全 文 ：第 29 卷 第 10 期
2 0 1 1年 1 0月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 29 No． 10
Oct． 2 0 1 1
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华
中
医
药
学
刊
日本毛连菜降血糖及免疫增强作用活性筛选
席啸虎，杨丰榕，刘恩荔，高建平
(山西医科大学，山西 太原 030001)
摘 要:目的:筛选日本毛连菜的具有降血糖作用以及免疫增强作用的有效部位。方法:采用四氧嘧啶致糖
尿病小鼠模型，日本毛连菜不同提取物连续灌胃 21 天，用葡萄糖氧化酶法测定小鼠血糖值。采用 CCK － 8 法检
测日本毛连菜不同提取物对正常大鼠体外脾脏淋巴细胞的增殖作用。结果:与模型组比较，日本毛连菜提取物
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ能显著降低糖尿病小鼠血糖值(P ＜ 0． 05) ，其中提取物Ⅰ组小鼠血糖值降至(11． 91 ± 1． 92)mmol /L，与
阳性药组无显著性差异(P ＞ 0． 05) ;提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ能刺激脾脏淋巴细胞增殖，其中提取物Ⅲ能显著促进刀豆
蛋白 A(Con A)诱导的淋巴细胞增殖(P ＜ 0． 05)。结论:提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ具有显著降血糖作用;提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
具有免疫增强作用。
关键词:日本毛连菜;四氧嘧啶;降血糖作用;免疫调节
中图分类号:R28 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2011)10 － 2360 － 03
Screening of Hypoglycemic and Immunological activity of Picris Japonica Thunb
XI Xiao-hu，YANG Feng-rong，LIU En-li，GAO Jian-ping
(Shanxi Medical College，TaiYuan 030001，ShanXi，China)
Abstract:Objective:To screen the extract of Picris Japonica Thunb． which had hypoglycemic and immunological ac-
tivity． Methods:The diabetic mice were established by injection of alloxan． Diabetic mice were given different parts of
Picris Japonica Thunb． for 21 days． Mice glucose value was detected by glucose oxidase method． The immunological
effect of different parts of Picris Japonica Thunb on lymphocytes of rat was detected by CCK － 8 method． Results:Com-
pared with the diabete model group，the parts Ⅰ Ⅱ and Ⅲ lowered alloxan － induced diabetic mice＇s glucose level obvi-
ously (P ＜ 0． 05)． While the part Ⅰ was the best and had no significant difference compared with glibenclamide (P ＞
0． 05)． The partsⅠ，Ⅱ and Ⅲ increased lymphoeytes proliferation． Furthermore，the part Ⅲ increased lymphoeytes
proliferation induced by Con A obviously (P ＜ 0． 05)． Conclusion:The part Ⅰ，Ⅱand Ⅲ possessed significant hypo-
glycemic activities． The parts Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ possessed immunological activities．
Key words:Picris japonica Thunb．;alloxan;hypoglycemic activity;immunological regulation
收稿日期:2011 － 05 － 10
作者简介:席啸虎(1986 －) ，男，山西榆次人，硕士研究生，研究方
向:药理与药物化学。
通讯作者:高建平(1963 －) ，女，山西盂县人，教授，博士，研究方
向:中药资源及其活性成分研究、中药鉴定新技术与中
药质量评价。
时步分糖尿病属中医“消渴病”范畴，已经成为当今危
害人类健康一种严重的慢性病，发病率逐年递增［1］。国内
外口服降糖药以西药为主，中药为辅，由于西药的刺激性、
不良反应较多［2］，寻找具有降血糖作用的中药资源植物，
进一步寻找具有降血糖作用的有效部位、活性成分具有重
要意义［3 － 4］。日本毛连菜(Picris japonica Thunb)为菊科二
年生草本植物，全草入蒙药，又名羊下巴、毛柴胡［5］。据
《中华本草》记载，日本毛连菜具有理肺止咳，化痰平喘，宽
胸之功效。有关日本毛连菜降糖作用及降血糖的有效部位
研究未见报道。在课题组前期研究基础上，本文拟比较日
本毛连菜不同提取物的降血糖作用，以期筛选出具降糖作
用的有效部位。
1 实验材料
1． 1 药材、药物及试剂 实验用日本毛连菜采自山西省
娄烦县，经山西医科大学药学院高建平教授鉴定为菊科毛
连菜属二年生草本植物日本毛连菜 (Picris japonica
Thunb．) ，蜡叶标本存放于山西医科大学中药标本室;四氧
嘧啶(美国 Sigma 公司) ;葡萄糖试剂盒(中生北控生物科
技股份有限公司)批号:102401． 201010;格列本脲(天津力
生制药股份有限公司)批号:1003013;刀豆蛋白 A(con A)
(美国 Sigma 公司) ;RP － Mll640 培养基(美国 GIBCOBRL
公司) ;CCK － 8 溶液(beyotime 公司) ;其余所用试剂均为
分析纯。
1． 2 实验动物 昆明种小鼠，体重 18 ～ 22g，清洁级，雌雄
各半;SD大鼠，体重 180 ～ 220g，清洁级，雄。均由山西医科
大学实验动物中心提供。本实验所有动物饲养条件一致，
开始实验前 3 天置本实验室观察饲养，自由摄食、饮水，各
0632
DOI：10.13193/j.archtcm.2011.10.210.xixh.057
第 29 卷 第 10 期
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Vol． 29 No． 10
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组饲料与饮用水来源均相同。
1． 3 仪器 旋转蒸发器 RE － 52AA(上海亚荣生化仪器
厂) ;752 紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公
司) ;离心机 LXJ － IIB(上海安亭科学仪器厂) ;电子天平
BS － 124S(北京赛多利斯仪器系统有限公司) ;酶标仪(奥
地利 SpeetraRainbow 公司) ;CO2培养箱(美国 NUAIR 公
司)。
2 实验方法
2． 1 日本毛连菜不同提取物的制备 称取日本毛连菜
100g，加 15 倍的蒸馏水回流提取 2 次，每次 1h，用 4 层纱布
过滤，合并滤液，减压浓缩至 100mL，浓缩液经 500gD101大
孔吸附树分离，依次用 3． 5 倍柱体积的蒸馏水、30%乙醇、
50%乙醇、70%乙醇洗脱，减压浓缩各洗脱液至 100ml，依
次得提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。
2． 2 对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖值的影响 小鼠尾静
脉注射新鲜配制的四氧嘧啶 50mg /kg造成糖尿病模型，72h
后，对禁食不禁水的小鼠眼眶后静脉丛采血，选取空腹血糖
高于 11． 1mmol /L者用于实验。取合格模型小鼠 70 只，随
机分为 6 组，即格列本脲阳性对照组，日本毛连菜提取物组
(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ) ，糖尿病模型组;另取重量相近的正常小鼠
作为正常对照组。连续给药 21 天，于第 7、14、21 天给药前
小鼠禁食不禁水 8h，给药后继续禁食不禁水 2h 后，小鼠眼
眶后静脉丛采血，测定空腹血糖值。
2． 3 对大鼠脾脏淋巴细胞增殖反应的影响 无菌条件下
取大鼠脾脏，剪碎，过 200 目筛，用密度梯度离心法获得淋
巴细胞悬液，无菌水裂解红细胞，调成 1 × 106个 /mL 的细
胞悬液，接种于 96 孔板中(50μ L 每孔) ，实验设正常对照
组、给药组(设 50μg /mL、100μg /mL、200μg /mL 3 个终浓
度) ，每个浓度设 4 个平行孔。于另一板上除加细胞悬液和
药物外，每孔还加人终浓度为 5μg /mL的 Con A。每孔总体
积补充到 100μL后将培养板置于 37℃、5%CO2培养箱孵育
48h后，以 CCK － 8 法染色 1． 5h，在 450nm处使用酶标仪检
测每孔吸光度值。
2． 4 统计学处理 实验数据用均数 ±标准差(珋x ± s)表
示，使用 t检验进行比较组间差异的显著性。
3 实验结果
3． 1 对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响 连续给药 7 ～
14 天后，日本毛连菜提取物Ⅰ、Ⅱ组小鼠血糖值与模型组
相比有显著性下降(P ＜ 0． 05) ，且日本毛连菜提取物Ⅰ
降糖效果最佳［血糖值: (14． 20 ± 3． 25)mmol /L］，与提取
物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ有显著性差异(P ＜ 0． 05) ，与阳性药没有显
著性差异(P ＞ 0． 05)。给药 21 天后，提取物Ⅰ组小鼠血
糖值显著低于提取物Ⅱ、Ⅲ(P ＜ 0． 05) ;与 14 天相比，提
取物Ⅲ组小鼠血糖值有显著性降低(P ＜ 0． 05)。结果见
表 1。
3． 2 对小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应的影响 与空白对照
组相比，各给药组单独作用均能刺激大鼠脾脏淋巴细胞增
殖(P ＜ 0． 05) ，作用强度依次为提取物Ⅰ ＞ Ⅱ ＞ Ⅲ;提
取物Ⅲ在刀豆蛋白 A(conA)协同作用下，能明显促进淋
巴细胞的增殖(P ＜ 0． 05) ，且有剂量依赖性。结果见
表 2。
表 1 日本毛连菜不同提取物对四养嘧啶
糖尿病小鼠血糖的影响(珋x ± s)
组别 n
剂量
(g /kg)
给药前血糖
(mmol /L)
7天血糖
(mmol /L)
14天血糖
(mmol /L)
21天血糖
(mmol /L)
模型 10 － 27． 94 ± 4． 74# 24． 33 ± 4． 36# 23． 74 ± 4． 88# 20． 76 ± 3． 48#
Ⅰ 10 3 26． 68 ± 5． 13 16． 07 ± 2． 74＊▲14． 20 ± 3． 25* 11． 91 ± 1． 92＊▲
Ⅱ 10 3 26． 12 ± 5． 27 18． 90 ± 3． 83* 19． 30 ± 5． 37 20． 52 ± 4． 64
Ⅲ 10 3 26． 59 ± 4． 96 21． 05 ± 4． 06 18． 58 ± 5． 84 15． 21 ± 4． 37*
Ⅳ 10 3 26． 82 ± 4． 92 26． 30 ± 3． 95 24． 23 ± 4． 52 19． 03 ± 4． 65
阳性药 10 0． 002 28． 46 ± 4． 28 15． 07 ± 2． 99* 10． 50 ± 1． 80* 10． 16 ± 3． 86*
正常 10 － 7． 07 ± 1． 19 6． 62 ± 0． 21 6． 99 ± 0． 41 7． 07 ± 1． 19
注:与正常对照组比较:# P ＜ 0． 05;与模型对照组比较:* P
＜ 0． 05;与阳性药比较:▲ P ＞ 0． 05。
表 2 日本毛连菜不同提取物对大鼠脾脏
淋巴细胞增殖的影响(珋x ± s)
组别
剂量
(μg /mL)
A值 组别
剂量
(μg /mL)
A值
Con A 5 0． 64 ± 0． 031 － － －
空白 － 0． 28 ± 0． 011 － － －
Ⅰ低 50 0． 98 ± 0． 073# Ⅰ低 + Con A 50 +5 0． 94 ± 0． 039
Ⅰ中 100 1． 17 ± 0． 108# Ⅰ中 + Con A 100 + 5 1． 01 ± 0． 034
Ⅰ高 200 1． 28 ± 0． 073# Ⅰ高 + Con A 200 + 5 1． 01 ± 0． 064
Ⅱ低 50 0． 99 ± 0． 041# Ⅱ低 + Con A 50 +5 1． 03 ± 0． 042
Ⅱ中 100 1． 10 ± 0． 110# Ⅱ中 + Con A 100 + 5 1． 17 ± 0． 078
Ⅱ高 200 1． 10 ± 0． 079# Ⅱ高 + Con A 200 + 5 1． 25 ± 0． 020
Ⅲ低 50 0． 82 ± 0． 069# Ⅲ低 + Con A 50 +5 1． 02 ± 0． 036*
Ⅲ中 100 1． 01 ± 0． 103# Ⅲ中 + Con A 100 + 5 1． 12 ± 0． 111*
Ⅲ高 200 1． 03 ± 0． 117# Ⅲ高 + Con A 200 + 5 1． 33 ± 0． 077*
注:与空白组比较，# P ＜ 0． 05;与未加 con A 组比较显著性升
高，* P ＜ 0． 05。
4 讨 论
有关日本毛连菜降糖作用及降血糖的有效部位研究未
见报道，本文通过对日本毛连菜降血糖的有效部位筛选实
验，结果表明，日本毛连菜提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均具有降糖作
用，降糖效果较好的为提取物Ⅰ，经过 21 天给药，糖尿病小
鼠血糖值由(26． 68 ± 5． 13)mmol /L 降至(11． 91 ± 1． 92)
mmol /L，与阳性药没有显著性差异(P ＞ 0． 05) ，推测提取物
Ⅰ是日本毛连菜降血糖的有效部位。
据文献报道，2 型糖尿病是一种多因素参与的遗传异
质性疾病，其发生的病理过程复杂，免疫调节异常可能在 2
型糖尿病的发生、发展中起作用［6］。淋巴细胞是机体最重
要的免疫细胞群［7］，在体内进行免疫应答时互相协同、拮
抗，以维持免疫应答的平衡，与糖尿病患者并发血管病变和
感染有着密切关系［8］。2 型糖尿病患者血清 CRP、IL － 6
和 SAA等炎症标记物较健康者高［9］，CD4 +、CD4 + /CD8 +下
降，提示 2 型糖尿病患者存在细胞免疫功能缺陷［10］。本文
研究结果表明，日本毛连菜提取物Ⅰ具有显著的降糖作用，
同时具有免疫增强作用，初步推测提取物Ⅰ的降糖机制与
其免疫增强作用有关。
一般认为刀豆蛋白 A(ConA)主要作用于 T淋巴细胞，
介导机体特异性细胞免疫应答，而 LPS 主要作用于 B 淋巴
细胞，介导机体的特异性体液免疫应答，日本毛连菜提
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收稿日期:2011 － 05 － 25
基金项目:浙江省中医药青年基金资助项目(2009YB010)
作者简介:宋巧玲(1984 －) ，女，浙江新昌人，硕士，研究方向:肿瘤
证候和治法治则的研究。
通讯作者:阮善明(1982 －) ，男，浙江台州人，医师，研究方向:中医
思维拓展、肿瘤证候和治法治则的研究。
取物Ⅲ能显著促进刀豆蛋白 A(Con A)诱导的 T 淋巴细胞
增殖(P ＜ 0． 05) ，推测提取物Ⅲ对机体的特异性细胞免疫
应答有一定程度的正向调节作用。
参考文献
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益元汤对 BALB /c小鼠 CT － 26 结肠癌抑瘤作用的实验研究
宋巧玲，阮善明，沈敏鹤
(浙江省中医院，浙江 杭州 310006)
摘 要:目的:探讨益元汤对结肠癌小鼠抑瘤和延长生存期作用。方法:BALB /c小鼠皮下接种 CT － 26 结肠
癌细胞(2 × 106mL －1) ;随机分为 6 组，分成优化实验组(分提前干预组，同步干预组，延后干预组) ，化疗对照组、
中药对照组和模型对照组 6 组，观察各组小鼠的抑瘤情况和生存期。结果:1．中药对照组具有促进肿瘤生长作
用，而优化干预组则显现出抑制肿瘤生长的作用，其中提前干预组疗效明显优于模型组、单用化疗组及中药组。
2．优化干预组;有延长小鼠生存期的作用，其中提前干预组疗效明显优于同步干预组、延后干预组，有统计学差
异。结论:益元汤与 5 － Fu联合应用具有抑制肿瘤生长作用，并能延长小鼠生存期，其机制有待进一步研究。
关键词:益元汤;结肠癌;抑瘤;生存期
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2011)10 － 2362 － 03
Experimental Study on Anti － tumor Effect of Yiyuan Tang on BALB /c Mice
with CT － 26 Carcinoma of Colon
SONG Qiao-ling，RUAN Shan-ming，SHEN Min-he
(Zhejiang Province TCM Hospital，Hangzhou 310006，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To investigate the anti － tumor and life span prolonging effect of YiYuan Tang on mice bearing
carcinoma of colon． Methods:Through subcutaneous injection of CT － 26 colon cancer cells(2 106mL －1)into 48 BALB /
c mice，48 BALB /c mice were randomly divided into 6 groups，namely optimization experimental group (consisting of
early intervention group，synchronous intervention group and delay intervention group) ，chemotherapy control group，tra-
ditional Chinese medicine control group，model control group，and observe the anti － tumor effect and survival time． Re-
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