全 文 ：� 615 �中华中医药杂志(原中国医药学报)2014年 2 月第29卷第2期 CJTCMP , February 2014, Vol . 29, No. 2
·研究报告·
通讯作者：康小龙，新疆乌鲁木齐市黄河路116号新疆医科大学附属中医医院药学部药研室，邮编：830000，电话：0991-5853365
E-mail：kangxiaolong_163@163.com
香青兰总黄酮对哮喘大鼠白三烯B4、白三烯C4、
C反应蛋白和白介素-10表达的影响
何承辉1，康小龙2，邢建国1，闫丽丽1
（1新疆维吾尔自治区药物研究所，乌鲁木齐 830004；2新疆医科大学附属中医医院，乌鲁木齐 830000）
摘要：目的：观察香青兰总黄酮对哮喘大鼠白三烯B4（LTB4）、白三烯C4（LTC4）、C反应蛋白（CRP）
和白介素-10（IL-10）表达的影响。方法：采用卵白蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型，给予香青兰总黄酮低
（90mg/kg）、中（180mg/kg）、高（360mg/kg）剂量进行干预后，ELISA法检测大鼠血清CRP、肺组织LTB4、
LTC4及支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-10含量。结果：香青兰总黄酮高剂量可降低哮喘大鼠CRP、LTB4、LTC4
水平（P<0.01），而香青兰总共酮中剂量可降低哮喘大鼠CRP、LTB4水平（P<0.01），对IL-10水平没有影响；香
青兰总黄酮低剂量可降低哮喘大鼠CRP水平（P<0.05），对LTB4、LTC4和 IL-10水平没有影响；阳性药地塞米松可
降低哮喘大鼠CRP、LTB4和LTC4水平，升高IL-10水平（P<0.01）。结论：香青兰总黄酮对哮喘CRP、LTB4、LTC4
等炎症因子的释放具有一定抑制作用。
关键词：香青兰总黄酮；白三烯B4；白三烯C4；C反应蛋白；白介素-10
基金资助：国家自然科学基金（No.81060358）
Effects of moldavica total fl avone on leukotriene B4, leukotriene C4, C reactive protein
and interleukin-10 levels in asthma rats
HE Cheng-hui1, KANG Xiao-long2, XING Jian-guo1, YAN Li-li1
( 1Xinjiang Medicine Research Institute, Urumqi 830004, China; 2Hospital of Chinese Medicine Affi liated to
Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China )
Abstract: Objective: To investigate the effects of moldavica total flavone on leukotriene B4 (LTB4), leukotriene C4
(LTC4), C reactive protein (CRP) and interleukin-10 (IL-10) levels in ovalbumin-induced asthmatic rats. Methods: Rats asthma
model was established by ovalbumin challenge methods. After therapy by moldavica total fl avone at 90, 180 and 360mg/kg, CRP
in serum, LTB4 and LTC4 in lung tissue, IL-10 in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were detected respectively by ELISA.
Results: The levels of LTB4, LTC4 and CRP were markedly decreased (P<0.01) after administration of 360mg/kg moldavica total
fl avone in ovalbumin-induced asthmatic rats. The levels of CRP, LTB4 were markedly decreased (P<0.01) after administration of
180mg/kg moldavica total fl avone, but the level of IL-10 wasn’t infl uenced. The levels of CRP were markedly decreased (P<0.05 )
after administration of 90mg/kg moldavica total fl avone, the level of LTB4, LTC4 and IL-10 wasn’t infl uenced. The levels of LTB4,
LTC4 and CRP were markedly decreased and IL-10 was markedly increased (P<0.01) after administration of 1mg/kg decaesadril.
Conclusion: Moldavica total fl avone can inhibit the release of infl ammatory cytokines of LTB4, LTC4 and CRP on asthma.
Key words: Moldavica total fl avone; Leukotriene B4; Leukotriene C4; C reactive protein; Interleukin-10
Fund assistance: National Natural Science Foundation of China (No.81060358)
哮喘是一种免疫变态反应性疾病，是由多种炎性细胞、炎
性介质和细胞因子参与的慢性炎症性疾病[1]。据《维吾尔药志
（上）》记载[２]，唇形科植物香青兰（Dracocephalum moldavica
L.）具有镇咳、袪痰、平喘作用，在维吾尔医和民间用于治疗气
管炎已有几百年的历史。本课题组从香青兰中提取的有效部
位香青兰总黄酮，拟用于治疗哮喘。本实验观察了香青兰总
黄酮对哮喘大鼠白三烯B4（leukotriene B4，LTB4）、白三烯C4
（leukotriene C4，LTC4）、C反应蛋白（C reactive protein，CRP）
和白介素-10（interleukin-10, IL-10）等炎性介质和细胞因子表
达的影响，以探讨香青兰总黄酮防治哮喘的作用机制，为香青
兰总黄酮的新药开发提供实验依据。
材料
1. 试验药物　香青兰药材经40%乙醇回流提取1次，3h，提
取液用HPD100型大孔吸附树脂纯化，70%乙醇洗脱，浓缩干
� 616 � 中华中医药杂志(原中国医药学报)2014年 2 月第29卷第2期 CJTCMP , February 2014, Vol . 29, No. 2
燥，得香青兰总黄酮，经UV测定，总黄酮含量为60%以上。临用
前用0.5%羧甲基纤维素钠溶解，配制成所需浓度。醋酸地塞米
松片，浙江仙琚制药股份有限公司生产，批号：110356。
2. 动物　清洁级SD大鼠，体质量180－220g，由新疆实验动
物研究中心提供，合格证号：SCXK（新）2003-0002。
3. 试剂　卵白蛋白（ovalbumin, OVA），Sigma公司，批号：
1001115808；氢氧化铝，西安化学试剂厂，批号：080912；大鼠
LTB4、LTC4 ELISA试剂盒，上海顺元生物科技有限公司，批号：
20120420、20120608；大鼠IL-10 ELISA试剂盒，美国R&D公
司，批号：295518；大鼠CRP ELISA试剂盒，厦门慧嘉生物科技
有限公司，批号：20120703：二辛可宁酸蛋白定量试剂盒，江苏
碧云天生物技术研究所，批号：20120415。
4. 仪器　超声雾化器，江苏鱼跃医疗设备公司；酶标仪，
美国BIO-RAD公司。
方法
1. 动物分组及哮喘模型的复制　清洁级SD大鼠60只，雌
雄各半，随机分为6组，即空白对照组，哮喘模型组，地塞米松
组，香青兰总黄酮低、中、高剂量组，每组10只。采用OVA致敏
法制备动物模型。除空白对照组外，其它5组动物第1、2、3天
用含OVA 10mg、Al（OH）3干粉100mg的0.9%氯化钠溶液混悬
液1mL腹腔注射致敏，第8天重复致敏1次，第15天开始除空白
对照组外各组动物超声雾化1%OVA进行激发，约30min/次，
于每天上午8：00-9：00进行。直至大鼠出现哮喘样发作，共
4周。雾化时见大鼠出现烦躁不安、打喷嚏、大小便失禁、抓
耳朵、紫绀等症状，说明哮喘模型复制成功。第5周起各给药
组分别灌胃给予地塞米松1mg·kg-1·d-1，香青兰总黄酮90、
180、360mg·kg-1·d-1，空白对照组及哮喘模型组灌胃给予
0.9%氯化钠溶液，1次/d，共30d。
2. 大鼠血清CRP含量测定　末次给药后1h，用2%戊巴比妥
钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离血清，ELISA
试剂盒检测血清CRP含量，操作按试剂盒说明书进行。
3. 大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，
BALF）中IL-10含量测定　末次给药后1h，上述大鼠消毒无菌
分离气管，夹闭右主支气管，剪开气管用相应导管插入左主气
管内，从导管注入4mL 0.9%氯化钠溶液灌洗左肺，反复3次，
回收率为60%-70%，回收灌洗液即为BALF，将BALF在4℃
3 000r/min条件下离心10min，取上清，首先用二辛可宁酸蛋白
定量试剂盒测定BALF中蛋白浓度，IL-10采用ELISA法测定，
操作按试剂盒说明书进行，测定结果以每毫升BALF中蛋白含
量（pg/mgprot）进行校正。
4. 大鼠肺组织LTB4和LTC4含量测定　末次给药后1h，上述
大鼠取右肺组织制成10%组织匀浆，制备好的匀浆放入离心机
中以3 500r/min离心10min，提取上清液分装，首先用二辛可宁
酸蛋白定量试剂盒测定肺组织匀浆中蛋白浓度，ELISA试剂盒
检测匀浆液中LTB4和LTC4含量，操作按试剂盒说明书进行，测
定结果以每毫升匀浆液中蛋白含量（pg/mgprot）进行校正。
5. 统计学方法　数据均以x-±s表示，各组间显著性差异比
较用方差分析，采用SPSS 11.0统计软件进行统计。以P<0.05为
差异有统计学意义。
结果
1. 香青兰总黄酮对哮喘大鼠血清CRP含量的影响　见表
1。与空白对照组比较，哮喘模型组大鼠血清CRP含量明显升高
（P<0.01）；与哮喘模型组比较，香青兰总黄酮低、中、高剂量组
及地塞米松组可降低大鼠血清CRP含量（P<0.05，P<0.01）。
表1　香青兰总黄酮对哮喘大鼠血清CRP含量的影响
（x-±s，n=10，pg/mL）
组别 CRP
空白对照组 6.20±1.62
哮喘模型组 49.88±5.47**
香青兰总黄酮低剂量组 45.30±3.90**△
香青兰总黄酮中剂量组 41.44±4.12**△△
香青兰总黄酮高剂量组 37.15±3.44**△△
地塞米松组 29.25±5.93**△△
注：与空白对照组比较，**P<0.01；与哮喘模型组比较，
△P<0.05，△△P<0.01。下表同。
2. 香青兰总黄酮对哮喘大鼠肺组织LTB4和LTC4水平的影
响　见表2。与空白对照组比较，哮喘模型组大鼠肺组织LTB4
和LTC4水平明显升高（P<0.01）；与哮喘模型组比较，香青兰总
黄酮中、高剂量组及地塞米松组可降低大鼠肺组织LTB4水平
（P<0.01），香青兰总黄酮高剂量组及地塞米松组可降低大鼠
肺组织LTC4水平（P<0.01）；香青兰总黄酮高剂量组LTC4水平与
地塞米松组比较差异没有显著性意义。
表3　香青兰总黄酮对哮喘大鼠BALF中IL-10含量的影响
（x-±s，n=10，pg/mgprot）
组别 IL-10
空白对照组 50.50±8.06
哮喘模型组 31.65±5.55**
香青兰总黄酮低剂量组 34.43±6.50**
香青兰总黄酮中剂量组 33.49±6.13**
香青兰总黄酮高剂量组 36.96±7.22**
地塞米松组 39.55±5.95**△△
表2　香青兰总黄酮对哮喘大鼠肺组织LTB4和LTC4水平的影响
（x-±s，n=10，pg/mgprot）
组别 LTB4 LTC4
空白对照组 20.59±2.45 10.63±1.91
哮喘模型组 41.21±3.19** 20.93±2.89**
香青兰总黄酮低剂量组 39.18±3.58** 19.01±2.14**
香青兰总黄酮中剂量组 33.52±3.35**△△ 18.59±2.97**
香青兰总黄酮高剂量组 33.42±4.80**△△ 16.95±3.21**△△
地塞米松组 26.98±2.16**△△ 14.87±2.84**△△
3. 香青兰总黄酮对哮喘大鼠BALF中IL-10含量的影响　见
表3。与空白对照组比较，哮喘模型组大鼠BALF中IL-10含量明
� 617 �中华中医药杂志(原中国医药学报)2014年 2 月第29卷第2期 CJTCMP , February 2014, Vol . 29, No. 2
显降低（P<0.01）；与哮喘模型组比较，香青兰总黄酮各剂量组
对大鼠BALF中IL-10含量的影响没有显著性差异，阳性药地塞
米松可升高大鼠BALF中IL-10含量（P<0.01）。
讨论
香青兰总黄酮是本课题组由传统治疗哮喘的维吾尔药香
青兰中提取的有效部位，前期研究表明：香青兰总黄酮能延长
小鼠咳嗽潜伏期，减少小鼠咳嗽次数，延长豚鼠引喘潜伏期；
降低哮喘大鼠血清卵白蛋白特异性IgE水平，减少嗜酸性粒细
胞浸润，减小离体气管螺旋条张力[3]，降低哮喘大鼠支气管肺
泡灌流液中IL-4含量，升高干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）
含量，减小IL-4/IFN-γ比值，调节辅助T淋巴细胞（helper T
lymphocyte 1，Th1）/辅助T淋巴细胞2（helper T lymphocyte 2，
Th2）免疫失衡[4]，提示香青兰总黄酮具有一定镇咳、平喘作用，
可改善哮喘气道炎症及高反应性。
近年来研究发现，哮喘患者的气道炎症是各种炎性介质与
气道内各种炎性细胞共同作用的结果[5]。白三烯（leukotrienes,
LTs）是哮喘的重要炎性介质，在哮喘的病变中起着重要作用，
不仅能收缩气道平滑肌，而且能促进炎性细胞尤其是嗜酸性
粒细胞在气道聚集，促进气道结构细胞如气道上皮细胞、平滑
肌细胞、成纤维细胞等增殖，从而参与气道炎症及重塑的发生
过程。LTB4是环氧化物白三烯的水解产物，LTB4可刺激人外周
血单核细胞和T细胞产生IL-1、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis
factor-α, TNF-α）和IL-5，还可使核转录因子过氧化物增殖
剂——活化受体-α和IL-4介导的B细胞IgE合成增加[6]。LTB4亦
介导内皮细胞和多型核白细胞表面黏附蛋白的表达，促进炎性
细胞的渗出及迁移，在哮喘发病中起着重要作用[7]。LTC4可在
多个途经加重哮喘发病，如使支气管平滑肌收缩，增加血管通
透性，增加炎性细胞聚集、浸润及活化，增加气道黏液生成，
降低纤毛运动能力等[8]。本实验表明：香青兰总黄酮高剂量可
降低哮喘大鼠肺组织LTB4和LTC4水平，提示香青兰总黄酮可能
通过抑制LTB4和LTC4表达而缓解哮喘气道炎症。
已有研究表明，CRP可能在气道炎性反应的增强、维持
和减轻过程中起调节作用。CRP是机体发生炎症或损伤时，由
IL-6、TNF-α等促炎因子刺激肝脏产生的一种急性期反应蛋
白。正常人血清中只存在微量，当机体存在感染、炎症、免疫
反应和组织损伤等情况时，CRP水平急速上升，因此常作为反
映机体炎症发生和机体组织损伤程度的敏感指标[9]。本实验表
明：香青兰总黄酮可降低哮喘大鼠血清CRP水平，提示香青兰
总黄酮可能通过抑制CRP表达而缓解哮喘气道炎症。
研究表明：IL-10对Th2型细胞驱动的过敏性免疫应答具
有很好的抑制作用[10]，能够抑制嗜酸性粒细胞在气道内的浸
润[11]，最重要的一点就是还能通过抑制抗原提呈细胞的功能，
诱导CD4+ T细胞不应答从而实现免疫耐受的目的[12]。Kono H等[13]
发现中和小鼠体内的IL-10，可以增加肺内各种炎性细胞因子的
分泌。Presser K等[14]的研究还发现IL-10是调节性T细胞抑制气
道高反应性所必需的因子。正是由于IL-10的上述作用，所以它
在哮喘的发生过程中起到保护作用。本研究表明：哮喘模型组
BALF中IL-10明显降低，但香青兰总黄酮对哮喘大鼠IL-10水平
没有明显影响，提示香青兰总黄酮可能对哮喘IL-10水平的降低
没有影响。
参 考 文 献
[1] 胡娟,林大欢.肿瘤坏死因子 α及C反应蛋白在老年哮喘患者
中的意义.中国医药指南,2012,10(13):51-52
[2] 刘勇民.维吾尔药志(上).乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,
1999:405-407
[3] 康小龙,何承辉,邢建国,等.香青兰总黄酮对哮喘大鼠气
道炎症及高反应性的改善作用.中国现代应用药学,2013,
30(3):234-238
[4] 闫丽丽,康小龙,何承辉,等.香青兰总黄酮对支气管哮喘
大鼠Th1/Th2免疫失衡的调节作用.中国医科大学学报,
2013,42(1):8-9
[5] 李志峰,王力宁,黄小琪,等.六味地黄颗粒对哮喘大鼠炎症介
质白三烯B4、白三烯C4及5-脂氧合酶影响的研究.时珍国
医国药,2010,21(8):1860-1862
[6] 王文英,涂献玉,许甲凤,等.五味地龙汤对实验性哮喘豚鼠平
喘机制的探讨.中国医院药学杂志,2008,28(14):1168-1170
[7] 刘清毅.雷公藤甲素对哮喘小鼠白三烯B4、C4表达的影响.
右江医学,2009,37(5):516-517
[8] 黄琰,李若葆.LTC4及其合成酶与咳嗽变异性哮喘气道重建
的相关性研究.山东医药,2010,50(33):22-24
[9] 付万朝.布地奈德联合沙丁胺醇雾化吸入对支气管哮喘急性
加重患者肿瘤坏死因子-α和超敏C-反应蛋白的影响.实用
医院临床杂志,2012,9(5):109-110
[10] Rivera A,Collins N,Stephan M T,et al.Aberrant tissue localization
of fungus-specific CD4+ T cells in IL-10 deficient mice.J Immunol,
2009,183(1):631-641
[11] Kosaka S,Tamauchi H,Terashima M,et al.IL-10 controls Th2 type
cytokine production and eosinophil infiltration in a mouse model of
allergic airway inflammation.Immnobiology,2011,216(7):811-820
[12] Amanatidou V,Apostolakis S,Spandidos D A.Genetic diversity of
the host and severe revere respiratory syncytial virus-induced lower
respiratory tract infection virginia amanatidou.Pediatr Infect Dis J,
2009,28(2):135-140
[13] Kono H,Fujii H,Tsuchiya M,et al.Inhibition of the kuPffer cell and
neutralization of IL-10 increase the expression of chemokines in
the lung in a rat peritonitis model.J Surg Res,2008,150(2):169-182
[14] Presser K,Schwinge D,Wegmann M,et al.Coexpression of TGF-1
and IL-10 enables regulatory T cells to completely suppress airway
hyperreactivity.J Immunol,2008,181(11):7751-7758
（收稿日期：2013年2月17日）