全 文 ：第 2 5卷
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2 5
第 3期
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3
山 东 大 学 学 报 (自然科学报 )
O U R JN人 L O F SH N A DO N GU N I VE R SI T Y
1 0 00年 。月
Se P
.,
199 0
石防风原生质体表面 C o n A 受体的
荧 光 标 . 记
戴 群
(生 物 系 )
根据生物膜流动镶嵌模型 , 生物膜的基本结构是功能蛋白质分子浮动镶嵌于类脂双
分子层中 。 为了研究蛋白质分子与类脂双分子层的相互关系 , P Oo 等人首先采用 F I T C -
co
: A标记 C 。 , A 受休的方法 , 测量了蟾赊胚肌细胞质膜上蛋白质分子在膜中的测向扩散
运动 t ’ 】。 随后 , 相同或类似的方法普遍用于动物细胞膜性质及与微管、 微丝的 关 系 研
究 。 本文将此法用于石防风原生质体 , 为研究植物细胞质膜提供一种有效的方法 。
1 材料和方法
石防风 ( P e u ce d a , : m t e。西i心无a e e um ( F i s c h . ) F i s c h . e x T u , · c : . ) 原生质休 获取
方法见文献〔2〕。 F I T C一 C。 。 A制备方法见文献〔3〕。 制成的 F I T C 一 c on A用洗涤液按 1 , 50
稀释 。 洗涤液组成为: o . 4m o l / L 甘 露 醇 、 0 . z m o l / L K C I 、 4 0 m o l / L C a C I : ,
PH > 7
.
0
.
co
, A受体荧光标记的具体方法如下: 在洁净的载玻片上的沟槽 ( 长 5 . oc m , 宽 1 . 0
。 nI , 深 0 . 25 nt m , 由盖玻片和载玻片用环氧树脂胶粘制而成 ) 中 , 放上数滴。 . 1% P ol y -
L
一
L y s i n e ( 分子最 3 0~ 7 o K D , S`g m a ) , 数分钟后 , 吸干 P o ly 一 L 一 L y s i n e , 滴上原 生
质休惫浮液 , 盖上盖玻片 , 用凡士林封好两侧 , 静置半小时 ; 用上述洗涤液清洗两追 ,
再用 F I T C 一 co 拄A溶液标记 15 分钟 , 用洗涤液清洗两遍 , 去除 F I T C 一 Con A溶液 , 在荧光
显橄价下观察 ( 魂g o n m , 5 2 o n m ) 和照像 。
2 结果和讨论
从照片 1中可以看出 , 荧光均匀分布在原生质体表面 。 在荧光蛋自标 记 细 胞 组 分
的方法中, 常存在的问题是非特异性染色。 为了检验是否存在非 特 异 性 染 色 , 用 含
收稿日期 : 10 8 5一 12一 13
翻 1习朋湘期 1 |.
4时 山 东 大 学 学 报( 自然科学版) 第 25卷
。 . m l l o/ LD一葡萄糖的洗涤液清洗原生质体 , 再用 F I T c 一 c o n A标记 , 结果是原生质 休
表面几乎没有荧光 , 见照片 2 。 这说明 F I T C 一 C on A标记是特异的 , 因为D 一 葡 萄 糖 与
C ` n A专一结合 , 竞争性抑制 F I T C 一 C on A 与质膜上 C on A 受休的结合 [ ` 】。
实验中有几点很霞票 。 首先 , 载玻片要洁净 , 否则 P o l y 一 L 一 L郑 in e很难附着玻璃表
面而粘着原生质体占{其欢` 整个实验过程都应小心操作 , 特别是洗涤液倩洗原生质体 ,
否则很难留存原生质体做荧光观察 。 培养基的 p H ( 5 . 6一 5 . 8 ) 会使 F I T C 一 C ;oI A 凝集沉
淀而失效 , 所以洗涤液的 p H是 7 . 。 。 实验中要避免掺入各种与C on A能特异结合的物 质 ,
如 D 一甘露糖 、 D 一葡萄糖及其衍生物 。 最后 , F I T C 一 C on A标记的原生质休在荧光 显 微
镜下观察不能太久 , 一般半小时后荧光明显减弱 。
总之 , 用于动物细胞质膜研究的 F I T C 一 C 。 。 A标记质膜上 C。 ; A 受休的方法也可以用
来研究植物细胞质膜的有关性质 。
参 考 文 献
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L a t e r a l e l e C t r o p h o r e s i “
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B i o l, 1 9 7 8
, 7 6
: 4 8 3~ 5 0 1
李忠谊 , 陈惠民 . 石防风原生质体再生植株 . 植物学报 , 1 9 7 8 , 幼 : 50 ~ 5圣 -
T k a e z J S
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形和 n a n 「 i n y e二七 e e l l s w i t h f l u o r e s e e宜n一 e o n j u g a t c d C o , z e e n a , a /i。 ·A . I B a c ,
1马2 1一丫4 05 :
`工一 5 ,
孙豚 朱政 , 莫汉庆 . 凝集素 . 北京 : 科学出版社 , 1 9 8 6 .
O自产0口
照片 r F IT C · oC n 人标记的石防风原生质体。
左 . 暗视野中 F I T C · C o n A的荧光 .
右 . 亮视野中的原生质体 。
第 3期 戴群 :石防风原生质林表面 c on人受体的荧光标记 4 Qq
照片 2用含。 . 1脚 lLD·葡萄城洗涤液请洗后 , F [T C , c o n A 标记的石防风原生质体 .
左 : 晴视野中F I T C 一 C o n A 的荧光 .
右 : 亮视野中的原生质体 .
SD 一 2 黄单胞菌多糖通过鉴定
我校微生物研究所研制成功的 S D一 2 5 ( 粉剂 ) 及 S D一 ZL (液体 ) 两种制剂于 1 9 9 0
年 6 月通过鉴定。 这项成果是 “ 七五 ” 国家科技攻关项目 “ 生物聚合物提高采收率的研
究 ” ( 75 一14 一时一 03 ) 课题的一部分 。 经测试证明两种制剂除提粘 、 剪切稀释作用 、温
度影响 、 p H的影响等数据与国外产品相似外 , 其粘度稳定性 、 耐盐性均优于美国 一 的同
类产品。 一 在 85 ℃保温一个 月后的实验条件下 , S D一 2 5粘度比美国 K e cl 。 产品高二倍 ,
s D一 ZL比美国 F` o e o n 、 8 0 0高 2 0% 。 当矿化度为 1 0%时 , K e` e o和下`“ e o n产品的塑夔望降约 30 % , 而 S D一 2 5 , S D一 Z L的粘度则上升 8 %左右 。 、` 一田川行 认
目前国内外生产的黄单胞菌多糖均不耐温 , 该制剂的研制成功对于高温高盘油田的
强化采油有很好的应用价值 。
( 陈冀青 )