全 文 ：技术与方法
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010年第 4期
分子标记技术在石斛属植物种质资源研究中的应用
黄海 李劲松 曹兵
(三亚市南繁科学技术研究院,三亚 572000)
摘 要: 介绍了分子标记的主要类型和特点, 综述了分子标记在石斛属植物的品种鉴定、药材的地道性、遗传多样性、
亲缘关系与分类、杂种纯度鉴定、遗传图谱构建等研究中的应用概况,同时对其应用前景进行展望。
关键词: 石斛 分子标记 种植资源 应用
The Application ofMolecularM arker Technique to the Studies of
Germplasm Resources ofDendrobium
HuangH a i L i Jinsong Cao B ing
(Sanya Science and T echnology A cademy forCrop W interM ultip lication, Sanya 572000)
Abstrac:t The m a in type and characteristic o f m o lecular m arkers are in troduced. The app lication o f m o lecular m arkers in the
fie lds o fDendrob ium such as variety identification, genetic d iversity, c lassification, de term ina tion of hybr id pur ity, construction o fm o
lecu la r g eneticmap a re rev iew ed in this paper. F ina lly, it po inted the fu ture develop ing d irections and application prospec t o fm olecu lar
m arker on germp lasm resources ofDendrob ium.
Key words: D endrob ium M olecular ma rker Germp lasm resources Applica tion
收稿日期: 20091228
基金项目:国家科技支撑计划 ( 2007BAD45B06 )
作者简介:黄海,男,博士,研究方向:分子遗传育种; Ema i:l huangh ai74@ 126. com
通讯作者:李劲松, Em ai:l fyseed@ 163. com
分子标记是继形态标记、细胞学标记和生化标
记之后发展起来的新的一种遗传标记。它反映的是
生物个体或种群间基因组中某种差异特征的 DNA
片段, 直接反映了基因组 DNA间的差异。与传统的
遗传标记相比,分子标记有许多明显的优越性,主要
表现以下方面:直接以 DNA的形式表现, 在生物体
的各个组织、各个发育阶段均可检测到, 不受季节、
环境限制,不存在表达与否等问题; 数量极多, 遍布
整个基因组;多态性高;表现中性, 不影响目标性状
的表达;共显性的特点,能区别纯合体和杂合体。分
子标记技术根据其核心技术可分为 3大类: 第 1类
是以分子杂交为核心的标记技术,包括 RFLP标记、
DNA指纹技术及染色体原位杂交等; 第 2类是以
PCR技术为核心的标记技术, 包括 RAPD、SSR、IS
SR、AFLP、STS、SCARs、APPCR和 SRAP等; 第 3类
是一些新型的分子标记技术, 如 SNP标记和 EST
等。分子标记已经被广泛应用于植物的遗传多样性
检测、品种鉴定、遗传关系的鉴定及遗传图谱的构建
等领域的研究 [ 1]。
石斛属 ( Dendrobium Sw. )是兰科中的第二大
属, 全球大约共有 1 500- 1 600个原生种,主要分布
于亚洲的热带、亚热带地区和大洋洲。我国有 76
种, 主要分布于西南和华南地区 [ 2]。石斛是著名的
中药材,目前供药用的有 39种 [ 3 ] ,具有滋阴清热、生
津益胃、润肺止咳、明目强身等功效,还具有抗肿瘤、
抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集
等作用 [ 4]。石斛兰也是一种观赏价值极高的花卉,
由于花姿优雅、花色鲜艳、花形优美花期长, 被喻为
四大观赏洋兰!之一, 许多国家还将其定为 父亲
节之花!。由于石斛属植物集药用和观赏于一体,
被过度地开发利用,加上生境的破坏及自身生长缓
慢等原因,石斛野生资源濒于绝灭。种质资源研究
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 4期
是资源保护和开发利用的基础。目前, 多种分子标
记技术如 RFLP、RAPD、AFLP、SSR和 ISSR等已经
在石斛属植物的种质资源研究中得到应用。
1 种质资源鉴定研究
1. 1 品种的鉴别和地道性研究
传统的植物鉴别方法是以表型特征为基础的鉴
别方法,包括组织形态学特征比较、化学成分分析、
同工酶分析等。然而,这些常规方法对一些疑难种、
易混种的鉴别往往很难得出正确有效的结论。
RAPD、RFLP和 SSR标记等分子标记技术的应用为
植物的种质鉴定开辟了一条新路。
张铭等 [ 5]用 RAPD技术对石斛属内 26个种和
金石斛属的 1个种进行了基因组 DNA多态性分析,
并根据筛选到的特异性 DNA片段序列,将 Sangon18
引物从 3∀端延长至 20 bp, 得到能准确鉴别铁皮石斛
(D. cand idum )的特异性引物。包英华等 [ 6] 采用
RAPD分子标记技术对不同产地美花石斛 (D. lod
d igesii)基因组总 DNA进行 PCR扩增, 从 117种随
机引物筛选出 8种有效引物, 其中 S2108的 PCR扩
增产物中的特异位点能够鉴别出广西玉林居群和贵
州安龙居群。肖鲲等 [ 7 ]用 RAPD方法构建石斛属
内 7种石斛及一种石仙桃植物 RAPD指纹图谱,试
验结果说明 RAPD技术可作为石斛属植物鉴别的有
效方法。张婷等 [ 8]采用 PCR - RFLP方法获得 ITS
片段的限制性图谱, 为鉴别束花石斛 ( D. chrysan
thum )、流苏石斛 (D. f imbriatum )及其形态相似种提
供依据。虞泓等 [ 9]采用 AFLP技术对石斛内 4个种
和 1个外类群种进行基因组 DNA多态性分析, 构建
了 5个种的 DNA图谱。沈颖等 [ 10]选取 10条 SSR
引物对 9种石斛进行多态性分析,引物 UBC807和
UBC864具有较高的多态性条带比率, 可以独立将
所有被测种区分开来。沈洁等 [ 11]从 76条引物筛选
了 10条引物进行 ISSR扩增来鉴别 8种石斛药品,
找到了 16个特异的鉴定标记,能准确地鉴别出 8个
野生种的石斛药品。樊洪泓等 [ 12]建立了一套适用
于石斛属植物稳定可靠、重复性强的 SRAP反应体
系,为 SRAP标记应用于石斛属植物的遗传多样性
研究及原植物鉴别奠定了基础。 Zhang等 [ 13]将 16
个不同种属石斛的 ITS15. 8SITS2序列固定于玻片
上制作了基因芯片,并用荧光标记的 ITS2序列作为
探针,可检测出 5种已被载入 #中国药典 ∃的石斛。
李同祥等 [ 14]建立了筛选 gDNA种特异性探针的抑
制性差减微阵列 SSHarray!新技术, 用筛选出的探
针对 5个石斛品种进行物种鉴定。
罗玉明等 [ 15]根据细叶石斛 (D. hancockii )及其
它 37种石斛的 rDNA ITS序列, 设计出鉴别细叶石
斛的位点特异性 PCR引物。丁小余等 [ 16]根据齿瓣
石斛 (D. devonianum )及其它枫斗类石斛的 rDNA
ITS序列数据库, 设计了齿瓣石斛的位点特异性
PCR鉴别引物。丁小余等 [ 17] 根据兜唇石斛 (D.
aphy llum )及其它 37种枫斗类和黄草类石斛的 rD
NA ITS序列, 设计了鉴别兜唇石斛的位点特异性
PCR引物。丁小余等 [ 18]对曲茎石斛 (D. f lex icaule )
与同属近似种进行外形和 rDNA ITS序列比较,并选
用了 7个碱基位点用作鉴别的 DNA证据,可根据药
材形态特征及 rDNA ITS碱基序列差异准确鉴别曲
茎石斛与同属近似种。丁小余等 [ 19]根据 rDNA ITS
区碱基序列差异,挑选了 15个碱基位点用作为鉴别
束花石斛及其相似种的 DNA标记。丁小余等 [ 20 ]建
立了 21种枫斗类石斛 rDNA ITS区的全序列数据
库, 利用枫斗类石斛的全序列数据库及遗传分析软
件, 通过对待检种 rDNA ITS区进行序列测定, 可以
成功鉴别属于数据库中枫斗类石斛的待检种。刘石
泉等 [ 21]利用石斛属植物基因库中 rDNA ITS序列数
据库,设计出 1对特异性引物, 能从 19种石斛 DNA
模板中鉴别出霍山石斛 (D. huoshanense )。应依
等 [ 22]根据测定及 GenBank上登录的 109种共计 164
个石斛样本的 rDNA ITS序列,设计了特异性鉴别引
物, 成功地对球花石斛 (D. thyrsif lorum )进行了位点
特异性 PCR鉴别。徐红等 [ 23] 根据金钗石斛 (D.
nob ile)及其他黄草类、枫斗类石斛的 rDNA ITS序列
数据库, 设计了专用于金钗石斛鉴别的 PCR引物。
徐红等 [ 24]通过分析 18种被称为 黄草 !的石斛 ITS
片段序列,结果表明, ITS 1与 ITS 2两段序列在石斛
种内保守,在种间有较大的差异, 与外类群的差异最
大, 可作为中药黄草石斛分子鉴定的标记。张婷
等 [ 25]扩增并测定了 9种石斛属植物线粒体中
NADH脱氢酶亚基 1编码基因 ( nad1)内含子 2 ( in
tron2)的全长序列。序列分析结果表明, 线粒体
nad1 intron 2序列可以作为一种新的分子标记用于
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2010年第 4期 黄海等:分子标记技术在石斛属植物种质资源研究中的应用
石斛属植物的鉴定。滕艳芬等 [ 26]比较几种药典收
载石斛与常见市场混淆品种的 m atK基因序列。结
果发现, 非石斛属的几种混淆品与正品石斛间的
matK基因序列差异远大于正品石斛间的差异, 通过
matK基因序列可以分析石斛及其混淆品间的遗传
关系, 将正品与混淆品区别开来。刘静等 [ 27]比较
12种药用石斛及密花石豆兰的叶绿体 DNA matK
基因序列差异。结果表明, 通过对待检种的 matK
基因全序列进行测定, 可以对石斛不同种及种内不
同居群 (品种 )进行鉴别。邵世光 [ 28]对 15种常见
枫斗类石斛 cpDNA的 psbAtrnH区进行了序列分
析,认为 cpDNA的 psbAtrnH区可作为枫斗类石斛
分子鉴别的候选标记。丁鸽等 [ 29]对石斛属 8个种
的叶绿体基因 matK、rbcL、核糖体基因 ITS, 以及线
粒体基因 nad1 intron2的序列差异进行分析, 认为
ITS序列位点差异和位点特异性 PCR在 GAP认证
和石斛质量控制过程中简单、实用而有效。
1. 2 杂种纯度鉴定
用传统手段进行杂种纯度鉴定很费时, 而且易
受环境条件的影响,分子标记可克服这些弊端。郑
勇平等 [ 30]对 30个引进的春石斛品种和杂交获得的
品种进行荧光 AFLP分析, 构建春石斛新品种的
DNA指纹图谱,为品种创新、新品种保护提供可靠
方便的技术手段。邓辉 [ 31]利用 ISSR分子标记技术
对安徽霍山产 3种药用石斛及其杂交优势种进行鉴
别,建立了安徽霍山 3种用于加工枫斗的优质药用
石斛的 ISSR指纹图谱, 为霍山石斛地理种源的群
体遗传多态性和广泛的良种选育与杂交提供了分子
水平上的参考和借鉴。
1. 3 遗传变异检测
石斛在长期栽培或组培快繁过程中, 都会出现
遗传变异,形成各种各样的突变类型。分子标记可
以用来鉴别形态学及同工酶分析难以鉴定的遗传变
异。罗远华 [ 32]以 4个母本园石斛兰品种和 1个试
管苗品种为材料, 采用 RAPD检测其遗传变异性。
结果显示, 绿意 (D endrobium Burana Green)和粉红
钻石 (D endrobium Pink Thamond) 2个母本园品种
未发现变异,熊猫 (D endrobium B ig Panda)和泰国白
(Dendrobium ThailandWh ite ) 2个母本园品种变异
率分别为 3. 3%和 23. 3% ; 红索尼娅 (D endrobium
Red Son ia)试管苗变异率为 10. 9%, 建立了石斛兰
品种遗传变异的 RAPD检测技术, 为筛选石斛的突
变新品种提供分子技术基础。
2 亲缘关系与分类研究
物种在进化过程中, DNA的变异是一个渐变的
过程。遗传关系越近,基因组 DNA差异越小;反之,
差异越大。因此, 通过分子标记技术可以为确定物
种间的亲源关系和进化地位提供有力的证据。
张建勇等 [ 33]利用 RAPD技术对石斛属植物 16
个种进行了基因组 DNA多态性分析。从 82个随机
引物筛选出 20个多态性好的引物进行 RAPD扩增,
扩增 DNA片段数据用 UPGMA聚类法构建系统发
育树。聚类结果显示 RAPD分子标记构建的系统发
育树与经典分类系统一致。虞泓等 [ 34]采用 AFLP
技术对石斛属内石斛组 4个种,包括金钗石斛、细茎
石斛 (D. moniliform e )、流苏石斛、束花石斛, 及一个
外群种 % % % 人工栽培种蝴蝶石斛 (D. phalaenop sis )
进行基因组多态性分析,从 64对引物组合中筛选出
了 5对引物组合, 构建了 5个种的 DNA指纹图谱,
通过聚类分析,石斛组 4种植物聚成 1个大类,与人
工栽培种蝴蝶石斛准确地区分开; 金钗石斛与细茎
石斛亲缘关系较近, 首先聚在一起,再与流苏石斛、
束花石斛聚为一类。金国虔等 [ 35]利用 APPCR方
法对 4种霍山来源的石斛属植物基因组 DNA进行
了多态性分析。结果表明, 4种霍山来源的石斛品
种具有较近的亲缘关系, 它们之间的平均遗传相似
系数分别为 0. 63, 其中铁皮石斛和铜皮石斛 (D. mo
niliform e )的亲缘关系最近, 二者的遗传相似系数为
078。它们与串珠石斛 (Dfalconeri ) 的遗传相似
系数分别为 0. 60和 0. 61, 与霍山石斛的遗传相似
系数分别为 0. 63和 0. 58; 相对于形态接近的铜皮
石斛,铁皮石斛与霍山石斛的亲缘关系更近。T sa i
等 [ 36]根据分析 ITS的序列差异确定了 12种台湾石
斛的遗传关系,完整地分析了 12种石斛及 2种非石
斛属植物的 ITS序列, 发现了 684个特征。建立了
其遗传距离和一个系统发育树,分为 4组,矩唇石斛
(D linaw ianum )、细茎石斛、黄花石斛 (D tosaense )、
细茎石斛 (台湾 ) (Dlep toclandum )、串珠石斛 (D.
falconeri)与叠鞘石斛 (Daurantiacum )归为一组, 长
距石斛 (Dchameleon )与红花石斛 (Dm iyakei)为一
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组,木石斛 (Dcrum enatum )与燕石斛 ( Dequitans)
为一组,双花石斛 (Dfurcatoped icellatum )和小双花
石斛 (Dsoma i)单独归为一组。袁佐清等 [ 37]从 55
个 ISSR引物中筛选出 14个多态性好的引物对石斛
属亲缘关系分析。结果表明,试验材料分为 5个类
群,第 1类包括石斛组的铁皮石斛、金钗石斛、晶帽石
斛 (Dcry staclinum )、樱石斛 (Dlinaw ianum )、细茎石
斛、线叶石斛 (Daurantiacum )、滇桂石斛 (D. guangx
iense)、流苏石斛和大苞鞘石斛 (Dwardianum ), 以
及黑毛组的黑毛石斛 (Dw iu iam sonii )和翅梗石斛
(Dtrigonopus), 而 #中国植物志 ∃并未对喉红石斛
(Dchristyantum )进行划分,该实验支持喉红石斛划
分在石斛组; 石斛组的霍山石斛、尖刀唇石斛 (D.
heterocarpum )、束花石斛、曲茎石斛、疏花石斛 (D.
henry i)和距囊组的红花石斛 (Dm iyakei)划分为第
2类;石斛组兜唇石斛、肿节石斛 (D. pendulum )、报
春石斛 (Dprimulinum )、独角石斛 (D. unicum )、细
叶石斛、玫瑰石斛 (D crep idatum )和禾叶组的竹枝
石斛 (D salccense)划分为第 3类; 顶叶组的密花石
斛 (Ddensif lorum )和鼓槌石斛 (D. chry sotoxum )为第
4类; 第 5类是圆柱叶组的海南石斛 (D. hainan
ense)。聚类结果显示 ISSR分子标记构建的亲缘关
系树状图与经典分类系统较一致。袁佐清等 [ 38 ]研
究 10种石斛植物叶绿体 rbcL基因序列变异和系统
发育关系。聚类结果显示石斛组的大苞鞘石斛、细
茎石斛、尖刀唇石 斛、独角石斛和矩唇石斛
(Dlinaw ianum )关系较近; 黑毛组翅梗石斛和距囊
组的红花石斛关系也较近; 瘦轴组的钩状石斛
(Dadum cum ), 石斛组的金钗石斛, 顶叶组的密花
石斛都单独为一类。这与 #中国植物志 ∃对石斛的
划分基本一致,在分子水平上显示了我国部分石斛
属植物间的亲缘关系。
3 遗传多样性分析
遗传多样性是生命进化和物种分化的基础,更
是评价自然生物资源的重要依据。保护生物多样性
的核心内容是遗传多样性的保护。分子标记技术可
以直接从分子水平提供遗传变异的证据, 是检测种
质资源多样性的最有效工具。
彭锐等 [ 39]利用 RAPD技术分析了 15种石斛属
药用植物的遗传多样性,选用 10个有效引物扩增出
99条 DNA片段, 其多态位点百分率为 84. 85%, 表
现出丰富的遗传多样性。王慧中 [ 40]等采用 RAPD
技术分析了 13种石斛属植物的遗传多样性。用筛
选出的 10个随机引物对供试材料 DNA进行随机扩
增, 共得到 188条带, 其中多态性带有 180条, 多态
性百分率为 9574%。任羽等 [ 41]利用 RAPD技术对
10种石斛种质资源的遗传多样性进行了分析。从
100条 10 bp的 RAPD引物中筛选获得 17条多态性
引物,对石斛属的 10个种的基因组 DNA进行扩增,
共获得 200条多态性带, 平均每个引物产生 11. 8个
多态性条带, 种间遗传相似系数变化范围为 0. 356
- 0. 676。金波等 [ 42]运用 RAPD技术对 11种野生
石斛进行基因组 DNA多态性分析, 从 100条随机引
物中筛选出 15个随机引物用于供试材料 DNA进行
随机扩增,共产生 152条带, 其中多态性片段有 129
条, 多态性百分率占 84. 9%。邱婧等 [ 43 ]采用 RAPD
技术从 103条随机引物中筛选出的 70条随机引物
对供试材料 DNA进行随机扩增, 共得到 520条带,
其中多态性带有 491条, 多态性百分率为 9442%。
金国虔等 [ 35]利用 APPCR方法对 4种霍山来源的
石斛属植物基因组 DNA进行了多态性分析, 从 75
种随机引物筛选出 10种扩增条带清晰、稳定的随机
引物,通过 PCR扩增共获得 250条 DNA片段,其中
呈多态性的片段数为 165条, 占扩增条带数的
66% ,表明霍山来源的石斛属植物具有较高的遗传
多态性。丁鸽等 [ 44]利用筛选出的 10个引物对 8个
铁皮石斛野生居群所进行的 RAPD研究。结果显
示, 各居群的多态性位点比率为 91. 35% , 略高于石
斛属种间的多态性比率,远高于其它濒危植物,说明
铁皮石斛具有较为丰富的遗传多样性。王慧中 [ 45]
等利用 AFLP技术分析 13种石斛属植物进行遗传
多样性,利用筛选出的 10个随机引物对供试材料
DNA进行随机扩增, 共得到 188条带, 其中多态性
带有 180条,多态性百分率为 95. 74%。白音等 [ 46]
采用 AFLP技术对我国 38种石斛属植物进行遗传
多样性分析,从 64对选择性引物中筛选出 8对引物
组合, 共扩增出 1 644个位点, 其中多态性位点
1639, 占总扩增位点的 99. 7% , 说明我国石斛属植
物遗传多态性水平很高。任羽等 [ 47]利用 SRAP技
术对海南 9种石斛种质资源的遗传多样性进行分
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2010年第 4期 黄海等:分子标记技术在石斛属植物种质资源研究中的应用
析。从 30对 SRAP引物中筛选获得 18对多态性引
物,对石斛属 9个种的基因组 DNA进行扩增。共获
得 285条多态性条带, 平均每个引物产生 15. 8个多
态性条带,种间遗传相似系数变化范围为 0. 179-
0. 636,说明海南省内分布的石斛具有丰富的遗传多
样性。樊洪泓等 [ 48]利用 SRAP分子标记技术进行
药用石斛的遗传多样性研究。筛选得到 40对多态
性引物组合,共产生 1 782条多态性条带,平均每个
引物组合产生 44. 55条多态性条带,显示了较高的
多态性比率。沈洁等 [ 49]通过筛选引物并设定影响
铁皮石斛 ISSR反应的诸因子的不同浓度, 检测 IS
SR不同反应体系的扩增效果, 建立起铁皮石斛 IS
SR稳定可靠的反应体系, 并用于遗传多态性分析。
结果表明 ISSR技术可以较好地应用于铁皮石斛的
居群鉴别及居群分子生态的研究。包英华等 [ 50 ]采
用 ISSR分子标记技术对 9个居群束花石斛的遗传
多样性进行分析。结果显示,束花石斛种内遗传多
态性水平较高,遗传变异较丰富, 9个居群的总扩增
条带为 242个,平均每个居群为 26. 90个,其中多态
性条带占 179个 ( 72. 90% )。马佳梅等 [ 51]采用 IS
SR分子标记技术对西双版纳分布的兰科濒危植物
流苏石斛 5个居群共 114个个体的遗传多样性进行
了研究。从 100条引物中筛选出了 12条用于扩增,
共检测到 117个位点, 其中 105个为多态位点。分
析结果表明, 流苏石斛居群水平遗传多样性较低。
丁小余等 [ 52]首次报道了铁皮石斛 ITS区的碱基序
列, ITS区总长度为 634 bp, 其中 ITS1为 231 bp,
58S为 163 bp, ITS2为 240 bp. 从 rDNA ITS区碱基
序列的比较分析进一步证明, 铁皮石斛 F型居群与
H型居群间具有显著的差异性。
4 遗传图谱的构建
种质资源收集保存的最终目标是为了种质的开
发利用和可持续发展。遗传图谱就是通过遗传重组
得到的基因线形图,它既是遗传研究的重要内容,又
是种质资源推荐与创新等许多应用研究的理论依据
和基础。长期以来,遗传图谱几乎都是根据形态、细
胞和生化标记来构建,但由于这类标记的数目有限,
极大地限制了该项工作的进行。分子标记的兴起大
大促进了遗传连锁图谱的构建和应用。应该指出,
用于遗传图谱构建的种质群体必须是连续几年选择
培育获得的系谱清楚的作图群体。由于栽培历史
短、遗传背景不清楚、可用分子标记数量有限等原
因,石斛属植物遗传图谱的构建研究进展缓慢。黄
少玲 [ 53]利用 RAPD标记构建了一张包含 9个连锁
群、由 121个标记位点组成的春石斛分子遗传图谱,
图谱总长度 6 568. 7 cm, 标记间平均距离为 50. 11
cm,连锁群长度变动在 128. 8 - 1 043. 0 cm之间。
标记最多的连锁群有 21个标记,最少的有 3个。
5 问题与展望
我国幅员辽阔, 地形复杂,石斛分布区域广阔,
种质资源相当丰富,但由于缺乏合理保护和开发利
用措施,致使野生资源日渐枯竭, 如铁皮石斛等名贵
品种已成为日益稀少的濒危植物。石斛种质资源研
究是也是资源保护和开发利用的基础。分子标记技
术由于不受环境因素、个体发育阶段及组织部位影
响、多态性强、准确率高等特点, 已经成为生物分类
学和遗传育种学等研究重要的工具。目前, 分子标
记技术已经在石斛种质资源研究, 如种质鉴定、亲缘
分析、遗传多样性检测、遗传图谱构建等方面得到了
广泛应用。然而,由于栽培历史短、生长发育缓慢、无
性繁殖成活率低、遗传背景模糊等原因,使得石斛属
植物种质资源研究进展缓慢,主要表现在以下几个方
面:可用 DNA分子标记数量有限, 特别是以经济性状
紧密连锁的分子标记少;所构建的遗传连锁图谱覆盖
基因组范围较小,饱和度低,标记间距离大;现有标记
还不能很好地与生产应用相结合;石斛种类繁多,同
名异种、异种同名现象严重;许多种类的种间遗传进
化与亲缘关系还不明确;由于分子标记技术本身存在
着不同程度的缺点和不足,如 RAPD技术存在由于重
复性、稳定性差,使得不同人之间研究结果难以比较
等等。鉴于以上问题,我们应该针对石斛种质资源研
究中的问题,加强国际国内的交流合作,开展多种分
子标记的研究,筛选出多态性高的引物和探针, 实现
自动化,降低成本,从而加快石斛种质资源研究进程。
随着分子标记技术在石斛种质资源上的广泛应用,特
别是分子标记技术与比较基因组学、功能基因组学、
蛋白组学科等学科相结合,将推动我国石斛种质资源
的遗传基础、起源与进化、品种分类、鉴定和分子育种
等基础科学的发展,从而更好地指导实践工作, 更好
地开发、利用和保护我国的石斛资源。
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生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 4期
参 考 文 献
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