全 文 ：狼毒大戟对 L615白血病患鼠细胞增殖
及肝肾中 SOD, GSH-Px活性的恢复作用
崔　 1　衣乐然 2　王淑娥 1　王为民 2　巩国明 2　刘　萍 1
( 1山东医科大学公共卫生学院卫生化学教研室　2烟台护校 )
　　内容提要　灌胃给予 L615白血病患鼠狼毒大戟水提物 3. 0g /kg (相当生药 ) 7d,小鼠 T
淋巴白血病细胞增殖受到了较强地抑制 ( P < 0. 02) ,显著增加了由于 L615白血病细胞攻击
所致的肝中谷胱甘肽过氧化酶 ( GSH-Px )和超氧化物歧化酶活力 ( SOD)下降 ( P < 0. 01, P
< 0. 001)。但狼毒大戟 1. 8g /kg水提物对白血病细胞增殖的抑制作用较弱 ,对 GSH-Px
与 SOD活力的恢复无效 ,提示其抗 L615白血病的有效剂量应大于 1. 8g /kg。
关键词　狼毒大戟 ; 白血病 ; 实验性 ; 谷胱甘肽过氧化酶 ; 超氧化物歧化酶
　　狼毒大戟 ( euphorbia fi sheriana stead)
为大戟科植物狼毒大戟的根 [1 ] ,始载于《神
农本草》 ,主咳 ,破积聚 ,恶疮 ,鼠瘘疽蚀 ,蛊
毒。东北民间用其水煎液治疗胃癌、肠癌、肺
癌、骨结核等疾病 [2 ]。近年来已证实其水、醇
提取物有广泛的抗癌活性 [3, 4 ]。为探讨其对
白血病及机体抗脂质过氧化酶系统的作用 ,
我们对狼毒大戟与 L61 5小鼠白血病及肝、肾
中超氧化物歧化酶 ( SOD)、谷胱甘肽过氧化
酶 ( GSH-Px )的关系进行了研究。
1　材料及方法
1. 1肿瘤模型　自中国医学科学院血液病研究所
引入 L615白血病瘤株 , 615近交系小鼠由中国医学
科学院药物所动物中心提供。
1. 2　药品及试剂
1. 2. 1　狼毒生药　由济南市医药公司提供 ,经本
校药学院中草药生药教研室鉴定。
1. 2. 2　狼毒水煎剂 LS-1, LS-2　分别取狼毒生药
12和 20g ,各加蒸馏水 100ml,煮沸后文火煎
15min,滤去药渣 ,加蒸馏水至 100ml置冰箱备用。
1. 3　实验方法
1. 3. 1　接种方法　取接种 6d的 L615小鼠 ,颈椎脱
位处死 ,在无菌条件下取出脾脏 ,在 Hanks液中研
磨 ,用 120目尼龙网过滤 ,用盼蓝排除法计算活细
胞 ,用 RPM I-1640培养基调成 1× 105 /ml个 615
细胞备用。
1. 3. 2　给药过程　 40只 615近交系小鼠 ,体重 19
～ 20g ,雌雄各半 ,平衡饲养 1周后 ,随机分为 4组:
阴性对照组 (Ⅰ ,n= 10) ,阳性对照组 (Ⅱ ,n= 10) ,
LS-1组 (Ⅲ ,n= 10) . LS-2组 (Ⅳ ,n= 10)。 I组在每
鼠左腋下注射生理盐水 0. 1ml,其余 3组在相同部
位注入 104个 L615细胞 ( 0. 1ml) , 24h后每日由胃管
分别注入Ⅰ 组生理盐水 0. 3ml,Ⅱ组生理盐水 0. 3
ml,Ⅲ组 LS-1 0. 3ml,Ⅳ组 LS-2 0. 3ml共 7d,第 8
日处死动物 ,取肝、肾、血 ,染色后观察血液中白细
胞数。肝、肾组织匀浆后测定其中 SOD, GSH-Px活
性。
1. 3. 3　 SOD, GS H-Px测定方法　 SOD活力测定
用黄嘌呤氧化酶法 , GSH-Px测定用 5-硫代二硝基
苯甲酸法 ,试剂盒均由南京铁道医学院提供。
2　结　果
2. 1　对 L615白血病细胞增殖的抑制作用　
接种后患鼠血液中白细胞与阴性对照组相
比显著增高 ( P < 0. 001) ,Ⅳ组中白细胞数
与阳性对照组相比明显下降 ( P < 0. 02) .显
示狼毒浸出液对 L615白血病细胞的增殖有
较强地抑制作用 ,而Ⅲ组白细胞数虽有下
降 ,但无统计学意义 ( P> 0. 05) ,见表 1。
2. 2　狼毒大戟浸出液对肝、肾中 SOD活性
的影响　患鼠肝中 SOD活力与阴性对照组
第36卷第4期　　　　　山　东　医　科　大　学　学　报　　　　　 Vol. 36 No. 4
1998年12月　　 ACTA ACADEM IAE MEDICIN AE SHANDONG　　 Dec.　 1998
相比明显降低 ( P < 0. 001) ,给药后高剂量
组恢复到正常水平 ,低剂量组则无作用 ,肾
中 SO D活力未受到药物的影响 ,见表 2。
2. 3　狼毒大戟浸出液对肝、肾中 GSH-Px
的影响　狼毒对患鼠肝、肾中 GSH-Px的
影响与对 SOD的影响类似 ,高剂量组对恢
复 GSH-Px有统计意义 (P < 0. 01) ,低剂量
组则无效。给药前后肾中 GSH-Px无变化 ,
见表 3。
表 1狼毒浸出液对 L615患鼠白血病细胞增殖的抑制作用
组别 药物 n 白细胞数 ( 109 /L ) P
Ⅰ 生理盐水 10 0. 0097± 0. 0055
Ⅱ 生理盐水 10 0. 2199± 0. 1099 < 0. 001*
Ⅲ LS-1 10 0. 1520± 0. 0040 > 0. 05* *
Ⅳ LS-2 10 0. 1164± 0. 0123 < 0. 02* *
　* 　 v sⅠ 组 　　* * v sⅡ 组
表 2　狼毒浸出液对 L615患鼠肝肾中 SOD活性的影响
组别 药物 剂量 n SOD(apro /nmol. s
-1 . L-1 )
肾 肝 P
Ⅰ 生理盐水 - 10 841. 33± 300. 23 1728. 68± 202. 71
Ⅱ 生理盐水 - 10 950. 52± 199. 81 1283. 92± 199. 87 < 0. 01*
Ⅲ LS-1 1. 8 10 937. 19± 192. 21 1255. 25± 233. 88 > 0. 05* *
Ⅳ LS-2 3. 0 10 934. 69± 218. 21 1763. 69± 226. 38 < 0. 01* *
　　* 　 v sⅠ 组 　　* * 　 vs　 Ⅱ 组
表 3　狼毒浸出液对 L615患鼠肝肾中 GSH-Px活性的影响
组别 药物 剂量 n GSH- Px (ξpro /nmo l. s
-1. L-1 )
肾 肝 P
Ⅰ 生理盐水 — 10 502. 12± 154. 20 603. 95± 65. 68
Ⅱ 生理盐水 — 10 464. 09± 145. 70 505. 43± 105. 69 < 0. 01*
Ⅲ LS-1 1. 8 10 474. 26± 187. 54 495. 10± 121. 69 > 0. 05* *
Ⅳ LS-2 3. 0 10 504. 27± 250. 55 625. 46± 82. 35 < 0. 01* *
　* v sⅠ 组 　　* * v s　Ⅱ 组
3　讨　论
狼毒的品种较多 ,狼毒大戟是应用较
广的一种 ,文献报道狼毒大戟对小鼠移植
性肿瘤生长有抑制作用 [5 ] ,临床治疗多种
实体肿瘤也取得了一定的疗效 [3 ]。本实验
结果表明 ,狼毒大戟对 L615白血病细胞在
体内的增殖有较强地抑制作用。 文献报
道 [6, 7 ] ,瑞香狼毒也可在体内和体外有效地
抑制白血病 L1210、 P388癌细胞增殖 ,表明不
同品种的狼毒对白血病细胞增殖有类似的
抑制作用。本实验还表明抑制作用与剂量
有关。
GSH-Px与 SO D是抗机体脂质过氧
化物的两个重要的酶 ,机体通过酶系统与
非酶系统产生超氧自由基 ( O-·2 )攻击生物
膜中的不饱和脂肪酸 ,形成脂质过氧化物 ,
290　　　　　　　　　　山　东　医　科　大　学　学　报　　　　　　 36卷 4期
进而生成毒性更大的羟基自由基 [ 8] ,后者
除引发生物膜脂质过氧化作用造成结构和
功能损伤外 ,还可破坏核酸、蛋白质等生物
分子 ,可能是诱发癌变的重要因素之一。
GSH-Px和 SOD可有效地清除并阻止 O-·2
引发的自由基连锁反应 ,保护细胞膜结构
和功能完整。本实验结果表明 ,受 L615白血
病癌细胞攻击的 615小鼠肝中 SOD与
GSH-Px活性明显下降 ,给大剂量狼毒大
戟后 , SOD和 GSH-Px活力水平恢复正
常 ,显示在药物作用下 ,超氧化物歧化酶与
谷胱甘肽过氧化酶的活力得到修复 ,表明
狼毒大戟对 L615白血病细胞的抑制作用至
少有部分原因是通过恢复 L615白血病细胞
破坏的酶活力而起作用的。本结果还显示
此种作用只限于肝中 ,肾中的 SOD与
GSH-Px则未受到白血病与药物作用的影
响 ,其原因有待于继续探讨。
低剂量狼毒对恢复 SOD和 GSH-Px
无作用 ,提示抑制白血病时狼毒在体内需
达到一定的浓度。文献 [9 ]认为“狼毒有大
毒” ,用时需慎重 ,故寻找其毒性与有效剂
量之间的安全范围很有必要 ,并需对其抗
白血病的机制进行深入的研究。
(收稿日期　 1998-03-21)
参　考　文　献
1　江苏新医学院 .中药大辞典 .上海:上海人民出版社 , 1977: 1899
2　刘桂芳 ,杨志强 ,傅玉琴等 .狼毒大戟的化学成份研究 .中草药 , 1989; 20( 7): 1
3　王文祥 ,丁杏苞 .狼毒的化学与药理研究进展 .国外医药植物药分册 , 1996, 11( 6): 252
4　李杰 ,张静 .中药狼毒抗癌作用研究进展 .中医研究 , 1996, 9( 5) 44
5　杨宝印 ,贾宝山 ,高国栋 . 大戟狼毒对小鼠移植肿瘤生长的抑制作用 .河北中医 , 1984; ( 3): 33
6　冯威健 ,吉田光二 ,池川哲郎 .瑞香狼毒提取物尼地吗啉与长春新碱和阿霉素体外抗癌活性的比较 .
癌症 , 1994; 13( 6): 503
7　冯威健 ,池川哲郎 ,吉田光二 .瑞香狼毒提取物尼地吗啉的抗癌活性 .中华肿瘤杂志 , 1995; 17( 1): 24
8　王明臣 ,苗健 ,陈本懋等 .血清超氧化物酶、同工酶活性与衰老关系初探 .中华医学杂志 , 1992; 11( 5):
287
9　李时珍 .本草纲目 .北京:人民卫生出版社 , 1975: 1125
THE IN HIBITION OF L615 LEUKEM IA CELL PRO LIFERATION
AND THE RECOV ERY O F GSH-Px AND SOD ACTIV ATION
IN L615 M ICE BY EU PHORBIA FISCHERIAN A STEAD
Cui Xi , Yi Leran, Wang Shue, et al
( Dept. of Analytical Chemistry ,
Public Heal th Co lleg e of Shandong Medical Univ ersi ty )
　　 Abstract　 The w ater ex tract of chinese herbal medicine, eupho rbia fi sch riana stead
( LS) , show ed st rong inhibi tion of L615 mice T lymphocy te cel l proliferation by adminis-
291崔 ,等 .狼毒大戟对 L615白血病患鼠细胞增殖及肝肾中 SOD, GSH-Px活性的恢复作用
tration int rag asr trically o f 3g /( kg . d) LS( equal to raw material) fo r 7 days ( P < 0. 02) .
For at tacking of L615 leukemia cell , the GSH-Px and SOD activ ation w ere decreased, and
recovered significantly af ter administ ra tion LS ( P < 0. 01, P < 0. 001) . The same resul ts
haven’ t been observ ed when tested w ith the ex tract of 1. 8g / ( kg. d) . The effectiv e
dosage against leukemia should be over 1. 8g /( kg . d) .
　　 Key words　 Euphorbia fischeriana stead; Leukemia; Experimental; Glutathione
peroxidase; Supero xide dismutase
自体外周血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤
山东医科大学附属医院　刘传方　彭　军　张春青　徐从高　王学永
　　淋巴瘤 11例中男 8例 ,女 3例 ; 24～ 62岁 ,Ⅱ期 7例 ,Ⅳ期 4例。 k、 s评分为 80～ 100分。在自体外
周血干细胞移植 ( PBSCT )前均行常规化疗 ,以减少瘤负荷 ,并行多部位骨髓穿刺术以证实无肿瘤骨髓侵
犯。移植前行大剂量化疗联合 G-CSF动员自体外周血干细胞。用血细胞分离机采集外周血单个核细胞
( MNC) ,冷冻保存备用。患者药浴后入无菌层流病房行全环境保护。随机分为两组 ,一组预处理用 CBV
方案 ( CTX: 6. og /m2; BCN U: 300mg /m2; V P-16 750～ 900mg /m2 ) ,另一组用 BEAM 方案 ( BCNU:
300mg /m2; VP-16 300mg /m2; Ara-c: 800mg /m2; M elp: 140mg /m2 ) ,同时给予水化、碱化尿液。静滴肝素、
丹参预防肝静脉闭塞症。回输细胞量: MNC为 1. 42× 108～ 4. 6× 108 /kg , CD34(+ )细胞为 1. 02× 106～
66. 9× 106 /kg。移植后给予 G-CSF促进造血恢复 ,必要时给予成分输血 ,同时加强抗感染和营养支持治
疗。经治疗 , 7例完全缓解 ( CR) , 4例部分缓解 ( PR) ,其中 3例为复发的晚期 (Ⅳ )患者。两种预处理的急
性毒性反应相似 ,主要为恶心、呕吐、肝功损害、脱发等。 经随访 1～ 22个月 ,平均 9. 7个月 ,其中持续
C R6例 ,病情稳定 3例 , 2例分别于移植后 2和 6个月死于肿瘤复发 ,这 2例在移植前后血清乳酸脱氢酶
( LDH)水平均高于正常。
　　讨　论　因 CBV和 BEAM方案用于淋巴瘤预处理时 ,不含有全身照射 ,故降低了间质性肺炎的发
生率。本组结果表明 ,两种预处理疗效相似 ,急性毒副反应亦基本相同。本组 PBSCT后 2例死亡 ,其移植
前后血清 LDH水平均增高。移植后 LDH降至正常者则尚未发现肿瘤复发的迹象 ,表明 LDH升高提示
预后不良。
淋巴瘤患者经化疗获 CR或 PR后 ,应尽早接受 PBSCT治疗。因此时肿瘤负荷量小 ,对放疗、化疗敏
感 ,而且机体状况好 ,耐受力强 ,易渡过预处理的极期 ;由于患者经历的放疗、化疗次数少 ,剂量小、造血
干细胞易采集 ,质量也好。
(收稿日期　 1998-05-08)
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