全 文 ：中西医结合学报 2 0 0 8年 1 2月第 6卷第 1 2期 Jou a r n lo fC he e s :nI n te ga r ti v。 M e i de e : n, D e e e m b e : 2 0 0 8 、 V o l . 6 . N o . 12
珠子参对5180荷瘤小鼠化疗的减毒作用
陈涛 ’ , 龚张斌 2 , 付亚玲 ’
1
. 三峡大学医学院中医系 , 湖北 宜昌 4 4 3 0 0 2
2
. 上海中医药大学基础 医学院生物化学教研室 , 上海 2 0 12 0 3
目的 : 观察珠子参对 5 18 0 荷瘤小鼠氟尿啥咤 ( 5一 f l u o or u r a ic l , 5 一F U )化疗 的减毒作用 。
方法 : 30 只 昆明种小 鼠右 腋皮下注 射肉瘤 51 8 0 腹水 瘤细 胞建立荷瘤模 型 , 随机分设 模型组 、 5一 F U 组 和
5
一
F U + 珠子参组 。 观察荷瘤小鼠治疗前后的一 般情况 ; 计数外周血 中白细胞 ( w ih t e b l o o d C el ! , W B 〔为 、 计
算网织 红细 胞比值 ; 记 录小鼠生存时间 。
结果 : 5一 F U + 珠子参组 5 18 0 荷瘤小鼠外周血 W B C 及 网织 红细胞下降程度低于 5一 F U 组 ( 尸 < 0 . 01 ) 。 5一 F U
+ 珠子参组 5 1 8 0 荷瘤小鼠平均存活时间为 3 2 . s d , 5一 F U 组平均存活时间为 2 3 . s d , 两组比较差异有统计学
意义 ( P < 0 . 0 1 ) 。
结论 : 珠子参可减轻 5一 F U 化疗后的骨髓抑制 , 并可延长荷瘤化疗小鼠生存时间 。
关键词 : 珠子参 ; 化学疗法 ; 肉瘤 18 0 ; 小鼠
中图分类号 : R 7 3 o . 5 2 ; 文献标志码 : A ; 文章编号 : 1 6 7 2一 1 9 7 7 ( 2 0 0 8 ) 12 一 12 5 5一 0 4
下书仁洽护 州的和目照口曰 . . 曰即林汾几例灿
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t卜o s e 旧 5一 FU g ro u P ( P < 0 . 0 1 ) . T卜e a v e r a g e l if e s P a n o f s 一 FU P lu s R P M g r o u P w a s 3 2 . 5 d a y s a n d t ha t o f t he
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.15 2 6
.中西医结合学报 2) ( (〕 8年 1 2月第 6卷第 1 2期 Jou r na lo fC hi ne s e l n te g a r t . v。 M e die i ne .e De e n、 be : 2 0 05, v o l . 6 . N o . 12
珠子参 ( hR i z o m a P a , , a 。 i: m a j o r i s , R P M ) 又
名扣子七 ,是五加科人参属植物珠子参的根茎 ,具有
活血散痕 、补血止血和消肿止痛之功 , 主要分布于东
喜马拉雅至中国西部山区 。 研究表明 ,珠子参水煎
液可明显对抗环磷酞胺和 6 0 C o 辐射所 引起 的骨髓
造血功 能损伤 , 使降低的红细胞 ( r e d b l o o d e e l l ,
R B C )
、 血红蛋白 ( h e m o g l o b i n , H b )和白细胞 ( w h i t e
b l o o d 。 e l l , W BC ) 明显升高 , 并可明显增加骨髓 有
核细胞及网织红细胞数〔`〕 ,但对恶性肿瘤使用化疗
药物后引起的骨髓抑制和造血功能损伤有无减毒作
用 , 尚无人报道 。 前期研究发现 ,珠子参水煎液有显
著抑瘤作用 ( 另文报道 ) , 本课题以 5 1 80 荷瘤小鼠为
实验对象 , 观 察珠 子 参对 化疗药物 5一氟尿 嗜 吮
( 5
一
f l u o r o u r a e i l
,
5
一
F U )毒副反应的作用 。
1 材料与方法
1
.
1 实验材料
1
.
1
.
1 实验动物与细胞株 4 ~ 6 周龄昆明近交系
小鼠 30 只 , 雌雄各半 , 体质量 16 ~ 18 9 ,动物合格证
为医动字第 1 9一 0 52 号 , 由同济医科大学动物实验中
心提供 。 小鼠肉瘤腹水细胞株 5 180 , 由华中科技大
学同济医学院免疫学教研室沈关心教授惠赠 , 接种
于小鼠腹腔内 。
1
.
1
.
2 主要药品与试 剂 珠子参购 自湖北宜 昌久
康药房 ,经宜昌市药品检验所鉴定 ,产于湖北省神农
架林区 。 5一 F U 针剂 , 2 50 m g /支 , 由天津氨基 酸公
司人民制药厂生产 ,灭菌生理盐水稀释至一定浓度 ,
避光常温保存 。
1
.
1
.
3 主要仪器 光学显 微镜 , O ly m p u S 公 司生
产 ;超净工作台 (S W 一 CQ 一 IF 型 ) , 苏州净化设备厂生
产 ;调温加热套 ( K DM 型 ) , 山东郸城仪器厂生产 ;
电子天平 ( M P 20 A 型 ) , 上海 良平仪器厂生产 。
1
.
2 实验方 法
1
.
2
.
1 药品配制 珠子参由三峡大学 医学院中医
系实验室打为细粉 , 蒸 馏水浸 泡 6 h , 置 圆底烧瓶
内 ,用 K D M 型调温加热套加热 ,挥发油提取器提取
挥发油和芳香成分后 ,转为 50 C浸煎 30 m in 提取水
溶性成分 , 纱布过滤取汁后 , 药渣加水再煮沸 , 转为
50 ℃浸煎 30 m in ,共煎 3 次 。 药液混合 , 加热浓缩定
容 , 与挥发 油 等混 匀 制 成 口 服 液 , 终 浓 度 为 生药
0
.
3 3 9 /m l
,经 0 . 2 2 拜m 微孔滤膜过滤除菌 , 4 C保存 。
1
.
2
.
2 动物模型 的制作 参照文献工 方法 , 5 18 0
腹水瘤株 小 鼠体 内传代 , 抽 吸 腹 水 , 呈 乳 白色 ,
仆 H a n k s液洗涤离心 3 次后 , 调整细胞浓度至 1 . O X
1护个 /m l , 台盼蓝拒染法检测细胞存活率 ) 9 5%可
用于实验 , 将 0 . 2 m l 细胞悬液注射至小 鼠右腋皮
下 。 全程严格无菌操作 , 40 m in 内完成 。
1
.
2
.
3 分组与给药 小鼠每笼 5 只 , 自由摄食与饮
水 。 造模后采用随机数字表法随机分为模型组 、 模
型十 5一 F U 组 (简称 5一 F U 组 ) 、 模型十 5一 F U + 珠子参
组 (简称 5一 F U + 珠子参组 ) , 每组 10 只 。 造模后第
2 天起 , 5一 F U 十珠子参组小鼠予珠子参煎液 0 . 3 m !
灌胃 , 1 次 / d , 至实验结束为止 ; 模型组和 5一 F U 组小
鼠给予 0 . 3 m ! 生理盐水灌胃 。 5一 F U 组和 5一 F U +
珠子参组小 鼠 自造模第 2 天起按 25 m g / k g 体质量
腹腔注射 5一 F U 0 . 4 m l , 1 次 / d , 连续 s d ;模型组小
鼠腹腔注射 0 . 4 m l 生理盐水 。 隔 4 周后再次同上
予腹腔注射 s d 。
1
.
2
.
4 外周血指标 各组小鼠于造模前 l d 、 5一 F U
第 l 次给药后 3 d 和 s d 分别割尾取血 。 2%冰醋酸
裂解红细胞 , 常规光学显微镜下计数 W B C ; 经煌焦
油蓝染色后涂片 , 常规光学显微镜下计数红细胞和
网织红细胞 ( r e t i e u l o e y t e , R e t ) , 并计算 R e t 比值 。
计算公 式 : R et 比值 一 R et 计数 /红 细 胞计数 X
1 0 0%
。
1
.
2
.
5 一般情况观察 实验过程 中严密观察小 鼠
精神状态 、 活动 、 饮食 、 毛发 、 粪和小便等一般状况 。
1
.
2
.
6 生存时间 观察小鼠的生存情况 ,记录其生
存时间 。
1
.
3 统计学方 法 应用 S P S S 10 . 0 软件进行统计
分析 , 采用单因素方差分析和 S N K 法进 行组 间 比
较 。
2 结 果
2
.
1 荷瘤小 鼠治 疗前后 W B C 计数 治疗 3 d 和
s d后 ,模型组小 鼠外周血中 W B C 计数稍高于造模
前 ,但差异无统计学意义 ( 尸 > 0 . 05 ) ; 5一 F U 组小鼠
于治疗 3 和 s d 时 W B C 计数明显下降 , 显著低于治
疗前 ( 尸 < 0 . 01 ) ,且 s d时下降更明显 。 5一 F U + 珠
子参组小鼠 W B C 计数也低于治疗前 ( 尸 < 0 . 01 ) 。
药物治疗 3 d 和 s d 时组间比较 , 5一 F U + 珠子参组
小 鼠 W B C 计数 均低 于模型组 ( 尸 < 0 . 01 ) , 高 于
5
一
F U 组 ( P < 0 . 0 5 . P < 0 . 0 1 ) 。 见表 l 。
2
.
2 荷瘤小鼠治疗前后 R et 比值 模型组小鼠灌
胃 3 d 时 R et 比值下降明显 , 与治疗前比较 , 差异有
统计学意义 ( 尸 < 0 . 05 ) , s d 时有所 回升 , 与治疗前
比较差异无统计学意义 。 5一 F U 组小鼠 3 d 和 s d 时
R et 比值均明显低于治疗前 ( 尸 < 0 . 0 1 ) , s d 时下降
更明显 。 5一 FU 十珠子参组小 鼠治疗后 R et 比值低于
治疗前 ( P < 0 . 0 1 ) 。 治疗后 3 d 和 s d 组 间相 比 ,
5
一
F U十珠子参组小鼠 R et 均低于模型组 ( 尸 < 0 . 05 ,
P < ()
.
0 1 )
,高于 5一 F U 组 ( P < 0 . 0 1 ) 。 见表 2 。
中西医结合学报 20 0 8年 2 1月第 6 卷第 12期 J o ur n al of Ch in e, e I n r e g r a t : v e M e d i e i n e . D e e e m b e : 2 0 0 5 . v o l . 6 . N o . 12 125 7 ·
T a b le
表 1 各组荷瘤小 鼠治疗前后白细胞数
W B C
c o u n ts in 5 1 8 0
一
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r in g m ie e be fo er a n d a ft e
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( 于士 、 , 又 1 0 `, / I沙 )
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7 8士 1 . 3 4
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.
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9 4士 0 . 8 9
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一
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10
.
4 1士 0 . 9 9▲ `
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.
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表 2
T a b le 2 R a t i o o f
各组荷瘤小鼠治疗前后 网织红细胞比值
R e t i n 5 1 8 0
一
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e e b e fo er a n d a ft e r e h em o th e r a P y
( 丁土 : , % )
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U n t r e a t e d
5
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5
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7 2士 1 . 8 4
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6 7士 2 . 0 0
A f t e r 3
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d n y t r e a tm e n t
4
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9 8士 1 . 5 6 卜 ▲▲
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3 7士 1 . 1 7 “ 一 ▲`
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4 5士 1 . 1 4 ’ ` ~ ▲▲
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, “ P < (〕. 0 1 . 钵 be fo r e t r e a t m e n r in t h e s a m e g r o u p ; 乙 P < 0 . 0 5 , △乙 P < 0 . 0 1 , 钵 u n t r e a t e d g r o u p ; ` ▲ P < 0 . 0 1 . 协 5一 FU g r ( ) u p .
2
.
3 荷瘤小 鼠一般状况观察 5一F U 组小鼠在腹腔
注射给药后 6 d 起 , 出现明显的脱毛 、 跄缩 、 抱团 、 拉
稀 , 活动情况及饮食量均较模 型组明显降低 , 消瘦 ,
在 8 、 9 和 n d 各 死亡 1 只 。 其余小 鼠度过急性期
后 ,运动 ,体形等有所改观 ,但总体上不及模型组及
珠子参联合用药组 。 第 2 次注射 5一 F U 后 , 5一 F U 十
珠子参组小 鼠也 出现脱毛 , 但体形及运动状况亦优
于 5一 F U 组 , 且第 2 疗程中未见小鼠死亡 。
2
.
4 生存时间 模型组 、 5一 F U 组和 5一 F U + 珠子参
组 的平均生 存天数分别为 24 . 0 、 23 . 5 和 32 . s d 。
5
一
F U + 珠子参组的平均生存天数与模型组和 5一 F U
组 比较明显延 长 ( 尸 < 0 . 0 1 ) ; 5一 F U 组平均生存天
数低于模型组 ,但差异无统计学意义 。
3 讨 论
化疗的减毒研 究 日趋受到重视 , 所谓减毒是指
减轻癌症病人在化疗 中的毒副作用 , 即对化疗 中造
血 、 消化 、 免疫等系统毒副反应 的减低或控制 , 以及
对化疗后期反应或少见副作用的防治 。 5一 F U 是第
一个根据一定设想而合成 的抗代谢药 , 是 目前临床
上应用最广泛的抗 啼咤类药物之一川 , 在肿瘤内科
治疗中占有重要地位 。 其主要的毒副反应是胃肠道
刺激症状和骨髓抑制互 ,从而明显影响外周血象 ,导
致许多患者因为不能耐受而被迫中断治疗 。 临床上
静脉滴注 5一 F U 后 骨髓抑 制 的低谷 期 出现在 7一
14 d川 , 患者容易并发严重感染 ,甚至危及生命 。 本
实验结果表明 , 5一 F U 化疗可致小 鼠外周血细胞明显
至一个低谷 。 结合小 鼠表现来看 , 5一 F U 组小 鼠分别
在 8 、 9 、 n d 出现死亡 , 其后逐渐稳定 。 虽 由于考虑
到反复割尾对小鼠刺激过大 , 失血过多 , 容易引起小
鼠死亡 ,对以后的实验造成影响 ,此期间未进行血指
标检测 ,但基本可以认 为 5一 F U 对小 鼠的毒副作用
以 1~ 2 周 内最 为明显 , 与人体较相似 。 5一 F U 组 与
加用珠子参组 小鼠 W B C 比较差异有统计学意 义 ,
加用珠子参组小 鼠 3 d 和 s d 时 W B C 值低于模型
组 ,但明显高于 5一 F U 组 ( 尸 < 0 . 01 ) 。 在研究红细
胞系变化时 ,血液网织红细胞计数是一个很敏感的
指标 6j[ , 其绝对值计数或与红细胞 比值下降均可提
示红系造血障碍 。 实验中发现注射 5一 F U s d 后 , 昆
明小 鼠 R et 比值明显下降 , 与用药前 及模 型组 比较
差异有统计学意义 , 而 5一F U 十珠子参组治疗 3 d 和
s d 时 , R et 比值均高 于 5一 F U 组 , 低于模 型组 。 提
示珠子参能在一定程度上拮抗 5一 F U 的骨髓 抑制 ,
起到机体保护作用 。
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下降 ’ ” 中以 WBC 下 ” 最 “ 明 ” ’ “ 给药 s d 后 ’ 、
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