全 文 ：香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠Th1/Th2免疫失衡的调节作用
闫丽丽1，康小龙2，何承辉3，邢建国3
（1. 石河子大学药学院药理系，新疆 石河子 832000；2. 新疆医科大学附属中医医院药理研究室，乌鲁木齐 830000；3. 新疆维吾尔自治
区药物研究所药剂室，乌鲁木齐 830004）
摘要 目的 观察香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠辅助 T淋巴细胞 1（Th1）/辅助 T淋巴细胞 2（Th2）细胞因子失衡的调节作
用。方法 采用卵白蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型，给予香青兰总黄酮进行干预后，ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌流液
中白介素 4（IL-4）、干扰素 γ（IFN-γ）及嗜酸粒细胞趋化蛋白 1（Eotaxin-1）的水平。结果 香青兰总黄酮可剂量依赖性的降低哮
喘大鼠支气管肺泡灌流液中 IL-4和 Eotaxin-1含量，升高 IFN-γ含量，减小 IL-4/IFN-γ比值（P < 0.05或 0.01）。结论 香青兰总
黄酮对支气管哮喘 Th1/Th2免疫失衡有一定调节作用。
关键词 香青兰总黄酮；支气管哮喘；辅助 T淋巴细胞；免疫失衡
中图分类号 R965.1 文献标志码 A 文章编号 0258-4646（2013）01-0008-03
网络出版地址 http://www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20130117.1142.003.html
Effects of Moldavica Total Flavone on Regulation of Th1/Th2 Imbalance in Ovalbumin-induced
Asthmatic Rats
支气管哮喘（简称哮喘）是一种常见病、多发病。
其发病与免疫失衡、炎性介质释放等多种因素有关。
辅助 T淋巴细胞（helper T lymphocyte 1，Th1）/辅助 T
淋巴细胞 2（helper T lymphocyte 2，Th2）免疫失衡是
哮喘发病的机制之一，纠正 Th1/Th2免疫失衡是治
疗支气管哮喘的有效途径［1］。据《维吾尔药志（上）》
记载［2］，唇形科植物香青兰（Dracocephalum mol－
davica L.）具有镇咳、袪痰、平喘作用，在维吾尔医学
和民间用于治疗气管炎已有几百年的历史。本课题
组从香青兰中提取的有效部位香青兰总黄酮，拟用
于治疗哮喘。本实验观察了香青兰总黄酮对哮喘大
鼠 Th1/Th2细胞因子的调节作用，以探讨香青兰总
黄酮防治哮喘的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物
清洁级 SD大鼠，体质量 180~220 g，由新疆实
验动物研究中心提供，合格证号：SCXK（新）2003-
0002。
1.2 试剂
卵白蛋白，购自美国 Sigma公司；氢氧化铝，购
自西安化学试剂厂；大鼠白介素 4（interleukin-4，IL-
4）ELISA 试剂盒、干扰素 γ（interferon-γ，IFN-γ）
ELISA试剂盒，购自美国 R&D公司；大鼠嗜酸粒细
胞趋化蛋白 1（Eotaxin-1）ELISA试剂盒，购自上海将
来试剂公司；二辛可宁酸蛋白定量试剂盒，购自江苏
碧云天生物技术研究所。
YAN Li-li1，KANG Xiao-long2，HE Cheng-hui3，XING Jian-guo3
（1. Department of Pharmacology，School of Pharmacy，Shihezi University，Shihezi 832000，China；2. Department of Medicine Research，Hospital of Chinese
Medicine Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830000，China；3. Department of Pharmaceutics，Xinjiang Medicine Research Institute，Urumqi
830004，China）
Abstract Objective To investigate the effects of moldavica total flavone on immunologic balance of helper T lymphocyte 1（Th1）/helper
T lymphocyte 2 （Th2）in ovalbumin-induced asthmatic rats. Methods Rats asthma model was established by ovalbumin challenge meth－
ods. After moldavica total flavones treatment，interleukin-4 （IL-4），interferon-γ （IFN-γ） and Eotaxin-1 in bronchoalveolar lavage fluid
（BALF）were respectively detected by ELISA. Results The levels of IL-4，Eotaxin-1 and ratio of IL-4/IFN-γ in ovalbumin-induced asth－
matic rats were markedly decreased and the level of IFN-γ dramatically increased（P < 0.05 or P < 0.01）after administration of moldavica
total flavone. Conclusion Moldavica total flavone is effective in treating asthma by adjusting immunologic imbalance of Th1/Th2.
Key words moldavica total flavone；asthma；helper T lymphocyte；immunologic Imbalance
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81060358）
作者简介：闫丽丽（1989 -），女，硕士研究生.
通信作者：邢建国，E-mail：kangxiaolong_163@163.com
收稿日期：2012-10-23
网络出版时间：2013-01-17 11:42
中国医科大学学报 第42卷 第1期 2013年1月
JournalofChinaMedicalUniversity Vol.42 No.1 Jan.2013
·论著·
8· ·
1.3 仪器
超声雾化器，购自江苏鱼跃医疗设备公司；酶标
仪，购自美国 BIO-RAD公司。
1.4 方法
1.4.1 动物分组及哮喘模型的复制：清洁级 SD大
鼠 60只，雌雄各半，体质量（200.3±19.4）g，随机分为
6组：空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组及香青
兰总黄酮低、中、高剂量组，每组 10只。采用卵白蛋
白致敏法制备动物模型。除空白对照组外，其他 5
组动物第 1、2、3天用含卵白蛋白 10 mg、Al（OH）3干
粉 100 mg的生理盐水混悬液 l mL腹腔注射致敏，
第 8天重复致敏 1次，第 15天开始除空白对照组外
各组动物超声雾化 1%卵白蛋白进行激发，约 30
min/次，于每天早上 8~9时进行。直至大鼠出现哮喘
样发作，共 4周。雾化时见大鼠出现烦躁不安、打喷
嚏、大小便失禁、抓耳朵、紫绀等症状，说明哮喘模型
复制成功。第 5周起香青兰总黄酮低、中、高剂量组
分别灌胃给予香青兰总黄酮 90、180、360 mg·kg-1·d-1，
地塞米松组灌胃给予地塞米松 1mg·kg-1·d-1，空白对
照组及哮喘模型组灌胃给予生理盐水，每日 1次，共
30 d。
1.4.2 支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage
fluid，BALF）的收取：末次给药后 1 h，用 2%戊巴比
妥钠（40 mg/kg）腹腔注射麻醉，然后消毒无菌分离
气管，夹闭右主支气管，剪开气管用相应导管插入左
主气管内，从导管注入 4 mL生理盐水灌洗左肺，反
复 3 次，回收率为 60%~70%，回收灌洗液即为
BALF，将 BALF在 4 ℃、3 000 r/min条件下离心 10
min，上清液保存于-80℃，用于细胞因子的测定。
1.4.3 BALF中 IL-4、IFN-γ和 Eotaxin-1浓度测定：
首先用二辛可宁酸蛋白定量试剂盒测定 BALF中蛋
白浓度，IL-4、IFN-γ 和 Eotaxin-1 浓度的测定采用
ELISA试剂盒，操作按试剂盒说明书进行，测定结果
以每毫升 BALF中蛋白含量（pg/mg prot）进行校正。
1.5 统计方法
数据均以 x ± s表示，各组间均数比较用方差
分析，采用 SPSS 11.0统计软件进行分析。P < 0.05
为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 香青兰总黄酮对哮喘大鼠 BALF 中 IL-4 和
IFN-γ浓度及 IL-4/IFN-γ比值的影响
与空白对照组比较，哮喘模型组 BALF中 IL-4
浓度升高，IFN-γ浓度降低，IL-4/IFN-γ比值增大（P
< 0.01），提示哮喘模型组大鼠出现 Th1/Th2免疫失
衡。与哮喘模型组比较，香青兰总黄酮可剂量依赖
性地降低大鼠 BALF中 IL-4水平，升高 IFN-γ水平，
减小 IL-4/IFN-γ比值（P < 0.05或 0.01）；香青兰总黄
酮高剂量组与地塞米松组比较，IL-4和 IFN-γ浓度
及 IL-4/IFN-γ比值的差异无统计学意义（P > 0.05）。
见表 1。
表1 香青兰总黄酮对哮喘大鼠BALF中IL-4和IFN-γ浓度及IL-4/IFN-γ比值的影响
Tab.1 Effects of moldavicatotalflavoneonthelevels of IL-4，IFN-γ andratioof IL-4/IFN-γ inbronchoalveolar lavagefluidof asthmatic
rats
2.2 香青兰总黄酮对哮喘大鼠 BALF 中 Eotaxin-1
含量的影响
与正常对照组比较，哮喘模型组 BALF中Eotaxin-
1含量明显升高（P < 0.01）；与哮喘模型组比较，香
青兰总黄酮可剂量依赖性地降低大鼠 BALF中 Eo－
taxin-1 水平（P < 0.05 或 0.01）；香青兰总黄酮高剂
量组与地塞米松组比较，Eotaxin-1含量的差异无统
计学意义（P > 0.05）。见表 1。
3 讨论
哮喘是由多种炎性细胞、细胞因子和炎性介质
Group n IL-4（pg/mg prot） IFN-γ（pg/mg prot） IL-4/IFN-γ Eotaxin-1（pg/mg prot）
Control 10 9.87±0.94 66.98±17.14 0.16±0.04 13.29±4.98
Model 10 24.72±2.191） 30.06±12.161） 0.91±0.281） 43.90±5.671）
Decaesadril 10 13.65±1.963） 60.97±13.233） 0.23±0.063） 19.58±5.143）
Moldavica total flavone
Low dose 10 21.64±2.553） 46.49±15.192） 0.53±0.243） 38.29±5.402）
Moderate dose 10 17.58±1.723） 53.90±11.133） 0.34±0.083） 29.70±5.243）
High dose 10 15.16±1.613） 57.55±12.073） 0.27±0.053） 24.46±5.293）
1）P < 0.01 vs control group；2）P < 0.05，3）P < 0.01 vs model group.
（下转第 13页）
闫丽丽等. 香青兰总黄酮对支气管哮喘大鼠Th1/Th2免疫失衡的调节作用第1期 9· ·
共同参与的气道慢性非特异性炎性疾病，其关键的
效应细胞是嗜酸性粒细胞和 Th细胞［3］。生理条件
下，机体的 Th1 和 Th2 细胞间处于动态平衡，而
Th1/Th2失衡是哮喘发病的重要机制［4］。IL-4是重
要的 Th2型细胞因子，主要参与黏液分泌、嗜酸性
粒细胞产生及浸润等过程［5，6］；IFN-γ为 Th1型细胞
的特征性细胞因子，主要作用是抑制 IgE的合成和
Th2型细胞因子的分化［5］。Th2型细胞效应增强，Th1
型细胞效应减弱，尤其是 IL-4/IFN-γ的比例与哮喘的
进展密切相关，因而人们常常以此比例来间接反映
Th1/Th2的比例。因此，改变 Th1和 Th2细胞的免疫
失衡状态，使免疫反应由 Th2型向 Th1型逆转，对于
支气管哮喘患者具有重要意义［1］。本研究发现：香青兰
总黄酮可剂量依赖性地降低哮喘大鼠 BALF中 IL-4
水平，升高 IFN-γ水平，减小 IL-4/IFN-γ比值，提示香
青兰总黄酮可有效调节 Th1/Th2平衡，从而达到抑制
炎性介质的释放和聚集、减轻哮喘气道炎症的目的。
嗜酸性粒细胞浸润是哮喘炎症的显著病理生理
特征，嗜酸性粒细胞向炎症部位趋化、募集是哮喘病
症中重要的病理过程，Eotaxin是一种嗜酸性粒细胞
选择性趋化因子，现已证明 Eotaxin对哮喘患者嗜酸
性粒细胞在支气管肺内聚集具有选择性趋化作用。
研究表明，Eotaxin直接参与了嗜酸性粒细胞的募集
浸润过程及其引起的组织损害。因此，抑制炎性细
胞、组织细胞表达 Eotaxin及阻止 Eotaxin趋化和激
活嗜酸性粒细胞可能是哮喘防治的一个新措施［3］。
本课题组前期研究表明，香青兰总黄酮可有效减少
哮喘嗜酸性粒细胞浸润。本研究发现，香青兰总黄
酮可剂量依赖性地降低哮喘大鼠 BALF中 Eotaxin-1
含量。以上研究提示，香青兰总黄酮可通过抑制
Eotaxin对嗜酸性粒细胞的特异性趋化作用，从而抑
制嗜酸性粒细胞向炎症部位趋化、募集，减轻哮喘气
道炎症。
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（编辑 陈 姜）
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（编辑 裘孝琦）
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张丽艳等. 糖基化扫描方法分析KvAP通道电压感受器S3-S4在膜中所处位置第1期 13· ·