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不同产地珠子参的生药学鉴别和含量测定



全 文 :基金项目:国家自然科学基金项目(编号:81403095);北京市属高校青年拔尖人才培育项目(编号:CIT&TCD201404175;CIT&TCD201404184) ;首
都中医药护理专项(编号:14ZY15)
作者简介:李佳(1974—),女,副教授,博士,主要研究方向:中药鉴定方法学,E-mail:yueliang2683@ sina. com
通信作者:邹海艳(1974—),女,副教授,博士,主要研究方向:中药质量控制,E-mail:bwzhy@ sina. com
不同产地珠子参的生药学鉴别和含量测定
李 佳 李慢中 邓晓露 邹海艳
(中医络病研究北京市重点实验室首都医科大学中医药学院,北京,100069)
摘要 目的:对云南、贵州、甘肃产的珠子参药材进行鉴别和含量测定。方法:应用性状、显微及薄层色谱方法对不同产地
珠子参药材进行鉴别,显微鉴别方面采用石蜡切片及粉末临时制片进行显微特征观察;采用高效液相色谱法测定了药材
中竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果:不同产地珠子参药材形状、颜色和晶体数量等特征具有一定差异,云南、贵州和甘肃产 3
个批次药材的含量分别为 5. 55%、1. 98%和 1. 96%。结论:3 个产地的珠子参药材的性状、显微特征及竹节参皂苷Ⅳa的
含量差异较大,其中以云南产药材的质量较好。
关键词 珠子参;性状鉴别;显微鉴别;含量测定
Pharmacognostical Study and Content Determination in Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes
in Different Producing Areas
Li Jia,Li Manzhong,Deng Xiaolu,Zou Haiyan
(Beijing Key Lab of TCM Collateral Disease Theory Research,School of traditional
Chinese Medicine,Capital Medical University,Beijing 100069,China)
Abstract Objective:To provide macroscopic and microscopic identification basis for the Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes in
the main producing areas such as Yunnan,Guizhou and Gansu and determine some contents in them. Methods:Macroscopic and
microscopic observation and TLC were used to authenticate the crude drugs,the content of chikusetsusaponin IVa in the materials
were determined with HPLC. Results:The macroscopic and microscopic characteristics of the three batches of Largeleaf Japanese
Ginseng Rhizome were different in shapes colors of surface,and numbers of the crystals. And the contents of chikusetsusaponin IVa
were 5. 55%(Yunnan),1. 98%(Guizhou)and 1. 96%(Gansu)respectively. Conclusion:The Largeleaf Japanese Ginseng Rhizo-
mes from three producing areas showed different characteristics in macroscopic and microscopic identification,and the content of
chikusetsusaponin IVa in the sample from Yunnan province is higher than the others.
Key Words Largeleaf Japanese Ginseng Rhizomes;Macroscopic Identification;Microscopic Identification;Determination
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1673 - 7202. 2016. 09. 061
珠子参来源于五加科(Araliaceae)植物珠子参
Panax japonicus C. A. Mey. var. major (Burk. )
C. Y. Wu et K. M. Feng 或羽叶三七 Panax japonicus
C. A. Mey. var. bipinnatifidus (Seem. ) C. Y. Wu et
K. M. Feng的干燥根茎,为历版《中华人民共和国药
典(以下简称《中国药典》)和《云南省药品标准》收
载品种。珠子参别名纽子七、疙瘩七、野三七等[1],
其味苦,性甘、微寒,归肝、肺、胃经,具有补肺养阴,
祛癖止痛,止血等功效[2],主要在我国少数民族地区
使用,为苗族、彝族、白族等多民族共用药。现代研
究表明,珠子参能增强机体造血功能和免疫功
能[3-4],具有镇痛镇静[5]、抗肿瘤、抗实验性溃疡,抗
心肌缺血[6-7]等活性,日益受到研究者的关注。珠子
参药材主产于云南,在陕西、四川、甘肃、贵州、西藏
等地均有分布[8],不同地区所产药材质量差异较大,
本文分析了珠子参的本草记载,并采用 2010 版《中
国药典》方法,对云南、贵州和甘肃 3 个产地的珠子
参药材进行了鉴别和 HPLC 含量测定,为保证药材
质量和临床疗效提供了参考。
1 药用历史
珠子参因其根茎呈串珠状或类圆球形而得名,
始见于明代兰茂所著的《滇南本草》:“珠子参,味
甘、微苦,性温、平。止血生肌,……。故土方:用珠
子参为末,捻刀伤疮,收口甚速”[9]。此后,《本草从
新》,《本草纲目拾遗》及《天宝本草》等本草中均有
记载。珠子参在本草考证上一直存在争议,历代本
草中记载的珠子参原植物主要有两类,除人参属植
物外,桔梗科党参属植物莲座状党参 Codonopsis ro-
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sulata W. W. Sm 和鸡蛋参 Codonopsis convolvulacea
Kurz. 及其变种也做珠子参使用[10],目前整理出版
的《滇南本草》中珠子参植物附图源于《植物名实图
考》中记载的“珠子参”,也为桔梗科党参属植物鸡
蛋参。但余庆远著《维西见闻纪》中称珠子参:“茎
叶皆类人参……味苦而性燥,远不及人参也”;《本
草纲目拾遗》中记载:“《救生苦海》说‘血症用之,可
代三七’”,而桔梗科鸡蛋参类植物主要有滋补强壮
的功效,不具有活血化瘀作用,因此,有学者认为,
《滇南本草》历经各代的增订、补注与传抄,有可能
出现原植物错误,其所记载的珠子参应为五加科人
参属植物[10]。
2 实验材料
2. 1 仪器与材料 Agilent 1200 高效液相色谱仪
(配有四元泵、自动进样器、柱温箱和 DAD检测器);
HW SY11-K电热恒温水浴(北京市长风仪器仪表公
司);101-OAB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪
器有限公司);TK-218 型恒温摊片烤片机(湖北泰维
医疗科技有限公司);Thermo SHANDON FINESSE
325(北京宏嘉泰业科技发展有限公司)、OLYMPUS
偏光显微镜(BX61 + DP72),万分之一电子天平(德
国 Sartorius公司)。
2. 2 受试药物 竹节参皂苷Ⅵa 对照品(含量测定
用,批号 111861-201001),购于中国食品药品检定研
究院,人参皂苷 R0 对照品(含量测定用,批号
14033108)购于成都普瑞法科技开发有限公司;三批
珠子参药材分别购于云南昆明新螺狮湾药材市场,
四川荷花池药材市场和兰州黄河药材市场,经北京
中医药大学药学院张贵君教授鉴别为五加科植物珠
子参 Panax japonicus C. A. Mey. var. major(Burk. )
C. Y. Wu et K. M. Feng的干燥根茎。乙腈为色谱纯
(美国 fisher scientific公司),其他试剂为分析纯,水
为娃哈哈纯净水。
3 实验方法
3. 1 组织横切制片 取珠子参药材按常规石蜡法
切片,经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘干、脱
蜡步骤后,以番红和快绿染色,制成永久石蜡切片,
显微镜下观察。
3. 2 粉末制片 将珠子参药材粉碎,过 60 目筛,取
适量粉末于载玻片上,水合氯醛透化,显微镜下观
察。
3. 3 薄层色谱 分别取 3 个产地的珠子参药材粉
末 1. 0 g,加甲醇 30 mL,超声处理 40 min,滤过,滤液
蒸干,残渣加水 20 mL加热使溶解,用水饱和正丁醇
振摇提取 3 次(20 mL,15 mL,15 mL)、合并正丁醇
液,蒸干,残渣加甲醇 5 mL加热使溶解,作为供试品
溶液。另取竹节参皂苷Ⅳa 对照品、人参皂苷 R0 对
照品,加甲醇制成每 1 mL各含 2 mg的溶液,作为对
照品溶液。吸取上述 3 种溶液各 1 μL,分别点于同
一硅胶 G薄层板上,以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-
水(5∶ 10∶ 0. 5∶ 0. 3∶ 3. 5)上层溶液为展开剂,展开,取
出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,在 105 ℃加热至
斑点显色清晰,置紫外光灯(365 nm)下检视。
3. 4 含量测定 色谱条件:Agilent zorbax XDB C18
色谱柱(4. 6 mm × 250 mm,5 μm),以乙腈-0. 2%磷
酸水溶液(35∶ 65)为流动相;检测波长 203 nm;柱温
30 ℃;进样量 20 μL。对照品溶液的制备:取竹节参
皂苷Ⅳa对照品适量,精密称定,加 60%乙醇制成每
1 mL含 0. 2 mg 的溶液,即得。供试品溶液的制备:
分别取三批竹节参药材粉末约 0. 1 g,精密称定,置
具塞锥形瓶中,精密加入 60%乙醇 25 mL 称定重
量,超声提取 40 min,补足减失的重量,0. 45 μm 微
孔滤膜滤过,取续滤液,既得。
4 结果
4. 1 药材性状 云南产珠子参呈圆锥形和扁圆球
形,混有节间碎段。长 0. 5 ~ 2 cm,直径 0. 5 ~ 2. 5
cm。表面淡黄白色、淡黄色至黄棕色,有明显的沟槽
状纵皱纹,膨大部分的一侧或两侧有残存细的节间
或有细小的不定根痕,偶有圆形凹陷的茎痕。质坚
硬,断面较平坦,黄白色,有黄色点状树脂道。气微,
味苦微甘。
贵州和甘肃产珠子参药材性状与云南产药材相
似,主要区别在于药材多呈不规则菱角形,大小悬
殊,表面颜色较深,为棕褐色或黄褐色,疣状突起明
显,除有沟槽状纵纹外,有明显的皱缩状纹理。
图 1 珠子参药材图
4. 2 显微鉴别
4. 2. 1 根茎横切面 云南产珠子参为木栓层为 5 ~
6 层细胞。皮层稍窄,外侧为数列厚角细胞。维管
束为无限外韧型,7 ~ 10 束断续呈环状排列,射线
宽。韧皮部有多数树脂道存在,呈类圆形。形成层
明显。木质部束呈放射状排列,导管类圆形及类多
角形。中央有髓,约占横切片的 1 /2,薄壁细胞含有
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草酸钙簇晶,并含淀粉粒。见图 1-A。
与云南产珠子参比较,贵州和甘肃产药材根茎
横切片主要区别在于,贵州产珠子参药材木栓层为
5 ~ 8 层细胞,维管束常 7 束断续呈环状排列,髓部
较小,约占横切片的 1 /3;甘肃产珠子参木栓层为 6
~ 10 层细胞,维管束 10 ~ 12 束断续呈环状排列,髓
部较小,约占横切片的 1 /2 ~ 2 /3;草酸钙簇晶众多,
尤其是皮层及射线部位较多。见图 1-B和 1-C。
4. 2. 2 粉末特征 云南产珠子参药材粉末呈淡黄
白色;木栓细胞表面观呈多角形,壁薄,草酸钙簇晶
较多,棱角多宽钝,少数较尖。厚角细胞长圆形或类
多角形,无色。树脂道呈长方形或细管状,内含淡黄
至棕黄色分泌物。淀粉粒众多,多为单粒,类球形、
卵形或椭圆形,脐点点状、裂隙状,层纹不明显,复粒
由 2 ~ 8 个分粒组成,导管多为网纹,可见螺纹及梯
纹导管。见图 3。
与云南产珠子参相比,贵州产珠子参草酸钙簇
晶较少,棱角多宽钝,淀粉粒复粒由 2 ~ 4 个分粒组
成,甘肃产珠子参草酸钙簇晶众多,棱角多宽钝,淀
粉粒复粒由 2 ~ 4 个分粒组成。
图 2 3 个产地珠子参药材根茎横切面图
注:A云南;B贵州;C甘肃。1. 木栓层;2. 皮层;3. 韧皮
部;4. 形成层;5. 木质部;6. 髓部;7. 树脂道;8. 草酸钙簇晶。
4. 2. 3 薄层鉴别 上述 3 个产地的竹节参药材薄
层色谱图见图 4,由图可知,3 个批次的药材的供试
品色谱中,在与人参皂苷 R0(Rf = 0. 20)和竹节参皂
苷Ⅳa(Rf = 0. 48)对照品相应的位置上,均显示相同
颜色的荧光斑点。
图 3 珠子参粉末图
注:1. 草酸钙簇晶;2. 厚角细胞;3. 导管;4. 树脂道;5.
木栓细胞;6. 淀粉粒。
图 4 珠子参的薄层色谱图
注:1. 竹节参皂苷Ⅳa 对照品;2. 人参皂苷 R0 对照品;
3. 贵州产药材;4. 甘肃产药材;5. 云南产药材。
4. 2. 4 含量测定 采用 2010 版《中国药典》方法测
定并计算3批珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含
(下接第 1888 页)
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制的重要指标之一,研究其含量测定方法,有助于完
善麦冬药材及制剂的质量控制方法,有一定的应用
价值[11-13]。在对供试品溶液进行色谱条件摸索时,
在 190 ~ 400 nm进行全波长扫描,其中 296 nm波长
下检测色谱峰效果最好,因此选 296 nm 为检测波
长。本实验比较了甲醇 - 0. 03%磷酸水溶液、乙腈-
水、乙腈 - 0. 2%磷酸水溶液 3 种不同的梯度洗脱溶
剂系统,以乙腈 - 0. 2%磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系
统所得图谱的峰形较好、分离度良好,所以选用乙腈
- 0. 2%磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统为本实验的
流动相系统。
通过上述数据分析,清楚了川麦冬经炮制后内
部化学成分的显著变化,酒制川麦冬样品中有 4 种
物质的含量显著增加,有 2 种新成分产生。样品中
各成分含量的增加,可能是酒制过程使有效成分溶
解度变大,导致溶出量增多。但对于其他成分的具
体变化情况,还有待于进一步的研究。
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(2016 - 01 - 08 收稿 责任编辑:张文婷)
(上接第 1884 页)
量,云南、贵州和甘肃产药材的含量分别为 5. 55%、
1. 98%和 1. 96%,根据 2010 版《中国药典》规定,珠
子参中含竹节参皂苷Ⅳa 不得少于 3. 0%,结果表
明,除云南产药材外,其余两批药材质量均未达到标
准。
5 讨论
实验结果表明,云南、贵州和甘肃所产珠子参药
材从性状在形状、表面颜色上差别较大,不同产地珠
子参显微特征的差异主要体现在木质部所占的面积
和草酸钙簇晶数量,其中甘肃产药材约占横切片的
1 /2 ~ 2 /3;草酸钙簇晶较多。
3 个产地的竹节参药材薄层色谱图无明显差
异,但竹节参皂苷Ⅳa的含量差异较大,其中以云南
产药材含量较高,质量较好。珠子参在我国民间药
用历史悠久,长期以来主要依赖于野生资源,随着资
源的枯竭,近年来,在云南、贵州等地区开始人工栽
培[11],目前市场上,不同产地以及野生和栽培药材
品种并存,亟需对药材质量进行控制,以有效地利用
和开发该药材。
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(2016 - 01 - 22 收稿 责任编辑:张文婷)
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