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香青兰黄酮类化合物的大鼠在体肠吸收



全 文 :  从溶出曲线中我们可以看出,PVP-花锚总苷固
体分散体中花锚苷在120 min时溶出度分别达到
55.2%(药载比1∶1)、60.5%(药载比1∶2)、65.4%
(药载比1∶4),而与其对应的固体物理混合物及花
锚总苷的120 min的溶出度分别为29%和14%。
3 讨论
结合SEM和XRD分析结果与溶出度测定结
果可以推测,在固体分散体中花锚总苷与载体形成
了低共溶物,且花锚总苷以无定形态或微晶分子形
态分散其中,这种低共溶物有助于提高药物溶解性。
PVP-花锚总苷固体分散体的溶出结果可以看出,由
于低共溶物的形成使得溶解性能有较明显增加。
不同载体与药物的质量比的固体分散体的溶出
结果可以看出,药物的溶出度随着载体质量比例的
增加而增大。
从实验过程可以看出,制备花锚总苷与PVP的
固体分散体的工艺简单容易操作,便于投入大规模
生产。而且通过本实验可以看出,固体分散体技术
可以提高中药材提取物溶解性能,从而提高药物的
吸收和生物利用度。
参考文献:
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溶出特性[J].中国医院药学杂志,2010,30(11):900-905.
[收稿日期]2010-11-26
[基金项目]国家自然科学基金(编号:8116025) [作者简介]袁勇,男,硕士研究生,电话:0993-2855827,E-mail:wxc69@sohu.com [通讯作
者]王新春,女,博士,电话:0993-2855827,E-mail:cwjwxc@163.com
香青兰黄酮类化合物的大鼠在体肠吸收
袁勇1,邢建国2,王新春1,3,鲁萍3,苏红3,文志萍3  (1.石河子大学医学院一附院,新疆 石河子832008;2.新疆维吾尔
自治区药物研究所,新疆 乌鲁木齐830004;3.石河子大学药学院,新疆 石河子832002)
[摘要] 目的:研究香青兰总黄酮在大鼠各肠段的吸收动力学特征。方法:采用大鼠在体肠灌流模型,利用 HPLC法测定灌
流液中田蓟苷的浓度,研究田蓟苷和香青兰总黄酮在大鼠各肠段的吸收特性。结果:香青兰总黄酮中田蓟苷在大鼠各肠段的
吸收速率常数Ka值按结肠、空肠、十二指肠、回肠顺序依次分别为5.7651×10-2,4.4081×10-2,4.3873×10-2,3.9899×
10-2;田蓟苷在大鼠各肠段的吸收速率常数Ka值按十二指肠、回肠、空肠、结肠顺序依次分别为6.7897×10-2,6.3018×10-2,
5.8011×10-2,5.6765×10-2。结论:田蓟苷单体与香青兰总黄酮中田蓟苷在大鼠各肠段的吸收特征相一致,二者在大鼠小肠
段不同部位的吸收均不存在差异。
[关键词] 香青兰总黄酮;田蓟苷;吸收动力学;大鼠小肠单向灌流
[中图分类号]R285  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2011)20-1667-04
Study on the intestinal absorption of Dracocephalumtotal flavones in situ
YUAN Yong1,XING Jian-guo2,WANG Xin-chun1,3,LU Ping3,SU Hong3,WEN Zhi-ping3(1.The first af-
filiated hospital of medical colege,Shihezi University,Xinjiang 832008,China;2.Xinjiang Institute of Meteria Medica,Xin-
jiang Urumchi 830004,China;3.School of Pharmacy,Shihezi University,Xinjiang Shihezi 832000,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the absorption characteristics and its mechanism of Dracocephalumtotal flavones in
various intestinal segments.METHODS In situsingle-pass intestinal perfusion model and HPLC were used to study the intes-
tinal absorption of tilianin in the four intestinal segments.RESULTS The absorption rate constants(Ka)of tilianin in total
Dracocephalumflavones were 5.7651×10-2、4.4081×10-2、4.3873×10-2、3.9899×10-2 at colon,jejunum,duodenum and
ileum respectively;and Kaof tilianin were 6.7897×10-2、6.3018×10-2、5.8011×10-2、5.6765×10-2 at duodenum,ileum,
jejunum and colon respectively.CONCLUSION The absorption characteristics of tilianin at smal intestine segments has no
difference with tilianin in the flavones.
KEY WORDS:Dracocephalumtotal flavones;tilianin;absorption kinetic;in situ perfused rat intestinal modal
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  香青兰(Dracocephalum Moldavica L.)为唇
形科一年生草本植物,是新疆地产维吾尔药,有着丰
富的药材资源。在维吾尔医和民间用于治疗气管
炎、心脏病、高血压等疾患,具有补脑安神、活血化
淤、通路开窍、镇咳止喘等作用。香青兰黄酮类化合
物是香青兰中保护心肌的主要活性成分[1],其中,田
蓟苷是香青兰黄酮中的主要有效成分[2]。
本研究采用大鼠在体肠灌流的方法对田蓟苷及
香青兰总黄酮提取物进行大鼠在体肠吸收实验,探
讨田蓟苷单体与香青兰总黄酮中的田蓟苷的大鼠在
体肠吸收的差异,为香青兰黄酮口服剂型的设计提
供生物药剂学依据。
1 材料
1.1 仪器 LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛
津公司);TG-16C型台式高速离心机(上海安亭仪
器厂制造);BT01-100蠕动泵驱动器(保定兰格恒
流泵有限公司);LS-3120超声波发生器(美国科学
系统公司);电子分析天平(奥豪斯国际贸易有限公
司)。
1.2 药品与试剂 香青兰总黄酮提取物(新疆维吾
尔自治区药物研究所制备,批号20091021,总黄酮
含量为57%);田蓟苷对照品(经 HPLC测定,面积
归一化法计算纯度大于98%,石河子大学药学院实
验室自制,批号20100303);Krebs-Ringer′s试剂(简
称K-R试液,自配,每1 000 mL含氯化钠7.8 g,氢
化钾0.35 g,氯化钙0.37 g,碳酸氢钠1.37 g,磷酸二
氢钠0.32 g,氯化镁0.02 g,葡萄糖1.4 g);空白肠循
环液(K-R试液进行大鼠小肠循环灌注2 h,即得)。
1.3 实验动物 健康 Wistar大鼠(♀♂各半),体
质量(200±20)g,清洁Ⅱ级,由新疆医科大学实验动
物中心提供,合格证号:新医动字第2003-0001号。
2 方法
2.1 香青兰总黄酮提取物制备 取香青兰药材适
量,粉碎成粗粉,加20倍量40%乙醇回流提取3 h,
滤过,上清液浓缩至无醇味。浓缩液采用大孔吸附
树脂吸附,水洗后用70%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓
缩,减压干燥,即得。
2.2 溶液的配制
2.2.1 田蓟苷(TIL)储备液 取田蓟苷对照品约
20 mg,精密称定,置20 mL量瓶中,用50%乙腈水
溶液定容,备用。
2.2.2 香青兰总黄酮(TFD)储备液 取香青兰总
黄酮约0.5 g,精密称定,置50 mL量瓶中,用50%
乙腈水溶液定容,备用。
2.2.3 空白肠灌流液 取空白K-R溶液进行大鼠
在体肠灌流操作,收集肠灌流后的流出液,备用。
2.2.4 肠灌流液 将上述TIL和TFD储备液分
别用K-R溶液稀释100倍,即得。
2.3 田蓟苷的含量测定
2.3.1 色谱条件 色谱柱:Symmetry C18(4.6 mm
×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(30∶70);流速:
1.0mL·min-1;柱温:35℃;PDA为检测器;检测波
长:332 nm;进样量:20μL;理论塔板数不低于
15 000;拖尾因子:1.01~1.02。
2.3.2 标准曲线的绘制 分别精密移取一定量的
田蓟苷储备液,置5 mL量瓶内,用空白肠灌流液稀
释成4.0,8.0,16.0,24.0,32.0mg·L-1的田蓟苷标
准溶液。按上述色谱条件进样测定,记录色谱图,以
质量浓度(C)为横坐标,田蓟苷的峰面积(Y)为纵坐
标,绘制标准曲线,得回归方程Y=26 517 X+
3263.3,R=0.999 8。结果表明,在4.0~32.0mg·
L-1范围内,田蓟苷的峰面积与质量浓度具有良好
线性关系。空白肠灌流液中内源性物质对田蓟苷无
干扰。见图1。
图1 高效液相色谱图
A.空白肠灌流液;B.田蓟苷对照液;C.灌流后供试液;1-田蓟苷
Fig 1 HPLC of chromatogram
A.blank intestinal perfusate;B.tilianin control liquid;C.perfused
reference liquid;1-tilianin
2.3.3 精密度试验 分别配制质量浓度为4.0,
16.0,32.0mg·L-1田蓟苷对照品溶液,进行日内、
日间精密度测定,于1 d内不同时间测定同一样品5
次,计算日内精密度;以连续测定5 d进行分析,计
算日间精密度。结果,日内精密度 RSD 分别为
1.52%、1.09%及0.65%,日间精密度RSD分别为
1.63%、1.21%及0.84%。
2.3.4 回收率试验 取低、中、高3种质量浓度分
别为4.0,16.0,32.0μg·mL
-1的田蓟苷对照品溶
液,进样20μL,在上述色谱条件下分离测定,按标
准曲线方程计算浓度,以测定浓度与加入浓度之比
计算回收率。结果表明,田蓟苷低、中、高3种质量
浓度的回收率分别为(101.1±1.2)%,(99.4±
1.3)%,(100.2±1.9)%。
2.4 稳定性试验 取50 mL质量浓度为100μg·
mL-1的香青兰总黄酮肠灌流液置于37℃水浴中,
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分别于0,1,2,3,4 h取样1 mL,测定田蓟苷含量
的变化,结果 RSD为0.7%,说明样品在4 h内稳
定,可以排除药物稳定性因素对实验结果的影响。
2.5 大鼠在体肠灌流试验[3-4] 实验前将大鼠禁食
过夜(自由饮水),腹腔注射戊巴比妥钠麻醉(60 mg
·kg-1),固定,沿腹部正中线打开腹腔,分离十二脂
肠、空肠、回肠、结肠4个待考察肠段,分别在肠段两
端插管,实验时用等渗生理盐水浸渍的纱布覆盖于
肠组织表面以保湿,用等渗生理盐水冲洗肠内容物
后换灌流液,用一恒速泵灌流肠腔,泵的流速为0.25
mL·min-1,约0.5 h后开始接收灌注流出液,随后
每隔15 min收集一份,灌注后将所灌流的肠段剪
下,测量其长度和内径。所取样品置于1.5 mL离心
管中,以10 000 r·min-1的速度离心10 min后,过
滤,按“2.3.1”色谱条件进样,记录峰面积。
2.6 大鼠肠壁的吸附 取灌流后的肠段,剪开,用
滤纸吸干,精密加入供试品溶液20 mL。置于37℃
水浴锅中,恒温水浴孵育3 h后,测定孵育前后溶液
的紫外吸收。结果表明,大鼠肠壁对香青兰总黄酮
没有吸附。
2.7 数据处理[5] 小肠不仅吸收药物,也吸收和分
泌水分,导致灌流液体积变化,因此,不能用直接测
定药物浓度的方法计算药物的吸收。本实验采用重
量分析法对灌流液的流入和流出的体积进行校正,
消除其体积变化的影响。按下式计算药物吸收速率
常数(Ka)和药物表观吸收系数(Papp)。
Ka= 1-
CoutQout
CinQ( )in QV  Papp=
-QlnCoutQoutCinQ( )in
2πrl
式中Qin和Qout分别为肠道进出口灌流液的体
积(mL);Cin和Cout分别为肠道进出口灌流液的质量
浓度(μg·mL
-1);l和r分别为被灌流肠段的长度
(cm)和横截面半径(cm);Q为灌流速度(0.25 mL·
min-1);V 为灌流肠段的体积;Ka和Papp为最后5
个时间段(45~105 min)样品的平均值。
3 结果
本实验分别取TIL肠灌流液和TFD肠灌流液
进行了大鼠在体肠灌流实验,分别将各肠段灌流流
出液进行 HPLC 测定,以田蓟苷含量为指标,
“SPSS”统计软件的方差分析,讨论实验结果。各肠
段的Ka及Papp见表1。
  结果显示,田蓟苷单体及其香青兰总黄酮中田
蓟苷的大鼠小肠(十二指肠、空肠、回肠)的肠灌流实
验结果一致,吸收无显著性差异。田蓟苷单体在各
肠段的吸收速率常数Ka值和Papp值按十二指肠、回
表1 田蓟苷单体和香青兰总黄酮中田蓟苷Ka和Papp的比
较(珚x±s,n=5)
Tab 1 Comparison of tilianin Kaand Pappin tilianin mono-
mer and Dracocephalumtotal flavones(珚x±s,n=5)
肠段
香青兰黄酮中的田蓟苷 田蓟苷单体
Papp×10-3
/cm·min-1
Ka×10-2
/min-1
Papp×10-3
/cm·min-1
Ka×10-2
/min-1
十二指肠 4.11±0.14 4.39±0.42 6.63±0.26  6.79±0.25
空肠 4.56±0.55 4.41±0.40 6.50±0.79  5.80±0.55
回肠 3.99±0.52 3.99±0.55 6.62±0.40  6.30±0.20
结肠 5.12±0.23 5.76±0.69 6.22±0.11  5.68±0.28
肠、空肠、结肠顺序依次下降,各肠段之间不存在显
著性差异(P>0.05)。香青兰总黄酮中田蓟苷单体
在各肠段的吸收速率常数Ka值和Papp值按结肠、空
肠、十二指肠、回肠顺序依次下降,结肠的Ka、Papp
值与其他肠段存在显著性差异(P<0.05)。
4 讨论
香青兰为维吾尔医常用药材。香青兰总黄酮是
从香青兰中提取得到的一类具有明确抗心肌缺血作
用天然黄酮类活性成分,其口服吸收特性的研究是
香青兰总黄酮口服新制剂设计的重要依据。本实验
分别进行了田蓟苷单体和香青兰总黄酮的大鼠在体
肠灌流试验,结果显示田蓟苷单体在大鼠各肠段的
吸收与香青兰总黄酮中田蓟苷在大鼠各肠段的吸收
特征存在一定的差异,表现为田蓟苷单体在大鼠肠
段不同部位吸收不存在差异,而香青兰总黄酮中田
蓟苷在结肠肠段的肠壁渗透系数显著高于其他肠
段。因此,研究结果为采用生物黏附给药技术进行
香青兰总黄酮新制剂的研究提供了一定的依据。
本文对比研究了田蓟苷单体与香青兰总黄酮中
田蓟苷在大鼠各肠段的吸收,结果显示田蓟苷单体
的吸收参数大于香青兰总黄酮中田蓟苷的吸收参
数,提示香青兰总黄酮中某些共有物质可能对活性
成分的吸收有影响,这在维药现代化研究中需引起
注意。鉴于影响黄酮类化合物吸收因素的复杂性和
多样性,我们将进一步对影响吸收的其他因素及其
吸收机制进行研究。
香青兰总黄酮肠灌流液能直接溶解分散于空白
灌流液中,故其可直接用空白灌流液配制,但在配制
田蓟苷肠灌流液时,为了使样品溶解于空白灌流液
中,参考相关文献[7],加入了0.4%聚山梨酯-80。
参考文献:
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[收稿日期]2011-03-31
[基金项目]湖北省自然科学基金项目(编号:2008A013) [作者简介]徐元翠,女,副主任药师,电话:18963910371,E-mail:xuyuancui1969@
126.com
马齿苋醇提取物对胰岛素抵抗型大鼠的降脂降压作用
徐元翠  (恩施自治州中心医院,湖北 恩施445000)
[摘要] 目的:探讨马齿苋醇提取物对胰岛素抵抗型大鼠的降脂降压作用。方法:随机将50只大鼠分成5组(对照组、模型
组、依那普利组、马齿苋醇提取物低剂量组和高剂量组),每组10只动物。后4组高脂、高糖和高盐饲料饲养8周后,后3组分
别给予依那普利和不同剂量马齿苋醇提取物灌胃4周,检测各组大鼠血压、肾素(renin)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血脂、血糖、
SOD活性、丙二醛(MDA)以及TNF-α等。结果:马齿苋醇提取物高剂量组能有效降低胰岛素抵抗大鼠血压以及血中血脂、
AngⅡ、MDA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,并增强胰岛素敏感性和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结论:马齿苋醇提取物
具有降低胰岛素抵抗型大鼠血脂和血压等作用,其作用机制可能与其影响肾素-血管紧张素系统等有关。
[关键词] 马齿苋醇提取物;血脂;血压;大鼠
[中图分类号]R285.5  [文献标识码]A  [文章编号]1001-5213(2011)20-1670-04
Effects of Purslane extract on blood pressure and serum lipid in a rats model of insulin resistance
XU Yuan-cui(Department of Pharmaceutical Preparation,Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture,Hubei Enshi
445000,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To explore the effects of Purslane extract(PLE)on blood pressure and serum lipid in a rats model of
insulin resistance(IR).METHODS 50 rats were randomly divided into 5 groups(n=10),there were control group(CG),model
group(MG),enalapril group(EPG),low and high-dose group of Purslane extract(PLE-L and PLE-H).After the CG was bred
with normal feedstuff,other group was bred 8 weeks with feedstuff of high liquid,high sugar and high salt.These animals were
given drugs respectively for 4 weeks with normal sodium(NS),enalapril,low and high-dose of PLE.Then the plasma renin,an-
giotensinⅡ(AngⅡ),serum lipid,fasting blood glucose,insulin-sensitivity index(ISI),activity of SOD,levels of MDA and
TNF-α,etc,were detected in rats.RESULTS These indexes were reduced by the high-dose PLE,such as the blood pressure,
serum lipid,AngⅡ、MDA and TNF-α,but the activity of ISI and SOD were reinforced.CONCLUSION The PLE possesses an
effect that degrades the blood pressure and serum lipid in a rats model of insulin resistance,its mechanism of action is concerned
with renin-angiotensinamide system.
KEY WORDS:Purslane extract;serum lipid;blood pressure;rats
  马齿苋(Portulaca oleracea L)又名蚂蚌菜、长
命菜,其鲜品含有去甲肾上腺素、多巴、维生素(A、
B、PP、C)、香豆素、黄酮、马齿苋素甲和马齿苋素乙
(oleracinⅠ,Ⅱ)[1]。有清热解毒之功效。近年研
究发现马齿苋有降血糖、抗动脉粥样硬化等作用[2]。
为探讨其对胰岛素抵抗型(insulin Resistance,IR)
大鼠血脂及血压的影响,我们采用了马齿苋醇提取
物干预胰岛素抵抗型大鼠的血压和血脂等,发现其
能够显著影响大鼠血脂和血压等。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器与试药 马齿苋醇提取物(Purslane
extract,PLE)选用马齿苋(湖北省中药材研究所,产
地:湖北利川),经过10倍量70%乙醇提取2次,过
滤浓缩,相当于10 g·mL-1生药。马来酸依那普利
(enalapril,EP,纯度98.8%,上海现代制药股份有限
公司,批号100407,国药准字:H31021938);肾素
(renin)测定试剂盒[广东虹业抗体科技有限公司,
·0761· 中国医院药学杂志2011年第31卷第20期Chin Hosp Pharm J,2011 Oct,Vol 31,No.20