全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第8期
收稿日期 : 2013-02-23
基金项目 : 国家自然科学基金项目（31001106）, 上海市科委“科技创新行动计划”基础研究重点项目（10JC1418600）, 中央级公益性科研
院所基本科研业务费面上项目（2011M05）
作者简介 : 徐真 , 女 , 硕士研究生 , 研究方向 : 水产基因组学与生物技术 ; E-mail: xuzhen2358@163.com
通讯作者 : 马凌波 , 男 , 研究员 , 研究方向 : 水产生物技术与遗传育种 ; E-mail: malingbo@vip.sina.com
拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因的克隆、组织表达及作为
内参的可靠性分析
徐真1，2  马洪雨1  马春艳1  冯娜娜1，2  李新苍1  
李淑娟1，2  蒋伟1，2  马凌波1
（1. 中国水产科学研究院 东海水产研究所 农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室，上海 200090 ；
2. 上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306）
摘 要 ： 采用 RT-PCR 和 RACE 技术，从拟穴青蟹肌肉组织中鉴定出 β-actin 基因的 cDNA 全序列。序列分析结果表明，拟
穴青蟹 β-actin 基因全长 1 434 bp，包括完整的开放阅读框 1 131 bp、5 端非翻译区 60 bp 及 3 端非翻译区 243 bp。该基因编码 376
个氨基酸，蛋白分子量为 41.79 kD，等电点为 5.205。同源性比较表明，该基因与其它物种具有高度的氨基酸保守性。聚类分析
表明，拟穴青蟹与百慕大陆蟹的亲缘关系最近。荧光定量 PCR 分析表明，β-actin 基因在拟穴青蟹血液、心脏、肝胰腺、胃、鳃、
肌肉、精巢、结缔组织组织中均有表达，在肌肉组织中的表达量最高，在胃、精巢、血液、肝胰腺、心脏、鳃组织中的表达量依
次降低，在结缔组织中的表达量最低。由于该基因在拟穴青蟹不同组织中的表达量存在明显的差异，因此不适用于作为内参基因
使用。
关键词 ： 拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因 基因克隆 组织表达 内参
Cloning and Tissue Expression of β-actin in the Mud Crab（Scylla
paramamosain）and Its Utility as an Endogenous Control
Xu Zhen1，2 Ma Hongyu1 Ma Chunyan1 Feng Nana1，2 Li Xincang1
Li Shujuan1，2 Jiang Wei1，2 Ma Lingbo1
（1. Key Laboratory of East China Sea and Oceanic Fishery Resources Exploitation，Ministry of Agriculture，East China Sea Fisheries Research
Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shanghai 200090 ；2. College of Fisheries and Life Science，
Shanghai Ocean University，Shanghai 201306）
Abstract:  β-actin gene is a member of the actin family，mainly involved in maintaining cell structure，movement and physical
activity in cell division, and plays an important role in quantitative genetic experiments. In this study, RT-PCR and RACE techniques were
used to amplify the cDNA full-length of β-actin in the mud crab（Scylla paramamosain）. Sequence analysis showed that the full cDNA of
β-actin gene was 1 434 bp long, including a 1 131 bp open reading frame（ORF）, a 83 bp 5 untranslated region（5 UTR）and a 243 bp 3
untranslated region（3 UTR）. The ORF encoded 376 amino acids residues with a predicted molecular mass and PI of approximately 41.79
kD and 5.205, respectively. Multiple alignment with homologous amino acid residues was performed and it indicated a high similarity among
the 18 species. Scylla paramamosain was more closely related to Gecarcinus lateralis than any other species according to the neighbor joining
（NJ）phylogenetic tree. Real-time PCR results indicated that β-actin gene expressed in all eight different tissues including blood, heart, liver,
stomach, gill, muscle, testis and connective tissue, with the highest expression in muscle and lowest expression in connective tissue. Owing to the
significant differences of RNA expression among these tissues, this gene is not suitable used as an endogenous control.
Key words:  Scylla paramamosain β-actin gene Gene cloning Tissue expression Endogenous control
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第8期106
真核生物肌动蛋白家族由 6 个亚型组成 ：α 和
γ 平 滑 肌、α 心 肌、α 骨 骼 肌、β 和 γ 细 胞 浆 肌 动
蛋白。β-肌动蛋白（β-actin）广泛存在于真核生物
非肌细胞中，是构成细胞骨架和肌小节的主要成
分，几乎参与了真核细胞的所有生理过程，如细胞
分裂、染色体运动、细胞器运动、细胞激化、胞
质流动等。β-actin 蛋白由多个基因组成的基因家
族编码，包括 375-377 个氨基酸残基，分子量在
42 kD 左右［1，2］。β-actin 基因的氨基酸编码区高度
保守，酵母和兔子肌肉的 β-actin 氨基酸同源性达
88%，而原鸡、鼠、人的 β-actin 氨基酸序列相似
性达 100%。此外，β-actin 基因还具有 mRNA 表达
量高、稳定，几乎不随年龄产生变化的特点。到目
前为止，学者们已经报道了多个水生动物的 β-actin
基 因， 如 西 伯 利 亚 鲟（Acipenser baerii）［3］、 罗 氏
沼 虾（Macrobrachium rosenbergii）［4］、 凡 纳 滨 对
虾（Litopenaeus vannamei）［5］、 海 胆（Lytechinus
pictus）［6］、牡蛎（Crassostrea gigas）［7］等。
肌动蛋白通常被分为肌肉型和胞质型两种类型，
胞质型 β-actin 基因能在细胞中持续衡量的表达，因
而在检测基因表达的半定量试验中常被用作内参基
因及进行分子系统进化等方面的研究［8］。常用的内
参基因包括 GAPDH、18S rRNA、28S rRNA 和 β-actin
等，β-actin 基因是应用最为广泛的一种［9］。近年来
的研究表明，β-actin 基因有时也会受到生理状态或
者环境的调控而出现表达水平的差异［10， 11］。因此，
在采用 β-actin 基因作为分子内标开展试验研究时，
必须首先评价其在该物种中的表达特征。
拟穴青蟹（Scylla paramamosain）属于节肢动物
门（Arthropoda）、甲壳纲（Crustacea）、十足目（Dec-
apoda）、短尾亚目（Brachyura）、梭子蟹科（Protuni-
dae）、青蟹属（Scylla）。在我国主要分布在浙江、福
建、台湾、广东、广西和海南沿海水域［12］。由于拟
穴青蟹个体大、生长快、肉味鲜美、营养丰富，因
此已成为我国重要的海水养殖蟹类之一［13，14］。有
关拟穴青蟹的组织学［15，16］、种群遗传学［13，17］、人
工育苗和养殖技术［18，19］方面的研究已有诸多报道，
但在重要经济性状相关基因挖掘与利用方面的研究
还较少［20-24］。因此，有必要开展拟穴青蟹 β-actin 基
因克隆、表达谱特征的研究，以便为后继的功能基
因组学的研究奠定基础。
本研究采用 RT-PCR 及 RACE 技术克隆拟穴青
蟹的 β-actin 基因，分析其序列特征，并进行系统发
育分析 ；通过荧光定量 PCR 方法［25］，分析 β-actin
基因在肌肉、心脏、血液等 8 个组织中的表达特征，
探讨其作为内参基因进行相关研究的可行性。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品采集 拟穴青蟹采自中国水产科学研究
院东海水产研究所海南琼海养殖基地。试验蟹在实
验室中暂养 3 d 后，选用健康、附肢完整的个体进
行试验。
1.1.2 主要试剂 总 RNA 抽提试剂 RNAiso Reagent、
SYBR® Premix Ex TaqTMⅡ（Perfect Real Time）、pMD-
19-T Vector、PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis
Kit（50 次）和 DNA Marker DL2000 均为 TaKaRa 公
司 产 品 ；SmartTM Race cDNA Amplification kit 购 于
Clontech 公司 ；Taq DNA Polymerase、大肠杆菌感受
态细胞 DH5α 购于天根有限公司 ；SanPrep 柱式 DNA
胶回收试剂盒以及其他试剂均购于上海生工生物工
程有限公司。
1.2 方法
1.2.1 总 RNA 的提取 选取 4 只拟穴青蟹进行活体
解剖，迅速取出肌肉、肝胰腺、胃、心脏、血液、精巢、
鳃、结缔组织共 8 个组织，放入含有 RNAiso reagent
试剂的 EP 管（RNAase free）中，室温静置 3 min，
用剪刀剪碎，匀浆离心后，将上清液加到 1.5 mL 离
心管中，之后经过氯仿抽提，异丙醇沉淀，75% 酒
精清洗，最后用 RNAase free 水溶解 RNA。通过琼
脂糖凝胶电泳检测 RNA 质量。
1.2.2 cDNA 第一链合成 以拟穴青蟹的肌肉 RNA
为模板，按照 PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis
Kit 试剂盒提供的方法进行 cDNA 第一条连的合成。
PCR 反应体系 ：Oligo dT Primer 1 μL、dNTP Mixture
1 μL、 模 板 RNA 1.5 μL，ddH2O 补 足 10 μL，65 ℃
孵育 5 min 后，至于冰上迅速冷却 3 min ；向上述
10 μL 体系的反应液加入 5×PrimeScript Ⅱ Buffer 4
μL、Rnase Inhibitor 0.5 μL、PrimeScript Ⅱ Rnase 1
μL，Rnase Free dH2O 补足 20 μL。PCR 反应程序为 ：
2013年第8期 107徐真等 ：拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因的克隆、组织表达及作为内参的可靠性分析
30℃ 10 min，42℃ 5 min，95℃ 5 min。反转录产物
置于 -20℃保存。
1.2.3 引物设计 β-actin 基因的开放阅读框序列通
过对拟穴青蟹的转录组测序获得。在 β-actin 基因两
端分别设计 1 条引物 actin-S 和 actin-A，扩增 β-actin
基因的中间片段并重测序，并用于后续的 RACE 试
验。设计引物 actin-QS 和 actin-QA，用于实时荧光
定量 PCR 试验，并检测该基因在不同组织中的表达
特征。试验所需引物均由上海生工生物工程有限公
司合成（表 1）。
表 1 拟穴青蟹 β-actin 基因克隆及检测表达量所用的引物
及序列
引物名称 序列（5-3） 用途
UPM-long CTAATACGACTCACTATAGGGC-
AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT
RACE
UPM-short CTAATACGACTCACTATAGGGC RACE
actin-S TCAGGATACAGTAAGCTTATAT-
CTG
基因克隆，
3RACE
actin-A GAATCCTAACTCGTCTTTTAAA-
TAT
基因克隆，
5RACE
actin-QS CTGACTGCCTACCTCACCAAG RT-PCR
actin-QA TGCCGACAGATTCCATACCC RT-PCR
Sp18S-RT-F GTGCCCTTCCGTCAATTCCTT 内参基因
Sp18S-RT-R GACGCTAGAGGTGAAATTCTTGGA 内参基因
1.2.4 β-actin 基因 RT-PCR 和 RACE 反应 RT-PCR
反应以 actin-S 和 actin-A 为引物，以肌肉 cDNA 为模
板。反应程序为 ：94℃ 5 min ；94℃ 30 s，57℃ 50 s，
72℃ 50 s，30 个循环 ；72℃ 7 min。扩增产物经琼脂
糖凝胶电泳检测后送赛音生物技术（上海）有限公
司测序。
RACE 反 应 按 照 Clontech 公 司 的 SmartTM Race
cDNA Amplification kit 试剂盒使用说明书介绍的方法
进行。5 RACE 的引物为试剂盒提供的通用引物和
特异性引物 actin-A，3 RACE 的引物为试剂盒提供
的通用引物和特异性引物 actin-S。Touch-down PCR
反应程序如下 ：94℃ 5 min ；94℃ 40 s，60℃ 40 s，
72℃ 90 s，10 个循环，其中每个循环降 0.5℃；然后，
94℃ 40 s，57℃ 40 s，72℃ 90 s，30 循环 ；最后在
72℃延伸 10 min。RACE 产物通过琼脂糖凝胶电泳
进行检测。
1.2.5 β-actin 基因 RACE-PCR 扩增产物的克隆、测
序 将目的基因条带割胶、回收、纯化，连接到
pMD19-T 载体上，转化至大肠杆菌 DH5α 感受态细
胞中，经 PCR 反应鉴定出目的克隆子，送上海杰李
生物公司测序。
1.2.6 β-actin 基 因 的 生 物 信 息 学 分 析 利 用
DNAStar 软件中的 SeqMan 程序去除序列两端的载
体序列并进行拼接，得到 β-actin 基因 cDNA 序列全
长。采用 NCBI 的 BLAST 程序对核酸序列进行比对，
以 确 定 是 否 为 目 的 基 因（http ：//blast.ncbi.nlm.nih.
gov/Blast/）。使用在线工具 ORF Finder（http ：//www.
ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html）鉴定序列的开放阅读
框，并翻译为氨基酸序列［26］。最后，将该基因提交
至 GenBank 数据库中，登录号为 KC795683。
从 GenBank 数据库中下载了以下物种的 β-actin
序列 ：拟穴青蟹（Scylla paramamosain，GU992421 ；
另外一种 β-actin 基因）、美洲龙虾（Homarus ameri-
canus，ACI23565）、 百 慕 大 陆 蟹（Gecarcinus latera-
lis，AAL40077）、斑节对虾（Penaeus monodon，AA-
C78681）、中国对虾（Fenneropenaeus chinensis，AAX-
63904）、 罗 非 鱼（Oreochromis mossambicus，BAA-
90689）、石斑鱼（Epinephelus coioides，ADG29140）、
鲑 鱼（Salmo salar，ACH70895）、 果 蝇（Drosophila
melanogaster，NP_524367）、虾夷扇贝（Mizuhopecten
yessoensis，ABG78596）、墨鱼（Sepia officinalis，CC-
G28026）、海胆（Tripneustes gratilla，AAB31965）、秀
丽线虫（Caenorhabditis elegans，CAA34718）、中华绒
螯蟹（Eriocheir Sinensis，ADH43622）、蓝蟹（Callin-
ectes sapidus，AAY85815）、凡纳滨对虾（Litopenaeus
vannamei，AF300705）、太平洋鳌虾（Pacifastacus le-
niusculus，ABI34073）、日本对虾（Marsupenaeus jap-
onicas，ADG45297）。
采用 DNAMAN 软件对上述物种的 β-actin 氨基
酸序列进行多重比对，并使用 MEGA 4.0 软件构建
NJ 系统进化树。运用在线软件 ExPASy（http ：//au.
expasy.org/drug_design）分析蛋白质的分子量和等电
点。 使 用 在 线 软 件 SignalP 4.1 Server（http ：//www.
cbs.dtu.dk/services/SignalP/） 预 测 信 号 肽。 使 用
PSORT II Prediction 软 件（http ：//psort.hgc.jp/form2.
html）预测蛋白质亚细胞定位点。
1.2.7 β-actin 基因的组织表达分析 以 Sp18S 为内
参基因［27］，actin-QS 和 actin-QA 为特异性引物，在
ABI Stepone Plus 定量 PCR 仪上进行荧光定量 PCR
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第8期108
试验。反应体系为 ：cDNA 模板 2 μL，SYBR Primix
Ex Taq 10 μL，ROX Reference Dye 0.4 μL，引物 actin-
QS 和 actin-QA 各 0.4 μL，dH2O 6.8 μL。 采 用 2
-ΔΔCt
法进行分析，得到 β-actin 基因在 8 个组织中的相对
表达量。
2 结果
2.1 β-actin基因的RT-PCR 和RACE的扩增结果
采用浓度为 1.5% 的琼脂糖凝胶电泳检测 RT-
PCR 产物，结果（图 1）显示在 1 000 bp 和 2 000 bp
之间有单一明亮的条带，与预期片段大小一致。测
序表明，该片段长度为 1 066 bp。
采用 1.5% 的琼脂糖凝胶电泳检测 5 RACE 及
3RACE 产物（图 2），经割胶回收、克隆、测序后发
现，其长度分别为 1 257 bp 和 1 304 bp。
氨基酸，其中包括 69 个酸性氨基酸（D、E、N、Q）、
45 个碱性氨基酸（K、R、H）、127 个疏水氨基酸（A、I、
L、F、W、V）和 90 个极性氨基酸（N、C、Q、S、T、Y）。
预测蛋白质分子量为 41.79 kD，等电点为 5.205。拟
穴青蟹 β-actin 基因不存在信号肽，且在细胞中定位
于细胞质内（52.2%）。序列分析发现拟穴青蟹 β-actin
氨基酸具有两个核输出信号位点（NES1，172-182 ；
NES2，212-223），为亮氨酸丰富区域。
利用 DNAMAN 软件将拟穴青蟹的 β-actin 的氨
基酸序列与其他 7 种水产动物的 β-actin 基因的氨基
酸序列进行多序列比对。结果（图 4）显示，所有
比对蛋白都有高度保守的氨基酸序列，序列特征为：
KAGFAGDDAPRAVFPSIVGRPRHQGVMVGMGQKD、
AKAGFAGDDAPRAVFPSIVGRPRHQGVMVGMGQ-
KD、PAMYVAIQAVLSLYASGRTTGIVLD、TTAERE-
IVRDIKEKLCYVALDFE、SSLEKSYELPDG、IKIIAP-
PERKYSVWIGGSILASLSTFQ 。
拟穴青蟹 β-actin 的氨基酸序列与拟穴青蟹中已
报道的另外一种 actin 氨基酸序列比对结果（图 4）
表明，这两种 actin 蛋白存在 Ser7、Val18、Ala53、
Ile77、Thr156、Asn229 等 33 个氨基酸残基的差异 。
采用 MEGE 4.0 软件构建了基于 β-actin 基因氨
基酸序列的 18 种水生动物的 NJ 系统进化树（图 5）。
系统进化树分为两大支，其中拟穴青蟹与百慕大陆
蟹、美洲龙虾、斑节对虾的亲缘关系较近，紧密聚
为一支 ；其它物种聚为另外一支。而拟穴青蟹中已
报道的另一种肌动蛋白基因与本研究报道的肌动蛋
白基因距离最远。
2.3 拟穴青蟹β-actin基因的组织表达分析
以 18S 为内参基因，采用荧光定量 PCR 检测了
拟穴青蟹 β-actin 基因在血液、心脏、肝胰腺、鳃、胃、
肌肉、结缔组织、精巢共 8 个组织中的相对表达量。
结果（图 6）显示，该基因在肌肉中的表达量最高 ；
其次为胃、精巢和血液 ；在心脏、鳃和结缔组织中
的表达量最低。由于 β-actin 基因在拟穴青蟹不同的
组织中的表达量存在显著差异，故该基因不适合作
为内参基因开展其它基因的相对表达量研究。
3 讨论
本研究从拟穴青蟹转录组 454 高通量测序文
2000
bp
M 1
1000
750
500
图 1 β-actin 基因 RT-PCR 电泳结果
2000
bp
M 1 2
1000
750
500
M ：DNA Marker ；1 ：5RACE ；2 ：3RACE
图 2 β-actin 基因 3 RACE 和 5 RACE 电泳结果
2.2 β-actin基因的生物信息学分析
对所获得的序列进行拼接，得到拟穴青蟹 β-actin
基因 cDNA 序列全长，为 1 434 bp，包括完整开放阅
读框 1 131 bp，5 端非翻译区 60 bp，3 端非翻译区
243 bp。3UTR 包含有 19 bp 的 poly（A）尾，在 poly
（A）上游 10 bp 处可见保守的加尾信号序列 AATA-
AA。使用 ORF Finder 分析发现（图 3），起始密码子
ATG 位于第 61-63 位核苷酸，终止密码子位于第 1
189-1 191 位核苷酸。 β-actin 基因能够编码 376 个
2013年第8期 109徐真等 ：拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因的克隆、组织表达及作为内参的可靠性分析
1
61
121
181
241
301
361
421
481
541
601
661
721
781
841
901
961
1021
1081
1141
1201
1261
1321
1381
方框表示起始密码子 ；星号（*）表示终止密码子 ；阴影部分表示多聚核苷酸加尾信号 ；下划线表示核输出信号（NES）
图 3 拟穴青蟹 β-actin 基因的全长 cDNA 及其预测的氨基酸序列
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第8期110
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81
81
81
81
81
81
82
81
163
163
163
163
163
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163
245
245
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245
245
245
246
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327
327
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327
328
327
376
376
376
376
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377
376
mc d l v d n g a g k a gf a gd d a p r a vf p a i v g r p r n q g vmv g mg q x d y v g q a x r g i l t l ky p i e h g i t nwd
d me k i w h h f yn e l r a p e e p l l t e a p l n px a n r e x mt q i m e f w p a my v a i q a v l a l y a a g r t t g i v l d g d gv h
v p i y e g y l p h a i r l d l a g r d l t y l k i t e r g y f t t a e r e i v r d i k e k l c y v a l d f e e m a a a a l e k g y e l p d
g i t i g n e r f r c p e l f q p g f g me g g i h e t y n g i m c d d i r k d l a n v l a g t t m p g i a d r mq k e i t l a p t x
i k i i a p p e r k yg v w i g g a i l a g l g t f q mw i k e y d e g p i v h r x c f
拟穴青蟹 2 为拟穴青蟹中已报道的另外一种 β-actin 基因
图 4 拟穴青蟹 β-actin 氨基酸序列与其它物种 β-actin 氨基酸序列的比对结果
库 中 鉴 定 了 β-actin 基 因 部 分 序 列， 采 用 RT-PCR
和 RACE 技术克隆得到了该基因的全长 cDNA。该
β-actin 基因与同物种中的另外一种 β-actin 基因［28］
相比 ：首先，两者的 ORF 长度相等，均为 1 131 bp，
且均编码 376 个氨基酸，但二者之间存在 33 个氨
基酸残基的差异，氨基酸序列的同源性为 91.22% ；
其次，本研究中的 β-actin 基因的 3 UTR 为 243 bp，
而前者的 3 UTR 为 139 bp ；第三，聚类分析表明，
二者之间的遗传距离较大，甚至大于同其它物种的
β-actin 基因之间的距离。由此可见，本研究获得的
β-actin 基因与已报道的拟穴青蟹 β-actin 基因为不同
的基因。
采用该基因的氨基酸序列与 GenBank 中已登录
的其它动物的 β-actin 基因的氨基酸序列比对发现，
其与百慕大陆蟹同源性高达 95%，与美洲龙虾、鲑
鱼、中华绒螯蟹、果蝇等各种生物之间的同源性都
2013年第8期 111徐真等 ：拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因的克隆、组织表达及作为内参的可靠性分析
在 70%-94% 之间。这种高度的保守性与 Perler 等［29］
的研究结果相一致，即生物肌动蛋白在生物进化过
程中受到较大的选择压力，在生物体生命过程中执
行着重要的生物学功能，因此具有高度的保守性。
基于氨基酸序列构建的系统进化树表明，拟穴青蟹
与美洲龙虾、百慕大陆蟹、斑节对虾、中国对虾亲
缘关系较近，聚为同一支。
由于 β-actin 基因在真核生物中的稳定表达，因
此其被广泛用作基因表达的相对定量试验的内参基
因［3，30］。然而，近期的研究表明，β-actin 在不同的
外界环境或者生理条件下，其表达水平存在显著的
差异［31，32］。Sarmiento 等［33］ 对广温性的鲤进行了
冷适应机制的研究，结果发现 β-actin 基因的表达水
平在冬季和夏季存在显著性差异 ；Barrallo 等［34］利
用 Northern blot 和组织原位杂交技术对斑马鱼 β-actin
基因的表达进行研究时发现，β-actin 基因在南欧神
经细胞增殖时具有过高表达的现象。此外，杨桂梅
等［35］在牙鲆发育过程中，也发现 β-actin 基因表达
水平的明显波动。本研究发现，拟穴青蟹 β-actin 基
因在肌肉组织中的表达量显著高于其它组织，而在
血液、心脏、肝胰腺、鳃及结缔组织中的表达量较
为一致，可见该基因不适宜作为内参基因用于检测
基因表达的半定量试验中。因此，建议学者们在开
展拟穴青蟹基因表达研究时，尽量采用 18S rRNA 基
因或其它适宜的基因作为内参基因。
4 结论
克隆了拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因的 cDNA 全序
列，其氨基酸序列与百慕大陆蟹的同源性最高。该
基因在拟穴青蟹血液、心脏、肝胰腺、胃、鳃、肌肉、
精巢、结缔组织组织中均有表达，在肌肉组织中的
表达量最高，在结缔组织中的表达量最低。该项目
适用于作为该物种的内参基因使用。
参 考 文 献
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0.01
97
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92
100
79
67
31
100
63
S. paramamosion2
Marsupenaeus japonicus
Pacifastacus leniusculus
Litopenaeus vannamei
Callinectes sapidus
Eriocheir Sinensis
Caenorhabditis elegans
Tripneustes gratilla
Sepia officinalis
Mizuhopecten yessoensis
Drosophila melanogaster
Salmo salar
Epinephelus coioides
Oreochromis mossambicus
Fenneropenaeus chinensis
Penaeus monodon
Homarus americanus
S. paramamosion
Gecarcinus lateralis
42
90
100
97
图 5 基于 β-actin 氨基酸序列的 18 个物种的 NJ
系统发生树
14
12
10
8
6
4
2
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图 6 β-actin 基因在拟穴青蟹各组织中的相对表达水平
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第8期112
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（责任编辑 李楠）