全 文 ：! 收稿日期 !%_! ) ! 基金项目 !国家自然科学基金项目 ! 7%_%) ( 陕西省教育厅专项科研计划项目 ! % %%% ( 西安医学院博士科研启动基金项目 ! ) 7 ! 通讯作者 ! ! 郑蕾 # 博士 # 讲师 # 从事中药抗肿瘤研究 # GG_ 37%)-)# G7GQG_ G_GGQ%_$5=G 木鳖子抗肿瘤有效作用部位筛选及作用机制探讨 郑蕾 ! ! 何昊 ! 方怡 ! 申旭霁 ! 张彦 西安医学院 药学院 ! 西安!# ! 摘要 !目的 观察中药木鳖子不同提取部位体内体外的抗肿瘤作用 # 并考察其中抗肿瘤效果显著的木鳖子乙酸乙酯提 取部位的抗肿瘤作用机制 & 方法 采用索氏提取技术将中药木鳖子按照溶剂极性顺序依次提取 # 得到不同成分 # 采用细胞增 殖实验结合动物抗肿瘤模型方法进行药效评价 # 运用现代分子生物学技术阐明其中最优部位可能的抗肿瘤作用机制 & 结果 中药木鳖子乙酸乙酯提取部位在体外和体内实验中均可表现出明显的抑制肿瘤生长能力 ! = $) # 且对实验动物无明显的 毒副作用 # 本研究首次发现木鳖子乙酸乙酯提取部位可影响表皮生长因子 ! G 激酶活性 ! = $) # 并可明显抑制 G 蛋白磷酸化表达 ! = $) # 可明显抑制丝裂原活化蛋白激酶家族 ! GG=GQ5GQG=GGGQG# 通路上重要节点 蛋白细胞外信号调节激酶 ! GQ5G__QG_QG=GGGQG# G % 氨基末端激酶 ! 77GGGQ_GQG# 和丝裂 原激活蛋白激酶 _7的磷酸化水平 ! = $) # 且具有浓度依赖关系 & 结论 中药木鳖子乙酸乙酯提取部位可通过抑制 G 蛋白及相关通路蛋白活性 # 在体内外实验中显著抑制肿瘤的生长 & ! 关键词 !木鳖子 ( 抗肿瘤 ( 表皮生长因子 ( 丝裂原活化蛋白激酶家族 ( 磷酸化 ! 中图分类号 !7))!! ! 文献标识码 !!! ! 文章编号 !)733_& 377% ! NXX ! ! 网络出版地址 ! ! 网络出版时间 ! G_XXXGJ XGNNXNX G_NIXN@G_XJ XN % G 5 % Q % 5 % 5 G _ 5 _ % G % G _ G GG! # GQ=# G# G7G# Q ! !>((Q(G=>>3G>39G2>Q!23>3# I2 >>(3G2>Q3>2=332G_# I2 >># G>2>> ) GGXXGGNX* !GGQXNXXIX G=GGGQGGQGG=Q5GG =GGG =_G GQ5 =((G(3G2> (>2>>2>3>25 2>=2=( Q2>=2G3(# Q GQ5G=GG5QGG =G_Q5GQGGQ5 =( G(>2>>2>3>2G Q GGG5Q QGG=GG5 IXX@XN =G=GGG Q5GG5=G=G# ( (>2>>2>3>2Q GQ5GG =_G Q55=G=GGG5G==_QGG = G=_G GQ5G= GG=GG QGGG=G5QGG_GGG5QGG =Q5G==G_Q5GQGGQ5 =( (>2>>2>3>2=5Q5G5G_ = QGQ_GGGG# QGG=GG=_=GGGG G5=_=G = GGGQGG G_GGG5QGGXXGQX G=QG= Q5G=# G_Q5GQGGQ5 =( (>2>>2>3>2 =GGGG5QQG7=_GGQGGGG52>=2=( QG=2G3( ! = $) # G ==G= =G5QGGGG5= GGGGQ_QGQ_GG ==GG GGQ G_Q5GQGGQ5 =( (>2>>2>3>25=_ GGG ==_QG==GGGGQ_= Q5=! G =GGGQGQ=GG==_QG= ! = $) # QGGG====7G # ==7 Q==7_7=GG=GQ5GQG=GGGQG ! GQ=G7GGG GQG! = $) MX_NQGXXX_ G_Q5GQGGQ5 =( (>2>>2>3>2 5=_= QGGG5QQG75Q5GGG5GGGG==_QG==G=GGGQG ) 2 XG MXGNX* ! ((G(3G2>(>2>>2>3>2( QG75Q5G( GGGGQ_= Q5= ! G ( GG=G Q5GQG=GGGQG! ( ==_QG= 第 _卷第 3 期 年 )月 中国实验方剂学杂志 GGG=Q_=GGGGQ_GQGG=Q_GG5Q_=G_QG =__# =3 Q# 2017-02-15 09:38:12 http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3495.R.20170215.0938.020.html !!恶性肿瘤严重威胁人类生命健康 # 其发病率和 死亡率逐年上升 ) 7* & 目前抗癌中药及其制剂的开 发已成为我国抗癌药物研究的重要方向 # 从植物中 寻找药物 # 已成为抗肿瘤药物研究的重要来源 # 研究 表明很多天然植物的提取物具有良好的抗肿瘤的活 性 # 天然产物或其化合物结构改性已进入临床研究 范围 ) _7)* & 木鳖子主要分布于中国西南各省份 # 味 苦 % 微甘 # 有毒 # 入肝 % 脾 % 胃经 # 具散结消肿 % 攻毒疗 疮功效 & 用于疮疡肿毒 # 乳痈 # 瘰疬 # 痔漏 # 干癣 # 秃 疮 & 古时多外用 # 少内服 & 已报道的木鳖子的化学 成分包括三萜及其苷类 % 甾体类 % 烯烃类 % 氨基酸类 和有机酸类等 # 药理活性主要集中在降血糖 % 抗癌 % 抗菌 % 抗过敏 % 镇痛方面 ) %7* & 本研究首次采用索氏 提取技术将中药木鳖子按照溶剂极性顺序依次提 取 # 通过细胞和动物水平进行筛选评价 # 发现其中 抗肿瘤效果最优成分为其乙酸乙酯提取部位 # 探 讨其抑制肿瘤生长能力 # 及对实验动物的毒副作 用 # 探讨木鳖子乙酸乙酯提取部位抑制表皮生长 因子 ! G 酪氨酸激酶的磷酸化作用 # 及抑制 G蛋白磷酸化表达的作用 # 抑制丝裂原活化蛋 白 激 酶 家 族 ! GG=GQ5GQG =GGGQG# 通路上重要节点蛋白细胞外信号调节激 酶 ! GQ5G__QG_QG =GGGQG# G # 氨基末端激酶 ! 77GGGQ_GQG# 和丝裂原激活蛋白激酶 _7的磷酸化水平的作 用 # 对中药木鳖子乙酸乙酯提取部位的抗肿瘤作 用机制进行探讨 & 21材料 2B2!细胞!人乳腺癌 7# 人乳腺癌 7 7 _# 人乳腺癌 7)7_ # 人肝癌 7# 人非 小细胞肺癌)-3 # 人结肠癌 ==# 人胃癌73# 人宫颈癌 G_Q均购自中国科学院典型培养物保藏委 员会细胞库 # 在含 胎牛血清的培养基 ! 含 G 青霉素和链霉素 中 # 置于 _ ) 培养 箱中进行培养 # 每隔 _传代次 & 小鼠 7 腹 水瘤来源自陕西中医药研究所实验动物中心 & 2B!动物!健康 级昆明种小鼠 # 雌雄各半 # 体 重7 # 由西安交通大学实验动物中心提供 # 合 格证号 ! 陕 7_& 小鼠自由摄取食物 和水 # 培养于 - # 湿度) # 7 光照7黑暗循环的洁净动物房 & 实验经西安交通大 学实验动物伦理委员会 ! G %77 批准 # 符合实验动物伦理指导原则 & 2BB!药材!木鳖子购自西安市万寿路药材市场 # 经 西安医学院张彦副教授鉴定为葫芦科苦瓜属植物木 鳖 ((G(3G2>(>2>>2>3>2的干燥成熟果实 & 2BG!试剂!噻唑蓝 ! GG# GGQ公司 # 批号 )%)) ( 胎牛血清 # G 和 %- 培养基 ! _=G公司 # 批号分别为 G-)# 73__# 73_) ( G# G # # _7 抗 体 ! =GGG5 公司 # 批号分别为 737%77# %--_77 # ))77# -%-77 ( 7G# 7G # 7 # 7_7抗体 ! G_GQ_GGG5=_=公司 # 批 号分别为)# -_ # -%%7# -) # 二抗 ! =GGG5 公司 # 批号 7 ( G 试剂盒 ! GG=公 司 # 批号%-G G & 2B6!仪器! 7)型 恒温培养箱 ! 日本 Q=公司 ( GG7 型倒置显微镜 ! 日本 G=公 司 ( 77型超净工作台 ! 苏州安泰空气技术 有限公司 ( G G 型多标记微孔板检测仪 ! 美国 GG7G_GG公司 # %7 型酶联免疫检测仪 # GG7 GGGGQ型蛋白电泳仪 # _3- 型电 泳转膜仪 # G_=5 型凝胶成像系统 ! 美国 G=7 Q公司 & 1方法 B2!药物制备!木鳖子药材 份 # ) 份 # 粉碎 # 份用蒸馏水提取 # 份用 乙醇提取 & 每次用 ) 倍体积溶剂量提取 # 各提取_次 # 滤液合并 # 旋干 # 收 膏率 & 在% 真空干燥箱烘干至粉末状 # 提取物相当于生药材 )& 各提取物均用二甲基亚 砜 ! 超声溶解 # 配置成饱和溶液作为储备液 # 储备液质量浓度为 # 于- 保存备用 & B!细胞增殖检测!通过 GG实验 ) 3 * # 检测木鳖 子总提取物对多种肿瘤细胞 ! 7# 7 7_# 7)7_ # 7# )-3 # ==# 73# G_Q 增殖的影响 & 将处于指数级增长期的肿瘤细 胞 # 消化 # 计数 # 接种到 3%孔培养板中 & 待细胞贴壁 后 # 加入不同质量浓度 ! # # ) # ) G 的本鳖 子提取物 # 分别作用 -7 后终止培养 # 每孔加入 ) GG ! # _ 避光孵育- # 加入 ) ! # 震荡 )GG# 使结晶物充分溶解 # 在酶标仪 -3 G波长下测定细胞吸光度 G# 计算细胞生长抑制率 & BB!小鼠 7 肉瘤模型建立!复苏 7 细胞 # 接种于健康昆明小鼠的腹腔内 # 后从肿瘤生长 旺盛且无破溃的小鼠腹腔内吸取白色的浓稠腹水 # 稀释至细胞密度为 个 G # 接种于小鼠右腋 窝皮下 # 每只 $G & 接种后第 天随机分组 # 每 组只 # 雌雄各半 # 根据木鳖子乙酸乙酯提取部位 第 _卷第 3 期 年 )月 中国实验方剂学杂志 GGG=Q_=GGGGQ_GQGG=Q_GG5Q_=G_QG =__# =3 Q# 半数致死量 ! ) # 木鳖子灌胃给药 ) _ # 木鳖子腹腔注射 ) G 设计浓度梯度 ! 灌胃给药浓度 3$-# $7# )$_# -$ # _$# $%# $ # $7 ( 腹腔注射给药浓度 _)# 7# # )3 # # 3 # %7# )G 进行给药 # 连续给 药 & 处死 # 剥离肿瘤 # 称重 # 计算小鼠 7 肉瘤 生长的抑制率 ) * & BG!木鳖子抗肿瘤有效成分分离!将木鳖子的果 仁和果壳分离 # 粉碎 # 分别称取 _ # 安装好索氏提 取装置 ) * # 正己烷浸泡药材过夜 # 加热回流 % # 收 集提取液 & 提取认依次加入乙酸乙酯 % 丙酮 % 乙醇 % 水提取 # 每次提取% # 收集相应部分的提取液 # 旋转 蒸发仪干燥 # 得到 个部位的固形物 # 得率依次为 $ # $) # $ # $% # $ # $) # _$% # -$_ # $) # $ & 并用肿瘤细胞对不同提取部 位进行药效筛选 & B6! Q5GG QQ检测木鳖子对 G激酶活力 !采用酶催化反应 # 将不同质量浓度 ! $%# _$ # %$- # $7 # $)% _# )$ -# $ )# $) % 待测药物 - ! 按顺序加入 _7-孔板 # 再依次向每孔中加入 G 底物7生物素工作液 ! # G激酶工作液 ! # G工作液! # 每组设 _个平行孔 # 将 _7-孔板 放入甩板机中使得孔板中溶液混匀 # 再将 _7-孔板 放入_ 孵箱中孵育_ GG& 终止反应 # 将_7-孔 板从_ 孵箱中取出 # 避光加入 Q7 %%)工作液 )! 和G_ 7G 7抗体工作液)! # 将_7-孔板放入 甩板机中使溶液混匀后 # 放入室温孵育 & 选择 _ G为激发波长 # %)# %%)G为发射波长 # 在多 功能 酶 标 仪 上 测 定 各 孔 G# 每 组 实 验 均 重 复 _次 ) * & BS !蛋白免疫印迹法 ! GG_= 检测蛋白表达 !将处于对数增长期的人乳腺癌细胞 7# 接种 于%孔对数板 # 加入不同质量浓度 ! - # 7 # % G 木鳖子乙酸乙酯提取物 # 作用 -7 # 收集细 胞并裂解 # I# - 离心 GG# 取上清 # 测定 各样本蛋白浓度 & 按比例与上样缓冲液混匀 # 煮沸 变性 )GG& 制胶 # 行 丙烯酰胺凝胶电泳 # 切 胶 # 转膜 # 封闭 # 一抗 ! ? 孵育 # 二抗反应 # 显 影 # 定影 # 以甘油醛7_7磷酸脱氢酶 ! 为内 参 # 用凝胶成像系统拍照并分析各条带灰度值 & BQ !统计学处理!采用 %$ 统计学软件处 理 # 实验数据以 # 表示 # 组间均数的比较采用G检 验 # 组间两两比较采用 检验 # = $)表示差异具 有统计学意义 & B1结果 BB2!木鳖子对肿瘤细胞增殖的影响!细胞增殖实 验表明 # 木鳖子水提物对多种肿瘤细胞增殖均表现 出明显的抑制作用 ! 多数抑瘤率 7 & 见表 & 与醇提取物组比较 # 木鳖子水提物的抗肿瘤效果更 为明确 & 因此 # 进一步对木鳖子水提物进行了更深 入的研究 # 与空白组比较 # 木鳖子提取物对于多种肿 瘤细胞生长具有较好的抑制作用 ! = $) # 这种 现象具有浓度依赖关系 & 见表& 表21木鳖子提取物对肿瘤细胞生长抑制率的影响 ! # # > ) GGGQX 21NNXNX XNXHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ N GGNXGXX_GGXQXNXGGXXX_XNNG_NXGNXQQX! # # > ) 组别 7 )-3 G_Q 7 73 == 水提物 7$% $ %7$ )$_ !7$ %$ 7$3% -$ 7$- $- 3$)7 _$_ 醇提物 77$%) %$3 $) $ $3% $)% 7)$7 )$ %$%7 )$7 %$_ 3$3 !!注 质量浓度均为) G ! 表)同 & 表1木鳖子水提物对肿瘤细胞生长抑制率的影响 ! # # > ) GGGQX 1NNXNX XNMGXXGXHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ N GGNXGXX_GGXQXNXGGXXX_XNNG_NXGNXQQX! # # > ) 组别 质量浓度 G 7 )-3 7 == 73 G_Q 木鳖子 ) 7$7 %$7_ 3%$% _$) 3%$ -$3 3$7 )$3 3%$- -$7% 3-$3 -$) ) -$ -$37 )3$7 %$- 7_$ )$ -$%) )$3 ))$%) %$3 %$7 )$3 7$% -$ -$7 _$77 3$) -$7 )$-3 -$%) %$% _$ ))$- _$ $_ -$) %$37 -$_ $%- $7 )$%3 $ _$) -$7 _)$3 )$3 空白 $%- $7 $7% $) $_) $ $- $7 $ $-) $)) $7 !!注 与空白组比较 = $)! 表_同 & BB!木鳖子对小鼠肉瘤生长作用的影响!将接种 7 瘤株的小鼠根据体重分组 # 每组 只 # 雌雄各 _ 第 _卷第 3 期 年 )月 中国实验方剂学杂志 GGG=Q_=GGGGQ_GQGG=Q_GG5Q_=G_QG =__# =3 Q# 半 # 根据半数致死量进行灌胃给药 # 连续 # 木鳖 子提取物对小鼠 7 移植瘤有一定的抑制作用 # 但 与空白组比较 # 抑瘤效果不明显 # 见表 _& 因此 # 本 研究考虑改变给药途径 & 与空白组比较 # 木鳖子提取物可以明显抑制小 鼠 7 肉瘤的生长情况 ! = $)# = $ # )# ) G 木鳖子提取物组抑瘤率可分别达到 )$ 和 %7$3 # 具有剂量依赖性 & 同时 # 连续 给药降低小鼠肉瘤体积和瘤重的同时 # 与空白组比 较 # 各药物组小鼠的体重并未出现明显的降低 # 说明 此剂量对小鼠的生理状态没有明显的影响 # 未表现 出对实验动物的毒副作用 & 见表-& 表B1木鳖子提取物 G 2G 灌胃给药对小鼠肉瘤生长作用的影响 ! # GGGQX B1NNXNX XNXHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ X_G 2G XGGNXJ G XGJ XGG GXGGX_IJ XNX! # 组别 剂量 G > 平均体重 平均瘤重 抑瘤率 给药前平均体重 体重增长率 空白!! $%) $3 $7 $ -$) -$- )_$) 木鳖子! ) $3 $- $- $_7 $3_ )$- $% _%$% ) _$- $)7 $- $ 3$-% -$) _$7- )3$)% 环磷酰胺 - $ $) $7 $ %7$) -$_ _$7 _3$_ 表G1木鳖子提取物 G 2G 腹腔注射对小鼠肉瘤生长作用的影响 ! # GGGQX G1NNXNX XNXHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ X_G 2G XGGNXJ G XGJ XGG GXGGX_IJ XGXX! # 组别 剂量 G > 平均体重 平均瘤重 抑瘤率 给药前平均体重 体重增长率 空白!! -$% _$3 $ $7) 3$7 _$ 3$33 木鳖子! ) 3$_ -$ $ $% )$ %$%- -$ )$) ) 7$3 $7 $%_ $ %7$3 3$%) $3 _$- 环磷酰胺 - $) _$ $% $% %$7 $ $ -$7 !!注 与空白组比较 = $)# = $& BBB!木鳖子活性部位筛选!将)种溶剂正己烷 % 乙 酸乙酯 % 丙酮 % 乙醇 % 水提取木鳖子得到的 个组分 进行生长抑制率检测 # 其中 # _# -两部分对肿瘤的抑 制率 ! %) 明显高于其他部位 & 说明 # 木鳖子乙 酸乙酯提取部位可能存在抗肿瘤活性成分 & 见 表)& 表61木鳖子各部位对肿瘤细胞生长抑制率的影响 ! # # > ) GGGQX 61NNXNX XNNXNNXGX_XXXQIX_X XHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ N GGNXGXX_GGXQXNXGGXXX_XNNG_NXGNXQQX! # # > ) 组分 G 7- 73 G_Q %$_ $7- ! )$) $ !7$) $ !_$_ $) _$3 $% ! $_) -$) -%$3 $_ ! $- $- _ %%$3% $_) ! 7-$% _$3 !%$% )$_ !-$_- 7$7- - 7-$%% )$% ! 3$) 7$- !_$% -$)% !3$ _$ ) $% )$%7 ! _)$3 %$_ !-$_% 7$3_ !_$ %$ % %$7_ )$- -$3 7$)- !37$7_ -$3_ _)$% _$- $3 %$3 ! %$%) )$) !_%$_ 3$_ !))$)_ 3$7 7 $ %$3 !%)$3 $7_ !$% 7$_ $_% -$_ 3 $37 %$- !)$ 7$_ !!! !--$)3 $- _$% -$33 ! %-$3 $73 !!! !7%$% -$) !!注 # $正己烷提取果壳 % 果仁部分 ( _# -$乙酸乙酯提取果壳 % 果仁部分 ( )# %$丙酮提取果壳 % 果仁部分 ( # 7$乙醇提取果壳 % 果仁部分 ( 3 # $水提取果壳 % 果仁部分 & BBG!木鳖子对 G激酶的影响!木鳖子提取物 作用于 G激酶的 )为 $)_3 & 说明木 - 第 _卷第 3 期 年 )月 中国实验方剂学杂志 GGG=Q_=GGGGQ_GQGG=Q_GG5Q_=G_QG =__# =3 Q# 鳖子乙酸乙酯提取物可以作用于 G酪氨酸激 酶 # 有效地抑制 G酪氨酸激酶的磷酸化作用 # 且 具有浓度依赖性 & 见图& BB6!木鳖子对 7细胞 G蛋白及 通路蛋白的影响!木鳖子乙酸乙酯提取物可明显抑 制 G蛋白磷酸化表达 # 可明显抑制 通路 上重要节点蛋白G # 和 _7的磷酸化水平 ! = $) # 且具有浓度依赖关系 & 见图# & 空白组 ( 木鳖子 - # 7 # % G 组 & 与空白组比较 = $)! 表同 图21木鳖子乙酸乙酯提取物对 N 蛋白表达水平的影响 ! # # > _ N XIG 21NNXNX XNXX@GQ GNXXGXX XHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ X_ N GGXXXX_XHGGXXXXX_! # # > _ 图1木鳖子乙酸乙酯提取物对 IGh2 X蛋白通路表达水平的影响 ! # # > _ N XIG 1NNXNX XNXX@GQ GNXXGXX XHXGGNXXXN % G 5 % Q % % 5 % 5 G _ 5 _ N GGNXGXX_IGh2 XGGX@MGG GGXXXX_XHGGXXXXX_! # # > _ G1讨论 目前化学药物对肿瘤的治疗尚不能满足临床使 用需求 # 如何研究开发新的抗肿瘤药物成为当今科 学界的重要课题 & 从植物中寻找药物 # 在世界范围 内已成为抗肿瘤药物研究的一个重要的组成来源 # 研究表明天然植物的提取物具有良好的抗肿瘤的活 性 # 很多天然产物或其结构改性化合物已进入临床 研究范围 # 解决了中药使用中存在的物质基础不清 # 药理机制不明等问题 & 木鳖子作为传统中药材 # 药 理活性研究却较为缺欠 & 细胞筛选发现木鳖子提取 物对于多种肿瘤细胞生长具有较好的抑制作用 # 这 种现象具有浓度依赖和时间依赖的关系 & 木鳖子提 取物通过小鼠腹腔给药途径 # 抑瘤效果显著 # 且木鳖 子腹腔注射给药)G ! 相当于 人用 量)G 组与空白组比较未表现出对实验动 物的毒副作用 & 但是木鳖子提取物通过灌胃给药方 式 # 抑瘤效果不明显 # 原因可能与有效成分的代谢过 程变化有关 # 灌胃给药后胃肠道的消化吸收运动可 能破坏了有效成分的结构 # 使得有效成分无法进入 循环系统 # 到达肿瘤作用部位 # 因此动物实验抑瘤效 果较差 & 恶性肿瘤发生转移 # 成为治疗失败的主要原因 & 肿瘤转移是一个多步骤过程 # 从细胞的恶性转化 % 细 胞的增殖与凋亡调控失衡 # 以及与细胞基质及黏附 分子结构和表达异常等均涉及多条细胞信号传导通 路的异常 & 上皮细胞间充质转化 ! GG 是指上皮 细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的过 程 # GG使上皮细胞失去细胞极性及与基底膜连接 等上皮表型特征 # 获得高迁移 % 易侵袭等间质表型特 征 & 此过程中 # G对肿瘤转移起到关键调节作 用 # 而 G需激活相依赖的因子受体 G以发挥 GG的入侵效应 & G是一种与肿瘤侵袭相关的 原癌基因 # 能够与特定的配体结合 # 刺激其内在的细 胞内蛋白质酪氨酸激酶活性 # 激活下游的信号级联 反应 # 如 信号通路 # 这些信号通路调控着重 要的生物学进程 # 包括细胞增殖 % 凋亡 % 侵袭迁移和 血管生成 & 为了更好地探寻其中的药效成分 # 本研 究将木鳖子通过极性由小到大的一系列溶剂充分进 行提取 # 对木鳖子所含成分进行分离 & 发现乙酸乙 酯提取组分表现出明显的抑制多种肿瘤细胞增殖的 作用 # 且具有浓度依赖关系 & 木鳖子乙酸乙酯提取 物可作用于 G# 有效地抑制 G的磷酸化作 用 # 且具有浓度依赖性 # 并可抑制 G蛋白磷酸化 表达 # 抑制 通路上重要节点蛋白 G # 和 _7的磷酸化水平 # 且具有浓度依赖关系 & 说明中药木鳖子乙酸乙酯提取部位可通过抑制 ) 第 _卷第 3 期 年 )月 中国实验方剂学杂志 GGG=Q_=GGGGQ_GQGG=Q_GG5Q_=G_QG =__# =3 Q# G蛋白及相关通路蛋白活性 # 发挥肿瘤抑制的 作用 & 综上 # 本研究首次发现中药木鳖子抗肿瘤有效 成分可能存在于其乙酸乙酯提取部位 # 并对该部位 进行了激酶活性筛选分析 # 发现木鳖子乙酸乙酯提 取部位可通过抑制 G激酶活性作用 # 在体内外 实验中显著抑制肿瘤的生长 # 为今后该药材的分离 鉴别以及机制的进一步阐明奠定了基础 & ! 参考文献 ) * !游伟程癌症发病趋势和面临的挑战 ) * 中华预防 医学杂志 # 7# -! %7%- ) * !GG_ # G_G # GGQ_# GQ_Q5GQGG5# %) * Q5G_G# %# %%! 7_ ) _* !GG# 5 # G# GQ_GG5GG = 5Q5GGGG=G QQ_5=G= ) * _G 5=_# 3 # ! % 7) ) -* !GQ # QQ # ==_Q QQ_=5 = 5Q5GGGG=Q_=Q_GG5GG) * QGQ5=_ GG# _# 33 ! 7_ ) )* !李杰 # 林洪生 # 孙桂芝中医药治疗肿瘤研究现状的 反思 及 展 望 ) * 中 医 药 学 刊 # )# _! % 73 ) %* !陈执中木鳖子大黄甘草及其复方制剂抗癌研究应 用进展 ) * 中国民族民间医药杂志 # ! %_7%% ) * !王铭章 # 陈执中木鳖子及其活性成分的研究进展 ) * 食品与药品 # # _! 3 _%-7_%) ) 7* !范戎 # 许敏 # 马晓霞 # 等苦瓜属植物的化学成分与药 理活性研究进展 ) * 云南中医学院学报 # -# _ ! % 3_7 ) 3 * !G # # # G Q_ 5GG# Q GG5GGQQ_5=G=GGG=G 7=GG5Q# G5G QGQGQQ==G G ==5G_) * ==GGG=G5=_# _# )7 __7__3 # =G $% 5 _$)$ ) * !何旭 # 普小菲 # 李娇 # 等美洲大蠊提取物对 7 荷 瘤小鼠肿瘤抑制作用及免疫功能的影响 ) * 中国实 验方剂学杂志 # # 7! ) 377 ) * !Q= # 5 = # G== # GQ_=_QG== QGQG=) 5* GQGGG Q_Q_=G =G Q5_GQQGG5=5QQ! GQG GG 5=GQG= = GQ5GQG=# =_G GQ5G= Q GGG _GG GQ5G=) * =5GGQ_# # _! ) -7-7 ) * ! G_=G# =_G_Q# 5Q_Q=# GQ_G7_7 G Q=G Q_GGG==GQQGG QGG= Q5GG GG_G_GG5_GG5Q_G=G_) * Q5GG# # ! - _3%7-) ! 责任编辑!张丰丰 % 第 _卷第 3 期 年 )月 中国实验方剂学杂志 GGG=Q_=GGGGQ_GQGG=Q_GG5Q_=G_QG =__# =3 Q#