全 文 ：分光光度法测定溪黄草及其近缘种中总黄酮含量
黄冬兰，陈小康，徐永群
（韶关学院 化学与环境工程学院， 广东 韶关 512005）
收稿日期：2013-08-12
基金项目：韶关市科技计划资助项目(201009).
作者简介：黄冬兰（1983-），女，广东韶关人，韶关学院化学与环境工程学院讲师，主要从事分子光谱分析和天然产物开发利用研究.
摘要：采用微波辅助萃取法提取溪黄草及其近缘种中的黄酮类化合物，以芦丁为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧
化钠作为显色体系，用可见分光光度法测定了溪黄草及其近缘种中总黄酮的含量.该方法在 0.00~1.25 mg范围内吸光
度与含量呈良好的线性关系，加标回收率为 97.43 %~103.0 %，相对标准偏差（n=6）为 1.83 %.结果表明：溪黄草及其近
缘种中总黄酮含量差异不大.该方法操作简便、结果稳定、重复性好，可用于溪黄草及其近缘种中总黄酮含量检测，实
验结果为溪黄草及其近缘种的开发和利用奠定了基础.
关键词：溪黄草；近缘种；微波萃取；总黄酮
中图分类号：O657.3 文献标识码：A 文章编号：1007-5348（2013）08-0031-04
溪黄草为广东民间习用草药，常用于清热利湿、凉血散淤、治急性黄疸肝炎、急性胆囊炎等症，并被用
作成药消炎利胆片、胆石通胶囊及复方胆通胶囊的原料之一 ［1］.《中药大辞典》记载该品来源仅为唇形科香
茶属植物线纹香茶菜 Rabdosia lophanthoides 的全草一种， 但是目前临床上使用的溪黄草除正品线纹香茶
菜外，还有其同属植物狭基线纹香茶菜 R. Iophanthoides var. gerardianus、纤花线纹香茶菜 R. Iophanthoides
var. graciliflorus 及溪黄草 Rabdosia serra 等数种近缘种植物 ［2］.溪黄草主要含有萜类、黄酮类、酚类、氨基酸
等活性成分 ［3］.其中，黄酮类为一类生物活性较强的成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗溃疡、降血
脂、抗心律失常、抑制表皮黑色素生成、防止皮肤癌等功效［4-5］.楼小红曾对溪黄草根茎叶不同部位总黄酮的
含量进行测定［6］，但溪黄草及其近缘种中总黄酮含量的比较研究未见报道.本文作者采用微波辅助提取-分
光光度法对溪黄草及其近缘种中总黄酮的含量进行了测定， 旨在为溪黄草及其近缘种资源的合理利用提
供理论依据.
1 实验部分
1.1 实验样品
1.2 仪器与试剂
仪器：722 S分光光度计 （上海棱光技术有限公司）；KJ23C-AN2 微波炉 （广东美的微波炉制造有限公
司）；AUY-220分析天平（岛津国际贸易（上海）有限公司）；878B粉碎机（江苏省金坛市通济仪器厂）.
试剂：芦丁标准品，中国药品生物制品检定所；无水乙醇、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠，所用试剂均为
市售分析纯；实验用水为去离子水.
1.3 实验方法
1.3.1 芦丁标准溶液的制备
准确称取 120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品 10.4 mg 置于 100 mL 烧杯中，加适量 70 %乙醇溶液使之溶
解，定量转移到 50.00 mL 容量瓶中，用 70 %乙醇溶液将其定容至刻度线，摇匀，即得到 0.208 mg/mL 的芦
丁标准溶液.
韶关学院学报·自然科学
Journal of Shaoguan University·Natural Science
2013年 8月
第 34 卷 第 8期
Aug.2013
Vol.34 No.8
韶关学院学报·自然科学 2013年
1.3.2 样品溶液的制备
准确称取溪黄草及其近缘种粉末 1.000 0 g 置于聚四氟乙烯消解灌中， 加入 20 mL 70 %的乙醇溶液，
微波中火提取 4 min，冷却后过滤，收集滤液，用 70 %乙醇定容至 50.00 mL，冷藏备用.
2 结果与讨论
2.1 样品提取条件的选择
选择 4 因素 3 水平正交试验，考察了微波功率（中火、中高火、高火）、微波时间（4、5、6 min）、乙醇浓度
（65、70、75%）和料液比（1∶10、1∶15、1∶20）比对提取率的影响.实验结果表明，当微波功率为中火，微波时间为
4 min，乙醇浓度为 70%，料液比为 1∶20 时，溪黄草及其近缘种中总黄酮提取率最高，因此选择该条件为样
品的提取条件.
2.2 测定波长的选择
准确移取 5.00 mL 标准对照品液至 25 mL 比色管中，先加入 1.00 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置 6
min，再加入 1.00 mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，放置 6 min后，再加入 10.00 mL 4%氢氧化钠溶液，最后用 70%
乙醇溶液定容至 25 mL，摇匀.以试剂空白作参比，采用 722S 可见分光光度计于 450～570 nm 波长范围内进
行光谱扫描.结果表明：芦丁在 510 nm 处有最大吸收峰；准确移取样品溶液 1.00 mL，同上操作显色后进行
光谱扫描，发现样品在 510 nm处有最大吸收峰.故选择 510 nm作为最佳测定波长.
2.3 标准曲线的绘制
分别准确移取芦丁标准溶液 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL 于 50.00 mL 比色管中， 先加入
1.00 mL 5 %亚硝酸钠溶液，混匀，静置 6 min，再加入 1.00 mL 10 ％硝酸铝溶液，混匀，静置 6 min，再加入
10.00 mL 10 %氢氧化钠试液，最后用 70 %乙醇溶液定容，摇匀.放置 10 min 后，以试剂空白作参比，在
510 nm 波长处测定其吸光度 .以质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 .其线性方程为 y=
0.469 x+0.001 8，相关系数为 0.999 7.表明芦丁在 0.00~1.25 mg范围内有较好的线性.
表 1 芦丁质量与吸光度的关系
图 1 芦丁的标准曲线
2.4 溪黄草及其近缘种中总黄酮含量的测定结果
按照 1.3.2 所述的方法提取总黄酮制得样品液，精密吸取样品液 1.00 mL，按照 2.2 所述方法显色后测
定溪黄草及其近缘种样品提取液的吸光度值，并根据标准曲线方程计算样品中总黄酮的含量，结果见表 2.
质量/mg 0.00 0.208 0.416 0.624 0.832 1.04 1.25
吸光度 0.000 0.106 0.194 0.291 0.393 0.487 0.591
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第 8期
表 2 溪黄草及其近缘种总黄酮含量的测定结果（n=3）
溪黄草及其近缘种中总黄酮含量测定结果表明，4 种植物均含有丰富的黄酮类化合物， 且四者所含的
总黄酮含量差异不大.因此，民间以狭基线纹香茶菜、纤花线纹香茶菜和溪黄草作为正品溪黄草（线纹香茶
菜）入药有一定依据，至于其临床上是否能作为正品溪黄草等同使用，仍待深入研究.
2.5 方法评价
2.5.1 精密度实验
在所选的测试条件下，以某一浓度的标液为考察对象，平行测定 8 次进行作仪器稳定性考察实验，吸
光度值分别为 0.420、0.418、0.421、0.422、0.419、0.415、0.417 和 0.423，其 RSD 值为 0.64 %，表明仪器精密度
良好.
2.5.2 稳定性实验
准确移取一定量的样品溶液，按上述方法操作，测定样品溶液在室温下放置 0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h 后
的吸光度，测得其 RSD值为 1.2 %，即样品溶液在 3 h内基本稳定.
2.5.3 重现性实验
同一份样品，分别取样 5次，按最佳条件处理后测定，按上述操作方法测定其吸光度，测得其 RSD 值为
2.1 %.实验结果表明，样品的重复性较好，可满足分析的要求.
2.5.4 加标回收率实验
准确称取 6份已知总黄酮含量的溪黄草样品 1.000 0 g，加入一定量的芦丁标准对照品，按照 1.3.2所述
的方法萃取制得样品液，精密吸取样品液 1.00 mL，显色后测定其吸光度，计算平均回收率，实验结果见表 3.
表 3 加标回收率实验结果(n=6)
编号 样品名称 样品产地 质量/g 吸光度 总黄酮含量/mg.g-1
1 线纹香茶菜 清远阳山 1.000 0 0.578 30.75
2 线纹香茶菜 韶关乳源 1.000 0 0.530 28.25
3 线纹香茶菜 韶关曲江 1.000 0 0.502 26.75
4 线纹香茶菜 广西贺州 1.000 0 0.548 29.00
5 狭基线纹香茶菜 韶关南雄 1.000 0 0.541 28.75
6 狭基线纹香茶菜 韶关曲江 1.000 0 0.446 23.68
7 狭基线纹香茶菜 韶关仁化 1.000 0 0.486 25.75
8 狭基线纹香茶菜 广西贺州 1.000 0 0.514 27.25
9 狭基线纹香茶菜 广西贺州 1.000 0 0.530 28.25
10 纤花线纹香茶菜 韶关曲江 1.000 0 0.521 27.75
11 纤花线纹香茶菜 韶关仁化 1.000 0 0.516 27.50
12 溪黄草 韶关翁源 1.000 0 0.500 26.50
13 溪黄草 韶关曲江 1.000 0 0.524 27.75
14 溪黄草 韶关曲江 1.000 0 0.532 28.25
样品总黄酮含量/mg 芦丁加入量/mg 测得总黄酮含量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
30.75 30.00 61.65 103.0
99.80 1.83
30.75 30.00 60.12 97.90
30.75 30.00 61.05 101.0
30.75 30.00 59.98 97.43
30.75 30.00 60.33 98.60
30.75 30.00 61.02 100.9
黄冬兰，等：分光光度法测定溪黄草及其近缘种中总黄酮含量 33· ·
韶关学院学报·自然科学 2013年
3 结论
采用微波辅助提取-分光光度法测定了溪黄草及其近缘种中的总黄酮的含量，该方法操作简便、精密
度、稳定性良好，为溪黄草及其近缘种中总黄酮含量测定提供了一种简便可行的方法.测定结果表明，正品
溪黄草及其近缘种中总黄酮含量差异不大.因此，民间以狭基线纹香茶菜、纤花线纹香茶菜和溪黄草作为正
品溪黄草（线纹香茶菜）入药有一定依据，至于其临床上是否能作为正品溪黄草等同使用，仍待深入研究.
参考文献：
［1］肖树雄, 杨启存, 吕红. 溪黄草的来源及与混淆品的鉴别［J］.中药材, 1993,16(6):24-26.
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［5］季宇彬, 姜薇, 范玉玲, 等. 甘草黄酮的研究进展［J］.中草药, 2004, 35(9): 5-6.
［6］楼小红. 溪黄草根茎叶不同部位总黄酮的含量测定［J］.中国医药学报, 2004,19(5):316-317.
Determination of total flavones from Rabdosia lophanthoides and
its relative species by spectrophotometry
HUANG Dong-lan, CHEN Xiao-kang, XU Yong-qun
(College of Chemistry and Environmental Engineering, Shaoguan University,
Shaoguan 512005, Guangdong, China)
Abstract: Flavonoids were extracted from Rabdosia lophanthoides and its relative species by microwave-assist-
ed method. Al (NO)3-NaNO2-NaOH colorimetric method was applied to determine the total flavonoids by spec-
trophotometry with rutin as the standard. The content of the standard was well correlated to its optical density in
the range of 0.00~1.25 mg. And the addition standard recoveries were in the ranges of 97.43 %~103.0 %, the
standard deviation (n=6) of measurement was 1.83%. The method was proved to have the advantages of simple
operation, stability and good repeatability, and it would be helpful for determining the total flavonoids of Rab-
dosia lophanthoides and its relative species. The result provided scientific basis for exploiting Rabdosia lophan-
thoides and its relative species.
Key words: Rabdosia lophanthoides；relative species；microwave-assisted extraction；total flavonoids
（E D. ：Y， D）
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