全 文 ：第5卷第3期
2007年8周
生物加工过程
ChineseJoumalofBioproce88En舀neering
Aug．2007
·43·
少根根霉菌株发酵生产纤溶酶条件的研究
张云瑞1，常翠贤2⋯，梁海秋2，杨辉2，周河治2
(1．山东轻工业学院 食品与生物工程学院，济南250353；
2．广西大学 生命科学与技术学院，南宁530004；
3．北京市食箍研究所，北京l∞076)
摘要：发酵条件优化可提高少根根霉菌株8B所产纤溶酶的活性。使用单因素试验和正交试验确定该菌发酵产
酶的最佳条件。试验确定最优化发酵条件，培莽基：麸皮水5∥L，尿素5g／L，胰餐白胨0．5∥L，K2HPO。·3H：0
o．3∥L，M拶O。·7壬{200．15∥毛，pH5．5 摇床转速160∥min，30℃发酵56h。在_I璁|优化条停下培养，88产绔溶酶
活秀这割345。4lⅣmL，是劾始培养基发酵产酶活力的7．52锫。
关键词：少根根霉；纤溶酶；发酵条件
中图分类母：Q939．97 文献标识码：A 文章编号：1672—3678(2007)03一0043—05
InVes耄i鬈鼗tionml＆rmentatio致condit耋onsof凌足螽拓印掰葶霸舯魄恐酝producing
fibrinolVticenzVme
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2．CoⅡege6f“feScienceandnchnolo盱，GnaII铲iUIlive瑙蛳，Nan|ling53000；4，China；
3．BeijiIlgFbodRearchInstitute，Beijing100ar76，China)
A酗妇e￡：飘谶pr。Ve氇e黔巍匆《鑫赫魏oly￡iee珏zyme《擞洳渺8蕊施8嚣，盛cls《si懿誉e一沁t艇
andonho转onaldesignexperimentsw reinVestigated．Results8howedthatheoptimiumfe删lentationcon—
ditionswereasfollows：themedumincluding5 g／Lbran，5g／Lurea，0．5∥Ltryptone，0．3g／LK2
HP04·3H20，O．15∥LMgS04·7H20；pH5．5，shaker160／min，at30℃，for56h．Underthecondi一
耄主ons，lhee魏zymeac羲Vi垮糙ached345。4lU／越L，娃ieh7。52times量li曲er凌毽|l凌a主ob魄i辣edu芏lder巍e
inilialeonditions，
Keywords：尺^却獬口r晰如“；fibrinolyticenzyme；fe咖entationconditions
血栓性疾病已成为人类健康的头号杀手，对抗
趣栓性疾病主要有外科手术、傈守疗法、溶稔疗法3
种H。2』。其中溶栓疗法是当前用于治疗此类疾病最
可靠、最实用的方法。根据溶栓药物的来源，可以
分为来源于动物和来源于微生物的药物"J，微生物
生产酶纾溶酶具有培养速度抉，适宜大规模生产等
优点，目蘸已成为困内外研究的重点。国内外已有
的报遂多是采震细菌生产纤溶酶，关于霉菌发酵产
此类酶开展的研究较少。霉菌发酵具有培养方便，
发酵过程中不易染茵，培养周期短等优点。
本研究是对筛选得到的产纤溶酶的少根根霉
菌株88的发酵条件进行探索，透过单因素试验獠
收稿日期：2007J。2—13
作者简介：张云瑞(1958一)，女，山东涛南人，副教授，研究方向：微生物发酵工程；E∞正1：zh㈣ge舵∞8@yahoo．com．en
万方数据
万方数据
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·46· 生物加工过程 第5卷第3期
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pH
蚕3发酵初始p薹差瓣产酶的彰晌
Fig．3Effectsofdifferentor溺nalpHon舳rinolytic
erIzymeprodllctivity
25
20
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＼
飞 lO
5
0
120 140 160 180 200 220
转速，(r·min_1)
霾4不弱摇珠转速瓣产酶的影晌
Fig，4Eff＆ts《di脆rentrotatespeedon舳rinolytic
en碍meproductivity
O
2．5微量元素配城对产酶的影响
由表2试验结果可知，K：HPO。·3H：O和MgsO。
·7遵0对产酶影蟋较大，磋者露时使用，效果最镶；
caCl：单独加入培养基中，发酵能正常进行，但是没
有纤溶酶释放出来，K：HPO。·3H：O和MgS04·7H20
单独加入，会抑裁纤溶酶的释放，但是3者藏时使
用，抑制作用会被抵消，故培养基中加入K：HP0。·
3H：O和M§O；-7}{120进行下一步试验。
袭2微量元素配比
Table2 Micmelementpercenta黔
p(＆}lP啦’尹(醚签镇+p(caCl2)／蠢(溶霾)／
因素 3H20)／ 7H20)／g·L— mm
g：兰：： g：垦：：——
A O。l O．05 O．1 22．O
B 0．重 0 0 王8。5
C 0．1 O．05 O 22．5
D O．1 O O．1 16．5
E e 0。晒 0。l 0
F O 0．05 O 19．O
G O 0 O．1 0
2．6发酵过程中各个参数的变化
根霉发酵过程是一个耗酸的过程，发酵液的初
始pH从5．5最终能升到9．1附近；该菌的生长曲
线表明，该菌8h内为延滞裳，8～24ll为对数生长
期，24～72h为平稳期，72h以后进入衰亡期。该
菌产酶在56h达到最大值，而后逐步下降。选取
56h为该菌的最适发酵时闻。
25
20
i
15
毛 lo
5
O
25 50 75 lOO
￡，h
+溶圈盥径一生物缀
霾5 8转发酵遂程鞠线
Hg．5FeⅡnentationcurve8of B
2。7正交试验结果及英分撰
对试验结果进行方差分析，结果如下。
袭2方差分辑表[k《3n}】
墨她le2 Variancean由sis【l口7{3B)j
注：+显著；一极显著
根据单因素试验和正交实验方差分鞭结果确
定了试验方案。培养基(g／L)：麸皮水5，尿索5，胰
蛋白胨0．5，K2HP04·3H20o．3，M拶04·7H20o．15；
p嚣5．5；转速160r／臻弧；30℃发酵56囊，剥耀以上配
方进行验证试验，所产酶活力达到345．41U／mL，是
初始酶活力的7．52倍。
窘／卿黎鲻
6
5
4
3
2
1
n
O
O
O
O
0
O
万方数据
2007年8月 张云瑞等：少根根霉菌株发酵生产纤溶酶条件的研究 ·47·
3讨论
通过对8B产酶最适发酵条件的单因素试验，
发现用尿素代替原有培养基中的豆汁，产酶活性较
高，且酶不易失活。尿素与豆汁相比，不受产地因
素影响，避免煮豆取汁带来的能源浪费与时间消耗
问题，使得发酵成本明显降低，产酶活性得到稳定
提高。所产酶体外作用于红细胞，不产生损伤。在
国内外已有的研究中，利用尿素和胰蛋白胨为复合
氮源进行发酵生产纤溶酶尚未见报道。至于尿素
替代豆制品发酵提高产酶量和稳定酶活的作用机
理还有待研究，但实验结果表明8B所产纤溶酶不
是由于大豆蛋白中的纤维蛋白结构类似物诱导产
生的。
参考文献：
[1]赵友春，赵淑梅，王革，等．第三代溶血栓药物研究进展[J]．
药学进展，2004，28(2)：27-75．
[2]史中，杜平中．纤溶酶原激活剂类药物的现状和进展[J]．药
物生物技术，1996，3(4)：246-257．
[3]刘晨光，王鹏，刘万顺．微生物溶栓酶研究概况及进展[J]．微
生物学通报，2002，29(2)：4649．
[4]AstrupT，StenM．Thefibrinplatem thodf restimatingfibrinolytie
activityfJ]．ArchBioploys，1952(40)：346-348．
[5]常翠贤，梁海秋，杨辉，等．亚硝基胍、紫外诱变筛选高产纤溶
酶菌株[J]．现代食品科技，2005(2)：32-35．
[6]梁海秋，常翠贤，杨辉，等．产纤溶酶少根根霉菌株的诱变筛选
[J]．生物技术通讯，2006(1)：55-57．
[7]上海市科学技术交流站组．正交试验设计法：多因素的试验方
法[M]．上海：上海人民出版社，1975：2841．
中科院专家推出“人工水草一藻菌生物膜”净水技术
在宁波开幕的第九届浙江投资贸易洽谈会上，中科院水生生物研究所副研究员刘剑彤介绍说，“人工水
草一藻菌生物膜”净水技术是一项列入国家“十五”水专项的技术，已经经过了不同规模的应用阶段，并且在
北京、上海和武汉投入应用，它还将在北京奥林匹克公园中使用。
“人工水草一藻菌生物膜”技术通过在富营养水体中铺设多孔高分子材料制成的人工水草，为藻类提供
载体，让他们在生长中吸附水中的氮、磷等营养物质。铺设人工水草后，水体透明度可以增加50—120cm，
水体叶绿素水平降低20％～50％，总氮降低20％～40％，总磷降低20％～40％。
超高压生物处理技术在天津运用于产业化生产
一种可以用于食品加工、保鲜和灭菌功能的新技术——超高压生物处理技术，经过3年多的反复试验在
天津获得成功并实现产业化生产，利用这种技术加工的海产品也已经面世。超高压生物处理技术应用领域
非常广泛，为生物、医药和食品工程的科学研究、产品开发、工艺改革提供新的平台。超高压食品加工技术
被称为除高温杀菌外的第二大食品灭菌技术。与热处理相比较，高压技术对食品中的小分子化合物，如风
味化合物、维生素和色素影响较小。400MPa的压力可使大多数植物性细菌失活(除芽孢外)，同时能保持食
品品质和天然口味，延长食品的保藏期。
这项技术在加工过程中不会有废气和其他废物产生，比热加工节约能源90％。超高压技术在食品加工
方面的应用，被称为“食品加工业的一场革命”。
(张春鹏)
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