全 文 ：文章编号:　1007-6611(2009)04-0329-03
日本毛连菜中多糖的含量测定
张志勇 , 　席啸虎 , 　康　曌 , 　高建平＊　(山西医科大学药学院中药学教研室 , 　太原　030001;　＊通讯作者 , Tel:
0351-4690345, E-mail:jpgao123@sina.com)
摘要:　目的　建立药用植物日本毛连菜中多糖的含量测定方法。 　方法　采用水提醇沉法从日本毛连菜中提取得到毛连
菜粗多糖 , 脱色 ,用苯酚 -硫酸法测定日本毛连菜中多糖含量。 　结果　在 3.03-15.10 μg/ml范围内具有良好的线性关系 ,
本法平均回收率为(97.55±2.26)%, RSD为 2.3%。 测定日本毛连菜提取物中总多糖含量以葡萄糖计平均为(5.80 ±
0.06)%。 　结论　该方法简便 、准确 、可靠 , 可以用于日本毛连菜中多糖的含量测定。
关键词:　日本毛连菜;　多糖;　含量测定
中图分类号:　R927.2　　　文献标识码:　A
DeterminationofpolysaccharideinPicrisjaponciaThunb
ZHANGZhi-yong, XIXiao-hu, KANGZhao, GAOJian-ping＊(DeptofTraditionalChineseMedicine, ColegeofPharmacy, Shanxi
MedicalUniversity, Taiyuan030001 , China;＊Correspondingauthor, Tel:0351 -4690345 , E-mail:jpgao123@sina.com)
Abstract:　Objective　ToestablishamethodfordeterminingthecontentofpolysaccharideinPicrisjaponciaThunb.　Methods　Poly-
saccharidewasextractedwithwater, purifiedwithalcoholprecipitationanddecoloredwithH2O2.Thenthecontentofpolysaccharidewas
determinedbyphenols-sulfuricacidmethod.　Results　Thelinearrangeforpolysaccharidewas3.03-15.10μg/ml.Theaveragere-
coverywas(97.55±2.26)%.RSDwas2.3%(n=6).ThecontentofpolysaccharideinPicrisjaponciaThunbwas(5.80 ±0.06)%
(glucose).　Conclusion　Theproposedmethodisconvenient, economic, accurateandreproducible, andcanbeusedtodeterminethe
polysaccharideinPicrisjaponciaThunb.
Keywords:　PicrisjaponciaThunb;　polysaccharide;　determination
　　日本毛连菜(PicrisjaponciaThunb)为菊科毛连
菜属植物 ,生于山坡草地 、灌丛中或田边 、河边 ,分布
于黑龙江 、内蒙古及山西等地 ,其中山西主要分布在
太原及周边县市 、交城 、五台等地区 。全草入蒙药 ,
具有清热 、消肿及止痛作用[ 1] 。国内学者对兴安毛
连菜(PicrisdavuricaFisch)染色体核型做了分析 ,研
究了兴安毛连菜系统演化位置和相近种亲缘关
系 [ 2] 。国外研究表明毛连菜(PicrishieracioidesSub-
sp)花中主要含内酯 ,全草含毛连菜苷(picriside)[ 3] 。
作者初步研究表明 ,日本毛连菜中含有丰富的多糖 ,
本文从日本毛连菜全草中提取多糖 ,并建立多糖的
含量测定方法 ,为进一步开发利用日本毛连菜奠定
基础。
1　仪器与试剂
旋转蒸发器 RE-52AA(上海亚荣生化仪器厂);
紫外可见分光光度仪(1901型);电子天平 BS-124S
(北京赛多利斯仪器系统有限公司);KDM型控温电
热套(山东邺城花鲁仪器公司);乙醇 、苯酚 、浓硫
酸 、石油醚等均为分析纯 。日本毛连菜采于山西省
娄烦县 ,经山西医科大学药学院高建平教授鉴定为
菊科毛连菜属植物日本毛连菜 。
2　方法与结果
2.1　标准葡萄糖溶液的制备　精密称取 105 ℃干
燥至恒重的葡萄糖对照品 10 mg,加适量蒸馏水溶
解 ,转移至 100ml容量瓶中 ,加蒸馏水至刻度 ,配成
标准葡萄糖溶液备用。
2.2　样品溶液的制备　精密称取日本毛连菜 5 g,
用 20倍量 80%乙醇回流 2 h,过滤 ,滤渣中加入 20
倍量的水 ,沸水浴回流 2 h,过滤 ,浓缩得多糖溶液 。
用氨水调 pH=8.8,再加入适量双氧水脱色 ,于 40
℃水浴中保温 4h,抽滤 ,浓缩滤液 ,将浓缩液转移至
100 ml容量瓶中 ,以蒸馏水定容 ,得样品溶液。
2.3　检测波长的确定　取葡萄糖对照品溶液 、日本
毛连菜样品溶液 ,分别依次加入 5%苯酚溶液 、浓硫
酸 ,置沸水浴中加热 15min,静置 10 min后摇匀 ,放
置至室温 ,以蒸馏水同法操作得空白对照 ,分别在波
长 190-900 nm范围进行扫描 ,结果见图 1,确定最
大吸收波长为 486nm。
　　　基金项目:　山西医科大学学生创新基金资助项目(2006045)
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1.葡萄糖标准品溶液;2.日本毛连菜多糖溶液
图 1　紫外可见光谱曲线
Fig1　UVspectrumofsolution
2.4　标准曲线的绘制　精密量取标准葡萄糖溶液
0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 ml,分别置于 10 ml容量瓶
中 ,加水至 1 ml,精密加入 5%苯酚溶液 1 ml,再快
速加入浓硫酸 5 ml,摇匀 ,置沸水浴中加热 15 min
后 ,静置 10min,放置至室温 ,于 486nm处测定吸光
度(A)。以浓度(X)为横坐标 ,吸光度值(Y)为纵坐
标 ,进行线性回归 ,得回归方程为:Y=52.95X-
0.023 2, r=0.999 8。表明在 3.03-15.10 μg/ml范
围内 ,线性关系良好。
2.5　日本毛连菜粗多糖的制备　称取 100 g日本
毛连菜生药材 ,用 20倍量 80%乙醇回流 2 h,滤渣
用 10倍量的蒸馏水回流 3次 ,每次 1 h,合并滤液
后 ,抽滤 ,滤液减压浓缩至 100 ml,加 3倍体积 95%
乙醇 ,冰箱静置过夜 ,离心 ,弃去上清 ,沉淀分别用无
水乙醇 、丙酮 、乙醚各洗涤 3次 , 40 ℃真空干燥至恒
重 ,得日本毛连菜多糖粗品。
2.6　换算因素的测定　精密称取干燥至恒重的日
本毛连菜多糖 20.8 mg,用水溶解后定容至 100 ml
容量瓶中 ,摇匀 ,作为多糖储备液。精密量取此溶液
0.2ml,加水至 2ml,按 2.4项下方法测定吸光度值 。
按 f=W/CD计算 ,其中 W为毛连菜多糖质量 , C为
多糖溶液中葡萄糖质量 3.92 mg, D为多糖稀释倍
数 10,测得 f=0.53。
2.7　稳定性实验 　精密量取样品溶液 0.1 ml,按
2.4项下方法操作 ,分别在 0 , 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 , 3 h
测定吸光度。 RSD=0.43%,表明样品溶液在 3h内
显色稳定 。
2.8　重复性实验　取同一批日本毛连菜样品 6份 ,
按 2.2项下方法配制 6份溶液 ,用苯酚 -硫酸法于
486 nm处测定吸光度 , RSD=1.06%,表明重复性
良好 。
2.9　精密度实验 　精密量取样品溶液 0.1 ml,按
2.4项下方法操作 ,重复测定 5次。 RSD=0.75%,
表明精密度良好。
2.10　回收率实验　精密称取已知葡萄糖含量的日
本毛连菜 6份 , 每份 2.5 g,精密加入标准葡萄糖
145 mg,按 2.2项下方法配制溶液 , 2.4项下方法测
定吸光度 ,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　　回收率实验结果　(n=6)
Tab1　　Theresultofrecoverytest　(n=6)
序号 原有量(mg) 加入葡萄糖的量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 145.05 145.00 291.9 101.3 97.6 2.3
2 145.08 145.00 288.8 99.2
3 145.00 145.00 284.6 96.3
4 145.03 145.00 285.2 96.7
5 145.02 145.00 284.3 96.1
6 144.98 145.00 283.8 95.7
2.11　样品含量测定　取日本毛连菜样品 3份 ,分
别配制样品溶液 ,精密量取 1 ml,按 2.4项下方法测
定吸光度值 。计算多糖含量:多糖含量(%)=CDf/
W×100。其中 , C为样品溶液中葡萄糖含量 , D为
样品溶液稀释倍数 , f为换算因子 , W为样品的质
量 。日本毛连菜中多糖含量为(5.80±0.06)%,结
果见表 2。
表 2　　毛连菜多糖的含量测定结果　(%, n=3)
Tab2　 　ContentofpolysaccharideinPicrisjaponcia
Thunb　(%, n=3)
序号 多糖含量 平均含量 RSD
1 5.74 5.8 0.93
2 5.85
3 5.82
·330· 　山西医科大学学报 (JShanxiMedUniv) 2009年 4月 , 40 (4)　
3　讨论
日本毛连菜中含有单糖 、双糖 、皂苷等成分 ,在
提取过程中先用 80%乙醇回流提取 ,不仅除去了大
量皂苷 ,还能除去一部分色素 、单糖 、寡糖等小分子
物质 ,有利于多糖的提取与纯化 。
苯酚 -硫酸法可以进行大量样品的测定 ,显色
稳定 ,灵敏度高 ,重复性好 ,回收率较高 [ 4] 。因此本
实验选用葡萄糖作为标准品 ,采用苯酚 -硫酸法在
486nm波长处测定日本毛连菜中多糖的含量。利
用换算因子计算日本毛连菜多糖含量 ,可以消除用
葡萄糖标准曲线计算多糖含量而带来的误差。
综上所述 ,通过对精密度 、重复性 、稳定性及加
样回收率方法学进行考察 ,结果表明本法各项指标
良好 、方法可行 ,可用于日本毛连菜中多糖的含量测
定。
参考文献:
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作者简介:　张志勇 , 男 , 1983-08生 ,在读硕士.
[收稿日期:　2008-12-05]
(上接第 317页)
　　随着对 AP发病机制认识的不断加深 ,将参与
AP发病过程的炎性介质作为 SAP预测指标已备受
人们的重视[ 7] 。本研实验显示 SAP早期肠及肝脏
组织即有 MCP-1表达 ,且早期随时间变化有增加趋
势 。趋化因子是抗炎治疗的理想靶点[ 1] , 若肠 、肝
组织 MCP-1的高表达是 SAP肠 、肝损伤发生的重要
因素 ,那么对肠 、肝损伤可试用 MCP-1拮抗剂治疗 ,
阻断趋化因子的作用 。本研究为应用 MCP-1拮抗
剂阻断趋化因子作用 ,进而降低局部及全身反应提
供实验依据 。
参考文献:
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作者简介:　马宏宾 , 男 , 1983-11生 ,在读硕士.
[收稿日期:　2008-11-25]
·331·　山西医科大学学报 (JShanxiMedUniv)2009年 4月 , 40 (4)