去小鼠背部长毛 ,然后用 8%硫化钠溶液对其脱毛处
理 , 脱毛面积 2.5cm×2.5cm。第二天将脱毛且皮肤无破损的小
鼠按体重性别随机分成 6组 , 每组 10只 , 雌雄各半。阴性对照
组每鼠滴涂生理盐水 10ml/kg体重 ,阳性对照组涂抹扶他林 0.
67g/kg体重 , 赋形剂组涂抹赋形剂 4.5g/kg体重 ,药物高 、中 、低
剂量组分别于小鼠脱毛处涂抹独一味巴布膏 4.5g(生药)/kg、
3.0g(生药)/kg、1.5g(生药)/kg体重 , 然后用二层纱布和一层
玻璃纸覆盖 ,再用胶布进行固定。每天给药前用生理盐水擦洗
给药处 ,待皮肤干燥后再给予药物涂抹。每日给药一次 , 连续给
药 5日。于末次给药后 1h, 用二甲苯 0.05ml/只涂抹每鼠右耳
致炎 , 左耳作对照 ,致炎后 30min脱颈椎处死小鼠 ,以 8mm直径
打孔器取下耳缘左 、右耳片 , 分别用电子天平称重 ,以右 、左耳片
重量差表示肿胀度。
1.4.2 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 [ 3] 小鼠
60只 , 分组与给药方法同上。每日给药一次 , 连续给药 5日。
于末次给药 1小时后 , 各组每鼠尾静脉注射 0.4%伊文思蓝生
理盐水溶液 0.1ml/10g体重 , 随即腹腔注射 0.6%醋酸 0.2ml/
只 , 30min后脱颈椎处死 , 仰位固定小鼠 , 剪开腹部皮肤 , 用 6ml
生理盐水注入腹膜内 ,轻揉小鼠腹部 , 自腹膜中央剪一小孔 , 吸
取腹腔液 4ml, 加生理盐水至 10ml, 2000rpm离心 10min,取上清
液在 UV-2300紫外分光光度计 , 590nm处测其光密度。
1.4.3 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 [ 3, 4] 取大鼠 60只 ,
给药前 24h剪去大鼠背部长毛 , 然后用 8%硫化钠溶液对其脱
毛处理 ,脱毛面积 5cm×5cm。第二天将脱毛且皮肤无破损的大
鼠按体重性别随机分成 6组 ,每组 10只 ,雌雄各半。阴性对照
组每鼠滴涂生理盐水 10ml/kg体重 , 阳性对照组涂抹扶他林 0.
67g/kg体重 , 赋形剂组涂抹赋形剂 4.5g/kg体重 ,药物高 、中 、低
剂量组分别于大鼠脱毛处涂抹独一味巴布膏 4.5g(生药)/kg、
3.0g(生药)/kg、1.5g(生药)/kg体重 , 然后用二层纱布和一层
玻璃纸覆盖 ,再用胶布进行固定。每天给药前用生理盐水擦洗
49中药药理与临床 2010;26(1)
＊ 通讯作者