全 文 ：第6卷第4期
2008年7月
生物加工过程
ChineseJoumalofBioprocessEn西neering
July2008
·65·
反相高效液相色谱法测定不同产地紫苏子
和白苏子中乌索酸和齐墩果酸
邹盛勤，陈 武
(宜春学院 生物工程研究所，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，宜春336000)
摘要：建立反相高效液相色谱(RP．HPLc)法测定了紫苏子和白苏子中鸟索酸和齐墩果酸的含量。色谱柱为K舡
m鹏ilCIs柱(250衄x4．6衄，5岬)，光电二极管阵列检测器(PAD)，流动相甲醇-水体积比为87：13，检测波长210
衄，流速0．8mL／IIlin，柱温28℃。鸟索酸在10—400彬IIlL，齐墩果酸在5～200彬mL内呈现良好的线性关系，
平均加样回收率分别为100．6％和98．7％，相对标准偏差(RSD)分别为1．6％和1．2％。
关键词：种子；紫苏；高效液相色谱；鸟索酸；齐墩果酸
中图分类号：’I郴．7+2 文献标志码：A 文章编号：1672—3678(2008)04—0065一04
Deternlinationofursolicacidandoleanolicac dinseedbof
j’匆删趾加纪scP咒s(L．)Brittonf omdifferentplacesbyRP-HPLC
ZOUSheng—qin，CHENWu
(Bi∞Ilgi涮Ilg‰h枷hne0fYichunUIliv∞ity，脚‰mtory0fJi甜倒Pm“∞e细
R嘲眦h∞Active州ien协inN咖ralMedici嘲，IichmUIIiv啪ity，Yichun，336000，Chi眦)
A搬阳d：Thecontentsofur∞lica idaIldoleanolicac din鸵edsoffk矗f纪加如sce珊(L．)Brittonwere
deteminedbvRP．HPLcwithpho州iode删rdetector(PAD)．Ursolic舵id柚dole锄olicacidwe陀
∞p啪ted粕d锄alyzedon‰m鹪ilC18colu咖(250咖×4．6mm，5斗m)usingmeth咖l—water(87：
13)鹊mobilepha∞atnawrateof0．8mL／nlin．UVdetectionwavel ngtllw鹊∞tat210删andtlle
coluIImte pemturew聃setat28℃．Anavemgerecovery阳teof100．6％w舶obtained讥tIlaRSD0f
1．6％intllemngeof10—400彬mLforur∞lica id，舳d粕averagerecovery0f98．7％w酗obtained
俪t}IaRSDof1．2％int}Ie瑚geof5—200u墨r／mLforole肌olic∞id．
Keywords：∞ed；Pe门汪z0／池嚣c绷；HPLC；u麟licacid；ole蛐olicacid
紫苏[眦伽删(L．)BrittonV盯口cl砌
(’nluIlb．)Kudo]和白苏[P纫以k厅u纪删(L．)Brit-
t∞]是长江中下游地区田间、路边常见的野生植物，
同为唇形花科紫苏属植物⋯，《中国植物志》将植物
紫苏和白苏合并为一种BJ。紫苏子和白苏子为紫苏、
白苏的干燥成熟果实，是一味临床较常用的中药，也
是特种油料原料，均具有降气消痰、平喘、润肠的功
效，用于治疗咳嗽、气喘、肠燥、便秘等症¨l。其成分
研究的文献报道较多，主要集中在脂肪油、氨基酸、微
量元素等方面HJ。研究表明，紫苏和白苏中乌索酸和
齐墩果酸的含量较高，但其子中2成分的研究国内未
见报道。本文采用反相高效液相色谱(RP．HPLC)法
收稿日期：200r7．1l瑚
基金项目：国家863计划重点资助项目(2002从223217)。
作者简介：邹盛勤(1970一)，男。江西奉新人，副教授。研究方向：天然药物成分提取与分析．E-衄il：zsqyc碍@日0hu．咖。
万方数据
·66· 生物加工过程 第6卷第4期
分离了紫苏子和白苏子中的乌索酸和齐墩果酸，并进
行了定性鉴别和定量分析，以期为紫苏手和白苏子化
学成分研究和开发利用提供依据。
1实验部分
1．1仪器与试剂
1．1．1仪器
Wate碍高效液相色谱仪(515泵，2996光电二
极管矩阵检测器，柱温箱，Empower中文色谱工作
站，美国)；Sl(2510HP超声提取器(上海科导超声仪
器公司)；CP225D分析天平(1／100000，德国s耐o·
rius公司)。
1．1．2试剂
甲醇(色谱纯，上海陆忠试剂厂)；95％乙醇(分
析纯，江西洪都生物化学有限公司)；水为高纯水；
乌索酸、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品鉴定
所，批号：110742．200314，110709—200304，供含量测
定用)。紫苏子和白苏子(产自江西宜春、湖南岳阳
和河南洛阳)，经鉴定为唇形科紫苏属植物紫苏和
白苏的成熟果实。
1．2色谱条件
色谱柱为l(rom鹄ilClB柱(250姗×4．6mm，
5斗m)；Wate硌2996光电二极管阵列检测器；柱温
28℃；流动相甲醇-水体积比为87：13；检测波长
210nm；流速0．8mL／IIlin；进样量10灿。
1．3试样溶液的制备
紫苏子和白苏子试样干燥后粉碎，过20目筛。
精密称取约5g，置于具塞三角烧瓶中，加入8倍量
95％乙醇40IIlL，超声提取90IIlin，过滤，滤渣用乙
醇洗涤2次，合并滤液至50mL容量瓶中，乙醇定
容。滤液用微孔滤膜(0．45岬)过滤，取续滤液作
为试样溶液。
1．4混合标准溶液的配制
准确称取乌索酸对照品10mg和齐墩果酸对照
品5mg，以无水甲醇定容至25mL作为对照品溶
液。然后配制成乌索酸质量浓度为10，40，80，200，
400∥mL和齐墩果酸质量浓度为5，20，40，100，
200斗g／mL的对照品混合溶液。
1．5标准曲线的绘制
将配制好的不同浓度的对照品混合溶液分别
进样lO斗L，平行3次，测定乌索酸和齐墩果酸峰面
积。以峰面积的平均值(y)为纵坐标，对照品质量
浓度(x)为横坐标，分别绘制乌索酸和齐墩果酸标
准曲线。
1．6乌索酸和齐墩果酸的定性定量检测
分别采用色谱峰保留时间和紫外光谱对分析
组分定性，应用Empower色谱软件适应性模块分析
色谱峰纯度。采用外标标准曲线法进行定量，由
HPLC色谱图峰面积并根据标准曲线方程求其
含量。
2结果与讨论
2．1 乌索酸和齐墩果酸检测波长的确定
采用PAD检测器在190～600nm波长范围内
扫描，对照品和试样中乌索酸、齐墩果酸在流动相
中的最大吸收波长均为202．2啪，且紫外吸收光谱
一致(图1)。但由于流动相在此波长处有较强的吸
收，为减少干扰，提高信噪比，提取不同波长的色谱
进行比较，选择210rm为检测波长，保证基线平稳
和检测的灵敏度。
1502002503003504004505005506001502∞2503∞350400450500550600
Ut∞A 材m
圈l对照品lA)和紫苏子试样(B)中乌索酸、齐墩果酸的紫外光谱图
Fig．1，11leUV—Visspec妇“哪licacidandoLe锄o“ca idinstarIdardmixture【A】锄d姗pl∞(B)
万方数据
2008年7月邹盛勤等：反相高效液相色谱法测定不同产地紫苏子和白苏子中乌索酸和齐墩果酸 ·67·
2．2线性关系考察
由1．5标准曲线绘制方法，作乌索酸和齐墩果酸
出峰色谱图，得出乌索酸和齐墩果酸的保留时间分别
为18．498和19．746Illin。乌索酸和齐墩果酸分离度
为1．90，理论板数分别为950l和14267，两峰对称因
子均为1．02。乌索酸和齐墩果酸的标准曲线线性参
数见表l，对照品和样品的HPIc色谱见图2。
2
表l标准曲线的线性参数
Tabler111elimarequatiomofstandardcurves
组分 线性回归方程 相关系数篙
乌索酸y=241×106X一1．1l×104r=0．99910一400
齐墩果酸y=233×106X一675×103r=o-9998 5—200
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d血“幽“幽
1一齐墩果酸(ol咖101ic∞id)；2一乌索酸(∞枷cacid)
图2对照晶lA)、紫苏子lBJ和白苏子lC)的HPLc色谱圈
Fig．2HPLcchmIM均彤哪0f嘲ndardmi柚l∞IA)and蛐pk(B．C)
2。3色谱峰纯度分析
对照品和试样中乌索酸和齐墩果酸色谱峰在
色谱柱中的保留时间一致。色谱峰纯度分析表明，
对照品溶液中齐墩果酸和乌索酸峰的纯度角值均
小于阈值，纯度角线位于自动阈值线下方(图3)，表
明齐墩果酸和乌索酸峰色谱峰均为单一组分吸收
峰，无其它成分的干扰，与色谱峰顶点、起始点和终
止点光谱归一化叠加后结果相吻合。
图3试样中齐墩果酸《A)乌索酸《B)峰纯度分析(210nm)
Fig．3Pe8kpIlrity卸alysi80foI锄曲c∽id舳dⅢ的№船idin蛐pl鹤
2．4精密度试验
精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照品混合溶液
10灿进样分析，重复5次，测得乌索酸峰面积相对标
准偏差为0．4％(乃=5)，齐墩果酸的峰面积的相对标
准偏差为0．6％。表明进样方法和仪器精密度良好。
2．5重现性试验
精密称取同—批白苏子试样5份，制备试样溶液，
精密吸取10灿进样分析，外标法计算含量，乌索酸含
量的相对标准偏差为1．2％(珏=5)，齐墩果酸含量的相
对标准偏差为1．5％(n=5)，方法重现性良好。
万方数据
·68· 生物加工过程 第6卷第4期
2．6加样回收率试验
准确称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的紫苏
子试样6份，分高、中、低3组分别加入乌索酸和
齐墩果酸对照品混合溶液适量，配制加标试样溶
液。进样测定乌索酸和齐墩果酸的含量，计算
回收率。乌索酸和齐墩果酸的平均加样回收率分
别为100．6％(相对标准偏差=1．6％)和98．7％
(相对标准偏差=1．2％)。
2．7试样含量的测定
准确吸取试样溶液10止注入高效液相色谱
仪，测定乌索酸与齐墩果酸峰面积，平行3次，按外
标法计算试样中乌索酸与齐墩果酸的质量分数，结
果见表2。测定结果表明，紫苏子和白苏子中均含
有五环三萜酸类化合物乌索酸和齐墩果酸，其质量
分数存在一定差异，所有试样中乌索酸的质量分数
均明显高于齐墩果酸的质量分数。
裹2紫苏子和白苏子中乌索酸和齐墩果酸的质量分数
惴le2 Contentsof啪olicacid明d0leanolicac dofinseedsofn矗玩加讹s舢
3结论
HPLC和光电二极管阵列检测器联用，在优化
的色谱条件下，可以直接对紫苏子和白苏子中微量
的乌索酸和齐墩果酸进行定性鉴别和定量分
析【4。】。采用反相Krom私ilCtB色谱柱，5斗m，以甲
醇．水体积比为87：13为流动相，在流速
0．8mL／IIlin，检测波长210啪下检测，试样中的乌
索酸和齐墩果酸得到基线分离(分离度为1．90)，平
均加样回收率分别为100．6％和98．7％。方法灵
敏、准确，重现性好，可为其他植物中的乌索酸和齐
墩果酸的分离及含量测定提供借鉴。
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一吐a巧眦dici他【J】．J‰BiI瑚edAnal，2舯5(39)：
矗97．704．
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