全 文 ：中国药物与临床 2012年 7月第 12卷第 7期 Chinese Remedies & Clinics，July 2012,Vol.12,No.7
基金项目：国家科技支撑计划（2011BAI07B07）
作者单位：030001 太原，山西医科大学药学院中药学教研室
通信作者：高建平，Email：jpgao123＠sina．com
日本毛连菜（Picris Japonica Thunb．）为菊科毛
连菜属植物，又名羊下巴，全草用来入药，生于山坡
草地、灌丛中或田边、河边，分布于黑龙江、内蒙古及
山西等地，其中山西主要分布在太原及周边县市、交
城、五台等地区［1］。全草入蒙药，具有清热、消肿及止
痛作用。临床用于瘟疫、结喉、乳腺炎、脑刺痛、腮腺
炎、阵刺痛等症［2］。据《西藏常用中草药》记载，日本
毛连菜苦，咸，微温，入肺经，理肺止咳，化痰平喘，宽
胸，治咳嗽痰多，咳喘，嗳气，胸腹闷胀等［3］。在我国
民间有食用习惯［4］。目前日本毛连菜总黄酮提取法
的工艺尚未见文献报道。在前期课题组对其药理实
验研究的基础上，本研究通过单因素循环和正交试
验考察提取法各因素对总黄酮提取率的影响［5-10］，确
定日本毛连菜总黄酮的提取工艺，为其后续的化学
成分等相关研究奠定基础。
1 仪器与试药
752紫外可见分光光度计 （上海精密科学仪器
有限公司）；电热恒温水浴锅（常州国华电器有限公
司）；离心机 LXJ-IIB（上海安亭科学仪器厂）；控温电
热套 KDM型 （山东华鲁仪器公司）；电子天平 BS-
124S（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。亚硝酸钠、
硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇均为分析纯。日本毛连
菜全草于 2010年 10月采自山西省娄烦县，经山西
医科大学药学院高建平教授鉴定为菊科植物毛连菜
属日本毛连菜。
2 方法与结果
2．1 日本毛连菜总黄酮含量测定
2．1．1 测定波长的选择
精密称取干燥至恒重的芦丁标准品 18．60 mg，
用体积分数为 60％的乙醇溶解，并转移至 100 ml容
量瓶中定容，摇匀，制成 0．186 mg/ml的芦丁对照品
溶液。取芦丁对照品溶液 3 ml于 10 ml容量瓶中，
加 5％亚硝酸钠溶液 0．3 ml，摇匀，放置 6 min，加
10％硝酸铝溶液 0．3 ml，摇匀，放置 6 min，加 4％氢
氧化钠溶液 4 ml，用 60％乙醇稀释至刻度，摇匀，放
置 15 min后，进行紫外光谱扫描（400～800 nm），结
果显示芦丁对照品溶液在 505 nm 处有最大吸收，
故选定 505 nm为最大吸收波长。
2．1．2 标准曲线的制作
精密吸取芦丁标准溶液 0．0、0．5、1．0、2．0、3．0、
4．0、5．0 ml分别置干燥玻璃仪器中，各加 60%乙醇
至 5．0 ml，5％亚硝酸钠溶液 0．3 ml，摇匀，6 min后
加 10％的硝酸铝溶液 0．3 ml，摇匀，6 min后加 4％
·论 著·
日本毛连菜总黄酮的提取工艺研究
张美玉 高建平 席啸虎
【摘 要】 目的 对日本毛连菜总黄酮提取工艺进行研究。方法 通过单因素实验和正交实验对其提取
工艺进行研究。结果 日本毛连菜总黄酮的最佳提取工艺为：提取温度 70 ℃，用 20倍量，体积分数为 40％乙醇
温浸提取 2次，提取时间为 2．5 h。结论 该工艺简便、稳定、准确，可用于日本毛连菜总黄酮的提取。
【关键词】 黄酮类；提取法；日本毛连菜
The extraction technique of total flavonoid from Picris Japonica ZHANG Mei-yu, GAO Jian-ping, XI Xiao-hu.
Department of Science of Chinese Pharmacology, Pharmacy College of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001,
China
【Abstract】 Objective To investigate the extraction technique of total flavonoid from Picris Japonica. Methods
Single-factor and orthogonal experiments were used to investigate the extraction technique. Results The best extrac-
tion technique was involved with the temperature of 70 ℃, two extractions from 20-fold 40%(v/v) alcohol and extrac-
tion time of 2.5 h. Conclusion This technique was simple, stable and accurate and might be used in extraction of to-
tal flavonoid in Picris Japonica.
【Key words】 Flavones； Extraction； Picris japonica
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中国药物与临床 2012年 7月第 12卷第 7期 Chinese Remedies & Clinics，July 2012,Vol.12,No.7
的氢氧化钠溶液 4 ml，摇匀，加蒸馏水定容至 10
ml，摇匀，放置 15 min，空白溶液作参比，于波长 505
nm处测定其吸光度（A）。以浓度 C（μg/ml）为横坐
标，A值为纵坐标，求得芦丁标准曲线回归方程：Y＝
0．0146X－0．0039（r＝0．9993），结果显示芦丁在 9．3～93
μg/ml线性关系良好。
2．2 日本毛连菜总黄酮提取工艺考察
2．2．1 浸提溶剂的选择
由于乙醇的选择性好，渗透性强，浸出率较高，
对环境污染小，故本实验选择一定浓度乙醇作为提
取溶剂。目前，浸提黄酮类化合物的方法很多，但主
要有水提法、碱性水或碱性醇提取法、有机溶剂提取
法。常用溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。由于
毒性原因，通常采用乙醇作为浸提剂。
2．2．2 日本毛连菜总黄酮提取的单因素实验
2.2.2.1 乙醇浓度对提取工艺的影响：分别准确称
取 10 g日本毛连菜药材 8份，在 70 ℃、液料比 15∶1
（ml/g）条件下，用不同浓度乙醇溶液（0、30%、40%、
50%、60%、70%、90%、95%）提取 90 min，利用紫外
分光光度法于波长 505 nm处测定 A值，依照标准
曲线方程计算总黄酮的含量，分别为：200、303、305、
270、262、254、141、135 mg。
2.2.2.2 提取温度对提取工艺的影响：分别准确称
取 10 g日本毛连菜药材 7份，在 40%乙醇、液料比
15∶1（ml/g）的条件下，选用不同的提取温度（40、50、
60、70、80、90 ℃水浴）提取以及 90 ℃回流提取 90
min，利用紫外分光光度法于波长 505 nm处测定 A
值，依照标准曲线方程计算总黄酮的含量，分别为
140、221、243、271、268、251、248 mg。
2.2.2.3 料液比对提取工艺的影响：分别准确称取
10 g日本毛连菜药材 5份，在 40%乙醇、70 ℃条件
下，选用不同的料液比（15∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1）
提取 90 min，利用紫外分光光度法于波长 505 nm
处测定 A值，依照标准曲线方程计算总黄酮的含
量，分别为 210、241、253、275、256 mg。
2.2.2.4 提取时间和提取次数对提取工艺的影响：
分别准确称取 10 g日本毛连菜药材 11份，在 40%
乙醇、70 ℃、300 ml乙醇条件下，选用不同的提取时
间和次数的组合［0.5、1、1.5、2、（1+1）、2.5、（2+0.5）、
（1.5+1）、（1+1+0.5）、3、（2+1）h］提取，利用紫外分光
光度法于波长 505 nm处测定 A值，依照标准曲线
方程计算总黄酮的含量，分别为 280、305、352、355、
376、360、385、380、320、378、375 mg。
2．2．3 日本毛连菜总黄酮提取正交试验设计
本研究采用正交试验设计，在单因素考察的基
础上，选择提取时间（A）、乙醇浓度（B）、料液比（C）、
提取温度（D）4个因素，每个因素选择 3个水平，建
立 L9（34）正交表，见表 1。正交试验设计结果见表 2。
通过对实验结果进行方差分析，结果表明，各因
素对总黄酮提取过程影响程度依次为 B因素＞A因
素＞D因素＞C因素，乙醇浓度、提取时间及次数、提
取温度对提取率的影响有统计学意义 （P＜0.05），而
料液比对提取率的影响无统计学意义。因此选择最
佳提取工艺条件是 A3B2C1D2，即：提取 2次，提取时
间分别为 1．5 h和 1 h，乙醇浓度为 40%，料液比为
20∶1，提取温度为 70 ℃。
3 讨 论
本试验对日本毛连菜总黄酮提取工艺进行了系
统的研究，分析结果显示，提取温度和乙醇浓度对日
本毛连菜总黄酮的提取效率影响较大，是工业生产
中严格控制的重点，浓度 40%左右的乙醇提取得到
最多的黄酮，乙醇浓度过大或者过小都会影响黄酮
得率；温度 70 ℃左右时，黄酮得率基本达到最高，温
度低于 70 ℃，黄酮得率明显降低，高于 70 ℃，黄酮
得率变化不大，但是浸膏明显增多，提取物中杂质也
相应增多，为进一步的研究带来困扰，因此选择
40%乙醇浓度，70 ℃的提取温度，温浸的方法，提取
2次作为日本毛连菜总黄酮的最佳提取工艺。该工
艺简单可行，有较高的总黄酮提取率。本研究为日
本毛连菜中黄酮类化合物的深入研究和开发利用奠
表 1 日本毛连菜总黄酮提取正交试验设计
因素 A（h） 因素 B（%） 因素 C 因素 D（℃）
1 1．5 0 20∶1 50
2 2 40 30∶1 70
3 1．5＋1 60 40∶1 回流
水平
表 2 日本毛连菜总黄酮提取正交试验设计结果
序号 正交试验条件 提取率（g/100 g）
1 A1B1C1D1 1．57
2 A1B2C2D2 3．02
3 A1B3C3D3 2．26
4 A2B1C2D3 2．03
5 A2B2C3D1 2．83
6 A2B3C1D2 2．58
7 A3B1C3D2 2．61
8 A3B2C1D3 3．39
9
注：A，B，C，D表示总黄酮提取的 4个因素；1，2，3表示 3个水平
A3B3C2D1 2．35
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中国药物与临床 2012年 7月第 12卷第 7期 Chinese Remedies & Clinics，July 2012,Vol.12,No.7
定了基础。
参 考 文 献
［1］ 钱崇澍，陈焕镛．中国植物志． 北京：科学出版社，2004：53．
［2］ 国家中医药管理局，中华本草编委会． 中华本草． 上海：上海科
学技术出版社，1999：674．
［3］ 刘合民，赵敏，邢红霞．药用野菜植物资源研究．安徽农业科学，
2006，34（12）：2701-2702．
［4］ 中科院植物研究所．西藏常用中草药． 拉萨：西藏人民出版社，
1971：351．
［5］ 刘斌，石任兵，周素蓉．苦参汤有效部位总黄酮含量测定方法研
究．中国实验方剂学杂志，2004，10（6）：24-26．
［6］ 江苏新医学院．中药大辞典（上册）.上海：上海科学技术出版
社，1997：1403-1405．
［7］ 赵伯涛，钱骅，薛辉，等．芦蒿花总黄酮提取工艺的研究．中国野
生植物资源，2001，20（6）：55-56．
［8］ 陈郑镔，陈炳华，刘剑秋，等．小蓬草总黄酮提取条件及含量测
定．福建师范大学学报（自然科学版），2004，20（1）：78-81．
［9］ 张红城，董捷，李慧．六种蜂花粉多酚和黄酮类物质含量测定及
抗氧化性的研究．食品科学，2007，28（9）：500-504．
［10］ Li YL. Antiviral activities of flavonoids and organic acid from
Trollius chinenss Bunge． J Ethnopharmacol，2002，79：356．
（收稿日期：2012-02-27）
·病例报告·
瑞格列奈致视觉异常二例
金 飞
例 1：男，64岁，患 2型糖尿病 2年余，否认冠心病、高血
压病及肝肾疾病史。曾服用二甲双胍、格列齐特，但血糖控制
不满意。2010年 11月 10日来本院门诊，测空腹血糖 11.32
mmol/L，治疗予瑞格列奈（商品名孚来迪，江苏豪森药业股份
有限公司生产）0.5 mg，2次/d，餐前 30 min口服，同时嘱控制
饮食。1周后，患者来院复诊，主诉每次服用瑞格列奈约 1 h
后，均出现视物模糊，持续约 30 min至 1 h后渐缓解。无头
晕、视物旋转、恶心、呕吐、冷汗、乏力。查体：神志清楚，精神
可，双瞳孔等大等圆约 4 mm，血压 125/86 mm Hg（1 mm Hg＝
0.133 kPa），心肺及神经系统未见明显异常。查随机（约餐后
1 h，服药后 1 h 30 min）血糖 10.62 mmol/L。嘱继续服药，如
不能耐受则停药。2周后，患者再次复诊，主诉视物模糊症状
已明显减轻，复查空腹血糖 6.74 mmol/L。后患者多次复诊，未
再诉上述症状。
例 2：女，54岁，既往无冠心病、高血压病及肝肾疾病史。
2011年 4月 12日因“口渴、多饮 15 d余”来本院诊治，查空
腹血糖 14.34 mmol/L，诊断为 2型糖尿病，治疗予瑞格列奈片
0.5 mg，2次/d，餐前 30 min口服，同时嘱控制饮食。3 d后，
患者复诊，主诉每次服药约 40~60 min后出现视物模糊，持
续约 1~2 h后能缓解，无其他明显不适症状。查体：未发现明
显异常。查随机（约餐后 1 h，服药后 1 h 30 min）血糖 13.05
mmol/L，嘱继续按前服药。1周后，患者复诊，主诉症状明显减
轻，查空腹血糖 9.56 mmol/L。后患者失访。
讨论 瑞格列奈经胃肠道吸收入血后，与胰岛 B细胞
膜外依赖 ATP的钾离子通道上的相对分子质量 36 000蛋白
特异性结合，使钾通道关闭，B细胞去极化，钙通道开放，钙
离子内流，促进胰岛素分泌，从而达到降低血糖的目的，主要
用于 2型糖尿病患者。该药的不良反应从产品说明书上可以
查到有“视觉异常”，但实际临床鲜有报道，其机制目前只能
认为与用药后改变血糖水平有关，具体机制还不清楚。从以
上 2例来看，瑞格列奈致视觉异常主要发生于用药初始阶
段，特别是 1~2周内，而且是可逆性的。所以，如果没有其他
明显不良反应，可以继续服用，视觉异常症状会逐渐缓解。但
鉴于例数较少，还有待于进一步观察。
（收稿日期：2012-01-12）作者单位：314311 浙江省海盐县沈荡医院全科医学科
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