全 文 ：综述与专论
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2009年第 4期
百脉根基因工程研究进展
程星 包爱科 冯波 王锁民
(兰州大学草地农业科技学院,兰州 730020 )
摘 要: 牧草基因工程是近年来国内外研究的热点之一。针对农杆菌介导百脉根遗传转化原理、影响农杆菌介导百脉
根遗传转化的重要因素、转基因技术在百脉根的生物固氮、抗逆性和品质改良以及生产可食性疫苗等方面的研究进行了全面
综述, 并就百脉根基因工程研究今后的主要发展方向进行了展望。
关键词: 百脉根 基因工程 品质改良
Advances on Lotus corniculatus L. Genetic Engineering
ChengX ing Bao A ike Feng Bo W ang Suom in
(School of PastoralAgriculture Science and T echno logy, Lanzhou University, Lanzhou 730020)
Abstrac:t Fo rage gene eng ineer ing as an a lterna tivew ay to improve the qua lity o f forage, has drawn g row ing attention wo rldw ide.
In th is review, the pr inciples of theAgrobacter iumm ed ia ted Lo tus corniculatus L. transfo rm ation m ethod, m a in fac to rs tha t cou ld a ffect
regene ra tion and transform ation ofL otus corniculatus L. and resea rch advances on n itrog en fixa tion o fLotus corniculatus L. , ab io tic and
b io tic stress res istence, qua lity improvem en t as w e ll as the development of the ed ib le transgen ic p lant vaccine were discussed. F ina lly,
future research trends in th is field w ere prospected.
Key words: Lotus corniculatu s L Genetic eng ineering Quality improvem ent
收稿日期: 20081012
基金项目: 973项目 ( 2007CB108901), 863计划 ( 2006AA10Z126) ,国家自然科学基金 ( 30770347, 30671488) ,新世纪优秀人才支持计划 ( NCET
050882)
作者简介:程星 ( 1982) ,女,在读硕士,研究方向:植物基因工程; Em ai:l chengx ingzx@ 163. com
通讯作者:王锁民 ( 1965) ,男,教授,博士生导师,研究方向:牧草逆境生理与分子生物学; Em ai:l smw ang@ lzu. edu. cn, T e:l 09318910983
百脉根 ( Lotus cornicu latus L )又名牛角花、五叶
草和鸟趾草,为豆科百脉根属草本植物,是世界著名
的多年生优良豆科牧草之一,也是常见的庭院观赏
植物 [ 1]。百脉根原产欧亚湿润地区, 目前在欧洲、
美洲、澳洲及南亚等地均有种植。我国华南、西南、
西北、华北等地均有分布, 是我国温暖湿润地区极具
潜力的优良牧草 [ 2]。百脉根不仅营养丰富, 耐寒、
抗旱、耐涝、虫害少,皂素含量低、适口性好、采食率
高、家畜饲用安全 [ 3] , 而且花量大、自交结实、种子
结实率高,较易得到稳定遗传的后代。百脉根的细
胞再生性在豆科牧草中是最好的, 通过胚状体途
径 [ 4, 5]和不定芽途径 [ 6]均可得到高频率的再生植
株;遗传转化效率相对较高,且转基因植株生长速度
快。因此,百脉根是研究外源基因转化、生物固氮机
理、牧草品质改良的豆科模式植物,也是作为生物反
应器进行动物疫苗生产的理想材料 [ 1]。
尽管百脉根有许多优点, 但大多数栽培品种苗
期生长缓慢、种子硬实率高和抗逆性差 [ 7] , 这给百
脉根产业化生产带来许多不便。因此,在常规育种
的基础上,利用生物技术对其加以遗传改良,以培育
出优质、高产的新品种, 对扩大百脉根生产和我国未
来草业的发展具有深远意义。 1985年, V asil[ 8]第一
次提出利用遗传转化技术将特定外源基因导入牧草
的可行性,为利用基因工程技术改良牧草奠定了理
论基础。近年来, 百脉根组织培养和以其为基础的
转基因研究已取得了较大进展, 将对这方面的国内
外研究概况进行综述。
1 农杆菌介导百脉根遗传转化的原理
农杆菌是一种能够将外源基因导入植物的天然
载体 [ 9] ,转化植物细胞的农杆菌主要有两类, 即根
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2009年第 4期
癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens)和发根农杆菌
(Agrobacterium rhizog enes), 它们同属根瘤菌属革兰
氏阴性菌。农杆菌能够在自然条件下趋化性地感染
大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤
或发状根。与其他转基因手段相比, 农杆菌介导法
具有简便易行、转化率高、导入受体基因明确等优
点。此外,农杆菌转化所适用的外植体广泛,包括叶
片、茎段、胚轴、叶柄、子叶、幼胚或成熟种子 [ 10, 11 ]。
根癌农杆菌内含 T i质粒,发根农杆菌内含 R i质粒。
研究表明, R i质粒在茄科作物转化中应用较为成
功 [ 12] ,尽管其对豆科牧草的转化研究也不少,但只
有在百脉根 ( Lotus cornicu latus ) [ 13, 14]、紫花苜蓿
(M ed icago sativa )
[ 15, 16]和矮柱花草 ( S tylo santhes hu
m ilis)
[ 17]上获得转化植株。虽然 R i质粒在百脉根
遗传转化中的应用相对较少,但其介导的转化率可
达 80% , 而常用的 T i质粒介导的转化率最高
为 30% [ 18]。
2 影响农杆菌介导百脉根转化的因素
21 基于组织培养的再生体系
快速、稳定、高效的遗传转化体系是基因工程的
基础, 而高效的再生体系又是高效遗传转化的先决
条件。建立高效、普遍适用的再生体系,不仅可以加
快转化技术在育种进程中的应用, 同时有助于百脉
根中特定基因功能的研究。豆科植物经愈伤诱导出
不定芽通常比较困难 [ 19 ] ,近年来多采用通过分生组
织直接诱导出芽的方法,此方法周期短, 出芽快 [ 20 ]。
从目前的报道来看, 建立一个快速稳定高效的百脉
根再生体系主要取决于以下几个因素。
211 外植体 近 30年来, 百脉根组织培养研究
中所采用的外植体种类繁多,几乎所有器官或组织
都可以作为外植体。如 Tom es等 [ 21]使用茎尖和茎
节作为外植体,首次成功建立了百脉根的再生体系,
再生率达 80%以上。O rshinsky等 [ 22]以幼芽为外植
体,探讨了均质愈伤组织培养对百脉根再生植株的
影响。Ahu ja等 [ 23 ]从百脉根的幼根、下胚轴与子叶
中分离原生质体形成体细胞胚并产生再生植株。
W ebb等 [ 24 ]利用百脉根茎段和叶片形成体细胞胚并
产生再生植株。Rybczynsk i等 [ 25]选用根作为外植
体,不经愈伤组织化而直接成功地获得再生植株。
A rm stead等 [ 26]以子叶和叶片为外植体均得到了再
生植株。Dam ian i等 [ 27 ]以叶片为外植体, 通过愈伤
组织培养成功获得了 72株再生植株。Handberg
等 [ 28~ 30]认为,以百脉根的下胚轴作为转化受体, 转
化率最高。N enz等 [ 31]发现下胚轴的再生能力要强
于叶片、子叶、茎与根。
在国内,时永杰等 [ 32 ]采用子叶、下胚轴、茎、花
茎、叶、花序、子房作为外植体进行培养,均不同程度
地诱导产生了愈伤组织。陈燕等 [ 33]利用根癌农杆
菌介导的方法使百脉根子叶外植体的转化频率达
97%。张振霞等 [ 34]研究百脉根受体材料对转化率
的影响证实,以子叶作为转化受体的最终分化率为
最高 (达 20% ),叶次之 ( 125% ), 而以茎段作为受
体的分化率为最低 ( 50% ), 胚轴次低 ( 75% )。孙
艳香等 [ 1]用百脉根子叶作为外植体, 在添加 6BA
的 MS培养基上培养得到转化植株,其转化率的高
低很大程度上受子叶苗龄的影响, 其中, 以 5d苗龄
的子叶的转化率最佳,转化率高达 147%。
212 基本培养基 建立一个理想的再生体系的
另一个重要的工作是找到一套适合植株再生的培养
基组合 [ 35]。不同外植体对基本培养基的无机和有
机营养成分具有很大的选择性, 其组成对愈伤组织
诱导及生长有明显的影响, 从而影响最终的转化
效率。
Rasheed等 [ 36]发现 UM培养基有利于百脉根愈
伤组织的诱导,而 B5培养基更有利于愈伤组织的分
化。Cooke等 [ 37]以 1/2 B5为基本培养基, 毛根为外
植体,探讨了外界因素对百脉根毛根培养中外源基
因表达的稳定性的影响。发现培养基中蔗糖含量高
低对根的分化有影响, 其中 3% 的蔗糖最有利于根
的形成。N iko lic等 [ 38]运用 BM培养基诱导百脉根
子叶获得再生植株。时永杰等 [ 39]通过对 MS、N 6、B5
和 BS培养基的研究得出,在 MS培养基上形成的愈
伤组织质量好、数量最多,增殖也更为迅速, 而在 BS
培养基上形成的愈伤组织易于褐化死亡。在诱导百
脉根愈伤组织分化成苗上, M S优越性也更大。师
尚礼 [ 40]指出在百脉根花药培养中, 花药出愈率、成
苗率和生根率在 N6培养基上均有显著提高。安骥
飞等 [ 41]发现 UM培养基更有利于诱导百脉根叶片
形成愈伤组织, 这与 R asheed等 [ 36] 的研究结果一
致。这是因为 UM培养基中较高的维生素水平对愈
2
2009年第 4期 程星等:百脉根基因工程研究进展
伤组织的发生有良好效果, 同时补加水解酪蛋白
( CH ) ,对调节培养基渗透压和改善愈伤组织质地
有一定作用 [ 42]。
213 激素类型及其配比 生长素和细胞分裂素
是细胞离体培养所必需的激素,二者的比例是激素
使用的关键,其原则是生长素浓度明显高于细胞分
裂素则促进细胞脱分化,诱导愈伤组织的形成,反之
促进细胞分化 [ 35]。在百脉根的离体培养中, 常用的
生长素有 2, 4D、IAA和 NAA,主要用于诱导愈伤组
织和生根; 常用的细胞分裂素有 6BA和 KT,主要功
能是促进芽的分化。
许多研究表明, 2, 4D在诱导百脉根愈伤组织时
的效果最为显著。如 Lombari等 [ 5]认为 015 mg /L
的 2, 4D效果最好,百脉根的根出愈率可达 90%。时
永杰等 [ 32]认为百脉根的子叶、下胚轴、茎、花茎、叶、
花序、子房、花药在附加有 2, 4D 10mg /L的培养基
上均能诱导出愈伤组织, 在 0 ~ 2mg /L的浓度范围
内,随着 2, 4D浓度增大, 愈伤组织的发生率相应提
高。安骥飞等 [ 41]认为虽然 2, 4D浓度对愈伤诱导影
响显著,但 2, 4D浓度过高对愈伤组织的生长是不利
的,多重比较发现 2, 4D的最佳浓度为 20mg /L。师
尚礼 [ 40]指出在 B5培养基上, 2, 4D的增加对百脉根
花药出愈有促进作用, 且作用效果明显,最高出愈率
可达 145% ( 2, 4D的浓度为05mg /L ),最低出愈率
仅为 90% ( 2, 4D的浓度为02mg /L )。
6BA是一种百脉根芽诱导分化阶段重要的细胞分
裂素, 6BA单独使用或与生长素配合使用都可以成功诱
导出丛生芽 [ 43]。例如,由百脉根的下胚轴诱导出的愈伤
组织在添加有 02 g /m l 6BA的 B5培养基上分化率
高,达 58% [ 28]。此外, 05 g /m l 6BA、005g /m lNAA
与 10mM NH4 +配合使用效果最佳,分化率可达 100%;
02mg /L 6BA与 10mM (NH4 ) 2SO4配合使用分化率可
高达 75% ~ 90% [5, 11, 30]。Akashi等 [ 4]认为百脉根的侧根
在添加有 15mg /L 6BA的MS培养基上可分化出大量
芽点。刘建利等 [ 44]将百脉根无菌幼苗的子叶 (带叶柄 )
外植体转入仅含有 05mg /L 6BA的分化培养基上直接
诱导出芽,且周期短,出芽快。
22 基于农杆菌介导的遗传转化体系
221 预培养时间对百脉根转化率的影响 外植
体的预培养时间与其效果有明显关系, 每一种外植
体均有其最佳共培养时间, 预培养时间太长会降低
外植体的转化率, 甚至造成农杆菌侵染后外植体死
亡。适当的预培养是百脉根转化所必须的, Lombari
等 [ 5]试验得出 5 d是百脉根的最佳预培养时间。孙
艳香等 [ 1]认为 5 d苗岭的百脉根的子叶的转化率最
高, 为 147% ;韦正乙等 [ 45]的研究表明预培养 3 d
的外植体转化率最高,以 30株不同抗性植株的基因
组 DNA为模板作 PCR检测, 呈阳性的有 14株, 阳
性率为 147%。
222 农杆菌菌株对百脉根转化率的影响 不同
农杆菌菌株对同一植物的转化效果不同,因此,在对
植物进行转化时, 选择具有较强侵染能力的菌种是
非常重要的。例如, 以农杆菌菌株 AGL1作为宿主
菌转化百脉根, 分化率为 97% [ 12] ; 由发根农杆菌
菌株 9402侵染百脉根的下胚轴,产生发根所用时间
短, 且诱导产生发根的频率高达 90% ~ 100% [ 30]。
张振霞等 [ 34]的研究发现, 接种 AGL1菌株时, 百脉
根的转化率远远高于接种 EHA105和 LBA4404菌
株, 达 20%, 而后两者的转化率仅分别为 75% 和
125%。孙艳香等 [ 1]发现 EHA105对百脉根的转化
效率最高 ( 125% ), GV 3101转化率最低, 转化率
为 45%。
223 共培养天数对百脉根转化率的影响 张振霞
等 [ 34]的研究发现,以 3 d的共培养效果为最好,比共培
养时间 2 d和 4 d的分化率分别高 1倍和 4倍以上,这
与 Chabaud等 [ 46] 在紫花苜蓿上的研究结果相似。
H andberg等 [ 28]认为共培养时在培养基上铺一层无菌
滤纸,共培养 7 d效果最佳。刘建利等 [ 44]也认为 3 d是
百脉根的最佳共培养时间,分化出不定芽的外植体数
目最多;共培养 4 d,培养基上会出现大量农杆菌菌落,
且会使外植体发黄。Bellucci等 [ 47]却认为 4 d是百脉
根的最佳共培养时间。所以在不同的实验条件下百脉
根转化时的共培养时间还需要进行优化。
3 百脉根遗传转化研究进展
31 生物固氮
豆科植物根瘤菌固氮研究很早以来就受到重
视。Webb等 [ 24]用发根农杆菌将豆血红素蛋白基因
L bc3转入百脉根, 得到的再生植株的根毛在形态
学、生理学、细胞学方面均发生了显著变化, 但固氮
性并没有任何改变。 Pet it等 [ 13 ]的研究也得到了相
3
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2009年第 4期
似的结果,即根瘤菌感染转基因植株与对照植株的
表型相似。 Stougaard等 [ 48]用发根农杆菌将 Lbc3基
因导入百脉根, 再生植株经农杆菌感染后, Lbc3基
因在根瘤组织中特异性表达。
土壤中的氨态氮或硝态氮过多会抑制根瘤菌的
活性, 从而抑制豆科植物的固氮作用 [ 49, 50]。许多实
验证明, 氨态氮的解毒作用是由谷氨酰胺合成酶
( g lutam ine synthetase, GS)催化形成谷氨酰胺完成
的 [ 51, 52 ]。M arso lier等 [ 53 ]将大豆 GS基因导入百脉根
并使其在维管组织特异性表达, 结果证明 GS基因
的表达受到氨的调控,在富含氨的环境下, GS过量
表达会加速植物的发育过程,导致植物早衰和提前
开花。V incent等 [ 54]将大豆胞质 gs15基因转入百脉
根,在 8个阳性植株的茎中检测到 GS表达。Lim am i
等 [ 55]通过将 GS基因转入百脉根来测定 GS与植物
生物量积累的关系, N15标记试验发现, 即使在有充
足氮素供应的情况下, GS的过量表达使得氮素不能
及时被利用而使植物表现出缺氮症状。
32 单宁
缩合单宁是一种多聚黄酮类化合物, 其含量的
高低对草食动物的影响极大 [ 56]。当缩合单宁含量
占牧草干重的 1%~ 3%时可防止动物臌胀病的发
生,减缓动物瘤胃微生物对蛋白质降解的速度,提高
豆科牧草的利用率和营养品质,当其含量占牧草干
重的 4%~ 5%时,就会大大降低牧草的营养价值和
动物的适口性 [ 57]。缩合单宁之所以能抗臌胀是因
为它可以与水溶性蛋白质相结合,降低其水溶性,甚
至产生沉淀,从而减少瘤胃中的泡沫 [ 58 ]。体外试验
显示, 致臌胀病的豆科牧草叶蛋白抽提物成泡率远
远高于含缩合单宁的豆科牧草 [ 59 ]。
百脉根是一种含有单宁的牧草, 每千克干物质
中大约含 20~ 40 g单宁 [ 60] ,是研究单宁生物合成的
模式植物。相比之下,苜蓿、三叶草等豆科牧草不含
单宁。Bennett等 [ 61]报道, 在百脉根草地上放牧的
羊与在黑麦草、白三叶草地上放牧相比,其排卵率增
加 14%,这是因为百脉根中的缩合单宁可减少瘤胃
微生物对蛋白质的降解率, 并提高小肠的吸收率。
许多单宁合成的关键酶基因都是从百脉根中分离克
隆的。Tanner等 [ 62 ]从百脉根中分离克隆出无色花
青素还原酶基因 LAR, 并申请了专利, 通过农杆菌
介导将其转入白三叶,转基因植株叶片中的缩合单
宁水平显著高于对照,表明可以通过提高 LAR的表
达来调控缩合单宁的水平。Gruber等 [ 63]从百脉根
中分离克隆出 3个单宁合成的调节基因, 这 3个基
因转化白三叶 (Trifolium repense )的结果表明, 转基
因植株叶片中单宁含量增加了。另外,已有研究人
员将参与缩合单宁生物合成的关键酶基因转入苜
蓿, 改变单宁结构和组织分布, 增加了单宁含量 [ 65]。
Bavage等 [ 65]将参与单宁合成的二氢黄酮还原酶
( DFR)的 cDAN转入百脉根,提高了转基因植物体
内缩合单宁的水平。Robbins等 [ 66 ]将 DFR的反义
片段转入百脉根, 发现转基因植株的茎、叶、根中单
宁含量下降,而其生物量不受影响。Carron等 [ 67]将
来源于金鱼草 (Antirrhinum majus L)的 DFR的反
义片段转入百脉跟,发现转基因植株根毛中的单宁
含量明显低于非转基因植株。
33 抗逆性
在各种非生物胁迫逆境中, 干旱胁迫、盐胁迫、
低温胁迫对植物的影响尤为突出 [ 68]。包括百脉根
在内的绝大多数豆科牧草长期生长在优越的环境
中, 耐盐性和抗旱性相对较弱,因而需要对其进行遗
传改良,以适应日益加重的干旱和盐渍化。随着植
物抗旱分子机制研究的不断深入和转基因技术的日
趋完善,利用转基因手段导入外源耐盐抗旱基因获
得抗干旱耐盐渍的转基因植物, 已成为当今植物生
物技术领域研究的热点之一。为培育高效抗旱耐盐
植物新品种提供了新的手段。
m tlD基因是从大肠杆菌 (E scherichia coli)中分
离出来的 1磷酸甘露醇脱氢酶基因, 是继脯氨酸合
成酶基因 p roA、山菠菜碱脱氢酶基因 BADH 之后发
现的又一类与耐盐相关的渗透调节基因。陈燕 [ 69]
首次通过农杆菌介导法将 mtlD基因转入百脉根, 成
功获得转基因豆科牧草。Gax io la等 [ 70]首先于 1992
年从酵母细胞中克隆到了 HAL1基因, 该基因的产
物是一个与酵母耐盐性相关的蛋白质, 可能与 K +
吸收、调节有关。已有的转基因植物耐盐检测表明,
转HAL1基因植株的耐盐性得到不同程度的提高。
HAL1基因的具体作用机制尚未清楚,但是它的表达
可赋予酵母细胞超强的耐盐表型, 所以这是用以在
转基因植物中表达的首选酵母调节因子 [ 45, 71, 72 ]。
4
2009年第 4期 程星等:百脉根基因工程研究进展
随着农牧及畜牧业生产的规模化、集约化发展,
化学除草剂得到广泛应用,但化学除草剂残留期长,
对牧草、人畜均有一定危害。百脉根出苗时生长缓
慢,容易受杂草侵害, 除草时只能用消灭禾本科杂草
的除草剂喷施, 而双子叶杂草只能进行人工除草。
因此, 培育抗除草剂的百脉根新品种势在必行。Lo
har等 [ 73]获得了对除草剂 PPT具有强抗性的转 Bar
基因百脉根新品种,且后代遗传稳定。刘艳芝等 [ 74]
于 2006年将广谱性除草剂 Basta( 136%, 稀释 100
倍 )的抗性基因 Bar成功导入百脉根,后代筛选及遗
传分析工作正在进行之中。
34 生物反应器
植物生物反应器广义上是指以植物悬浮细胞培
养或整株植物为工厂大量生产具有重要功能的蛋
白,如人或动物的疫苗、抗体、重要的氨基酸。狭义
上是指以转基因的整株植物为工厂大量生产各种高
价值的生物制品 [ 75 ]。目前,以百脉根作为生物反应
器在生产疫苗、工业酶制剂和一些重要的药用蛋白
等研究方面已经取得了很大进展。
王宝琴等 [ 76]将口蹄疫病原 ( FMDV )的结构蛋
白基因 VP1作为抗原基因转入百脉根, VP1在转化
的百脉根中有转录活性并且获得了正确、有效地翻
译,扩繁和移栽后获得了批量转基因百脉根,为下一
阶段的动物试验提供了实验材料。王炜等 [ 77]将口
蹄疫病毒 P12A 3C基因整合到百脉根基因组中,并
使其表达,通过转基因百脉根粗蛋白提取物与弗氏
不完全佐剂混合制成疫苗免疫豚鼠, ELISA检测表
明产生特异性抗体, 豚鼠血清效价最高可达 1 /64。
贺红霞等 [ 78]利用根癌农杆菌介导的方法成功地将
乙肝表面抗原 (HB sAg)基因导入百脉根并使之表
达,这将为下一步在豆科植物中生产乙肝疫苗的研
究提供基础资料。
兔出血症 ( rabbit hemorrhag ic disease, RHD )是
由兔出血症病毒 ( rabb it hemorrhag ic d isease v irus,
RHDV )所致的一种急性、高度传染致死性疾病, 以
全身实质器官水肿、淤血及出血性变化为主要特征,
其发病率和致死率都很高, 是兔的一种毁灭性传染
病。唐广立等 [ 79]将兔出血症病毒 ( RHDV )衣壳蛋
白 VP60基因导入百脉根,为利用百脉根生产动物
口服型疫苗建立了技术基础。
张占路等 [ 80]将 H5N1亚型禽流感病毒血凝素
( A IVHA )基因转入百脉根基因组中, 在核酸水平和
蛋白水平都得到了表达。目前禽流感可饲用疫苗动
物试验即将进入饲喂阶段, 该动物试验旨在观察种
鸽采食转基因百脉根牧草后, 对种鸽免疫性能及种
鸽多种生长发育指标的影响, 同时在试验进行前后
测定种鸽细胞免疫功能 ( T细胞功能 )和体液免疫功
能 ( B细胞、免疫球蛋白和抗体产生功能 )的水平,
以评价转基因牧草的全方位效用。
4 结语
百脉根基因工程研究虽然已经取得了一定进
步,但还存在着许多有待解决的问题。目前已获得
的转基因百脉根,大多数还停留在实验室阶段,没有
进入生产应用;受体系统中普遍存在的转基因沉默、
转化频率低、转化植株后代遗传不稳定。考虑到我
国未来生态建设和畜牧业发展的实际需要, 今后百
脉根基因工程研究应注重其抗旱节水、抗寒、抗臌胀
病、抗虫性和丰产性等方面的改良, 使其在水土保
持、高海拔地区畜牧业生产和草产品加工等方面发
挥更大的作用。此外,基因芯片技术解决了传统核
酸印记杂交技术复杂、自动化程度低、检测目标分子
数量少、成本高、效率低等不足, 已被广泛应用于基
因表达研究、发现新基因等领域, 将来有望在百脉根
基因工程中发挥其重要作用。
参 考 文 献
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6
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2009年第 4期
基因治疗等多个方而将会有广泛的应用前景。同
时,将 PRV作为一种良好的疫苗载体, 可以研制预
防猪传染病的系列化二价、多价基因工程疫苗。相
信在不久的将来,只有易于被感染相鉴别的疫苗才
可获准上市,用于动物接种,而伪狂犬病重组疫苗正
符合这一趋势。
参 考 文 献
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78 贺红霞,林春晶,王铭, 董英山 农业生物技术学报, 2007, 15
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