全 文 ：药学学报 A e t a P h ar mae e u t i e a Si nie a 1 9 87 ; 2 2 ( 2 ) : 9 8、 1 02
抗癌药 1 , 2 ; =5, 6一二去水卫矛醉与长春新碱联合
用药的实验研究
樊亦军 韩 锐 ’ 周 军 . 李 茂
(广西中医药研究所 , 南宁 , * 中国医学科学院药物研究所 , 北京 )
提耍 去水卫矛醇 ( D A G ) 与长春新碱 ( V C R ) 联合使用 , 对小鼠淋巴细胞白血病 L 川 。 有协
同疗效 , 疗效强度决定于给药方案和剂量 。 先给 D A G , 24 h 后给 V C R , 协同疗效最高 。 D A G剂
盆是影响疗效的主要因素 , 最佳剂量为 3 . 0 m g k/ g 。 凉脂扩散合试验亦证明二药有方案依赖性协
同作用 。 二药合用对小鼠骨髓千细胞仅有微弱的协同杀灭作用 。
关越词 1 , 2 : 5 , 6一二去水卫矛醇 ; 长春新碱 ; 琼脂扩散合试验 , 骨健千细胞 , 小 鼠 白血病
肠。 。
我们曾报道 D A G 与美登新以一定方式联合使用 , 对小鼠淋巴细胞白血病 1L 2 ;。及 E A C
有协同疗效 , 而对骨髓干细胞的杀灭却未超过 “ 相加作用 ” `” 。 由于美登新来源不易 , 且临床
疗效不肯定 , 为此 , . 我们选用与之药理作用类似的 V C R , 进行了联合用药研究 。
材 料 和 方 法
D A G 同以往试验 ` 2 ’ , v C R 为上海第十二药厂生产 , 均临用时以生理盐水溶解配成所需
浓度 。 实验用 D B A / 2 , C F W , B D F , ( D B A / 2 、 C 5 7 B L )及昆明种小鼠 , 雌雄皆用 , 但每次
试验用同一性别 。 L , 2 ,。 小鼠每 7天用 D B A / 2 小鼠腹腔接种传代 ; 实验用 B D F ; 小鼠 , 每鼠
i P 白血病细胞 1 0 6个 。 照射源为钻 6 o y 射线 ,输出量分别为 1 9 r a d /m i n ( A D C 试验 )及 7 5 r a d /
m i n ( C F U
一
S 试验 ) , 小鼠照射总量均为 75 0 r a d , 照射距离为 6 0 e m 。
对小鼠白血病 1L 2 1。 的实验治疗 用接种 L 1 2 ; 。 细胞后 24 h 的小鼠 6组 ,分别按表 1 所列
方式 i p , D A G 剂量 为 3 . 0 m g / k g , v C R 为 1 . 3 m g / k g , 观察 6 0 天内小鼠存活情况 , 并计
算生命延长率 。 估计 “ 相加作用 ” 及观察协同疗效的方法同前文` ” 。
不同剂 t D A G 及 v C R 联合用药的疗效 用 B D F I 小鼠 25 组 , 每组不少于 5 鼠 , 其中
1组 ip 生理盐水 , 其余 2 4 组分别 i p D A G I . 5 , 3 . 0 , 5 . 0 , 8 . o m g / k g 或 V C R o . s , 2 . 3 ,
2
.
0 , 3
.
0 m g / k g
,或按图 1 所示方案联合给药 。 凡单用药组均于接种 1L 2 ,。 细胞后 24 h 给药 ;
联合给药组则于接种 1L 2 ,。 细胞后 24 h 给 D A G , 再隔 24 h 给 V C R 。 观察指标同 “ 1 ” , 同时
计算协同指数 (妙 en r gy in d e x) `“ ’ , 大于 1 者认为有协同作用 ; 该指数越大 , 则协同作用越
强 .
协同指数 一联合用药组生命延长率“ 相加作用 ” 生命延长率
对 1L 2 : 。千细胞的杀灭作用 参照 G or d o n 等的琼脂扩散合 ( A D C )方法 ` 4 ’ , 用有机玻璃
单面扩散合 , 微孔滤膜 (上海医药工业研究院产品 )孔径 。 . 4 拼m . 取接种于小鼠腹腔内 4 天
本文子 1 98 6 年 4 月 2 2 日收到。
药学学报 Ae ra P ha nr飞a e e ut i e a Si n i ca 1 9 8 7 ;2 2 (2 ): 9 5~ 1 0会
的 L1 2 ,。细胞 , 以 F i s e h o r , s 培养基 (含 2 0% 马血清 )稀释 , 加人 C A D 中 , 琼脂 ( D i f e o ) 最终
浓度为 0 . 3% 。 乙醚麻醉下将扩散合植入经照射的昆明种小鼠腹腔 , 一般每鼠 2 合 , 第 7 天
取合计数集落 , 凡超过 50 个细胞的细胞团 , 被认为是集落 。 药物试验时 , 首先将扩散合植
入未经照射的小鼠 (第一受体 ) , 4 h后 , 按规定腹腔给药 , 经一定时间 , 从第一受体取合 ,植人
经照射的小鼠 (第二受体 ) , 第 7 天再取合计数集落 , 并按常规方法计算集落形成率 ( lP at in g -
e f f i e i e n e y ) 及细胞存活比 ( s u r v i v a l f r a e t i o n ) , “ 相加作用 ” 计算同前文 “ ’ 。 受体均每组 7 鼠
( 1 4 个合 ) 。
对骨盆千细胞的作用 用脾集落形成法进行试验 ` 2 , , C F w 小鼠 6 组 , D A G 剂量为 3 . 0
m g k/ g
,
V C R 为 1 . 3 m g / k g , 按表 2所列方式腹腔给药 。 计算脾集落 ( c F u 一 s) 及协同
疗效方法同前文 “ ’ 。
结 果
一 对小民 1L 21。 的实验治疗
D A G 与 V C R 联合使用时 , 具有一定的协同疗效 。 二药单用时生命延长率的“ 相加炸用 ”
为 8 5 . 4% , 无一鼠存活 。 先给 D A G , 后绝 v C R , 生命延长率高达 2 69 . 4% , 近 半 数 动 物
( 6 / 1 3 )存活 ; 二药同时使用则协同疗效较差 , 先给 v C R 后给 D A G 的协同疗效更差 ,生命延
长率为 8 . 4% , 仅稍高于二药的 “ 相加 ” 疗效 。 重复二次实验 , 结果相近 , 其中一次实验结果
列于表 l 。
T a b l
。
C o m b i n e d
·
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.
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.
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.
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.
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.
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2 69
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.
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2 / 1 3
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0 / 1 3
人 d d i t i v e
. R o P r e s e n t s s y n e r g i s 畜i e 亡f f e e 重
为了探讨联合用药剂量与协同作用的关系 , 用不伺剂量 D A G 与 V C R , 单用或合用 。 结
果如图 1 , 除 D A G 8 . 0 m g / k g 十 V C R 3 . 0 m g / k g 外 , 各联合用药组均有不同程度协同作用 ,
而以 D A G 3 . 0 m g / k g + V C R 1 . 5 m g / k g 组协同疗效最高 , 协同指数达 3 . 5 3 。
二 . 对 1L 2 1。 千细胞的杀伤作用
(一 ) 扩散合细胞数与集落数的关系 用三种不同浓度细胞悬液 , 结果见图 2 。 每合细胞
数为 2 . o x l o 3~ 1 . 8 x l 少 时 , 细胞数与集落数成线性关系 , 集落形成率为 1 , 3% 。
(二 ) D A G 剂 t 一反应关系 第 1 受体鼠 7 组 , 分别 iP 生理盐水及不同剂量 D A G , 经
24 h
, 取合植人第二受体鼠 , 结果见图 3 。 D A G 剂量为 1 . 5~ 8 . 0 m g / k g 时 , 随着剂量增加 ,
细胞存活比呈指数降低 。
(三 ) v C R 荆 t 一反应关系 方法同 “ 2’ , 仅以不同剂量 v C R 代替 D A G , 结果见图 4。
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月一 -一一 - .一 叫- ~一 .一- 叫一V C R 剂量低于 o . 6 m g /k g 时 , 细胞存活比呈指数降低 , 剂量为 0 . 8~ 3 . O m g / k g 时 , 曲线斜率明·显降低 , 存活比在 1 0 “ ” ~ 1 -0 令 出现坪值 。(四 ) D A G 与 v C R 联合用药 第 1 受体鼠 10 组 , 依图 4规定的方 式 iP 生 理 盐 水或D A G 或 (和 ) V C R 。 D A G 剂量为 o . s m g / k g , V C R 为 o . Z m g / k g 。 全部小鼠均于第一次给
药后 40 h 取合 , 分别植入第二受体鼠 , 结果见图 5 。 先给 D A G , 隔 s h 给 v C R , 未观察到
协同作用 , 其余各组均有不同程度的协同作用 , 尤以先给 D A G , 隔 24 h 给 V C R 方案的作
用最好 , 对 L ; 2 1。 细胞的杀伤 , 超过 “ 相加作用 ” 1 0 倍以上 。
三 . 对骨位千细胞的杀伤作用
D A G 与 V C R 杀灭小鼠骨髓干细胞的 “ 相加作用 ” (存活比 ) 为 0 . 17 。 先用 D A G 后用
V C R 为 0 . 15 , 即有轻微的协同杀伤作用 , 其余各联合用药组均未超过 “ 相加作用 ” , 见表 乙
T a b Z
。
C o m b i n e d e f里亡亡 t s of D A G a n d V C R o n C F U - 5 i n m i e e
S e h e d u l e M e a o C F U
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r a e t i o n C F U
一
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S a l i n e 1 92 0士 1 52 7 0 . 2 5 ’
D A G 47 5土 1 80 0 . 6 6
V C R 1 26 6士 7 64 0 . 1 8
D人 G + V C R 3 5 4士 8 2 o · 1 5 .
。 ^ o蚁 v e , 2 9 7士 11 0 0 . 2 0
v e R巡以 。 3 7 9士 2 0 1
人 d d i t i V . 0 . 1 7
. Re P r e s e n t s s y n e r g i s t i c e f f e e t
讨 论
D A G 与 V C R 以一定方式合用可发挥协同作用 , 其强度与给药方案及剂量有 关 。 先 给
D A G
, 隔 24 h 再给 V C R , 对小鼠 1L 2 1。 的协同疗效最好 。 A D C 试验也得到同样结果 , 在此
试验中 , 细胞数在一定范围内与集落数呈直线关系 ; D A G 与 v C R 的剂量一反应曲线也与此
二药的细胞周期动力学特性相吻合 。 可以认为 , 在我们的实验条件下 , 用此法研究抗庙药联
合使用对 1L 2 1。 干细胞的杀灭作用是可行的 。 此外 , 联合用药协同疗效主要决定于 D A G 剂
量 , 而 V C R 剂量对疗效影响较小 。 D A G 为 3 . 0 m g / k g 时 , 无论 V C R 剂量如何 , 协同指数
均在 3 . 17 以上 ; 超过 5 . o m g / k g 时 , 可能由于毒性增加犷 协同指 数 反 而 降 低 。 同一剂量
V C R
, 疗效依 D A G 剂量不同而异 。 据报道 , V C R 是一大分子量药物 , 它通过某种载体中
介 ( “ “ r r ie 卜 m de ia t“ )系统转运机制进入细胞内 , 与微管蛋白等结合而发挥细胞毒作用 ` 5 ’ 。 膜
结构改变 , 将影响药物通透性 。 电镜下已观察到 D A G 杀伤的细胞呈 “ 调落性 ” 坏死 (“ ’ , 细胞
从出现芽突至完全溶解 , 膜结构必将有改变 , 是否此种改变激活了 V C R 的膜转运系统 , 提
高了药物通透性 , 值得进一步探讨 。
先给 D A G , 24 h 后给 V C R , 对小鼠骨髓干细胞的毒性有轻微协同作用 , 所杀灭的骨
髓干细胞超过 “ 相加作用 ” 12 % , 而 J , 12 1。小鼠生命延长率却是 “ 相加作用 ” 的 3 倍以上 , 对
L ; 2 : 。千细胞的杀灭则超过单药 “ 相加 ” 的 1 0 倍 。 因此 , 在本实验条件下 , 此方案应被认为是
最佳联合用药方案 。
致谢 北京友谊医院同位素科及广西自治区人民医院放疗室协助照射小鼠 , 中国医学科学院药物 研 究
所林琳同志参加部份技术工作 。
1 02 药学学报 A e t a ph a r ma e e u t l。 a Si n ie a 1 98 7碑 2 (2 ) :95 、 102
参 考 文 献
1
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2
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3
.
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s c h e d u l e
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T I N E A N D I
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2 : 5
,
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^ B S T R A C T T h。 c o m b i n e d e f f e e t o f z , 2 : 5 , 6二 d i a n h y d r o g a l a e t i t o l ( D A G ) a n d
v i n e r i s t i n e ( V C R ) o n L , 2 : 0 l e u k e m i a w a s s t u d i e d
.
T h e r e s u l t s o b t a n e d 葱儿 公艺v o s u g g -
e s t t h a t s im u i t a n e o u s a d m i n i s t r a t i o n o f D A G a n d V C R
, o r a d m i n i吕t r a t i o n o f t h e s e
t w o a g e n t s w i t h i n a 2 4 h i n t e r v a l
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i n d e P e n d e n t o f o r d e r
,
P r o d u e e d a s y n e r g i s t i e
e f f e e t
.
T h e d e g r e e o f s y n e r g i s m w a s d e P e n d e n t o n d o s e a n d s e h e d u l e
.
W h e n D A G
w a s g i v e n b e f o r e V C R
,
t h e e f f e e t w a s m o r e t h a n t h e o t h e r t w o s e h e d u l e s o f e o m b
-
i n a t i o n
.
S t u d i e s u s i n g d i f f e r e n t d o s e s o f D A G a n d V C R w i t h a n o P t i m u m s e h e d u l e
i n d i e a t e d t h a t t h e d e g r e e o f s y n e r g i s m w a s m a i n l y d e P e n d e n t o n t h e d o s e o f D A G
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2 : 5
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一
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