全 文 ：·综述与专论·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010 年第 6 期
乳铁蛋白分子结构及其抗菌机制
朱艳萍 滕达 田子罡 白雪晶 杨雅麟 王建华
(中国农业科学院饲料研究所基因室 农业部饲料生物技术重点实验室，北京 100081)
摘 要: 乳铁蛋白是一种单体糖蛋白，是哺乳动物非特异性免疫系统的第一道防线，具有防御微生物感染的功能。分析了
乳铁蛋白氨基酸组成、多肽链折叠、铁结合结构、分子表面特性等与抗菌有关的分子结构。综述了乳铁蛋白抗微生物活性的作用
机制，包括限制 Fe3 +利用，抑制细菌生物膜形成，与负电性生物大分子结合，降解细菌毒力因子以及阻止细菌入侵等。
关键词: 乳铁蛋白 分子结构 抗菌机制
Molecular Structure and Antibacterial Mechanism of Lactoferrin
Zhu Yanping Teng Da Tian Zigang Bai Xuejing Yang Yalin Wang Jianhua
(Key Laboratory of Feed Biotechnology，The Ministry of Agriculture;Gene Engineering
Laboratory，Feed Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081)
Abstract: Lactoferrin is a monomeric glycoprotein，which has been considered as the first line defense protein of mammalian non-
specific immune system and involves in protection against microbial infection Lf s antibacterial-related molecular structure，including
the amino acid sequence，polypeptide fold，iron binding structure and surface properties were summrized The antibacterial mechanism
was reviewed，including its structure，deprivation of iron，influence of biofilm formation，interaction with macromolecular with negative
charge，degradation virulence factors of bacterial and inhibition of bacterial invasion
Key words: Lactoferrin Molecular structure Antibacterial mechanism
收稿日期:2010-02-04
基金项目:国家自然科学基金项目(30972125，30771574，30810303084) ，北京市自然科学基金项目(5062031，5093030)
作者简介:朱艳萍，女，硕士研究生，从事功能蛋白表达研究;E-mail:yanpingzhu1983@ 163 com
通讯作者:王建华，男，研究员，博士生导师，主要从事微生物学和生物技术研究;E-mail:wangjianhua@ mail caas net cn
乳铁蛋白(lactoferrin，LF)属转铁蛋白家族成
员，是哺乳动物体内一种重要的非血红素铁结合糖
蛋白［1］。LF主要由嗜中性粒细胞分泌，广泛存在于
乳汁、泪液、唾液、汗液、胰液、胆汁、精液等内外分泌
液中［2］。LF分子量约 80 kD，其高级结构由一条多
肽链折叠形成的两个结构相似的球状叶组成。由于
具抗炎症反应、免疫调节和铁离子结合功能，LF 被
认为是一种天然免疫因子和广谱抗菌剂［3］。LF 具
有抗革兰氏阳性菌(G +)和革兰氏阴性菌(G －)的
活性，其抗菌机制曾被认为主要与铁结合能力有关。
此外，大量体外试验提出了基于 LF 与细菌表面相
互作用的多种抗菌机制。
1 乳铁蛋白的分子结构
1 1 氨基酸组成
乳铁蛋白多肽链约由 700 个氨基酸组成，一般
含 2 － 4 条多聚糖侧链。多肽链氨基酸组成中 Arg
和 Lys含量较高，除含有少量 Cys，几乎不含其它含
硫氨基酸［4］。不同物种来源乳铁蛋白氨基酸序列
同源性高，分析 9 个物种(人、牛、野牛、骆驼、山羊、
绵羊、马、小鼠和猪)LF 氨基酸序列［5］发现，人、小
鼠和牛的同源性较高。其中，人和小鼠同源性达
70%，人和牛的达 69%，小鼠和牛的达 63%。
1 2 结构域
LF二级结构主要由 α-螺旋和 β-折叠交替排
列组成，α-螺旋多于 β-折叠［6］。X 射线所测人 LF
溶液和晶体三维结构［4］显示，在二级结构基础上
折叠形成的高级结构是两个极其相似且对称的球
状叶，即 N-叶(1 － 333)和 C-叶(345 － 691) ;两叶
序列同源性约 40%，这可能是生物进化中基因重
复复制所致［7］。N-叶和 C-叶均由两个 α /β 亚结
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2010 年第 6 期
构域组成，称为 N1、N2、C1、C2 亚结构域，N1 与
N2、C1 与 C2 亚结构域之间深裂隙为 Fe3 +结合位
点。N-叶和 C-叶之间由一条约含 10 － 15 个氨基
酸残基且对蛋白酶敏感的 α-螺旋连接。人乳铁蛋
白(hLF)连接区(334 － 344)对 N-叶和 C-叶铁结
合结构域的开闭起重要作用，具稳定铁结合结构
的作用。N-叶和 C-叶间无共价键连接，主要依赖
两叶间疏水作用维持空间结构稳定性。这种由两
个球状叶，4 个结构域构成的分子结构是转铁蛋白
家族成员分子动力学特点的结构基础［4］。
1 3 铁结合结构域
LF位于 N-叶和 C-叶的 Fe3 +结合配基是高度
保守的，均由 2 个酪氨酸、1 个精氨酸和 1 个组氨
酸残基以及与 Fe3 +协同结合的 CO2 －3 离子组成。
例如，Tyr92，Tyr192，Asp60 和 His253 组成位于
LF N-叶的 Fe3 +结合配基。在铁结合过程中，配基
提供 3 个负电荷中和 Fe3 +的正电荷;Arg121 和 N
端的第 5 个 α 螺旋所带正电荷中和协同结合的
CO2 －3 所带负电荷(图 1)
［8］，从而起到稳定铁结合
作用，配位体发生突变会削弱乳铁蛋白的铁结合
能力。当 Fe3 +进入 LF亚结构域裂隙内部时，此区
域闭合，分子结构趋于紧密。晶体学结构分析发
现，当铁饱和乳铁蛋白(Holo-LF)释放 Fe3 +时，两
叶发生相对旋转，暴露出铁结合位点，同时位于铁
结合位点后的 2 个碱性氨基酸残基 Arg210 和
Lys310 参与调节 Fe3 +的释放［8］。LF 释放 Fe3 +受
环境 pH影响，低 pH 值能使 CO2 －3 质子化，阴离子
质子化弱化了配基 Tyr，His等对 Fe3 +的结合作用，
从而实现通过 pH调节控制 Fe3 +释放［9］。LF 除了
结合 Fe3 + 外，还能与 Ga3 +，Al3 +，Mn2 +，Cu2 +，
Ca2 +，Mg2 +及镧系金属结合，但是缔结常数远低于
铁缔合常数［8］。
LF构象随铁饱和状态不同而变。X-射线晶体
衍射［8］发现，铁不饱和人乳铁蛋白(Apo-hLF)存在
多种构象，一种构象中 N2 亚结构域相对于 N1 亚结
构域转动 54°，C2 亚结构域相对于 C1 亚结构域转
动 18°;另一种构象中则分别转动 55°和 27°。这种
构象差异非 hLF 特有，不同物种 Apo-LF 构象间也
有差异，马 Apo-LF两叶都处于闭合状态［10］，而骆驼
Apo-LF两叶都处于开放状态［11］。这可能由于 LF
构象细微差异引起的能量变化所造成，这种能量变
化帮助实现铁结合结构域的开或闭。同时 LF 分子
构象的变化仅是亚结构域相互移动，并不影响分子
表面特性，不会破坏其表面的一些大分子结合位点。
1 4 分子表面特性
LF分子等电点 pI 较高约为 9，具较强阳离子
性，是 LF 能结合不同类型细胞及阴离子的主要原
因。晶体结构分析显示［8］，LF分子表面正电荷浓度
很高且不均匀，有 3 个显著的正电荷富集区域:N端
1 － 7 个氨基酸残基，第 1 个 α-螺旋(13 － 30 氨基酸
残基)和两球状叶连接区域的 α-螺旋附近(图 2)。
从图 2 可看出正电荷多分布于 N 端区域第 1 个 α-
螺旋上，N叶第 1 个螺旋的 12 － 31 个氨基酸残基构
成主要的抗菌功能区，也是 Lactoferrincin(Lfcin)的
抗菌功能域［12］。所有 LF的这一段螺旋都含有 5 －
6 个碱性残基，其构象不受 Fe3 +饱和度影响。此外，
N叶 1 － 5 个氨基酸残基暴露在分子表面，正电荷密
度高，与邻近 C-叶末端 α-螺旋一起构成 DNA，LPS，
肝素，葡胺聚糖等大分子结合位点［8］。例如，LF 可
与细菌细胞表面蛋白如肺炎链球菌表面蛋白 PspA
结合。另推测，LF蛋白水解酶活性位点位于分子表
面 Ser 残基上且靠近 Lys，但不同物种 LF 的这一功
能区域是不同的。
图示 hLF N-叶铁结合位点，Tyr92、Tyr192、Asp60 和
His253 组成铁结合配基，Arg121 和 N 端的第 5 个 α 螺
旋有助于稳定协同结合的 CO2-3 。同时位于铁结合位点
后的两个碱性氨基酸残基 Arg210 和 Lys310 参与调节
Fe3 +的释放
图 1 乳铁蛋白铁结合位点示意图［8］
83
2010 年第 6 期 朱艳萍等:乳铁蛋白分子结构及其抗菌机制
上半部分显示 LF立体空间构象，下半部分显示与空间构象
相对应的多肽链构象。正电荷最密集区域为 N-末端，L表
示抗菌肽 Lactoferricin的功能域，H为两叶间的连接区
图 2 乳铁蛋白表面电荷分布图［8］
1 5 糖基化
LF 是一种糖蛋白，糖基共价结合在 Asn-X-
Thr /Ser(X为任意氨基酸)的天冬酰胺残基上，形成
2 － 4 条 N-连接型糖链。不同物种乳铁蛋白潜在和
实测的糖基化位点和数目有差异［8］。例如小鼠 LF
只有 1 个潜在糖基化位点 Asn476，人乳铁蛋白有 3
个糖基化位点 Asn137、Asn478 和 Asn623，而牛、山
羊、绵羊乳铁蛋白则含 5 个糖基化位点，分别为
Asn233、Asn281、Asn368、Asn476 和 Asn545。某些位
点糖基化反应是受限制的，如 hLF 一般只使用
Asn137 和 Asn478 这两个糖基化位点［13］，牛乳铁蛋
白中 Asn281 未被使用［14］。大多数糖基化位点暴露
在分子表面，糖链残基除了和肽链部分形成少量氢
键外，几乎不影响蛋白质结构。糖基化与否并不影
响铁的结合和释放，热稳定性以及 CD 谱图等特
征［8］。但骆驼 LF 糖基化直接影响它的结构和铁结
合能力，这是因为 Asn518 位于骆驼 C-叶铁结合位
点处，此位点又是糖基化位点，此位点一旦糖基化就
会抑制铁结合结构域闭合，造成铁结合能力下
降［11］。乳铁蛋白中糖链功能尚不十分明确，可能参
与 LF与细菌毒素结合位点的识别或与细胞膜上信
号接触及其它活性有关。
2 LF的抗菌机制
LF发挥抗菌功能主要与其分子结构特性有关。
结合 Fe3 +限制细菌生长曾被认为是 LF的一种重要
抗菌机制。然而，体外试验提出了与 LF 分子表面
特性相关的更多抗菌机制，如与负电性的生物大分
子结合或是发挥蛋白水解酶活性降解细菌黏附蛋
白等。
2 1 限制 Fe3 +的利用
LF对铁离子高度亲和性是其发挥抑菌作用的
基础。铁是大多数细菌生长所必需的金属离子，LF
通过螯合 Fe3 +限制细菌对 Fe3 +的利用，抑制 Strepto-
coccus mutans，Vibrio cholerae 等菌生长［3］。LF 能抑
制致病菌 Actinobacillus actinomycetemcomitans 生长，
且抑菌作用受铁饱和状态影响［15］。Griffiths 等［16］
通过体外抑菌试验证明缺铁 LF和铁饱和度 66% LF
可显著抑制 E coli 0157 ∶ H7 的生长，而铁饱和度
98% LF则无明显抑菌活性。人 hLF 多以不饱和形
式存在，能结合 Fe3 +，经结合 Fe3 +使机体内 Fe3 +维
持在细菌生长所需浓度水平以下，防御细菌感染。
但这种依赖螯合 Fe3 +的抑菌作用并不绝对有效，有
的细菌可通过其它途径解除缺 Fe3 +限制。如革兰
氏阴性菌 Salmonella spp 、Klebsiella spp 和 Neisseria
spp 等通过表达铁载体蛋白，与 LF 竞争性结合
Fe3 +，满足自身需要［17］。此外，Neisseria meningitidis
和 Haemophilus influenzae可在外膜上表达特异的 LF
受体，通过内化 Holo-LF，提高获得 Fe3 +的能力;但
此类 LF受体种属特异性高［18］。
2 2 抑制细菌生物膜的形成
生物膜是指一些病原细菌通过自身分泌大分子
多聚物，吸附营养物质、代谢产物以及细菌裂解产物
等物质，与邻近的菌体形成有组织的细菌群体。形
成生物膜的细菌能够对抗机体免疫防御系统，并对
抗生素产生抗性。生物膜的形成与营养成分、温度、
渗透压、pH、铁离子浓度等环境信号有关。
Weinberg［19］认为在细菌生物膜形成的起始黏
附、发展和成熟 3 个阶段均需 Fe3 + 介导。Singh
等［20］发现，高浓度 Fe3 +能减缓 Pseudomonas aerugi-
93
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2010 年第 6 期
nosa的蹭行性运动，使子代细胞停留在分化位点，
有助于细菌间黏附形成生物膜;当 Pseudomonas
aeruginosa和 Apo-LF 共培养时，随着代数增加，自
由移动的细胞逐渐增多，不利于细菌凝集。Apo-LF
能通过螯合 Fe3 +，降低环境中 Fe3 +浓度，阻止细菌
的粘附和生物膜形成。将 Pseudomonas aeruginosa
和 LF共同孵育，降低了该菌对 H2O2和妥布拉霉素
的抗性。
囊性纤维病(cystic fibrosis，CF)是由 P aerugi-
nosa在肺部集群生长形成生物膜所引起的气管性
疾病，据报道在 CF病人体内，LF含量比正常状态下
高许多倍，但由于患者气管和痰中含大量 Fe3 +(6 3
× 10-5M) ，使 hLF(1 × 10-5 M)处于饱和状态，妨碍
LF发挥抑菌作用［21，22］。但也有研究发现［23］牙周
炎病人唾液中 Fe3 +浓度 < 0 1 μmol /L时，患者口腔
中 Streptococcus mutans更易发生细胞凝集，形成生物
膜;当 Fe3 +浓度 > 1 μmol /L 时，会抑制 S mutans 凝
集和生物膜形成。
2 3 与表面正电荷相关的杀菌作用
如上所述，LF通过铁结合发挥的抑菌作用能随
环境中 Fe3 +浓度增高而解除，但 hLF还具有直接杀
菌活性，LF可与细菌表面分子非特异性结合，封闭
细菌细胞膜上重要的通道位点，阻断营养物质和细
菌毒性蛋白的运送，抑制细菌的合成代谢，导致菌体
死亡。G －外膜上脂多糖(LPS)的释放被认为是最
为重要的抗菌分子机制之一。细菌 LPS 为构成 G －
细胞外膜的主要成分。LF 与细菌细胞外膜上的孔
道蛋白结合，诱导 LPS释放，LPS的释放增加了细胞
外膜对疏水分子的通透性，有利于溶菌酶和其他抗
菌分子进入细胞发挥杀菌作用［24］。LF 可能通过两
条途径来影响 LPS的释放，第一条途径是通过 N 叶
正电荷簇与致病菌细胞外膜 LPS 分子的脂质体 A
结合，直接发挥作用［25］。另一途径与 LF 和 LPS 竞
争性螯合 Ca2 +有关［26］，LPS 与 Ca2 +结合后能稳定
外膜空间结构，当 LF与 Ca2 +结合后，外膜结构稳定
性被打破，导致 LPS 释放。Rossi 等［27］试验发现 LF
不需与细菌直接作用，只是通过结合 Ca2 +，就能导
致 G －释放大量 LPS。Ellison 等［26］观察到当 Apo-
bLF在不含 Ca2 +和 Mg2 +的 PBS 中时，能介导浓度
依赖方式的 LPS 释放，当向 PBS 中加入 Ca2 + 和
Mg2 +时，LF则不能显著促进 LPS 的释放。而 Ca2 +
与 bLF的结合具有特异性，Ca2 +在热变性和化学变
性过程中对 LF 结构起显著稳定作用，因为 Ca2 +能
够与 bLF两条糖链上的唾液酸残基结合［27］。
LF的晶体结构显示其正电荷主要分布于 N-
叶，推测 N-叶是发挥杀菌作用的主要功能区域。LF
对 G +的杀菌机理与阳离子抗菌肽［28］和两亲性抗菌
肽［29］的作用机理相似，即阳离子性氨基酸残基与膜
上带负电性的磷壁酸通过静电相互作用结合，两亲
性的氨基酸残基打破了细菌内膜的非极性环境，造
成膜通透性发生改变，使菌体内容物外泄而致
死［30］。
2 4 与蛋白水解酶活性相关的抗菌作用
最新研究发现 LF 具蛋白水解酶活性，为阐释
LF抗菌作用提供了新思路。Plaut 等［31］发现当 H
influenzae在以人乳为惟一营养源的环境中生长时，
hLF能降解 H influenzae IgA1 蛋白酶。Hendrixson
等［32］证实 hLF的 N-叶具有与丝氨酸蛋白酶相似的
蛋白水解酶活性，不仅能水解 IgA蛋白酶，还能水解
Hap黏附素，切割位点可能位于蛋白的 Arg-富集区。
G －能够通过 III型分泌系统分泌毒蛋白侵入宿
主细胞，Therese 等［33］发现 hLF 能削弱 Shigella 和
Enteropathogenic E coli (EPEC)模式菌分泌毒蛋白
的能力。用 LF处理 Shigella，能促使 III型分泌系统
分泌的侵袭质粒抗原 IpaB 和 IpaC 的释放和降解，
这两种蛋白能够形成复合物介导 Shigella 侵入宿
主。LF还能通过降解 E coli 分泌的毒蛋白 EspA，
EspB，EspC，阻止 E coli对 HEp2 细胞的黏附。推测
LF可能通过两个步骤抑制 III型分泌系统分泌的毒
蛋白毒性的发挥。首先 LF 刺激细菌分泌毒性抗
原，LF结合细菌外膜 LPS 的脂质体 A 部分，使膜结
构缺乏弹性，影响与细菌分泌毒素相关的针形蛋白
复合物在外膜上的锚定，造成毒性抗原释放。第二
步 LF发挥蛋白水解酶作用，降解毒力蛋白。但是
发现在 Shigella 中，一旦形成 IpaBC 复合体便会对
LF水解作用产生抗性，可能 LF 只能在复合体形成
前发挥作用。
Massucci等［34］用体外合成的底物验证 LF 的蛋
白水解酶活性时发现，LF 的催化常数(kcat)比胰蛋
白酶的低很多个数量级，并能与丝氨酸蛋白酶亲和
04
2010 年第 6 期 朱艳萍等:乳铁蛋白分子结构及其抗菌机制
层析柱相结合的 LF不超过 10%。尽管进行了大量
试验和分子动力学分析，仍不能确定 LF 的蛋白水
解酶活性位点以及其作用的天然底物。总之，由于
LF水解底物的催化常数很低，又缺乏有关催化位点
的几何学正确定位，需要更多更深入的研究以确定
LF蛋白水解酶活性及其生物学意义。
2 5 抑制细菌对宿主的侵袭
许多黏膜病原菌不仅能附着在宿主细胞上，还
能避开宿主防御系统侵入上皮细胞生存和繁殖。细
菌分泌的侵袭素与宿主整联蛋白受体结合是介导细
菌入侵的主要途径。Apo-LF 和 Holo-LF 能与宿主
细胞和细菌结合［35］，掩盖了宿主整联蛋白和细菌侵
袭素的互作位点，从而阻止 E coliHB101(pRI203)
进入 HeLa细胞。Di Biase 等［36］发现 bLfcin 在不影
响 Yersinia enterocolitica 对 HEp-2 细胞附着的情况
下，使其侵染能力降低了 10 倍。
糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAGs)是细胞间
质重要组成部分，可与核心蛋白结合形成蛋白聚糖，
能与胞外基质中纤连蛋白结合，形成的异源二聚体
糖蛋白具有多个配体结合结构域，可与肝素，纤维蛋
白等多种配体结合。同时纤连蛋白作为配体能与
α5β1整联蛋白的受体结合，介导微生物的黏附反
应。bLfcin与肝素结合，瓦解了 GAGs，纤连蛋白和
整联蛋白间配体-受体复合物的形成，而它们之间互
作有助于 Yersinia enterocolitica 分泌的 YadA 蛋白发
挥黏附作用。bLfcin与 GAGs 结合还能降低细菌侵
袭素和宿主整联蛋白的亲和性，并抑制整联蛋白受
体的聚集，阻断了由受体聚集产生的内化信号的传
递，从而导致细菌只能在宿主细胞上黏附而无法有
效地内化。
Rose等［37］报道了不同的抗细菌侵入机制，A
actinomycetemcomitans 能分泌一种自主转运蛋白
Aae，有助于细菌与上皮细胞的结合和入侵，hLF 能
切割此蛋白，致其失活。也有认为 LF 能结合在特
定 DNA 序列上，激活相关基因转录，通过调节基因
表达引起对细菌内化起关键作用的细胞骨架的
重排［38］。
3 总结
综上所述，乳铁蛋白通过铁结合，抑制细菌生物
膜形成，破坏细胞膜稳定性，降解细菌毒力蛋白，防
止致病菌入侵等多种方式发挥其广谱抗菌作用。但
大多数抗菌机制的阐明在很大程度上受制于体外试
验条件的影响，如 LF饱和度、环境 pH、温度、缓冲液
离子强度以及微生物自身结构特点和对铁的依赖程
度等，由于体内环境复杂多变，推测 LF 可能通过多
种途径发挥作用。LF 抗菌机理的充分揭示有待更
多更深入的研究。
参 考 文 献
［1］Sargent PJ，Farnaud S，Evans RW Structure / function overview of
proteins involved in iron storage and transport Curr Med Chem，
2005，12(23) :2683-2693
［2］Jacobsen LC，Sorensen OE，Cowland JB，et al The secretory leu-
kocyte protease inhibitor (SLPI)and the secondary granule protein
lactoferrin are synthesized in myelocytes，colocalize in subcellular
fractions of neutrophils，and are coreleased by activated neutrophils
J Leukoc Biol，2008，83(5) :1155-1164
［3］Jenssen H，Hancock RE Antimicrobial properties of lactoferrin
Biochimie，2009，91(1) :19-29
［4］Baker EN，Baker HM Molecular structure，binding properties and
dynamics of lactoferrin Cell Mol Life Sci，2005，62 (22) :
2531-2539
［5］Kang JF，Li XL，Zhou RY，et al Bioinformatics analysis of lacto-
ferrin gene for several species Biochem Genet，2008，46(5-6) :
312-322
［6］Gonzalez-Chavez SA，Arevalo-Gallegos S，Rascon-Cruz Q Lacto-
ferrin:structure，function and applications Int J Antimicrob A-
gents，2009，33(4) :301. e1-8.
［7］Teng CT，Gladwell W Single nucleotide polymorphisms (SNPs)in
human lactoferrin gene Biochem Cell Biol， 2006， 84 (3) :
381-384
［8］Baker EN，Baker HM A structural framework for understanding the
multifunctional character of lactoferrin Biochimie，2009，91(1) :
3-10
［9］Baker EN，Baker HM，Kidd RD Lactoferrin and transferrin:func-
tional variations on a common structural framework Biochem Cell
Biol，2002，80(1) :27-34
［10］Kumar P，Khan JA，Yadav S，et al Crystal structure of equine
apolactoferrin at 303 K providing further evidence of closed confor-
mations of N and C lobes Acta Crystallogr D Biol Crystallogr，
2002，58(2) :225-232
［11］Khan JA，Kumar P，Paramasivam M，et al Camel lactoferrin，a
transferrin-cum-lactoferrin:crystal structure of camel apolactoferrin
at 2 6 A resolution and structural basis of its dual role J Mol Biol，
2001，309(3) :751-761
［12］Gifford JL，Hunter HN，Vogel HJ Lactoferricin:a lactoferrin-de-
14
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2010 年第 6 期
rived peptide with antimicrobial，antiviral，antitumor and immuno-
logical properties Cell Mol Life Sci，2005，62(22) :2588-2598
［13］Haridas M，Anderson BF，Baker EN Structure of human diferric
lactoferrin refined at 2 2 A resolution Acta Crystallogr D Biol
Crystallogr，1995，51(5) :629-646
［14］Moore SA，Anderson BF，Groom CR，et al Three-dimensional
structure of diferric bovine lactoferrin at 2 8 A resolution J Mol
Biol，1997，274(2) :222-236
［15］Fine DH，Furgang D Lactoferrin iron levels affect attachment of
Actinobacillus actinomycetemcomitans to buccal epithelial cells J
Periodontol，2002，73(6) :616-623
［16］Griffiths EA，Duffy LC，Schanbacher FL，et al In vitrogrowth re-
sponses of Bifidobacteria and Enteropathogensto bovine and human
lactoferrin Dig Dis Sci，2003，48(7) :1324-1332.
［17］Shouldice SR，Skene RJ，Dougan DR，et al Structural basis for i-
ron binding and release by a novel class of periplasmic iron-binding
proteins found in gram-negative pathogens J Bacteriol，2004，186
(12) :3903-3910
［18］Ekins A，Khan AG，Shouldice SR，et al Lactoferrin receptors in
gram-negative bacteria:insights into the iron acquisition process
Biometals，2004，17(3) :235-243
［19］Weinberg ED Suppression of bacterial biofilm formation by iron
limitation Med Hypotheses，2004，63(5) :863-865
［20］Singh PK，Parsek MR，Greenberg EP，et al A component of in-
nate immunity prevents bacterial biofilm development Nature，
2002，417(6888) :552-555
［21］Caraher EM，Gumulapurapu K，Taggart CC，et al The effect of
recombinant human lactoferrin on growth and the antibiotic suscep-
tibility of the cystic fibrosis pathogen Burkholderia cepacia complex
when cultured planktonically or as biofilms J Antimicrob Chemoth-
er，2007，60(3) :546-554
［22］Rogan MP，Taggart CC，Greene CM，et al Loss of microbicidal
activity and increased formation of biofilm due to decreased lacto-
ferrin activity in patients with cystic fibrosis J Infect Dis，2004，
190(7) :1245-1253
［23］Berlutti F，Ajello M，Bosso P，et al Both lactoferrin and iron in-
fluence aggregation and biofilm formation in Streptococcus mutans
Biometals，2004，17(3) :271-278
［24］Ellison RT，Giehl TJ Killing of gram-negative bacteria by lacto-
ferrin and lysozyme J Clin Invest，1991，88(4) :1080-1091
［25］Chodaczek G，Zimecki M，Lukasiewicz J，et al Lactoferrin-mono-
phosphoryl lipid A complex enhances immunity of mice to Plesi-
omonas shigelloides CNCTC 138 /92 Acta Biochim Pol，2008，55
(1) :91-96
［26］Ellison RT，LaForce FM，Giehl TJ，et al Lactoferrin and transfer-
rin damage of the gram-negative outer membrane is modulated by
Ca2 + and Mg2 +  J Gen Microbiol，1990，136(7) :1437-1446
［27］Rossi P，Giansanti F，Boffi A，et al Ca2 + binding to bovine lacto-
ferrin enhances protein stability and influences the release of bacte-
rial lipopolysaccharide Biochem Cell Biol，2002，80(1) :41-48
［28］Tian ZG，Teng D，Yang YL，et al Multimerization and fusion ex-
pression of bovine lactoferricin derivative LfcinB15-W4，10 in
Escherichia coli Appl Microbiol Biotechnol，2007，75 (1) :
117-124
［29］Yang YL，Tian ZG，Teng D，et al High-level production of a
candidacidal peptide lactoferrampin in Escherichia coli by fusion ex-
pression J Biotechnol，2009，139(4) :326-331.
［30］Onishi J，Roy MK，Juneja LR，et al A lactoferrin-derived peptide
with cationic residues concentrated in a region of its helical struc-
ture induces necrotic cell death in a leukemic cell line(HL-60) J
Pept Sci，2008，14(9) :1032-1038
［31］Plaut AG，Qiu J，Grundy F，et al Growth of Haemophilus influ-
enzaein human milk:synthesis，distribution，and activity of IgA
protease as determined by study of iga + and mutant iga-cells J
Infect Dis，1992，166(1) :43-52
［32］Hendrixson DR，Qiu J，Shewry SC，et al Human milk lactoferrin
is a serine protease that cleaves Haemophilus surface proteins at ar-
ginine-rich sites Mol Microbiol，2003，47(3) :607-617
［33］Ochoa TJ，Clearly TG Lactoferrin disruption of bacterial type III
secretion systems Biometals，2004，17(3) :257-260
［34］Massucci MT，Giansanti F，Di Nino G，et al Proteolytic activity
of bovine lactoferrin Biometals，2004，17(3) :249-255
［35］Longhi C，Conte MP，Seganti L，et al Influence of lactoferrin on
the entry process of Escherichia coli HB101 (pRI203) in HeLa
cells Med Microbiol Immunol，1993，182(1) :25-35
［36］Di Biase A M，Tinari A，Pietrantoni A，et al Effect of bovine
lactoferricin on enteropathogenic Yersinia adhesion and invasion in
HEp-2 cells J Med Microbiol，2004，53(5) :407-412
［37］Rose JE，Meyer DH，Fives-Taylor PM Aae，an autotransporter
involved in adhesion of Actinobacillus actinomycetemcomitans to epi-
thelial cells Infect Immun，2003，71(5) :2384-2393
［38］Ashida K，Sasaki H，Suzuki YA，et al Cellular internalization of
lactoferrin in intestinal epithelial cells Biometals，2004，17(3) :
311-315.
24