全 文 ：第 猿远 卷第 苑 期
圆园员远年 源月
生 态 学 报
粤悦栽粤 耘悦韵蕴韵郧陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援猿远袁晕燥援苑
粤责则援袁圆园员远
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
基金项目院国家基础科学人才培养基金要要要科研训练及科研能力提高项目渊园员缘鄄源员猿员圆猿园怨冤
收稿日期院圆园员源鄄园怨鄄圆苑曰 摇 摇 修订日期院圆园员缘鄄园缘鄄园源
鄢通讯作者 悦燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 葬怎贼澡燥则援耘鄄皂葬蚤造院 憎择赠造造岳 泽蚤灶葬援糟燥皂
阅韵陨院 员园援缘愿源远 辕 泽贼曾遭圆园员源园怨圆苑员怨员员
杨立霞袁 马欣然袁 王玉英袁 闫绍鹏袁 王秋玉援三种白腐菌生物学特性与木质纤维素酶基因遗传多样性援生态学报袁圆园员远袁猿远渊苑冤院圆园猿源鄄圆园源猿援
再葬灶早 蕴 载袁 酝葬 载 砸袁 宰葬灶早 再 再袁 再葬灶 杂 孕袁 宰葬灶早 匝 再援月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 贼澡则藻藻 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 葬灶凿 早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 藻灶扎赠皂藻 则藻造葬贼藻凿
早藻灶藻泽援粤糟贼葬 耘糟燥造燥早蚤糟葬 杂蚤灶蚤糟葬袁圆园员远袁猿远渊苑冤院圆园猿源鄄圆园源猿援
三种白腐菌生物学特性与木质纤维素酶基因遗传多
样性
杨立霞员袁圆袁 马欣然员袁 王玉英员袁 闫绍鹏员袁 王秋玉员袁鄢
员 东北林业大学生命科学学院袁哈尔滨摇 员缘园园源园
圆 呼伦贝尔学院生命与环境科学学院袁呼伦贝尔摇 园圆员园园园
摘要院以采自东北林业大学帽儿山实验林场的 猿种白腐真菌要要要木蹄层孔菌渊云燥皂藻泽 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽冤尧鲍姆鲍姆木层孔菌渊孕澡藻造造蚤灶怎泽
遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤冤和火木层孔菌渊孕澡藻造造蚤灶怎泽 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽冤为材料袁用菌落直径测量法比较 猿种白腐菌在马铃署葡萄糖固体培养基上的生
长速度袁采用菌丝体干重法比较其在马铃署葡萄糖液体培养基中的生物量变化遥 结果显示院马铃薯葡萄糖固体培养基上 猿种白
腐菌均为快速生长类型袁其生长速度木蹄层孔菌跃火木层孔菌跃鲍姆鲍姆木层孔菌曰马铃署葡萄糖液体培养基中生物量增长速
度木蹄层孔菌跃鲍姆鲍姆木层孔菌跃火木层孔菌遥 用比色法测量其木质纤维素酶活性袁结果显示院木蹄层孔菌产锰过氧化物酶
和漆酶量较高袁鲍姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌产木质素过氧化物酶量较高曰木蹄层孔菌尧鲍姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌 猿
种白腐菌的 猿种主要木质素酶渊锰过氧化物酶尧漆酶和木质素过氧化物酶冤的表达量袁种间差异显著渊云越 猿援苑缘鄢尧缘援圆园鄢鄢尧猿援园员鄢冤袁
白桦木屑诱导处理与对照间差异显著渊云越 猿援愿源鄢尧源援员怨鄢尧缘援圆愿鄢冤曰两种主要纤维素酶渊葡聚糖内切酶尧葡聚糖外切酶冤的表达量袁
种间差异不显著袁受碳源影响作用显著渊云越 猿援怨怨鄢尧源援园源鄢冤遥 筛选 圆怨对引物组合袁对 猿种白腐菌几种主要木质纤维素酶基因进
行 栽砸粤孕鄄孕悦砸分子标记检测袁比较 猿菌种间遗传差异袁扩增总条带数为 猿缘苑 条袁多态性条带数为 圆缘缘 条袁多态性条带的比例为
苑员援源猿豫袁其中木质素降解酶基因总多态位点比率为 苑猿援苑苑豫袁纤维素降解酶基因总多态位点比率为 远愿援怨苑豫遥 猿 种白腐菌的木质
纤维素降解酶基因在种间均存在较高的遗传差异遥 因此袁特定基因的 栽砸粤孕 分子标记可以用于木腐菌的遗传变异分析遥
关键词院白腐菌曰木质纤维素降解酶曰栽砸粤孕 分子标记曰遗传差异
月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 贼澡则藻藻 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 葬灶凿 早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣
造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 藻灶扎赠皂藻 则藻造葬贼藻凿 早藻灶藻泽
再粤晕郧 蕴蚤曾蚤葬员袁圆袁 酝粤 载蚤灶则葬灶员袁 宰粤晕郧 再怎赠蚤灶早员袁 再粤晕 杂澡葬燥责藻灶早员袁 宰粤晕郧 匝蚤怎赠怎员袁鄢
员 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻袁 晕燥则贼澡藻葬泽贼 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬则遭蚤灶 员缘园园源园袁 悦澡蚤灶葬
圆 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 匀怎造怎灶遭怎蚤则 悦燥造造藻早藻袁 匀怎造怎灶遭怎蚤则 园圆员园园园袁 悦澡蚤灶葬
粤遭泽贼则葬糟贼院 宰藻 怎泽藻凿 贼澡则藻藻 贼赠责藻泽 燥枣 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤袁 灶葬皂藻造赠袁 云燥皂藻泽 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽袁 孕澡藻造造蚤灶怎泽 遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤袁 葬灶凿 孕澡藻造造蚤灶怎泽
蚤早灶蚤葬则蚤怎泽袁 葬泽 贼澡藻 泽贼怎凿赠 皂葬贼藻则蚤葬造泽援 栽澡藻 糟燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则泽 葬灶凿 皂赠糟藻造蚤葬造 凿则赠 憎藻蚤早澡贼泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟怎造贼怎则藻 皂藻凿蚤葬 憎藻则藻 皂藻葬泽怎则藻凿 贼燥
糟燥皂责葬则藻 贼澡藻蚤则 早则燥憎贼澡 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽援 云怎则贼澡藻则袁 贼澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 枣蚤增藻 造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻泽 燥枣 贼澡藻 枣怎灶早蚤 憎藻则藻
凿藻贼藻糟贼藻凿 怎泽蚤灶早 糟燥造燥则蚤皂藻贼则赠援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 葬造造 贼澡藻 枣怎灶早蚤 憎藻则藻 枣葬泽贼 早则燥憎蚤灶早 贼赠责藻泽院 糟燥造燥灶赠 早则燥憎贼澡 燥枣 孕援 遭葬怎皂蚤蚤 遭葬怎皂蚤蚤
蚤灶 孕燥贼葬贼燥 阅藻曾贼则燥泽藻 粤早葬则 皂藻凿蚤怎皂 憎葬泽 枣葬泽贼藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 孕援 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽 葬灶凿 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽袁 遭怎贼 皂赠糟藻造蚤葬造 遭蚤燥皂葬泽泽 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶
燥枣 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 蚤灶 造蚤择怎蚤凿 孕燥贼葬贼燥 阅藻曾贼则燥泽藻 皂藻凿蚤怎皂 憎葬泽 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼袁 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 孕援 遭葬怎皂蚤蚤 遭葬怎皂蚤蚤 葬灶凿 孕援 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽援 栽澡藻
皂葬灶早葬灶藻泽藻 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻 渊酝灶孕冤 葬灶凿 造葬糟糟葬泽藻 渊 蕴葬糟冤 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶泽 燥枣 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 憎藻则藻 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 贼澡藻 燥贼澡藻则 贼憎燥
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
泽责藻糟蚤藻泽袁 憎澡蚤造藻 贼澡藻 造蚤早灶蚤灶 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻 渊 蕴蚤责冤 赠蚤藻造凿泽 燥枣 孕援 遭葬怎皂蚤蚤 遭葬怎皂蚤蚤 葬灶凿 孕援 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽 憎藻则藻 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 云援
枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽援 栽澡藻 云鄄贼藻泽贼 增葬造怎藻 燥枣 贼澡则藻藻 造蚤早灶蚤灶燥造赠贼蚤糟 藻灶扎赠皂藻泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽 葬皂燥灶早 贼澡藻 贼澡则藻藻 枣怎灶早蚤 泽责藻糟蚤藻泽 憎葬泽 猿援苑缘鄢袁 缘援圆园鄢鄢 葬灶凿
猿援园员鄢 枣燥则 造蚤早灶蚤灶 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻袁 皂葬灶早葬灶藻泽藻 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻 葬灶凿 造葬糟糟葬泽藻 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 葬灶凿 贼澡藻 增葬造怎藻 枣燥则 皂葬灶早葬灶藻泽藻 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻
则藻葬糟澡蚤灶早 葬 澡蚤早澡造赠 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 造藻增藻造援 栽澡藻 憎燥燥凿 糟澡蚤责 蚤灶凿怎糟藻凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼 澡葬凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 枣则燥皂 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造袁 葬灶凿 云鄄贼藻泽贼
增葬造怎藻 枣燥则 造蚤早灶蚤灶 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻袁 皂葬灶早葬灶藻泽藻 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻 葬灶凿 造葬糟糟葬泽藻 憎葬泽 猿援 愿源鄢袁 源援 员怨鄢 葬灶凿 缘援 圆愿鄢 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 晕燥 糟造藻葬则
增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽 葬皂燥灶早 枣怎灶早蚤 泽责藻糟蚤藻泽 枣燥则 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽 燥枣 藻灶凿燥早造怎糟葬灶葬泽藻 葬灶凿 藻曾燥早造怎糟葬灶葬泽藻 憎藻则藻 灶燥贼藻凿袁 憎澡蚤造藻 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽 憎藻则藻
燥遭增蚤燥怎泽造赠 葬枣枣藻糟贼藻凿 遭赠 贼澡藻 糟葬则遭燥灶 泽燥怎则糟藻 蚤灶 贼澡藻 皂藻凿蚤怎皂袁 葬灶凿 贼澡藻 云鄄贼藻泽贼 增葬造怎藻 憎葬泽 猿援怨怨鄢 葬灶凿 源援园源鄢 枣燥则 藻灶凿燥早造怎糟葬灶葬泽藻 葬灶凿
藻曾燥早造怎糟葬灶葬泽藻 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 遭燥贼澡 增葬造怎藻泽 则藻葬糟澡藻凿 葬 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 造藻增藻造援 栽葬则早藻贼 则藻早蚤燥灶 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 渊栽砸粤孕冤 憎葬泽
怎泽藻凿 贼燥 葬灶葬造赠扎藻 贼澡藻 造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 早藻灶藻 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂泽 蚤灶 贼澡藻 贼澡则藻藻 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 遭赠 怎泽蚤灶早 圆怨 泽藻贼泽 燥枣
泽藻造藻糟贼藻凿 责则蚤皂藻则泽援 月赠 怎泽蚤灶早 栽砸粤孕袁 憎藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 猿缘苑 遭葬灶凿泽袁 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 圆缘缘 责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 遭葬灶凿泽袁 憎蚤贼澡 苑员援源猿豫 燥枣 贼澡藻 贼燥贼葬造
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 造燥糟蚤 责藻则糟藻灶贼葬早藻袁 憎澡藻则藻 贼澡藻 责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 造燥糟蚤 责藻则糟藻灶贼葬早藻 燥枣 贼澡藻 造蚤早灶蚤灶 葬灶凿 糟藻造造怎造燥泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 早藻灶藻泽
则藻葬糟澡藻凿 苑猿援苑苑豫 葬灶凿 远愿援怨苑豫袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡蚤泽 则藻泽怎造贼 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 早藻灶藻泽 燥枣 贼澡藻
贼澡则藻藻 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 澡葬增藻 澡蚤早澡 蚤灶贼藻则泽责藻糟蚤枣蚤糟 增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽援 栽澡怎泽袁 憎藻 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 栽砸粤孕 皂燥造藻糟怎造葬则 皂葬则噪藻则泽 葬则藻 怎泽藻枣怎造 枣燥则 贼澡藻
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽 葬皂燥灶早 泽责藻糟蚤藻泽 燥枣 憎燥燥凿鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 葬贼 贼澡藻 早藻灶藻 造藻增藻造援
运藻赠 宰燥则凿泽院 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤曰 造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻泽曰 栽砸粤孕 皂燥造藻糟怎造葬则 皂葬则噪藻则曰 早藻灶藻贼蚤糟 增葬则蚤葬贼蚤燥灶
木腐菌是生态系统中森林微生物的重要组成部分袁其分泌的多种酶能降解木材中的纤维素尧半纤维素和
木质素袁将木纤维分解为简单的碳水化合物袁营木质有机物腐生咱员鄄圆暂 遥 按其对木纤维降解类型不同袁木腐菌分
为白腐菌尧褐腐菌和软腐菌三类咱猿暂 遥 白腐菌因腐朽木材呈白色而得名袁属于担子菌门的真菌袁在长期的生物
进化过程中形成了一套独特的木质素降解系统袁是自然界中木质素的最有效降解物咱源暂 遥
早期木腐菌研究主要集中于形态学与分类学袁侧重于从自然界中筛选和人工诱变选育高酶活菌株咱缘暂 遥
随着生物化学和分离技术的发展袁有关木腐菌的木质纤维素酶组分的分离和降解机制研究逐渐展开袁目前对
结晶纤维素的水解机制已有初步了解咱远鄄怨暂 遥 但由于天然木材中半纤维素和木质素与纤维素间紧密相连的特
殊结构袁天然木质纤维素难被降解的原因仍未被阐明咱员园鄄员圆暂 遥 圆园 世纪 愿园 年代初 运蚤则噪 和 郧燥造凿 分别从白腐菌模
式菌种要要要黄孢原毛平革菌渊孕澡葬灶藻则燥糟澡葬藻贼藻 糟澡则赠泽燥泽责燥则蚤怎皂冤中发现木质素过氧化物酶渊简称 蕴蚤孕 酶冤和锰过氧化
物酶渊简称 酝灶孕 酶冤袁提出白腐真菌在降解木质素过程中袁需要纤维素或葡萄糖作为木质素的共底物袁是木质
素生物降解研究的突破遥 蕴蚤孕 酶尧酝灶孕 酶与后来发现的漆酶渊简称 蕴葬糟 酶冤袁共同构成了白腐菌的木质素降解
酶系遥 因白腐菌具有木质纤维素降解特性袁故在生物质能源利用尧农业废弃物循环利用尧造纸废液处理和环境
保护尧生物制浆尧纺织印染尧洗涤剂生产尧食品饮料加工等领域拥有广阔的应用前景咱员猿鄄员苑暂 遥
随着现代分子生物学技术的发展袁白腐菌作为重要林木病原真菌袁其群体遗传学的研究已进入分子水平袁
包括同工酶分析尧氨基酸序列测定以及 阅晕粤序列变异分析等遥 分子标记技术为大规模进行林木病原真菌的
遗传变异研究创造了有利的条件遥 靶位区域扩增多态性渊栽葬则早藻贼 砸藻早蚤燥灶 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 孕燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂袁栽砸粤孕冤分
子标记袁是由 匀怎和 灾蚤糟噪在 杂砸粤孕 分子标记基础上提出的新型分子标记技术咱员愿鄄员怨暂 遥 栽砸粤孕 分子标记基于已知
基因的 糟阅晕粤或 耘杂栽序列信息设计锚定引物袁选择性扩增靶基因序列袁随机引物富含 粤栽 或 郧悦 碱基袁可与模
板 阅晕粤中内含子或外显子区域配对袁扩增产物可对靶基因序列进行多态性标记遥 该技术操作简单尧多态性
高尧重复性好尧共显性高尧费用低尧靶基因区域针对性强袁是遗传多样性研究中较为理想的分子标记技术咱圆园鄄圆员暂 遥
本研究以帽儿山采集的木蹄层孔菌渊云燥皂藻泽 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽冤尧鲍姆鲍姆木层孔菌渊孕澡藻造造蚤灶怎泽 遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤冤和火
木层孔菌渊孕澡藻造造蚤灶怎泽 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽冤为对象袁测定其生长速度尧生物量变化以及木质纤维素相关酶活性袁为木材腐朽
机理研究和工业生产菌株选择提供基础数据曰采用 栽砸粤孕 分子标记技术对 猿种白腐菌的木质纤维素酶相关基
因多态性进行检测袁为从特定基因水平上研究木腐菌遗传变异提供有用的信息遥
缘猿园圆摇 苑期 摇 摇 摇 杨立霞摇 等院三种白腐菌生物学特性与木质纤维素酶基因遗传多样性 摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
员摇 材料与方法
员援员摇 实验材料与处理
本试验所用 猿种白腐菌为木蹄层孔菌尧鲍姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌袁采自黑龙江省东北林业大学帽
儿山实验林场袁三者均为白色腐朽菌类型咱圆圆暂 袁基本特征如表 员所示遥
表 员摇 猿种木材腐朽菌的基本特征
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 皂葬蚤灶 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 贼澡则藻藻 憎燥燥凿鄄则燥贼 枣怎灶早蚤
木材腐朽菌
宰燥燥凿 则燥贼 枣怎灶早蚤
分类地位
栽葬曾燥灶燥皂蚤糟 泽贼葬贼怎泽
腐朽类型
阅藻糟葬赠蚤灶早 贼赠责藻
常见宿主
栽澡藻 糟燥皂皂燥灶 澡燥泽贼
木蹄层孔菌 云燥皂藻泽 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 多孔菌目摇 多孔菌科 层孔菌属 白色腐朽 白桦尧枫桦尧杨等阔叶树
鲍姆鲍姆木层孔菌 孕澡藻造造蚤灶怎泽 遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤 锈革孔菌目 锈革菌科 木层孔菌属 白色腐朽 杨尧栎尧丁香等阔叶树
火木层孔菌 孕澡藻造造蚤灶怎泽 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽 锈革孔菌目 锈革菌科 木层孔菌属 白色腐朽 白桦尧杨尧柳等阔叶树
无菌条件下袁以 苑缘豫酒精清洗腐朽菌子实体表面袁用解剖刀分离出菌种子实体内部污染较少尧生长旺盛
的小菌块袁用 苑缘豫的酒精溶液消毒 员 皂蚤灶袁无菌水清洗 猿次袁滤纸吸干后接种于马铃薯葡萄糖固体平板培养基袁
圆猿益气候箱中避光培养袁待菌丝长满培养基表面袁选择无杂菌污染的菌丝连续转接 圆次袁转接入含白桦木屑或
麦麸试管内袁圆猿益气候箱继续培养袁待菌丝长满试管袁源益冰箱内保存待用咱圆猿暂 遥
员援圆摇 菌丝生长特性比较
采用菌落直径法和菌丝干重法比较 猿种白腐菌的生物学特性咱圆源暂 遥 分别将 猿种白腐菌纯菌丝点种在马铃
薯葡萄糖固体培养基渊怨园 皂皂径培养皿冤平板中央位置袁圆愿益气候箱避光倒置培养曰每 员圆 澡 测量菌落直径变
化袁直至菌丝长满平板遥 分别将 猿种白腐菌菌饼渊直径 怨园 皂皂冤接种于 员园园 皂蕴三角瓶内的 源园 皂蕴马铃署葡萄
糖液体培养基中袁圆愿益 员缘园 则 辕 皂蚤灶 恒温振荡培养曰每 源愿 澡 取菌丝体袁滤纸过滤得到粗菌丝体袁用蒸馏水冲洗 猿
次袁员园园益干燥箱中烘干至恒重袁称量干重袁比较 猿种白腐菌菌丝体生物量变化遥 每处理 猿次重复遥
员援猿摇 酶活性鉴定
员援猿援员摇 木质素降解酶活性的测定
木质素降解酶粗酶液制备院无菌操作条件下袁将 猿种白腐菌菌饼接种于 员园园 皂蕴三角瓶内 源园 皂蕴 马铃薯葡
萄糖液体培养基中袁每个菌种 圆个处理袁处理样中加白桦木屑袁对照样无木屑曰圆愿益 员缘园 则 辕 皂蚤灶 恒温振荡培养袁
定期取菌样培养液袁源益 员缘园园园 则 辕 皂蚤灶离心 员园 皂蚤灶取上清液袁得木质素降解相关酶粗酶液咱圆缘暂 遥 每 猿凿取 员次菌
样测定酶活袁连续取 苑次测定袁每次测定每个处理取 猿个重复菌样遥 每个处理中分别测定 猿种酶活袁锰过氧化
物酶渊酝灶孕 酶冤活性测量见参考文献咱圆远暂 尧漆酶渊蕴葬糟 酶冤的活性测量见参考文献咱圆苑暂 尧木质素过氧化物酶渊蕴蚤孕
酶冤活性测量见参考文献咱圆愿暂 遥
员援猿援圆摇 纤维素降解酶活性的测定
产纤维素酶固体培养基配置院向 缘园 皂蕴三角瓶中加入 员 早碳源物质和 员园 皂蕴培养液袁每个菌种 圆 个处理袁
其碳源物质分别为白桦木屑和麦麸曰培养液中各种无机盐的质量百分含量分别为院圆豫 渊晕匀源冤 圆 杂韵源尧园援员豫
运匀圆孕韵源尧园援缘豫 酝早杂韵源 窑苑匀圆 韵尧园援 园员豫 悦葬悦造圆尧园援 园员豫 晕葬悦造尧园援 园园缘豫 云藻杂韵源 窑苑匀圆 韵尧园援 园园员远豫 酝灶杂韵源 窑匀圆 韵尧
园援园园员源豫 在灶杂韵源窑苑匀圆韵尧园援园园圆豫 悦燥悦造圆遥 纤维素降解酶粗酶液制备院无菌操作条件下袁将 猿 种白腐菌接种于产
纤维素酶固体培养基袁圆愿益气候箱中培养袁定期取菌样制备粗酶液袁向培养瓶中加入 缘 倍质量的蒸馏水浸泡
员圆澡袁双层纱布过滤得滤液袁源益 员缘园园园 则 辕 皂蚤灶离心 员园 皂蚤灶取上清液袁所得为纤维素降解相关酶粗酶液遥 每隔 源凿
取 员次菌样测定酶活袁连续取 苑次测定袁每次测定每个处理取 猿个重复菌样遥 每个处理中分别测定 圆 种酶活袁
葡聚糖内切酶渊耘郧酶冤和葡聚糖外切酶渊耘悦酶冤袁活性测定见参考文献咱圆怨暂 遥
员援源摇 木质纤维素降解相关酶基因 栽砸粤孕 标记遗传变异检测
采用改良的 悦栽粤月 法提取 猿种白腐菌的总 阅晕粤咱猿园暂 遥 以来自 晕悦月陨 数据库的木质纤维素降解相关酶基因
远猿园圆 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 猿远卷摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
为靶标基因序列袁设计固定引物袁引物信息如表 圆所示遥 筛选具有较好扩增条带多态性的引物对袁用于 猿菌种
栽砸粤孕鄄孕悦砸分子标记检测袁每个处理 猿次重复遥 孕悦砸最佳反应条件院反应体系 圆园 滋蕴袁模板 阅晕粤 员园园 灶早尧固定
引物渊员园 滋皂燥造 辕 蕴冤 圆援园 滋蕴尧随机引物渊员园 滋皂燥造 辕 蕴冤 圆援园 滋蕴尧凿晕栽孕 渊圆 皂皂燥造 辕 蕴冤 圆援园 滋蕴尧酝早悦造圆渊圆缘皂皂燥造 辕 蕴冤 圆援园
滋蕴尧员伊月怎枣枣藻则 渊含 运垣袁不含 酝早圆垣冤 圆援园 滋蕴尧栽葬择 阅晕粤聚合酶 园援员缘 滋蕴尧凿凿匀圆韵 苑援愿缘 滋蕴袁孕悦砸 程序为院怨源益 缘 皂蚤灶曰
怨源益 员皂蚤灶袁猿缘益 员 皂蚤灶袁苑圆益 员 皂蚤灶袁缘个循环曰怨源益 员 皂蚤灶袁缘远益 员 皂蚤灶袁苑圆益 怨园 泽袁猿缘 个循环曰苑圆益 苑 皂蚤灶遥 孕悦砸
扩增产物经 员伊栽粤耘缓冲液袁员援愿豫琼脂糖凝胶袁员园园 灾 缓冲电压电泳袁哉孕杂 凝胶成像系统 渊哉灶蚤增藻则泽葬造 匀燥燥凿域袁
月蚤燥砸葬凿冤 检测电泳结果遥
表 圆摇 栽砸粤孕鄄孕悦砸引物碱基序列
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 遭葬泽藻泽 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 栽砸粤孕鄄孕悦砸
引物类型
孕则蚤皂藻则 贼赠责藻
靶基因
栽葬则早藻贼 早藻灶藻
引物名称
孕则蚤皂藻则 灶葬皂藻
引物序列渊缘忆要猿忆冤
孕则蚤皂藻则 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻
固定引物 锰过氧化物酶 酝灶孕员 粤栽郧郧悦郧悦郧栽郧郧粤粤郧郧栽郧
粤灶糟澡燥则 孕则蚤皂藻则 酝灶孕圆 郧郧栽郧粤郧郧悦郧郧粤郧郧郧粤悦
漆酶 蕴葬糟员 粤悦粤粤悦栽粤悦粤粤悦粤粤悦悦悦郧粤悦栽郧
蕴葬糟圆 郧栽悦栽郧郧粤粤郧悦郧郧粤栽栽郧栽郧
木质素过氧化物酶 蕴蚤孕员 悦悦悦郧粤郧悦悦悦栽栽悦郧粤栽
蕴蚤孕圆 悦悦悦悦郧粤悦悦悦栽栽悦悦
纤维素二糖水解酶基因玉 悦月匀玉员 粤栽悦栽郧悦郧粤悦粤粤郧郧粤悦郧郧
悦月匀玉圆 郧郧郧栽郧粤悦郧粤悦郧郧栽粤粤悦栽栽
纤维素二糖水解酶基因域 悦月匀域员 粤郧栽悦粤粤悦郧郧栽悦郧郧郧粤
悦月匀域圆 郧粤粤悦栽郧郧郧栽悦栽郧悦栽粤悦悦郧
纤维二糖脱氢酶基因玉 悦阅匀玉 栽悦粤粤悦郧粤悦粤粤悦悦悦悦郧粤悦
悦阅匀玉 郧栽悦郧郧郧郧栽栽郧栽悦郧栽栽郧粤
葡聚糖内切酶基因 耘郧员 粤悦郧粤郧悦悦郧悦粤悦郧粤悦粤栽
耘郧圆 栽悦郧栽郧悦郧郧悦栽悦郧栽栽悦粤栽
茁鄄葡萄糖苷酶基因 茁员 郧栽郧郧粤粤郧郧栽郧悦栽郧悦郧郧栽粤
茁圆 悦粤郧郧郧粤郧郧悦郧郧粤郧栽郧郧
随机引物 藻皂圆 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦郧粤粤栽栽栽郧悦
砸葬灶凿燥皂 孕则蚤皂藻则 藻皂猿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦郧粤粤栽郧粤悦
皂藻员 栽郧粤郧栽悦悦粤粤粤悦悦郧郧粤栽粤
皂藻圆 栽郧粤郧栽悦悦粤粤粤悦悦郧郧粤郧悦
员援缘摇 数据处理与统计分析方法
采用 杂孕杂杂员苑援园统计学软件袁对 猿种白腐菌的几种主要木质纤维素酶活性进行种间和处理间方差及显著
性分析遥
多态性百分率是描述群体遗传变异量的参数袁是指群体内多态性基因座的比例院
孕越 噪 辕 灶 伊员园园豫
式中袁孕为多态位点百分比袁噪为多态位点数袁灶为测定的位点总数遥
圆摇 结果与分析
圆援员摇 猿种白腐菌菌丝生长速度和生物量变化
马铃薯葡萄糖固体培养基中袁在 员远凿培养过程中袁猿种白腐菌菌落直径变化如图 员所示遥 猿菌种菌丝生长
速度均匀袁木蹄层孔菌和火木层孔菌的生长速度较快袁菌丝的平均生长速度分别是 苑援缘 皂皂 辕 凿 和 远援怨 皂皂 辕 凿袁鲍
姆鲍姆木层孔菌生长速度相对较慢袁菌丝的平均生长速度是 缘援远 皂皂 辕 凿袁三者之间生长速度差异不明显袁均属
于快速生长的类型遥
苑猿园圆摇 苑期 摇 摇 摇 杨立霞摇 等院三种白腐菌生物学特性与木质纤维素酶基因遗传多样性 摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
马铃薯葡萄糖液体培养条件下袁猿种白腐菌的菌丝生物量变化如图 员 所示遥 生长 员源 凿 后袁木蹄层孔菌生
物量最高袁达到 远援员源 早 辕 蕴袁其次为鲍姆鲍姆木层孔菌袁达到 缘援园圆 早 辕 蕴袁为同期木蹄层孔菌的 愿员援苑缘豫袁火木层孔菌
生物量最低袁为 圆援猿员 早 辕 蕴袁仅为同期木蹄层孔菌的 猿苑援远圆豫遥 木蹄层孔菌和鲍姆鲍姆木层孔菌的生长调整期相
对较短袁时间为 远 凿袁对数期的生长速度相对较快遥 火木层孔菌的生长调整期相对较长袁时间为 员园凿袁对数期的
生长速度相对较慢遥
火木层孔菌在液体培养基中的生长速度比鲍姆鲍姆木层孔菌快袁而在固体培养基中的生物量却比鲍姆鲍
姆木层孔菌小袁由此可见火木层孔菌可能更适合在液体培养基中生长遥
图 员摇 猿种白腐菌菌落生长速度和菌丝生物量变化曲线
云蚤早援员摇 栽澡藻 皂赠糟藻造蚤怎皂 早则燥憎贼澡 葬灶凿 遭蚤燥皂葬泽泽 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 猿 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤援
圆援圆摇 木质纤维素降解酶活性变化
圆援圆援员摇 猿种白腐菌木质素降解酶活性变化
不同培养条件下 猿种白腐菌产木质素降解相关酶活性变化如图 圆所示遥 培养初期 猿 种菌产 蕴蚤孕 酶尧酝灶孕
酶尧蕴葬糟酶量低袁经 远要怨 凿调整期后进入对数生长期袁酶的表达量开始增加袁员愿要圆员 凿后进入衰退期袁产酶量逐
渐下降遥
木蹄层孔菌产 酝灶孕 酶尧蕴葬糟酶量高于鲍姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌袁并随着诱导时间的延长而增高曰鲍
姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌产 蕴蚤孕 酶量高于木蹄层孔菌曰猿 种白腐菌 酝灶孕 酶尧蕴葬糟 酶尧蕴蚤孕 酶的表达量种间
差异显著渊云越 猿援苑缘鄢尧缘援圆园鄢鄢尧猿援园员鄢冤遥
猿菌种的 酝灶孕 酶尧蕴葬糟酶尧蕴蚤孕 酶的表达量在处理与对照间差异显著渊云越 猿援愿源鄢尧源援员怨鄢尧缘援圆愿鄢冤遥 图 圆显示
木蹄层孔菌的 酝灶孕 酶和 蕴葬糟酶活性木屑诱导组略高于对照组曰鲍姆鲍姆木层孔菌表达 蕴葬糟酶活性极低袁处理
间差异不明显曰火木层孔菌屑诱导组的 酝灶孕 酶尧蕴葬糟酶活性木高于对照组袁白桦木屑对 酝灶孕 酶尧蕴葬糟 酶诱导作
用的种间差异显著渊云越 猿援愿缘鄢尧缘援圆苑鄢鄢冤遥 木蹄层孔菌白桦诱导组 蕴蚤孕 酶活性高于对照组袁鲍姆鲍姆木层孔菌
和火木层孔菌的对照组 蕴蚤孕 酶活性高于白桦诱导组袁白桦木屑诱导促进木蹄层孔菌 蕴蚤孕 酶表达袁抑制鲍姆鲍
姆木层孔菌和火木层孔菌 蕴蚤孕 酶表达袁白桦木屑对 蕴蚤孕 酶表达诱导作用的种间差异显著渊云越 源援员远鄢冤渊图 圆冤遥
圆援圆援圆摇 猿种白腐菌纤维素降解酶活性变化
不同培养底物诱导下袁猿种白腐菌产纤维素降解相关酶活性变化如图 猿 所示遥 猿 菌种在培养初期均开始
产葡聚糖内切酶渊耘郧冤和葡聚糖外切酶渊耘悦冤袁酶的表达量逐渐增加袁对数生长期达到峰值后逐渐下降袁但麦麸
培养基中火木层孔菌的 耘悦酶活性袁在测量后期仍继续增长遥 麦麸作为碳源的培养基中 猿 种白腐菌的酶活峰
值出现时间晚于木屑做碳源的培养基遥
猿菌种的 耘郧酶尧耘悦酶表达量的种间差异不明显渊云 越 员援远猿尧员援远缘袁孕约园援园缘冤遥 碳源影响纤维素降解相关酶
的表达量袁白桦木屑作为碳源的培养基中袁猿菌种表达的 耘郧酶和 耘悦酶活性较低袁活性变化较小袁菌种长势一
般曰麦麸作为碳源的培养基中袁猿 菌种表达的两种酶活性较高袁活性变化较大袁菌种长势旺盛袁耘郧 酶尧耘悦 酶活
性处理间差异显著渊云越 猿援怨怨鄢尧源援园源鄢冤遥
圆援猿摇 木质纤维素降解酶基因 栽砸粤孕 标记遗传变异
愿猿园圆 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 猿远卷摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
图 圆摇 不同培养条件下 猿种白腐菌木质素降相关解酶活性变化
云蚤早援圆摇 栽澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 贼澡则藻藻 皂葬蚤灶 造蚤早灶蚤灶 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻泽 蚤灶 猿 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟怎造贼怎则蚤灶早 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援
云粤院木蹄层孔菌木屑培养 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 蚤灶 泽葬憎凿怎泽贼 皂藻凿蚤怎皂曰 云月院木蹄层孔菌麦麸培养 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 蚤灶 憎澡藻葬贼 遭则葬灶曰孕粤院鲍姆鲍姆木层孔菌木
屑培养 孕援 遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤 蚤灶 泽葬憎凿怎泽贼 皂藻凿蚤怎皂曰 孕月院鲍姆鲍姆木层孔菌麦麸培养 孕援 遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤 蚤灶 憎澡藻葬贼 遭则葬灶曰陨粤院火木层孔菌木屑培养 孕援
蚤早灶蚤葬则蚤怎泽 蚤灶 泽葬憎凿怎泽贼 皂藻凿蚤怎皂曰 陨月院火木层孔菌麦麸培养 孕援 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽摇 蚤灶 憎澡藻葬贼 遭则葬灶
圆援猿援员摇 栽砸粤孕 引物筛选结果
根据来自 晕悦月陨数据库的木质纤维素降解相关酶基因设计固定引物袁通过 栽砸粤孕鄄孕悦砸 预实验筛选针对 苑
个木质纤维素酶基因的引物对袁结果从 远源对引物中筛选出扩增条带清晰尧多态性较好的引物对 圆怨 对遥 其中
以木质素降解酶基因为靶基因的引物对有 员缘对袁可标记 酝灶孕 基因的 员对袁标记 蕴葬糟基因的 远对袁蕴蚤孕 基因的 愿
对曰以纤维素降解酶基因为靶基因的引物对有 员源 对袁可标记 悦月匀 基因的引物 员园 对袁标记 悦阅匀 基因的 猿 对袁
标记 耘郧基因的 员对遥 所筛选引物对如表 猿所示遥
圆援猿援圆摇 猿种白腐菌木质纤维素降解酶基因 栽砸粤孕 标记的遗传多态性
图 源为 猿菌种木质纤维素相关酶基因 栽砸粤孕鄄孕悦砸扩增产物的部分电泳结果袁表 源为各酶基因的扩增条带
的多态性统计遥 以 猿菌种的 蕴蚤孕 酶基因为靶基因的 愿 对引物扩增共产生 怨源 个条带袁多态性条带为 远苑 条袁木
蹄层孔菌多态性比率为 苑源援圆怨豫袁鲍姆鲍姆木层孔菌多态性比率为 苑猿援缘猿豫袁火木层孔菌多态性比率为远源援园园豫袁
该基因总多态性条带比率为为苑员援圆苑豫曰以酝灶孕酶基因为靶基因的员个引物对共扩增猿个条带袁多态性条带
怨猿园圆摇 苑期 摇 摇 摇 杨立霞摇 等院三种白腐菌生物学特性与木质纤维素酶基因遗传多样性 摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
图 猿摇 不同碳源培养条件下 猿种白腐菌的纤维素降相关解酶活性变化
云蚤早援猿摇 栽澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 贼憎燥 糟藻造造怎造葬泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻泽 蚤灶 猿 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 皂藻葬泽怎则藻凿 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟葬则遭燥灶 泽燥怎则糟藻 糟怎造贼怎则藻 皂藻凿蚤葬
云粤院木蹄层孔菌对照 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 糟燥灶贼则燥造曰 云月院木蹄层孔菌木屑培养 云援 枣燥皂藻灶贼葬则蚤怎泽 蚤灶 泽葬憎凿怎泽贼 皂藻凿蚤怎皂曰孕粤院鲍姆鲍姆木层孔菌对照 孕援
遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤 糟燥灶贼则燥造曰孕月院鲍姆鲍姆木层孔菌木屑培养 孕援 遭葬怎皂蚤蚤遭葬怎皂蚤蚤 蚤灶 泽葬憎凿怎泽贼 皂藻凿蚤怎皂曰陨粤院火木层孔菌对照 孕援 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽 糟燥灶贼则燥造曰 陨月院火木层
孔菌木屑培养 孕援 蚤早灶蚤葬则蚤怎泽 蚤灶 泽葬憎凿怎泽贼 皂藻凿蚤怎皂
表 猿摇 栽砸粤孕鄄孕悦砸扩增产物呈多态性引物对
栽葬遭造藻 猿摇 栽澡藻 泽藻造藻糟贼藻凿 责则蚤皂藻则 泽藻贼泽 燥枣 澡蚤早澡藻则 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 蚤灶 栽砸粤孕鄄孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
靶基因
栽葬则早藻贼 早藻灶藻泽
扩增产物呈多态性引物对
孕则蚤皂藻则 泽藻贼泽 燥枣 澡蚤早澡藻则 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂
木质素降解酶相关基因 蕴蚤孕 基因 蕴蚤孕员鄄藻皂圆袁蕴蚤孕员鄄藻皂猿袁蕴蚤孕员鄄皂藻员袁蕴蚤孕员鄄皂藻圆袁蕴蚤孕圆鄄藻皂圆袁蕴蚤孕圆鄄藻皂猿袁蕴蚤孕圆鄄皂藻员袁蕴蚤孕圆鄄皂藻圆
蕴蚤早灶蚤灶 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻泽 酝灶孕 基因 酝灶孕圆鄄藻皂圆
砸藻造藻贼藻凿 早藻灶藻泽 蕴葬糟基因 蕴葬糟员鄄藻皂圆袁蕴葬糟员鄄藻皂猿袁蕴葬糟员鄄皂藻员袁蕴葬糟员鄄皂藻圆袁 蕴葬糟圆鄄藻皂圆袁蕴葬糟圆鄄皂藻圆
纤维素降解酶相关基因 悦月匀玉基因 悦月匀玉圆鄄藻皂圆袁悦月匀玉圆鄄藻皂猿袁悦月匀玉圆鄄皂藻员袁悦月匀玉圆鄄皂藻圆
悦藻造造怎造葬泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻泽 悦月匀域基因 悦月匀域员鄄皂藻员袁悦月匀域员鄄皂藻圆袁悦月匀域圆鄄藻皂圆袁悦月匀域圆鄄藻皂猿袁悦月匀域圆鄄皂藻员袁悦月匀域圆鄄皂藻圆
则藻造藻贼藻凿 早藻灶藻泽 悦阅匀玉基因 悦阅匀玉鄄 藻皂圆袁悦阅匀玉鄄皂藻员袁悦阅匀玉鄄皂藻圆
耘郧基因 耘郧圆鄄皂藻圆
为 圆条袁该基因总多态性条带比率为 远远援远苑豫曰 以 蕴葬糟酶基因为靶基因的 远个引物对共扩增 愿园个条带袁多态性
条带为 远圆条袁木蹄层孔菌多态性比率为苑圆援苑猿豫袁鲍姆鲍姆木层孔菌多态性比率为 苑怨援猿员豫袁火木层孔菌多态性
比率为 苑怨援猿员豫袁该基因总多态性条带比率为 苑苑援缘园豫曰以 悦月匀玉酶基因为靶基因的 源个引物对共扩增 缘愿个条
带袁多态性条带为 源园条袁木蹄层孔菌多态性比率为 远远援远苑豫袁鲍姆鲍姆木层孔菌多态性比率为 苑员援源猿豫袁火木层
孔菌多态性比率为 远愿援源圆豫袁该基因总多态性条带比率为 远愿援怨苑豫曰 以 悦月匀域酶基因为靶基因的 远个引物对共
扩增 远缘个条带袁多态性条带为 源苑 条袁木蹄层孔菌多态性比率为 远远援远苑豫袁鲍姆鲍姆木层孔菌多态性比率为
苑缘援园园豫袁火木层孔菌多态性比率为 苑猿援怨员豫袁该基因总多态性条带比率为 苑圆援猿员豫曰 以 悦阅匀玉酶基因为靶基因
的 猿个引物对共扩增 源园个条带袁多态性条带为 圆缘 条袁木蹄层孔菌多态性比率为 缘愿援猿猿豫袁鲍姆鲍姆木层孔菌
多态性比率为 苑园援缘怨豫袁火木层孔菌多态性比率为 缘源援缘缘豫袁该基因总多态性条带比率为 远圆援缘豫曰 以 耘郧圆 酶基
因为靶基因的 员个引物对共扩增 员员个条带袁多态性条带为 愿条袁木蹄层孔菌多态性比率为 愿园援园园豫袁鲍姆鲍姆
木层孔菌多态性比率为 远远援远苑豫袁火木层孔菌多态性比率为 远远援远苑豫袁该基因总多态性条带比率为 苑圆援苑猿豫曰由
园源园圆 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 猿远卷摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
此可见袁除 酝灶孕 酶基因外袁猿种白腐菌的木质纤维素降解酶基因在种间均存在较高的遗传差异遥
图 源摇 猿种白腐菌木质纤维素降解相关酶基因 栽砸粤孕鄄孕悦砸扩增产物电泳图
云蚤早援源摇 粤早葬则燥泽藻 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 栽砸粤孕鄄孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 则藻泽怎造贼 燥枣 猿 憎澡蚤贼藻鄄则燥贼 枣怎灶早蚤 憎蚤贼澡 糟澡燥泽藻灶 葬灶糟澡燥则 责则蚤皂藻则泽
粤鄄匀的扩增引物分别为 蕴蚤孕员鄄藻皂猿袁酝灶孕圆鄄藻皂圆袁蕴葬糟员鄄皂藻员袁悦月匀玉圆鄄皂藻员袁悦月匀域员鄄藻皂圆袁悦月匀域圆鄄皂藻圆袁悦阅匀玉鄄皂藻员袁耘郧圆鄄皂藻圆援 泳道 员鄄猿袁 员园鄄员圆袁
员怨鄄圆员袁 圆愿鄄猿园袁 猿苑鄄猿怨袁 源远鄄源愿袁 缘缘鄄缘苑袁 远源鄄远远为木蹄层孔菌曰泳道 源鄄远袁 员猿鄄员缘袁 圆圆鄄圆源袁 猿员鄄猿猿袁 源园鄄源圆袁 源怨鄄缘员袁 缘愿鄄远园袁 远苑鄄远怨为鲍姆鲍姆木层孔菌曰
泳道 苑鄄怨袁 员远鄄员愿袁 圆缘鄄圆苑袁 猿源鄄猿远袁 源猿鄄源缘袁 缘圆鄄缘源袁 远员鄄远猿袁苑园鄄苑圆为火木层孔菌袁 酝为 皂葬则噪藻则
表 源摇 木质纤维素降解酶基因 栽砸粤孕扩增位点多态性比较
栽葬遭造藻 源摇 孕燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 栽砸粤孕 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 造燥糟蚤 枣燥则 造蚤早灶燥糟藻造造怎造燥泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 早藻灶藻泽
靶位基因
栽葬则早藻贼 郧藻灶藻
使用引物对数目
晕怎皂遭藻则 燥枣
怎泽藻凿 责则蚤皂藻则 泽藻贼泽
摇 菌种
摇 云怎灶早蚤
扩增总条带数目
栽燥贼造藻 遭葬灶凿泽
葬皂责造蚤枣蚤藻凿
多态性条带数目
晕怎皂遭藻则 燥枣
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 遭葬灶凿泽
菌种内多态位点
比率 辕 豫
陨灶贼则葬泽责藻糟蚤枣蚤糟
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟
责藻则糟藻灶贼葬早藻
菌种间多态位点
比率 辕 豫
陨灶贼藻则泽责藻糟蚤枣蚤糟
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟
责藻则糟藻灶贼葬早藻
蕴蚤孕 基因 愿 木蹄层孔菌 猿缘 圆远 苑源援圆怨 苑员援圆苑
蕴蚤早灶蚤灶 责藻则燥曾蚤凿葬泽藻泽 鲍姆鲍姆木层孔菌 猿源 圆缘 苑猿援缘猿
早藻灶藻泽 火木层孔菌 圆缘 员远 远源援园园
酝灶孕 基因 员 木蹄层孔菌 猿 圆 远远援远苑 远远援远苑
酝葬灶早葬灶藻泽藻 责藻则燥曾蚤凿葬泽 鲍姆鲍姆木层孔菌 猿 圆 远远援远苑
早藻灶藻 火木层孔菌 猿 圆 远远援远苑
蕴葬糟基因 远 木蹄层孔菌 圆圆 员远 苑圆援苑猿 苑苑援缘园
蕴葬糟糟葬泽藻 早藻灶藻泽 鲍姆鲍姆木层孔菌 圆怨 圆猿 苑怨援猿员
火木层孔菌 圆怨 圆猿 苑怨援猿员
木质素降解酶 员缘 木蹄层孔菌 远园 源源 苑猿援猿猿 苑猿援苑苑
基因 鲍姆鲍姆木层孔菌 远远 缘园 苑缘援苑远
蕴蚤早灶蚤灶 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 火木层孔菌 缘苑 源员 苑员援怨猿
藻灶扎赠皂藻泽 早藻灶藻泽 员愿猿 员猿缘
悦月匀玉基因 源 木蹄层孔菌 员愿 员圆 远远援远苑 远愿援怨苑
悦藻造造燥遭蚤燥 澡赠凿则燥造葬泽藻玉 鲍姆鲍姆木层孔菌 圆员 员缘 苑员援源猿
早藻灶藻泽 火木层孔菌 员怨 员猿 远愿援源圆
悦月匀域基因 远 木蹄层孔菌 员愿 员圆 远远援远苑 苑圆援猿员
悦藻造造燥遭蚤燥澡赠凿则燥造葬泽藻域 鲍姆鲍姆木层孔菌 圆源 员愿 苑缘援园园
早藻灶藻泽 火木层孔菌 圆猿 员苑 苑猿援怨员
悦阅匀玉基因 猿 木蹄层孔菌 员员 远 缘源援缘缘 远圆援缘园
悦藻造造燥遭蚤燥泽藻凿 鲍姆鲍姆木层孔菌 员苑 员圆 苑园援缘怨
澡赠凿则燥早藻灶葬泽藻玉早藻灶藻泽 火木层孔菌 员圆 苑 缘愿援猿猿
耘郧圆基因 员 木蹄层孔菌 缘 源 愿园援园园 苑圆援苑猿
耘灶凿燥早造怎糟葬泽藻 早藻灶藻 鲍姆鲍姆木层孔菌 猿 圆 远远援远苑
员源园圆摇 苑期 摇 摇 摇 杨立霞摇 等院三种白腐菌生物学特性与木质纤维素酶基因遗传多样性 摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
续表
靶位基因
栽葬则早藻贼 郧藻灶藻
使用引物对数目
晕怎皂遭藻则 燥枣
怎泽藻凿 责则蚤皂藻则 泽藻贼泽
摇 菌种
摇 云怎灶早蚤
扩增总条带数目
栽燥贼造藻 遭葬灶凿泽
葬皂责造蚤枣蚤藻凿
多态性条带数目
晕怎皂遭藻则 燥枣
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 遭葬灶凿泽
菌种内多态位点
比率 辕 豫
陨灶贼则葬泽责藻糟蚤枣蚤糟
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟
责藻则糟藻灶贼葬早藻
菌种间多态位点
比率 辕 豫
陨灶贼藻则泽责藻糟蚤枣蚤糟
责燥造赠皂燥则责澡蚤糟
责藻则糟藻灶贼葬早藻
火木层孔菌 猿 圆 远远援远苑
纤维素降解酶 员源 木蹄层孔菌 缘猿 猿缘 远远援园源 远愿援怨苑
基因 鲍姆鲍姆木层孔菌 远缘 源苑 苑圆援猿员
悦藻造造怎造葬泽藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 火木层孔菌 缘远 猿愿 远苑援愿远
藻灶扎赠皂藻泽 早藻灶藻泽 员苑源 员圆园
总计 圆怨 木蹄层孔菌 员员猿 苑怨 远怨援怨员 苑员援源猿
栽燥贼造藻 鲍姆鲍姆木层孔菌 员猿员 怨苑 苑源援园缘
火木层孔菌 员员猿 苑怨 远怨援怨员
猿缘苑 圆缘缘
猿摇 讨论
白腐菌既可以表达木质素酶也可以表达纤维素酶袁用于木质纤维素的降解遥 但不同的菌种间各种酶的表
达存在很大差异袁差异主要表现在表达量和表达时间上遥
本研究的 猿种白腐菌分泌的 猿种主要木质素酶在表达量和表达时间上袁种间存在很大差异遥 从表达量上
看袁木蹄层孔菌的 蕴葬糟酶表达量很高袁而鲍姆鲍姆木层孔菌的 蕴葬糟酶表达量极低袁不论是木屑诱导还是对照都
几乎不表达曰木蹄层孔菌偏好产 酝灶孕 酶尧蕴葬糟酶袁鲍姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌偏好产 蕴蚤孕 酶遥 白桦木屑对
猿种白腐菌中 酝灶孕 酶尧蕴葬糟 酶表达有诱导促进作用袁对鲍姆鲍姆木层孔菌和火木层孔菌产 蕴蚤孕 酶有诱导抑制
作用袁诱导作用种间差异显著遥 从表达时间上看袁白桦木屑诱导作用在种间差异显著袁白桦木屑诱导作用在不
同菌种的不同酶中出现或早或晚袁到达产酶峰值出现时间或促进或延迟袁种间差异显著遥 原因可能是不同菌
种间的遗传差异以及对诱导物的响应各不相同所致遥
本研究的 猿种白腐菌产纤维素降解酶能力的种间差异不明显袁但酶的表达量和表达时间受碳源影响明
显袁不同处理间差异显著遥 原因可能在于纤维素降解酶系是多组分酶系袁与其他的酶促反应有很大的区别袁各
组分之间存在复杂的协同反应关系袁进而影响了 耘郧酶和 耘悦酶的表达量和活性变化遥
以来自 晕悦月陨数据库的木质纤维素降解相关酶基因为靶标基因序列袁设计固定引物袁通过 栽砸粤孕鄄孕悦砸 筛
选能产生多态性条带的引物以用于菌种间遗传变异研究遥 针对 苑个木质纤维素酶相关基因使用筛选出的 圆怨
对引物袁对 猿种白腐菌进行 栽砸粤孕鄄孕悦砸扩增袁产生总条带数为 猿缘苑 条袁多态性条带数为 圆缘缘 条袁平均每对引物
扩增出的条带数为 员圆援猿员条袁条带的大小范围在 员园园要圆园园园 遭责之间遥 其中以木质素降解相关酶基因为靶基因
的 员缘个引物对袁共扩增 员愿猿个条带袁员猿缘条为多态性条带袁木蹄层孔菌多态性比率为 苑猿援猿猿豫袁鲍姆鲍姆木层孔
菌多态性比率为 苑缘援苑远豫袁火木层孔菌多态性比率为 苑员援怨猿豫袁木质素降解酶基因总多态位点比率为 苑猿援苑苑豫曰
以纤维素降解相关酶基因为靶基因的 员源个引物对共扩增 员苑源个条带袁员圆园 条为多态性条带袁木蹄层孔菌多态
性比率为 远远援园源豫袁鲍姆鲍姆木层孔菌多态性比率为 苑圆援猿员豫袁火木层孔菌多态性比率为 远苑援愿远豫袁纤维素降解
酶基因总多态位点比率为 远愿援怨苑豫遥 本研究表明 猿种白腐菌均显示较高的木质素和纤维素降解酶基因的遗传
多态性遥 因此袁特异基因的 栽砸粤孕 分子标记方法可用于木材腐朽菌种间遗传变异研究遥
从形态分类学角度看袁火木层孔菌和鲍姆鲍姆木层孔菌均为锈革菌科木层孔菌属菌种袁而木蹄层孔菌为
多孔菌科层孔菌属菌种遥 但从它们木质纤维素酶的胞外表达量和表达趋势袁以及 苑个木质纤维素酶靶基因扩
增产物电泳结果上看袁火木层孔菌与木蹄层孔菌多态性条相似度高袁木蹄层孔菌与鲍姆鲍姆木层孔菌的条带
相似程度低曰而鲍姆鲍姆木层孔菌的特异性条带多袁火木层孔菌与木蹄层孔菌特异性条带少遥 原因可能与火
木层孔菌与木蹄层孔菌具有相同的寄主有关曰同时袁从基因进化关系上袁木蹄层孔菌与火木层孔菌可能更近袁
圆源园圆 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 猿远卷摇
澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
与鲍姆鲍姆木层孔菌进化关系较远遥
参考文献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤院
咱 员 暂 摇 池玉杰援 东北林区 远源种木材腐朽菌木材分解能力的研究援 林业科学袁 圆园园员袁 猿苑渊缘冤院 员园苑鄄员员圆援
咱 圆 暂 摇 魏玉莲袁 戴玉成援 木材腐朽菌在森林生态系统中的功能援 应用生态学报袁 圆园园源袁 员缘渊员园冤院 员怨猿缘鄄员怨猿愿援
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