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Feasibility of Fluorescent Tag on Takifugu rubripes

荧光标记红鳍东方鲀可行性研究



全 文 :·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2014年第2期
近年来,由于受过度捕捞和海洋环境恶化的影
响,渔业资源量严重衰退,世界各地均把增殖放流
作为恢复渔业资源的主要措施。为了准确评价增殖
放流效果、确定放流生物种群分布及洄游路线,通
常在放流时标志部分放流生物。目前标志方法很多,
主要分为体外和体内两大类。体外标志有切鳍、剪
棘、挂标志牌等;体内标志有荧光标记、同位素标志、
档案式标记、分离式卫星标志、生物遥测标记等方
式。在这些标志方法中,体外挂牌标志具有低费用、
易发现、好回收等优点,所以应用广泛。
红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)隶属于硬骨鱼纲、
鲀形目、鲀科、东方鲀属,在我国主要分布于黄海、
渤海和东海,是重要经济鱼类资源,是出口创汇主
收稿日期 : 2013-10-09
基金项目 :农业部渔业种质资源保护项目(农财发[2012]31 号)
作者简介 :陈雷,男,助理研究员,研究方向 :海水养殖与增殖 ;E-mail :chenlei@dlou.edu.cn
通讯作者 :刘海映,男,教授,研究方向 :渔水资源增殖 ;E-mail :hyliu@dlou.edu.cn
荧光标记红鳍东方鲀可行性研究
陈雷1  刘海映1  王秀利2  张红1  张嵩1  杨贵福1  张秀芹1
(1. 大连海洋大学 辽宁省海洋牧场工程技术研究中心,大连 116023 ;2. 大连海洋大学 水产与生命学院,大连 116023)
摘 要 : 2012 年 7 月 13 日至 10 月 1 日,注射荧光染料(Visible implant elastomer,VIE)标记体重(13.58±1.19)g、体长
(7.15±0.61)cm 的红鳍东方鲀。标记部位为左侧尾柄的上、下半部,分别记为标记Ⅰ、Ⅱ组。标记 30 d、55 d、80 d 后标记组的
存活率、体重、体长与对照组均无显著差异(P>0.05)。标记 30 d 后无论是通过紫外光源照射还是肉眼观察标记组的保持率均为
100% ;55 d 和 80 d 时的保持率均有所下降,并表现为紫外光源照射识别的保持率高于肉眼观察的,80 d 时通过紫外光源照射识别
标记Ⅰ、Ⅱ组红鳍东方鲀的荧光标记保持率均在 93% 以上,可见荧光标记红鳍东方鲀具有可行性。
关键词 : 红鳍东方鲀 荧光标记 可行性
Feasibility of Fluorescent Tag on Takifugu rubripes
Chen Lei1 Liu Haiying1 Wang Xiuli2 Zhang Hong1 Zhang Song1 Yang Guifu1 Zhang Xiuqin1
(1. Center for Marine Ranching Engineering Science Research of Liaoning,Dalian Ocean University,Dalian 116023 ;2. College of Fisheries
and Life Science,Dalian 116023)
Abstract:  Visible implant elastomer(VIE)tag was used to tag Takifugu rubripes body weight(13.58±1.19)g, body length(7.15±
0.61)cm from 13, July of 2012 to 1, October of 2012. The part of tag was the top half of left caudal peduncle in the group Ⅰ , and it was the
lower half in the group Ⅱ .The survival rate and growth were no significant differences in all groups between 30 days to 80 days(P>0.05). The
tag retention rates were 100% in the tagging groups, they fell later, and it was higher under the shine of ultraviolet than perusal. The tag retention
rates of tagging groups were more than 93% in the 80 days, so VIE was a suitable tagging method for Takifugu rubripes.
Key words:  Takifugu rubripes Fluorescent tag Feasibility
要品种,被奉为“百鱼之首”,但自 20 世纪 80 年代
中期以来,由于捕捞过度,其资源量明显下降,已
形成不了渔汛。黄海北部海洋岛渔场自 2010 年开始
增殖放流红鳍东方鲀,2011 年至今每年挂牌标志 1-2
万尾,通过跟踪调查发现标志鱼的生长速度明显低
于未标志鱼,推断挂牌标志对标志鱼的生长有一定
影响。在以往的研究中,通过对鲑[1,2]、褐鳟[3]、
凡纳滨对虾[4]、日本对虾[5]、中国对虾[6,7]注射
荧光染料(Visible implant elastomer,VIE)进行标记
发现,VIE 标记对标志生物的存活率、生长速度等
均无不良影响,且易于识别,证明了 VIE 标记上述
生物具有可行性。如果 VIE 标记对标记红鳍东方鲀
的存活率、生长速度无显著影响,且易于识别回收,
2014年第2期 113陈雷等 :荧光标记红鳍东方鲀可行性研究
那么对于红鳍东方鲀来说 VIE 标记将是一种优于挂
牌的标志方法。
1 材料与方法
1.1 材料
试验用红鳍东方鲀购于东港市祥顺渔业有限公
司,体重(13.58±1.19)g、体长(7.15±0.61)cm,
饲养于大连海洋大学的农业部北方海水增养殖重点
实验室,养殖用水槽为大连汇鑫钛有限公司生产的
循环水槽,共 6 品、18 个水槽,水槽的长、宽、高
分别为 80、45、45 cm ;养殖用水为大连黑石礁海
域经沉淀沙滤后的自然海水,自然水温 18-24℃,
pH7.9-8.2,盐度 30‰ -32‰,24 h 不间断充气,日
换水 1 次,换水量为 1/3。每日 8 :00、17 :00 投喂
粉碎的杂鱼肉,投饲率为鱼体质量的 4%。试验前暂
养 1 周。试验时间为 2012 年 7 月 13 日至 10 月 1 日,
共 80 d。
荧光标记材料、工具为美国西北海洋技术公司
(Northwest Marine Technology,INC.)生产的红色硅
胶染料及其配套注射装置。
1. 2 方法
1.2.1 试验分组 挑选规格均匀、肉眼观察健康无
病的红鳍东方鲀 180 尾,随机分为 3 组,分别为对
照组、标记Ⅰ组、标记Ⅱ组。每组均 60 尾。2012
年 7 月 13 日荧光标记。
1.2.2 荧光标记方法 将标记用红色硅胶染料按说
明书进行配制,即硅胶染料与凝固剂按 10∶1 的比
例混合均匀。将混合物吸取到 0.3 mL 的小型注射器
中,注射器在使用前用医用酒精消毒。标记Ⅰ组注
射部位为红鳍东方鲀的左侧尾柄的上半部,该部位
的皮肤为深色,如图 1 ;标记Ⅱ组注射部位为左侧
尾柄的下半部,该部位皮肤为白色,如图 2。将荧
光染料注射到皮肤与肌肉的结合部位,标记线条长
度为 10 mm 左右,方向与鱼体平行。每尾鱼标记操
作时间控制在 20 s 以内。对照组不标记。标记当天
如有死亡个体,统计即时死亡个体数量,计算即时
死亡率。
试验期间记录死亡个体的数量,标记后 30 d、
55 d、80 d 检查标记Ⅰ、Ⅱ组 VIE 标记的保持率,
并测定体重、体长。
VIE 标记的保持率(%)= 识别出 VIE 标记的
红鳍东方鲀数量/最初标记的红鳍东方鲀总数量 ×
100%。
图 1 标记Ⅰ组的红鳍东方鲀
图 2 标记Ⅱ组的红鳍东方鲀
1.2.3 统计分析 利用 SPSS13 软件分析对照组、标
记Ⅰ、Ⅱ组在标记后 30 d、55 d、80 d 的存活率、
生长情况,并对 30 d、55 d、80 d 红鳍东方鲀 VIE
标记的保持率进行统计。
2 结果
2.1 VIE标记对红鳍东方鲀存活率的影响
红鳍东方鲀标记当天标记Ⅰ组、Ⅱ组和对照组
均无死亡情况,即时死亡率为 0。标记组在饲养 30
d、55 d、80 d 后的存活率低于同期对照组,但无显
著差异,详见表 1。
表 1 试验组红鳍东方鲀的存活率(%)
组别 30 d 55 d 80 d
对照组 93.3a 88.3a 81.7a
标记Ⅰ组 90.0a 83.3a 80.0a
标记Ⅱ组 91.7a 85.0a 78.3a
同列中标有不同字母表示组间有显著性差异(P<0.05),标有相同字母者表
示组间无显著性差异(P>0.05)
2.2 VIE标记对红鳍东方鲀生长情况的影响
将标记Ⅰ组、Ⅱ组和对照组在试验养殖 30 d、
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第2期114
体长均无显著差异(P>0.05)。
2.3 红鳍东方鲀VIE标记的保持率情况
标记Ⅰ组和标记Ⅱ组在试验养殖 30 d、55 d、
80 d 后,通过紫外光源照射、肉眼两种方式进行观察。
30 d 时标记组的保持率无论是通过紫外光源照射还
是肉眼观察均为 100%,只是个别标记鱼的标记线条
有中断现象。55 d 和 80 d 的保持率有所下降,并表
现为通过紫外光源照射识别的保持率高于肉眼观察。
试验过程中,标记Ⅰ组与标记Ⅱ组 30 d 时的保持率
均为 100%,之后标记Ⅰ组的保持率始终高于标记
Ⅱ组,肉眼观察识别的保持率(表 3)差异更明显,
55 d 相差 5.8%,80 d 相差 13%,而紫外光源照射分
别相差 1.9%、2.2%。
表 3 肉眼观察的红鳍东方鲀 VIE 标记的保持率(%)
组别 30 d 55 d 80 d
标记Ⅰ组 100(100) 98.0(96.0) 95.8(89.6)
标记Ⅱ组 100(100) 96.1(90.2) 93.6(76.6)
3 讨论
3.1 VIE标记对红鳍东方鲀存活和生长的影响
标记对动物生长和存活率有无影响是衡量标记
适用性的一项重要指标。通过对红鳍东方鲀标记后
的即时死亡率、试验养殖期间的存活率、体重、体
长进行统计,发现 VIE 标记后红鳍东方鲀的即时死
亡率为 0,标记组在试验养殖 30 d、55 d、80 d 后的
存活率虽然低于同期对照组,但无显著差异 ;标记
组与对照组的体重、体长在试验过程中、试验结束
时均无显著差异。可见,VIE 标记对红鳍东方鲀的
存活和生长无显著影响,相对于挂牌标记,VIE 标
记对红鳍东方鲀的损伤较小。
3.2 红鳍东方鲀VIE标记的保持率情况
标记的保持率是评价标记适用性的另一项重要
指标。VIE 标记日本对虾的试验结果表明红色的效
果最好[5],所以本研究选用红色荧光染料标记红鳍
东方鲀。VIE 标记 30 d 后标记组的保持率无论是通
过紫外光源照射还是肉眼观察均为 100%,只是个
别标记鱼的标记线条有中断现象。55 d 和 80 d 的保
持率无论是通过紫外光源照射还是肉眼观察均有所
下降,这可能与随着标记鱼的生长,皮肤逐渐增厚、
透明性降低有关。55 d、80 d 时标记线条出现明显
的位置移动现象,且中断现象较 30 d 时有加剧趋势,
这也与鱼体的生长有关。
VIE 标记红鳍东方鲀养殖 80 d 后,通过紫外光
源照射识别标记Ⅰ组与标记Ⅱ组红鳍东方鲀的标记
保持率均在 93% 以上,虽然标记线条有明显的位置
移动、中断现象,但标记仍然清晰,易于发现。这
一结果与 VIE 标记褐鳟[3]、红鲷[8]、蓝鲶鱼[9]、乌
尔鳇[10]等鱼类的研究结果一致。因此 VIE 标记红
鳍东方鲀是可行的,相比损伤较大的挂牌标志,VIE
标记无疑为红鳍东方鲀标志放流提供了更佳的方法。
本次试验中 VIE 标记两种不同部位即标记Ⅰ组、Ⅱ
组,标记 80 d 后通过紫外光源照射识别的保持率仅
相差 2.2%,但肉眼观察两组之间相差 13%,因此
VIE 标记红鳍东方鲀的最佳位置是尾柄的上半部,
即深色皮肤部位,这样有利于增殖放流时准确回收
标志鱼。分析原因是,虽然尾柄上半部的皮肤颜色
较深,但该部位的皮肤透明性要好于尾柄下半部的
白色部位,这与乌尔鳇[10]VIE 标记时选择透明度相
对较高的吻部腹面作为标志位置相似。通过本次试
验发现,无论是标记尾柄上半部还是下半部,在试
表 2 试验组红鳍东方鲀的生长情况
组别 指标 0 d 30 d 55 d 80 d
对照组 体重(g) 13.47±1.15a 23.90±2.05a 39.47±3.54a 61.32±5.65a
标记Ⅰ组 13.77±1.22a 23.38±2.11a 39.18±4.01a 60.92±6.17a
标记Ⅱ组 13.51±1.11a 22.83±2.01a 38.96±3.50a 60.54±5.48a
对照组 体长(cm) 7.11±0.59b 9.06±0.78b 11.39±1.01b 13.41±1.31b
标记Ⅰ组 7.20±0.61b 9.10±0.82b 11.43±1.03b 13.27±1.21b
标记Ⅱ组 7.14±0.62b 9.13±0.85b 11.31±1.09b 13.25±1.28b
同一指标同列中标有不同字母表示组间有显著性差异(P<0.05),标有相同字母表示组间无显著性差异(P>0.05)
55 d、80 d 后的体重、体长进行单因素方差分析, 结果(表 2)显示,标记Ⅰ组、Ⅱ组和对照组的体重、
2014年第2期 115陈雷等 :荧光标记红鳍东方鲀可行性研究
验中、后期通过紫外光源照射识别标记鱼的保持率
均高于肉眼观察,如果在夜间或黑暗处通过紫外光
源照射识别,VIE 标记更加清晰,因此如果在红鳍
东方鲀增殖放流中采用 VIE 标记,建议在夜间或黑
暗处通过紫外光源照射进行回捕鱼识别。VIE 标记
将不仅可以应用于标志放流,还可应用于红鳍东方
鲀的育种、养殖过程中的家系识别。
中国对虾荧光标记 120 d[7]、210 d[11]后均具
有较高的保持率,而本次研究仅探讨了 VIE 标记红
鳍东方鲀在 80 d 内的保持率情况,更长时间后的保
持率高低还需进一步试验研究。
4 结论
VIE 标记红鳍东方鲀具有可行性,而且标记的
最佳部位为尾柄上半部的深色皮肤区域。
参 考 文 献
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(责任编辑 李楠)