全 文 ：生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2009年第 3期·研究报告·
收稿日期：2008-10-10
基金项目：国家“863”高技术研究发展计划（2008AA10Z304）
作者简介：王筱青（1982-），女，硕士，研究方向：发酵工程；E-mail：bamboo_sims@hotamail.com
通讯作者：徐岩，Tel：0510-85918197，E-mail：yxu@sytu.edu.cn
l-薄荷醇是重要的化工原料之一，具有薄荷香
气、辛辣味和凉感等特征，同时还有兴奋、助消化、
杀菌镇痛、止痒、芳香清凉等功能，大量应用在化妆
品、食品、香料以及医药卫生等方面。化学法合成薄
荷醇外消旋体，结合生物催化拆分生产 l-薄荷醇的
方法具有反应条件温和、环保、高效等优点，具有广
阔的发展前景 [1~5]。 目前国内外生物拆分薄荷醇多
集中在非水相酯化研究上，而对环境更加友好的水
相拆分制备 l-薄荷醇的研究较少，特别是相关催化
酶在基因水平上的研究报道很少。本研究室在前期
研究中成功筛选到一株洋葱伯克霍尔德氏菌
（Burkholderia cepacia）， 该菌株能够高效的选择性
水解 d，l-乙酸薄荷酯制备 l-薄荷醇；对该菌株所产
具有立体选择性的脂肪酶的酶学性质研究表明 B.
cepacia 可能具有表达多种脂肪酶同工酶的能力，这
些脂肪酶同工酶均为胞内单亚基酶，且对短链酯具
洋葱伯克霍尔德氏菌 HMW DNA的制备及酶切研究
王筱青 1 喻晓蔚 1 徐岩 1 顾玲 2
（1江南大学生物工程学院酿造微生物与应用酶学研究室，无锡 214122；2江苏省疾病预防控制中心 CDC急传科，南京 210000）
摘 要： 高质量粘粒基因组文库构建的关键是 HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的 10倍，通常粘粒载体
的容量为 30~50 kb，因此提取的 HMW DNA应不小于 500 kb。HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力，以免
DNA断裂和损伤。利用琼脂糖凝胶包埋制备的 DNA胶块经裂解和纯化后发现其 DNA长度远大于 500 kb，明显优于商
品化试剂盒提取和酚抽提法。用 BamHⅠ、Sau3AⅠ、XbaⅠ和 HindⅢ对 DNA胶块进行不完全酶切研究表明，构建文库常
用的 Sau3AⅠ并不适合胶块内酶切反应，而 BamHⅠ酶切 B. cepacia HMW-DNA效果较好，产生的 DNA片段集中在
20~50 kb之间，完全适合粘粒基因组文库的构建，为 B. cepacia大插入片段基因组文库的构建以及功能基因组的研究奠
定了良好的理论基础。
关键词： 高分子量 DNA 粘粒文库 胶块 脉冲场电泳
Study of Preparation and Restriction Endonuclease of
B. cepacia HMW DNA
Wang Xiaoqing1 Yu Xiaowei1 Xu Yan1 Gu Ling2
（1Lab of Brewing Microbiology and Applied Enzymology，School of Biotechnology，Jiangnan University，Wuxi 214122；
2Centers for Disease Control and Prevention of Jiangsu Provience，Department of Acute Disease Infection，Nanjing 210000）
Abstract： The key of the construction of high quality genomic cosmid library is to prepare HMW DNA，the
length of which should at least be ten times longer than of which of cosmid vector which usually ranges from 20 to 50
kb. PFGE analysis result indicated that the length of genomic DNA that was embedded and purified in agarose gel block
was more than 500 kb longer，better than using genomic DNA extraction kit and phenol-chloroform extraction. Sau3A
Ⅰ，BamHⅠ，HindⅢ and XbaⅠwere used to study partial restriction digestion of HMW DNA. The result showed that
partial restriction digestion of HMW DNA with BamHⅠcould generate fragments with 20~50 kb size range，which were
suitable for the construction of genomic cosmid library. This research would be useful for further construction of
genomic cosmid library and research of functional genome.
Key words： HMW-DNA Genomic cosmid library Agarose gel block PFGE
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2009年第 3期
有较好的立体选择性水解作用。 因此，对该菌株所
具有的相关酯酶基因及其表达调控进行研究，提高
其表达活性，进而提高 l-薄荷醇的生产效率 ，无疑
对 l-薄荷醇的工业化生产具有重大意义。
目前关于的报道多为胞外脂肪酶 [6~10]，其胞内
脂肪酶的报道很少， 因此难以通过 PCR 等方法直
接获得目的基因序列。 B. cepacia 为原核细菌，基因
组 DNA 不如真核生物复杂， 不存在内含子和外显
子等问题，故可以通过构建基因组文库利用活性筛
选的方法获得具有立体选择性水解 d，l-乙酸薄荷
酯的酯酶及其同工酶基因 。 提取高分子量 DNA
（High Molecular Weight DNA，HMW DNA）是构建大
片段基因组文库（粘粒文库）的前提和关键，因为只
有提取的基因组 DNA 长度至少 10 倍于粘粒载体
容量时才能保证消化产物具有 2 个正确末端，从而
获得高质量文库所需的重组克隆数目。粘粒载体的
克隆容量一般在 20~50 kb 之间 ， 因此 HMW DNA
长度应大于 500 kb。 HMW DNA 的提取难度较大，
要求在 DNA 制备时尽可能减少外力对 DNA 的影
响，以免使 DNA 遭到断裂和损伤 [11]。 通过比较研究
4 种不同的基因组 DNA 提取方法， 确立了简便经
济的 B. cepacia HMW DNA 提取法以及最佳酶切条
件， 且酶切产生的 DNA 片段完全适用于粘粒文库
的构建。
1 材料和方法
1.1 主要仪器和试剂
细菌基因组 DNA 提取试剂盒购自 TIANGEN 公
司，蛋白酶 K 购自 Merck 公司，RNase A 购自 TIAN-
GEN 公司， 低熔点琼脂糖和脉冲场电泳琼脂糖购
自 Amresco 公司，Seakem Gold 普通熔点琼脂糖购自
Rockland 公司，β-Agarase 以及限制性内切酶 Sau3A
Ⅰ 、BamHⅠ 、XbaⅠ和 HindⅢ购自大连宝生物公
司，MidRange PFG MarkerⅠ购自 NEB 公司，其余均
为国产分析纯级试剂。 CHEF-DR II 脉冲场电泳仪、
Gel Doc XR 凝胶成像系 统 购 自 Bio-Rad 公 司 。
Biophotometer 生 物 分 光 光 度 计 6131 购 自 Ep-
pendorf 公司。
TE Buffer：1 M Tris-HCL，0.5 M EDTA，pH8.0；
Buffer A：1%（w/v）Amresco 低熔点琼脂糖，1%（w/v）
SDS，TE Buffer 溶解 ；Buffer B：1%（w/v）Seakem Gold
普通熔点琼脂糖，1%（w/v）SDS，TE Buffer 溶解；Bu-
ffer C：0.1 M Tris-HCl，0.1 M EDTA，pH 8.0；Buffer
D：0.05 M Tris-HCl，0.05 M EDTA，pH 8.0，1%（v/v）
Sodium Lauryl Sarcosine，0.1 mg/ml 蛋白酶 K。
1.2 菌株与培养
菌种洋葱伯克霍尔德氏菌 B. cepacia， 保存于
江南大学生物工程学院酿造微生物与应用酶学研
究室。 LB 培养基参照文献 [12]方法配制，单克隆接
种于 3 ml LB 培养基中 ，30℃ 150 r/min 培养过夜 ，
再取 200 μl 培养物接种于 50 ml LB 培养基中扩大
培养，30℃ 150 r/min 培养 12~16 h。
1.3 洋葱伯克霍尔德氏菌 HMW DNA 的提取
1.3.1 试剂盒法提取基因组 DNA 按照细菌基因
组 DNA 提取试剂盒说明书进行 DNA 的提取。
1.3.2 酚抽提法提取基因组 DNA[12] 取 1.5 ml 过
夜培养的菌悬液 ，5 000 r/min 离心 10 min 收集菌
体，用生理盐水洗涤 2 次后重悬于 TE Buffer 中，加
入 SDS 溶液至终浓度为 0.5%（w/v），加入蛋白酶 K
至终浓度 0.l mg/ml，50℃保温 3~6 h。 冷却至室温
后 ，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇 （25 ∶24 ∶1），轻柔
颠倒离心管约 10 min，6 000 r/min 离心 20 min。 将
上清液转入另一干净离心管中， 反复用酚/氯仿/异
物醇抽提至有机相和水相之间无白色物质为止。加
入 1/10 体积醋酸钠溶液，2.5 倍体积冰冷的无水乙
醇，于-20℃放置过夜。 12 000 r/min 离心 15 min，弃
上清，用 70%（v/v）乙醇洗涤 2 次，室温下干燥。 用
适量 ddH2O 溶解沉淀。 用 λDNA 标记分子量大小，
0.3%（w/v） 琼脂糖凝胶，5 v/cm 电泳检测提取的基
因组 DNA 大小。
1.3.3 低熔点琼脂糖胶块的制备 [13~15] 取过夜培养
的菌悬液，5 000 r/min 离心 10 min 收集菌体， 用生
理盐水洗涤 1 次后用 Buffer C 重悬菌体至 2×109
个/ml 左右。取 400 μl 细菌悬浊液，37℃保温 5 min，
加入蛋白酶 K 至终浓度为 0.5 mg/ml， 加入等体积
Buffer A，迅速混匀并转入干净预冷的制胶模具中，
每孔约 300 μl。 待冰上完全凝固后转入 50 ml 离心
管中， 加入 20 倍体积 Buffer D，50℃水浴振荡 2 h。
小心除去 Buffer D，加入灭菌 ddH2O，50℃水浴振荡
洗涤 2 次。 胶块移至新鲜的 TE Buffer 中，50℃水浴
振荡洗涤 4 次。 纯化后的胶块在 TE Buffer 4℃可以
138
2009年第 3期
保存数年。
1.3.4 普通熔点琼脂糖胶块的制备 [13~15] 取过夜培
养的菌悬液，5 000 r/min 离心 10 min 收集菌体，用
生理盐水洗涤 1 次后用 Buffer C 重悬菌体至 2×109
个 /ml 左右。取 400 μl 细菌悬浊液，37℃保温 5 min，
加入蛋白酶 K 至终浓度为 0.5 mg/ml， 加入等体积
Buffer B，迅速混匀并转入干净预冷的制胶模具中，
每孔约 300 μl。 待室温下完全凝固后转入 50 ml 离
心管中，加入 20 倍体积 Buffer D，50℃水浴振荡 2 h。
小心除去 Buffer D，加入灭菌的 ddH2O，50℃水浴振
荡洗涤 2 次。 胶块移至新鲜的 TE Buffer 中，50℃水
浴振荡洗涤 4 次。 纯化后的胶块在 TE Buffer 4℃可
以保存数年。
1.3.5 菌体量对于琼脂糖凝胶块质量的影响 取
过夜培养的菌悬液 ，5 000 r/min 离心 10 min 收集
菌体，用生理盐水洗涤 1 次后用 Buffer C 重悬菌体
制备成含有不同菌体浓度的菌悬液，取相同体积不
同菌体浓度的细菌悬浊液， 按照 1.3.3 所述方法制
备成一系列低熔点琼脂糖凝胶块。将低熔点琼脂糖
凝胶块胶块于两倍体积的 1×β-Agarase Buffer 中冰
浴 30 min，除去 1×β-Agarase Buffer，低熔点琼脂糖
凝胶块在 65℃水浴中保温 15 min， 完全溶化后，加
入 1/10 体积 10×β-Agarase Buffer， 混匀 ，60℃平衡
10 min。 加入 β-Agarase 消化反应 1 h，冰上放置 15
min，调整体系的 NaCl 浓度至为 0.15 M。 12 000 r/
min 离心 15 min。 将上清液移至一干净的离心管
中，加入 1 倍体积的异丙醇，充分混匀后-20℃沉淀
60 min，12 000 r/min 离心 15 min。 除去上清 ，用
70%（v/v）的冷异丙醇清洗沉淀 2 次，真空干燥。 用
TE Buffer 或其他合适的缓冲液溶解 DNA 沉淀。 用
Biophotometer生物分光光度计 6131检测基因组 DNA
的纯度以及含量。
1.4 HMW DNA 的胶块内酶切 [13~15]
将制备好的琼脂糖胶块切割成合适大小，加入
10 倍体积相应的 1×限制酶缓冲液，冰浴 1 h。 除去
缓冲液，加入 2~3 倍新鲜 1×限制酶缓冲液，分别加
入不同浓度的 Sau3AⅠ、BamHⅠ、XbaⅠ和 HindⅢ，
冰上平衡 1 h，37℃温浴 1 h。 脉冲场电泳检测酶切
效果，条件如下：0.5×TBE 配制 1%（w/v）Agarose for
PFGE，5%（w/v）Goldview 染色 ，14℃，起始脉冲 1 s，
终止脉冲 25 s，脉冲时间 16 h，电压 6 v/cm，角度
120°，泵 70。 Bio-Rad Gel Doc XR 凝胶成像系统检
测。
2 结果和分析
2.1 洋葱伯克霍尔德氏菌 HMW DNA 的提取
2.1.1 试剂盒法提取基因组 DNA 商品化的细菌
基因组 DNA 提取试剂盒利用吸附柱进行 DNA 的
纯化和提取，操作快速简便，从图 1 可以看出，提取
的 DNA 质量高，纯净无杂质。 但是大部分 DNA 分
子在吸附柱上截留和洗脱时已经发生断裂，大小通
常在 20 kb 左右， 这样的基因组 DNA 能够满足普
通的分子生物学操作包括 PCR，酶切和杂交。 然而
构建大片段基因组文库所需 DNA 长度至少大于
100 kb，以保证经限制性内切酶消化后可以获得具
有 2 个正确末端的消化产物 ， 因此试剂盒提取的
DNA 不能满足文库构建的要求。
2.1.2 酚抽提法提取基因组 DNA 文库构建要求
基因组 DNA 具有较高的纯度和质量， 为获得较纯
的 DNA 样品，该方法需要反复进行酚/氯仿/异戊醇
抽提，才能将细胞内蛋白质以及多糖类物质去除干
净， 而反复抽提极易造成基因组 DNA 的断裂。 以
λDNA 作为标准参照物，0.3%（w/v） 琼脂糖凝胶电
泳，5 v/cm 电泳 1 h 检测提取的基因组 DNA。 结果
显示（图 2），该方法得到的基因组 DNA 不足 48 kb，
因此利用酚抽提法难以获得高分子量基因组 DNA，
无法满足文库构建的需要。
2.1.3 琼脂糖凝胶块的制备 菌体经过生理盐水
洗涤后用 Buffer C 重悬制备得到菌悬液，分别与等
体积 Buffer A 制成低熔点琼脂糖凝胶块，与等体积
Buffer B 制成普通熔点琼脂糖凝胶块， 脉冲场电泳
1 2 3 4 5 6 7 8
kb
10
5
1~7.B. cepacia 基因组 DNA；8.1 kb DNA Ladder
图 1 试剂盒提取基因组 DNA
王筱青等：洋葱伯克霍尔德氏菌 HMW DNA的制备及酶切研究 139
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2009年第 3期
（Pulse Field Gel Electrophoresis，PFGE）检测结果。结
果表明 （图 3）， 两种胶块制备得到的基因组 DNA
均有略微出孔且远大于 300 kb， 几乎没有降解，可
以用于大片断基因组文库的构建以及复杂基因组
DNA 的分型和分析， 同时说明普通熔点琼脂糖和
低熔点琼脂糖在制备凝胶块提取高分子 DNA 上并
无区别。
2.1.4 菌体浓度对于琼脂糖凝胶块质量的影响
采用相同体积不同菌体浓度的细菌悬浊液制备
一系列低熔点琼脂糖凝胶块，将相同大小的低熔点
琼脂糖凝胶块完全熔化后按照 1.3.5 所述方法回收
基因组 DNA， 用核酸蛋白定量仪检测基因组 DNA
的纯度以及含量。 结果显示 （表 1）， 菌体浓度在
2.0×109 个/ml 左右时，虽然制备得到的琼脂糖凝胶
块内 DNA 含量较低，但是胶块纯净 ，杂质含量少 ，
回收得到的基因组 DNA 纯度较高， 满足构建文库
的基本要求。 当菌体浓度高于 2.0×109 个/ml 时，琼
脂糖凝胶块内杂蛋白含量明显偏高，回收得到的基
因组 DNA 纯度低， 不利于胶块内的限制性内切酶
的不完全酶切， 这可能是与 B.cepacia 自身蛋白表
达量较高有关。 试验表明，在利用琼脂糖凝胶包埋
法提取 HMW DNA 的过程中，适宜的菌体浓度是获
得高质量琼脂糖凝胶块的关键， 菌体浓度偏高，增
加了胶块内 DNA 的含量， 但是会导致琼脂糖凝胶
块纯度低，不利于后续的试验操作；菌体浓度过低，
可以获得较为纯净的琼脂糖凝胶块， 但是 DNA 含
量太少，难以满足文库构建的需要。
2.2 HMW DNA 的胶块内酶切
2.2.1 低熔点琼脂糖凝胶块和普通熔点琼脂糖凝
胶块内高分子量 DNA 酶切的比较 纯化过的普通
熔点琼脂糖凝胶块和低熔点琼脂糖凝胶块各切成
大小相等的 2 块，每块约含基因组 DNA 100 ng，分
别用 0.1 U Sau3AⅠ和 5 U XbaⅠ处理普通熔点琼
脂糖凝胶块和低熔点琼脂糖凝胶块各一块，脉冲场
电泳检测酶切效果。 电泳结果显示（图 4），Sau3AⅠ
在低熔点琼脂糖凝胶块内几乎没有酶切效果，而能
将普通熔点琼脂糖凝胶块内的高分子 DNA 切割产
生很小的片段，大部分远小于 15 kb，以至于在经过
16 h 的脉冲场电泳后大部分小片段 DNA 已经跑出
电泳区域。 XbaⅠ对于普通熔点琼脂糖凝胶块内高
分子 DNA 和低熔点琼脂糖凝胶块内高分子 DNA
的酶切效果几乎没有区别。 Sau3AⅠ常用于基因组
文库制备中获得合适大小的 DNA 片段， 但研究结
果表明 Sau3AⅠ并不适合对洋葱伯克霍尔德氏菌
基因组酶切获得合适大小的 DNA 片段， 可能是因
为 Sau3AⅠ的酶切位点在该菌株的基因组 DNA 内
分布很不均匀， 酶切后难以获得大小较为平均的
DNA 片段。 Sau3AⅠ并不适合于低熔点琼脂糖凝胶
块内酶切，具体原因还有待探究。
2.2.2 普通熔点琼脂糖胶块内 DNA 的限制性内切
1 2 3
kb
48
1.λDNA；2，3.B.cepacia 基因组 DNA
图 2 基因组 DNA 电泳图谱
1 2 3
291
kb
97.0
63.5
48.0
33.0
15.0
1.低熔点琼脂糖凝胶包埋发制备的基因组 DNA；2.普通
熔点琼脂糖凝胶包埋法制备的基因组 DNA；3.MidRange
PFG MarkerⅠ
图 3 基因组 DNA 的脉冲场电泳分析

 1 2 3
 /ml 2.0×10
~
4.0×10
2.0×10~
4.0×10
2.0×10~
4.0×10
OD 1.341 1.861 1.902
  DNA µg/µl 0.910 0.620 0.370

表 1 菌体浓度对于琼脂糖凝胶块质量的影响
140
2009年第 3期
酶酶切 取 14 个切成合适大小的普通熔点琼脂糖
凝胶块 ， 其中 7 个凝胶块分别加入不同浓度的
HindⅢ进行酶切处理，另外 7 个凝胶块分别加入不
同浓度的 BamHⅠ进行酶切处理 （表 2），脉冲场电
泳检测酶切效果。 电泳结果（图 5）表明，HindⅢ和
BamHⅠ进行胶块内 HMW DNA 酶切能够获得较好
的酶切效果，添加 1 U~5 U 的 BamHⅠ进行酶切能
够获得大小在 15~33 kb 的 DNA 片段 ，该片断大小
适合于插入粘粒载体 pKC505 构建粘粒 DNA 文库。
为了使大部分基因组 DNA 经酶切后集中于 15~33
kb 的范围内，对 1 U~5 U BamHⅠ的不完全酶切条
件进行进一步优化。取 5 个切成合适大小的普通熔
点琼脂糖凝胶块，分别加入 1、2、3、4 及 5U 的 BamH
Ⅰ进行酶切处理，脉冲场电泳检测酶切效果。 电泳
结果（图 6）显示，当 BamHⅠ的添加量为 2 U 时，酶
切产生的片段大部分集中于 15~33 kb 的范围内 ，
该范围内的 DNA 片段适合于插入粘粒载体 pKC505
中构建粘粒 DNA 文库。
3 讨论与总结
构建大片段基因组文库的关键就是获得高分
子量的基因组 DNA， 只有得到长度约为插入 DNA
片段长度的 10 倍以上的基因组 DNA 时，才能保证
不完全酶切后产生的 DNA 片段两侧均有正确地粘
性末端可以与载体相连。本课题采用容量在 20 kb~
30 kb 之间的柯斯质粒 pKC505 为载体，因此初始基
因组 DNA 长度必须大于 300 kb， 利用成熟的商品
化试剂盒提取基因组 DNA 只能得到大小约在 20
kb 左右的 DNA； 酚抽提法需经过多次抽提才能得
到较纯的 DNA，极易造成基因组断裂，难以获得大
于 300 kb 的基因组 DNA， 因此这 2 种方法都不适
合 HMW-DNA 的提取。 为避免大分子 DNA 在提取
过程断裂， 细胞需在琼脂糖栓内原位裂解纯化，即
1 2 3 4 5
kb
82.0
63.5
48.0
33.0
1.Sau3AⅠ不完全酶切低熔点琼脂糖凝胶块内的 HMW
DNA；2.XbaⅠ不完全酶切低熔点琼脂糖凝胶块内的 HMW
DNA；3.XbaⅠ不完全酶切普通熔点琼脂糖凝胶块内的
HMW DNA；4.MidRange PFG MarkerⅠ；5.Sau3AⅠ不完全酶
切普通熔点琼脂糖凝胶块内的 HMW DNA
图 4 DNA 胶块不同限制性内切酶酶切效果的脉冲
场电泳分析

 1 2 3 4 5 6 7 9 10 11 12 13 14 15


BamH Hind

(U)
0.25 0.5 1 5 10 15 20 0.25 0.5 1 5 10 15 20

表 2 限制性内切酶酶切普通熔点琼脂糖凝胶块内
基因组 DNA 的酶切条件
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
kb
48.0
33.0
15.0
1~7.不同单位 BamHⅠ不完全酶切普通熔点琼脂糖凝胶块内的
HMW DNA；8.MidRange PFG MarkerⅠ；9~15. 不同单位 HindⅢ
不完全酶切普通熔点琼脂糖凝胶块内的 HMW DNA
图 5 普通熔点琼脂糖胶块内 DNA 的限制性内切
酶酶切分析
1.MidRange PFG MarkerⅠ；2~5.不同单位 BamHⅠ不完全酶
切普通熔点琼脂糖凝胶块内的 HMW DNA
图 6 普通熔点琼脂糖胶块内 DNA 的 BamHⅠ酶切分析
1 2 3 4 5 6
kb
48.0
33.0
15.0
王筱青等：洋葱伯克霍尔德氏菌 HMW DNA的制备及酶切研究 141
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2009年第 3期
将完整的细胞或胞核在熔化的琼脂糖中混悬后于
印模内固化 ，选择相应试剂浸入栓内，引起细胞裂
解和除去蛋白质。这样产生的 DNA 是完整的，大小
通常在几千 kb 左右， 并且易在原位被限制性内切
酶切开。 试验表明 ， 用琼脂糖凝胶块提取基因组
DNA 能够获得足够大的 DNA 片段， 可以完全符合
构建粘粒基因组文库的要求。
菌体浓度对于琼脂糖包埋法提取的基因组
DNA 质量影响很大， 适宜的菌体浓度控制在 2.0×
109~4.0×109 个 /ml 左右 ， 菌体浓度低导致胶块内
DNA 含量少，无法满足后续试验的要求，菌体浓度
高易导致胶块内杂质含量高，胶块纯度低。 分子克
隆试验指南（第 3 版）以及大多数国内外文献报道
[13~15] 均采用低熔点琼脂糖制备凝胶块提取基因组
DNA，但是低熔点琼脂糖价格昂贵 ，且胶块在制备
纯化的过程中容易破裂，因此尝试利用普通熔点琼
脂糖进行基因组 DNA 的制备， 结果表明普通熔点
琼脂糖和低熔点琼脂糖在基因组 DNA 的制备方面
没有区别。选取 Sau3AⅠ，XbaⅠ，BamHⅠ和 HindⅢ
4 种酶进行胶块内酶切， 结果表明 BamHⅠ和 Hind
Ⅲ在普通熔点琼脂糖胶块内酶切取得较好的酶切
效果， 且 2 U 的 BamHⅠ酶切 1 h 左右产生的片段
较集中于 15~33 kb 之间，适合于插入粘粒 pKC505
载体构建粘粒基因组文库。
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