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不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量测定



全 文 :陕 西 中 医 学 院 学 报 2012 年 5 月第 35 卷第 3 期
·74· Journal of Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine May. 2012 Vol. 35 No. 3
中药现代化
不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量测定*
李渊源 王 青 王 薇 崔九成 宋小妹
(陕西中医学院,陕西 咸阳 712046)
摘 要:目的 测定不同采收期珠子参药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量并确定珠子参的最佳采收期。方法 供试
品用 60 %乙醇超声提取 40 min,滤过,取续滤液作为供试品溶液,高效液相色谱仪测定峰面积。色谱柱:Kromasil
- C18(5 um,4. 6 mm × 150 mm) ;流动相:乙腈 - 0. 2 %磷酸溶液(36:64) ;柱温:30 ℃;流速:1. 0 mL /min;检测波
长:203 nm。结果 不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的累积量差异较大且 7 月含量最高。结论 以竹节参皂苷
Ⅳa为指标性成分确定珠子参的最佳采收期应为 7 月份。
关键词:珠子参;竹节参皂苷Ⅳa;采收期;HPLC
中图分类号:R 284 文献标识码:A 文章编号:1002 - 168X(2012)03 - 0074 - 03
The Assay of Chikusetsu - saponin Ⅳa in
Panax Pseudo - ginseng in Different Harvesting Time
Li Yuanyuan Wang Qing Wang Wei Cui Jiucheng Song Xiaomei
(Shaanxi University of Chinese Medicine,Xian Yang,Shaanxi,712046)
Abstract:Objective To explore the content of chikusetsu - saponin Ⅳa in Panax pseudo - ginseng in different har-
vesting time and decide the best harvest period. Methods Samples were ultrasonic extracted in 60 % alcohol for 40 min,
filtered,and took filtrate as the testing solution,and measured the peak area by HPLC. Chromatographic column was Kro-
masil - C18(5 um,4. 6 mm × 150 mm) ,acetonitrile - 0. 2 % phosphoric acid solution (36:64)were used as mobile
phase and the column temperature at 30 ℃,flow velocity was 1. 0 mL /min and wave - length 203 nm. Results The cumu-
lant of chikusetsu - saponin Ⅳa in Panax pseudo - ginseng varied greatly in different harvesting time and in July it was the
highest. Conclusion The optimum time to harvest determined by content of chikusetsu - saponin Ⅳa in Panax pseudo -
ginseng may be July.
Key words:Panax pseudo - ginseng;Chikusetsu - saponin Ⅳa;harvesting time;HPLC
珠子参又名珠儿参,钮子七、扣子七。为五加
科植物珠子参 Panax japonicusC. A. Mey. var. major
(Burk.)C. Y. Wu et K. M. Feng 或羽叶三七 Panax
japonicus C. A. Mey. var. bipinnatifidus(Seem)C. Y.
Wu et K. M. Feng 的干燥根茎。用于气阴两虚、烦
热口渴、虚劳咳嗽、跌扑损伤、关节疼痛、咳血、外伤
出血等症[1]。主产于四川、云南、贵州、西藏、甘肃、
陕西等。具有补肺、养阴、活络、止血功效。现代研
究表明,珠子参主要化学成分为多种皂苷类[2],而
皂苷在镇痛、镇静、抗炎、增强免疫力、抗肿瘤等诸
多方面表现出一定生理的活性[3]。本文采用高效
液相色谱法研究不同采收期珠子参中竹节参皂苷
Ⅳa含量变化,并初步确定珠子参的最佳采收期,
为充分利用中药珠子参资源提供科学依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters2695 高效液相色谱仪;2996 紫
外检测器,Empower2 工作站;GB204 型电子天平
(瑞士梅特勒 -托利多) ;SB - 3200D 型超声清洗
机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
1. 2 试药 珠子参药材来自陕西宁强,经陕西中
* 基金项目:2011 陕西省科技统筹创新工程项目(2011KTCQ03 - 02);国家自然科学基金项目(81102805 /H2804);陕
西省科学技术研究发展计划项目(2011k16 - 02 - 02)
DOI:10.13424/j.cnki.jsctcm.2012.03.028
2012 年 5 月第 35 卷第 3 期 陕 西 中 医 学 院 学 报
May. 2012 Vol. 35 No. 3 Journal of Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine ·75·
医学院药学院王继涛高级实验师鉴定,来源为珠子
参 Panax japonicus C. A. Mey. var. major (Burk.)
C. Y. Wu et K. M. Feng 的干燥根茎。竹节参皂
苷Ⅳ a 对照品(自制,面积归一法计算含量大于
98 %,符合含量测定要求) ;乙腈为色谱纯(Fisher
公司) ;其余均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件[3] 色谱柱:Kromasil - C18(5μm,
4. 6 mm ×150 mm) ;流动相:乙腈 - 0. 2 %磷酸溶液
(36:64) ;检测波长:203 nm;流速:1. 0 mL /min;进
样量:10 μL;柱温:30 ℃;理论板数按竹节参皂苷Ⅳ
a峰计算应不低于 3000。
2. 2 样品溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的配制 取竹节参皂苷Ⅳa 对
照品适量,精密称定,加 60 %乙醇配制成每毫升含
竹节参皂苷Ⅳa 0. 2605 mg 的溶液,摇匀,作为对照
品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取珠子参粉末(过 2
号筛)约 0. 1 g,精密称定,加 60 %乙醇溶液 25 mL,
称定重量,超声处理 40 min,取出,放至室温,加
60 %乙醇补足重量,滤过,取续滤液即得。
2. 3 线性关系考察 取上述对照品溶液,分别进
样 1 μL、2. 5 μL、5 μL、10 μL、15 μL 和 20 μL,测定
峰面积,以竹节参皂苷Ⅳa 的进样量(μg)为横坐
标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方
程,Y = 3. 2E + 5X - 18460 (r = 1)。结果表明,竹
节参皂苷Ⅳa 在 0. 26 ~ 5. 21μg 范围内,峰面积 Y
与进样量(μg)X线性关系良好。
2. 4 重复性试验 取同一批号样品,平行称取 6
份,按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液,照“2. 1”
项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa 含量。结果表
明,本方法具有较好的重复性,RSD为 1. 93 %。
2. 5 回收率试验 取已知含量的样品 6 份,各
0. 1 g,精密称定,精密加入竹节参皂苷Ⅳa 对照品
适量,按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液,按
“2. 1”项下色谱条件测定竹节参皂苷Ⅳa 含量,计
算回收率。竹节参皂苷Ⅳ a 的平均回收率为
101. 89 %,RSD为 1. 08 %。结果表明,本方法回收
率良好。
2. 6 精密度试验 取对照品溶液 10 μL,照“2. 1”
项下色谱条件,重复进样 6 次,测定竹节参皂苷Ⅳa
峰面积,RSD为 1. 07 %。结果表明,本方法精密度
良好。
2. 7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于 0、
2、4、8、12、18、24 h 内进样,照“2. 1”项下色谱条件
测定竹节参皂苷Ⅳa峰面积,RSD为 1. 61 %。结果
表明,供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 8 样品含量测定 取不同采收期样品粉末约
0. 1 g,精密称定,按“2. 2. 2”项下方法制备样品溶
液,进样 10 μL,按“2. 1”项下色谱条件进行测定,
记录色谱峰面积,计算含量,结果见表 1。对照品
和供试品 HPLC图谱见图 1、图 2,不同采收期竹节
参皂苷Ⅳa含量折线图见图 3。
图 1 竹节参皂苷Ⅳa对照品色谱图 图 2 珠子参样品色谱图
图 3 不同采收期珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量折线图
陕 西 中 医 学 院 学 报 2012 年 5 月第 35 卷第 3 期
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
表 1 不同采收期珠子参中竹节
参皂苷Ⅳa含量测定结果 (%,n = 4)
编号 采集时间 竹节参皂苷Ⅳa含量(%)
1 2009 - 05 - 20 4. 03
2 2009 - 05 - 27 4. 94
3 2009 - 06 - 16 5. 00
4 2009 - 07 - 29 6. 21
5 2009 - 08 - 09 4. 04
6 2009 - 09 - 26 3. 30
3 结果与讨论
3. 1 本文以珠子参中竹节参皂苷Ⅳa 为指标性成
分,对不同采收期的珠子参中竹节参皂苷Ⅳa 含量
进行比较,结果表明,7 月采收的珠子参中竹节参
皂苷Ⅳa含量最高,这一结果为珠子参的合理采收
奠定了一定基础。
3. 2 本实验结果与《陕西中草药》中记载的珠子
参采收期为“夏秋采挖”[4]有共同之处,为进一步
证明传统采收时间的合理性提供了科学依据。
3. 3 从珠子参的化学研究来看,珠子参中主要成
分除竹节参皂苷Ⅳa 外,尚含其他皂苷成分,多糖
等,而多糖具有增强免疫、抗肿瘤等多方面的药理
活性[5]。因此,要全面准确评价珠子参的采收期,
应进行多方面研究。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中国药典[M]. 北京:中国医药科技
出版社,2010:254 - 255.
[2]宋小妹,刘越,蔡宝昌. 珠子参的化学成分[J]. 沈阳药
科大学学报,2010,27(8) :626.
[3]宋小妹,唐志书,王薇,等.太白“七药”研究进展[J].亚
太传统医药,2009,5(2) :120.
[4]陕西省革命委员会卫生局,商业局. 陕西中草药[M].
北京:科学出版社,1971:590.
[5]庞春红.多糖药理作用研究进展[J]. 浙江中医药大学
学报,2011,35(4) :639 - 640.
(收稿日期:2011 - 09 - 07)
不同煎煮条件下黄连解毒汤中小檗碱溶出率考察
梁 晓1 赵 锦2 马文龙2
(1.宝鸡市中医医院,陕西 宝鸡 721000;2.陕西中医学院,陕西 咸阳 712083)
摘 要:目的 以黄连解毒汤为例说明不同煎煮条件下对中药汤剂中有效成分溶出率的影响。方法 以小檗
碱的溶出量为指标,采用高效液相色谱法对不同煎煮条件下(煎煮时间、次数、煎煮前浸泡)黄连解毒汤中小檗碱
的溶出率进行动态分析。结果 煎煮 30 min,煎 2 次小檗碱的溶出量、溶出率明显增加。
关键词:不同煎煮条件;黄连解毒汤;小檗碱;溶出率;高效液相色谱法
中图分类号:R 284 文献标识码:A 文章编号:1002 - 168X(2012)03 - 0076 - 02
本文中黄连解毒汤处方源自《外台秘要》,由
黄芩、黄柏、黄连和栀子 4 味中药组成[1],具有清
热、泻火、解毒之功效,临床可用于各种感染性疾病
的治疗[2],并具有明显的抗炎、抗菌、抗内毒素、抗
氧化、抗脑缺血、抗肿瘤、降糖、降压、降脂等作
用[3]。现代药理学研究证明,小檗碱是其现代药
理学作用的重要基础之一,所以本实验采用 HPLC
测定不同煎煮条件下黄连解毒汤中小檗碱的含量,
研究不同煎煮条件下小檗碱的溶出率,进而研究黄
连解毒汤的最佳煎煮条件,为临床科学煎煮清热解
毒类中药提供科学依据。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪:DIONEX(戴安)P680 HPLC
PUMP、UV D170U紫外检测器、CHROMELEON(变
色龙)软件(美国戴安分析仪器有限公司) ;小檗碱
对照品(090226 - 200613)。甲醇、乙腈为色谱纯,
液相用水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 黄连解毒汤中小檗碱测定方法的建立
2. 1. 1 对照品溶液的制备 取小檗碱对照品适
量,精密称定,加甲醇制成每 1 mL含 0. 15 mg 的溶
液,即得。
2. 1. 2 原药材供试品溶液制备 取黄连粉末(过
2 号筛)约 0. 2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密
加入甲醇 -盐酸(100∶ 1)的混合液 50 mL,密塞,
称定重量,超声处理(功率 250 W,频率 40kHz)
30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重
量,摇匀,滤过,取续滤液过 0. 45 um 微孔滤膜 ,测
得小檗碱含量为每克药材含小檗碱 60. 89 mg。
取黄柏粉末(过 2 号筛)约 0. 5 g,精密称定,置