全 文 ：第 １１ 卷第 ４ 期
２０１３ 年 ７ 月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ． １１ Ｎｏ． ４
Ｊｕｌ． ２０１３
ｄｏｉ：１０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １６７２ － ３６７８． ２０１３． ０４． ００５
收稿日期：２０１２ － ０２ － １１
基金项目：国家自然科学基金（１０８７４１０８）；陕西省自然科学基础研究计划（ＳＪ０８Ａ１６）
作者简介：窦佩娟（１９８７—），女，陕西西安人，硕士研究生，研究方向：天然产物化学研究；张　 静（联系人），副教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｚｈａｎｇｊｉｎ＠ ｓｎｎｕ． ｅｄｕ． ｃｎ
碱提工艺对茶树菇多糖形貌特征和构象及其
生物活性的影响
窦佩娟１，张　 静２，吕青青３，郭　 琦１，郭国赟１，孙润广１
（１． 陕西师范大学 物理学与信息技术学院 生物物理与生物医学工程实验室，西安 ７１００６２；
２． 陕西师范大学 食品工程与营养科学学院，西安 ７１００６２；
３． 武汉科技大学 化学工程与技术学院，武汉 ４３００８１）
摘　 要：利用传统水提及碱提的方法得到茶树菇粗多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ和 Ｊ⁃ＡＣＰ，经 ＣＴＡＢ法和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ 凝胶层析法
对其分离纯化，分别得到 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 以及 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 两组主要组分，用扫描电子显微镜
（ＳＥＭ）和原子力显微镜（ＡＦＭ）对多糖的形貌进行表征并测定其体外抗氧化活性和抗肿瘤活性；对多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 进行刚果红实验测定及圆二色谱仪（ＣＤ）分析。 ＳＥＭ 观测结果：Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 为较粗的表面光滑的丝状，
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１呈较细的有少量碎屑的丝状；Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 为较大的片状，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在大的片状周围有很多细小的碎屑。
ＡＦＭ观测结果：碱液可以使多糖分子部分断裂成小片段。 刚果红实验：Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在水溶液中为自由卷曲
构型。 ＣＤ分析：Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的空间构型中有序结构较少，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在水溶液中为无序构型。 对比 ４ 种多糖的活性，
碱液作用的多糖 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 活性高于 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２。
关键词：茶树菇；圆二色谱；显微镜；多糖
中图分类号：Ｓ６４６􀆰 １ ＋ ９； Ｑ５３９　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ － ３６７８（２０１３）０４ － ００２２ － ０９
Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ
Ａｇｒｏｃｙｂｅ ａｅｇｅｒｉｔａ ａｎｄ ｉｔｓ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ
ＤＯＵ Ｐｅｉｊｕａｎ１，ＺＨＡＮＧ Ｊｉｎｇ２，ＬÜ Ｑｉｎｇｑｉｎｇ３，ＧＵＯ Ｑｉ１，ＧＵＯ Ｇｕｏｙｕｎ１，ＳＵＮ Ｒｕｎｇｕａｎｇ１
（１． Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃｓ ａｎｄ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｓｈａａｎｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ ７１００６２，Ｃｈｉｎａ；
２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ ７１００６２，Ｃｈｉｎａ；
３． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｎａｍｅｄ Ｓ⁃ＡＣＰ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ａｇｒｏｃｙｂｅ ａｅｇｅｒｉｔａ ｂｙ ｈｏｔ ｗａｔｅｒ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ａｆｔｅｒ ｔｈａｔ， ａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｎａｍｅｄ Ｊ⁃ＡＣＰ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｄｒｉｅｄ ｌｅａｆ ｍｕｓｔａｒｄ ｗｉｔｈ
ａｌｋａｌｉ． Ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＣＴＡＢ ａｎｄ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ ｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ａｎｄ ｔｈｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ ｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ＳＥＭ
ａｎｄ ＡＦＭ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ， ａｎｄ ＡＦＭ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ
ｏｂｓｅｒｖｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ａｎｔｉ⁃ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｗｅｒｅ
ｕｓｅｄ ｆｏｒ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ ｔｅｓｔ ａｎｄ ＣＤ ａｎａｌｙｓｉｓ． ＳＥＭ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ
ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｏｒｍ，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｓｈｅｅｔ ｆｏｒｍ，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｒｉｇｉｄｉｔｙ ｔｈａｎ
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｈｅｅｔ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｗａｓ ｂｉｇｇｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ． ＡＦＭ ｉｍａｇｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：
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ｔｈｅ ａｌｋａｌｉ ｃｏｕｌｄ ｍａｋｅ ａ ｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｂｒｅａｋ ｉｎｔｏ ｓｍａｌｌ ｐｉｅｃｅｓ． Ｔｈｅ
ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｃｏｍｐｌｅｘ⁃ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ，ｒｅｓｕｌｔ
ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｉｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｃｏｌｉ ｉｎ ｗａｔｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ＣＤ ｓｐｅｃｔｒｕｍ
ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｎｌｙ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｏｆ ＡＣＰ２⁃２ ｗａｓ ｉｎ ｏｒｄｅｒｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐａｔｉａｌ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２
ｗａｓ ｉｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｋａｌｉｎｅ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ􀆰
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｇｒｏｃｙｂｅ ａｅｇｅｒｉｔａ；ｃｉｒｃｕｌａｒ ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ；ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
　 　 茶树菇（Ａｇｒｏｃｙｂｅ ａｅｇｉｒｉｔａ）是一种具有抗肿瘤、
抗衰老、增强免疫、降低胆固醇等功效的食用菌，其
主要的功能成分———多糖含量为 ６􀆰 ７％ ；其中 β 葡
聚糖含量为（３０２􀆰 ５ ± ３􀆰 ２） ｍｇ ／ １００ｇ［１］。 目前，关于
茶树菇多糖提取工艺方面的研究较多，但关于提取
工艺对多糖结构以及生物活性影响的报道尚不
多见［２ － ３］。
多糖的生物活性与化学结构及空间构型有关，
因此多糖形貌特征及其溶液构象，是一个值得研究
的课题。 随着对不同种多糖形貌的观测，越来越多
地倾向于形成一个统一的标准或者结论的趋势［４］。
目前，观测的技术方法不断有新的进展，如采用电
子显微镜和光学显微镜观察以及采用原子力显微
镜（ＡＦＭ）研究多糖的分子形貌、精细结构以及多糖
空间结构［５］。
圆二色谱分析（ＣＤ）是研究生物大分子溶液构
象的有力工具，已普遍应用于蛋白质、核酸、多肽等
结构的分析。 多糖的圆二色性与多糖分子中的一
级结构（即糖苷键）及空间结构（即螺旋、卷曲和杆
状构象）有关［６］，因此将 ＣＤ分析与扫描电子显微镜
（ＳＥＭ）和 ＡＦＭ结合用以研究多糖的结构是一种新
的尝试。
在前期工作中，采用传统水提以及在水提残渣
中碱提的方式分别得到 ２ 种茶树菇粗多糖Ｓ⁃ＡＣＰ和
Ｊ⁃ＡＣＰ，笔者将上述 ２ 种粗多糖进行分离纯化，对纯
化的多糖进行 ＳＥＭ 和 ＡＦＭ 观测，对多糖的形貌特
征初步表征，对含量较多的多糖组分 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２的溶液构象进一步采用刚果红实验测定及
ＣＤ分析，并对比 ４ 种多糖的体外抗氧化活性和体外
抗肿瘤活性，以获得茶树菇多糖的化学结构方面更
多的信息，以期为 ＳＥＭ、ＡＦＭ 和 ＣＤ 分析在多糖形
貌特征研究方面的应用提供理论依据。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 材料与试剂
茶树菇多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ和 Ｊ⁃ＡＣＰ为自制；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ⁃
１５０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ分装）购于科昊生物工程有限公司；二
苯代苦味酰基自由基（ＤＰＰＨ·）购于美国 Ｓｉｇｍａ 公
司；人白血病细胞 Ｋ５６２ （ ＡＴＣＣ）， １６４０ 培养基
（ ＲＰＭＩ Ｍｅｄｉｕｍ １６４０， Ｇｉｂｃｏ ）， 噻 唑 蓝 （ ＭＴＴ，
Ａｍｒｅｓｃｏ），无支原体新生牛血清购于浙江天杭生物
科技有限公司；十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）、刚
果红、乙酸、ＮａＯＨ、ＮａＣｌ 等均为国产分析纯；实验室
用水为三蒸水。
１􀆰 ２ 　 仪器
ＣＦ１６ＲＸ 高速离心机 （日本日立公司）， ＴＵ ⁃
１８１０ 紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限
责任公司），Ａｌｐｈａｌ ４ 真空冷冻干燥机（德国 Ｃｈｒｉｓｔ
公司），Ｚ系列层析柱、ＤＢＳ⁃１００ 电脑全自动部分收
集器（上海沪西分析仪器厂），Ｑｕａｎｔａ ２００ 环境扫描
电子显微镜（德国 ＦＥＩ公司），ＳＰＭ ９５００Ｊ３ 原子力显
微镜（日本岛津公司），Ｃｈｉｒａｓｃａｎ 型圆二色谱仪（英
国应用光物理公司），Ｏｌｙｍｐｕｓ ＴＨ４⁃２００ 倒置显微镜
（日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ 公司），ＨＨ． ＣＰ⁃０１Ｗ 型二氧化碳细
胞培养箱（上海博讯事业有限公司医疗设备厂），
ＹＰ６０１Ｎ电子天平（上海精密科学仪器有限公司），
ＴＤＬ８０⁃２Ｂ 台式离心机 （上海安亭科学仪器厂），
ＤＧ５０３２ 型酶联免疫检测仪（南京华东电子集团医
疗仪器设备有限责任公司），ＳＺ⁃９７ 自动三重纯水蒸
馏器（上海亚荣生化仪器厂）。
１􀆰 ３　 茶树菇多糖的纯化
１􀆰 ３􀆰 １　 茶树菇多糖的制备
新鲜茶树菇购自西安朱雀农产品贸易中心，经
晾晒、粉碎、脱脂，然后水提、醇沉、脱蛋白、透析，得
到 Ｓ⁃ＡＣＰ；水提残渣用 ０􀆰 ５ ｍｏｌ ／ Ｌ ＮａＯＨ 经浸提、醇
沉、脱蛋白、透析，得 Ｊ⁃ＡＣＰ。
１􀆰 ３􀆰 ２　 季铵盐沉淀法纯化 Ｓ⁃ＡＣＰ和 Ｊ⁃ＡＣＰ ［７］
采用季铵盐沉淀法将茶树菇多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ 和
Ｊ⁃ＡＣＰ分离纯化，分别得到亚组分 Ｓ⁃ＡＣＰ１、Ｓ⁃ＡＣＰ２、
Ｓ⁃ＡＣＰ３ 及 Ｊ⁃ＡＣＰ１、Ｊ⁃ＡＣＰ２、Ｊ⁃ＡＣＰ３。
１􀆰 ３􀆰 ３　 Ｓ⁃ＡＣＰ２ 和 Ｊ⁃ＡＣＰ２ 的凝胶柱层析纯化
分别将 ５ ｍｇ ／ ｍＬ多糖试样的 Ｓ⁃ＡＣＰ２ 和 Ｊ⁃ＡＣＰ２
３２　 第 ４ 期 窦佩娟等：碱提工艺对茶树菇多糖形貌特征和构象及其生物活性的影响
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上 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ 层析柱（Φ２􀆰 ５ ｃｍ × ６０ ｃｍ）进一
步纯化分析，蒸馏水洗脱、苯酚 硫酸法隔管检测，直
至无糖组分流出，以洗脱管数为横坐标，吸光值（ＯＤ
值） 为纵坐标作 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ 层析柱洗脱曲线，
分别合并各主峰溶液（Ａ ＞ ０􀆰 ４ 的管），旋转蒸发浓
缩，冷冻干燥。
１􀆰 ３􀆰 ４　 多糖的纯度鉴定———紫外光谱分析
室温下用紫外可见分光光度计对一定浓度的
多糖试样溶液进行 １９０ ～ ９００ ｎｍ 区域扫描，记录其
扫描曲线。
１􀆰 ４　 茶树菇多糖的电子显微镜（ＳＥＭ）分析
将少量茶树菇多糖粉 状 试 样 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、
Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 粘在试样座上，用吸
耳球吹去浮样，喷金，置于扫描电镜的试样室中扫
描分析，观察多糖表面形貌。
１􀆰 ５　 茶树菇多糖的原子力显微镜（ＡＦＭ）分析［８］
将多糖试样 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 配制成 １００
μｇ ／ ｍＬ的溶液，在磁力搅拌器上搅拌４ ｈ，分别稀释为
２５、１０ μｇ ／ ｍＬ，搅拌均匀后滴在新剥离的云母上，干燥
后被置于原子力显微镜上测试。 图像均在 Ｔａｐｐｉｎｇ
模式下获得，测试在室温和大气环境中进行，湿度为
５０％ ～６０％。 探针为 Ｓｉ３Ｎ４，用 ２００ μｍ 长的微悬臂，
力弹性常数为 ０􀆰 ２８ Ｎ ／ ｍ。
１􀆰 ６　 茶树菇多糖的刚果红实验
２ ｍＬ的多糖 （５ ｍｇ ／ ｍＬ）中加入等体积的 ８０
μｍｏｌ ／ Ｌ刚果红试剂，再逐渐加入 １ ｍｏｌ ／ Ｌ 的 ＮａＯＨ
溶液，使混合溶液中 ＮａＯＨ 浓度梯度增加到 ０􀆰 ５
ｍｏｌ ／ Ｌ，放置 １０ ｍｉｎ，进行紫外扫描，测定各碱性条件
下的最大吸收波长（以纯刚果红为对照）。 以 ＮａＯＨ
浓度为横坐标，最大吸收波长为纵坐标作图。
１􀆰 ７　 茶树菇多糖的圆二色谱（ＣＤ）分析
采用 Ｃｈｉｒａｓｃａｎ型圆二色谱仪测定圆二色谱，检
测波长为 １９０ ～ ４００ ｎｍ，测定试样经温度改变及配
位化合物刚果红对多糖圆二色性改变的影响。
１􀆰 ８　 茶树菇多糖的体外抗氧化活性
以对 １，１ 二苯基 ２ 苦苯肼自由基（ＤＰＰＨ·）
的清除能力为指标，衡量茶树菇多糖的体外抗氧化
活性。 参照文献［９］的方法，试样多糖的质量浓度
分别为 ０􀆰 １、０􀆰 ２、０􀆰 ４、０􀆰 ８、１􀆰 ０ 和 ２􀆰 ０ ｍｇ ／ ｍＬ。
１􀆰 ９　 茶树菇多糖的体外抗肿瘤活性
取对数生长期的 Ｋ５６２ 细胞，调节细胞密度至
１ × １０５ 个 ／ ｍＬ。 设置空白组、对照组和实验组，每组
设 ６ 个复孔。 于 ９６ 孔板接种，每孔中加 １００ μＬ 细
胞。 空白组只加完全培养基不加细胞。 培养 ２４ ｈ
后，实验组各孔加入不同质量浓度的茶树菇多糖
（２５、５０、１００、２００、４００ 和 ８００ μｇ ／ ｍＬ）１００ μＬ；空白
组和对照组不加多糖，加 １６４０ 培养基。 培养 ２４ ｈ
后加入 ＭＴＴ（５ ｍｇ ／ ｍＬ）２０ μＬ ／孔，３７℃孵育 ４ ｈ 后
离心弃上清。 加 ＤＭＳＯ ２００ μＬ ／孔，避光振荡 １０
ｍｉｎ，使结晶物充分溶解，用酶联免疫检测仪在波长
４９２ ｎｍ处测量各孔的吸光度（ＯＤ 值），平行实验 ３
次，计算细胞的相对生长抑制率。
相对生长抑制率 ＝
ＯＤ对照 － ＯＤ实验
ＯＤ对照 － ＯＤ空白
× １００％
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 茶树菇多糖的纯化
十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）是一种阳离子
表面活性剂，可与酸性多糖阴离子形成不溶于水的
化合物，在水中形成沉淀。 利用多糖与硼酸可形成
配合物的特点，则中性多糖也能被沉淀出来。 这样
通过季铵盐 硼酸就可依次把酸性多糖、中性多糖和
碱性多糖沉淀出来［７］。 ２ ｇ Ｓ⁃ＡＣＰ 经 ＣＴＡＢ 沉淀可
得到 Ｓ⁃ＡＣＰ１ ０􀆰 １８６ ｇ，Ｓ⁃ＡＣＰ２ ０􀆰 ６０６ ｇ 和 Ｓ⁃ＡＣＰ３
０􀆰 １９５ ｇ；２ ｇ Ｊ⁃ＡＣＰ经季铵盐沉淀得到 Ｊ⁃ＡＣＰ１ ０􀆰 １４２
ｇ，Ｊ⁃ＡＣＰ２ ０􀆰 ３３２ ｇ和 Ｊ⁃ＡＣＰ３ ０􀆰 ２７７ ｇ。 由于经初步
分离后二者的中性多糖量较多，则在下一步分离纯
化过程中采用 Ｓ⁃ＡＣＰ２、Ｊ⁃ＡＣＰ２。
Ｓ⁃ＡＣＰ２、Ｊ⁃ＡＣＰ２ 上 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ 柱，经苯酚
硫酸检测均有 ２ 组组分，分别命名为 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃
ＡＣＰ２⁃２，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１、 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ （见图 １、图 ２，柱体：
Φ２􀆰 ５ ｃｍ × ６０ ｃｍ，用蒸馏水洗脱，流速控制在 ０􀆰 ３
ｍＬ ／ ｍｉｎ，每管 ２ ｍＬ 分布收集）。 由图 １、图 ２ 可知：
图中的洗脱峰为对称峰，表明均为相对分子质量较
均一的多糖试样。 紫外光谱扫描未见明显的蛋白
质或核酸的吸收，进一步说明其为均一的多糖
组分［１０］。
图 １　 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０层析后的 Ｓ⁃ＡＣＰ２的色谱图
Ｆｉｇ． １　 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２
４２ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
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图 ２　 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ 层析后的 Ｊ⁃ＡＣＰ２ 色谱图
Ｆｉｇ． ２　 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ⁃１５０ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ Ｊ⁃ＡＣＰ２
２􀆰 ２　 茶树菇多糖的环境扫描电子显微镜观测结果
图 ３ 是茶树菇多糖粉末试样在 ２ ５００ 倍数下的
ＳＥＭ照片。 由图 ３ 可以看出：不同提取工艺对多糖
　 　 　 　
形貌有一定的影响，其中 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ （图 ３ （ ａ））、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１（图 ３（ｃ））试样均呈现丝状外貌，前者为较
粗的表面光滑的丝状，刚性较强，而后者呈较细的
有少量碎屑的丝状，刚性较弱； Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ （图 ３
（ｂ））、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２（图 ３（ｄ））试样均呈现片状或碎屑
状形貌，前者为较大的片状，放大后仍为光滑的片
状，而后者在大的片状周围有很多细小的碎屑，可
见碱提方式对多糖分子有一定的解聚和破坏作用，
使较大分子产生多的细小的片段及碎屑。
由图 ３ 还可以看出，粉末试样的多糖分子聚集
成大片或粗的丝状，但都表面紧密光滑，说明在无
水状态下，茶树菇多糖分子具有较强的相互作用
力，由于没有细微网络的多孔结构，说明没有结晶
区的形成［１１］。
图 ３　 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 粉末试样的 ＳＥＭ照片
Ｆｉｇ． ３　 ＳＥＭ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ ｐｏｗｄｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２
２􀆰 ３　 原子力显微镜的观测
２􀆰 ３􀆰 １　 制样条件对 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的影响
图 ４ 为 ２５ μｇ ／ ｍＬ的 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 稀糖溶液在室温
搅拌 ３０ ｍｉｎ后直接滴在云母片上干燥后观测到的
不同分辨率的多糖形貌。 由图 ４（ａ）可知，在低分辨
率的条件下 ＡＦＭ 观测（Ｂａｒ ＝ ２５ μｍ），可以看到多
糖链呈柔性缠绕的链状，细小的链又交织弯曲成约
４ μｍ 孔径大小的网；而在高分辨率条件下观测
（Ｂａｒ ＝ ５００ ｎｍ）发现，相互缠绕的链自身也呈现网
状结构，链 ＡＢ宽 ５６ ｎｍ，高 ８ ｎｍ 左右，形成的孔径
ＣＤ宽 ５６ ｎｍ，高 ８ ｎｍ。 图 ４（ｂ ～ ｂ″）为 ２５ μｇ ／ ｍＬ的
Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２稀糖溶液在 ８０ ℃恒温搅拌 １０ ｍｉｎ 后热溶
液直接滴在云母片上干燥观测到的不同分辨率的
多糖形貌。 由图 ４ （ ｂ）可知：在低分辨率条件下
（Ｂａｒ ＝ ２５ μｍ），可以明显观测到多糖链形成均匀的
网状结构，网孔大小约 ２ ～ ２􀆰 ５ μｍ；在高分辨率观测
（Ｂａｒ ＝ １􀆰 ２５ μｍ）则可以看出，多糖链宽平均约 １６０
ｎｍ，高约 ８ ～ ９ ｎｍ。 这是由于在加热情况下，多糖分
子内及分子间有效的氢键作用和分子间的范德华
力作用增强，多糖链由柔性变为刚性，形成了大的
网状结构。 由此还可以看出，温度对原子力显微镜
观测试样的结果有着显著的影响［１２］，加热可使多糖
稀溶液发生分子自组装，多糖链缔合成长链、粗链
的超分子结构。
２􀆰 ３􀆰 ２　 多糖浓度对 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的影响
图 ５（ｃ）为 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在不同浓度情况下的 ＡＦＭ
的观测图。 图 ５（ｃ ～ ｃ″）中 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 质量浓度为 ２５
μｇ ／ ｍＬ，图 ５ （ ｄ ～ ｄ″）中 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 质量浓度为 １０
μｇ ／ ｍＬ。 从图 ５（ｃ）的低分辨率（Ｂａｒ ＝ １２􀆰 ５ μｍ）观
测图中可以看到，多糖以小的雪花片以及小的圆球
状均匀分布于云母片，在 ５（ｃ′）的高分辨率（Ｂａｒ ＝
１􀆰 ５ μｍ）观测图中测量小的雪花片直径约 ４５０ ～ ７００
ｎｍ，链宽约 ７５ ｎｍ，高约 ２ ～ ３ ｎｍ，小球宽度为 ３０ ～
５０ ｎｍ，高度为 ２ ～ ３ ｎｍ。 由图 ５（ｄ）可以明显看出
与图 ５（ｃ）的形貌不同，图 ５（ｄ）中多糖链呈环状或
片状聚集，在 ５（ｄ′）（Ｂａｒ ＝ １􀆰 ５ μｍ）中，环的直径约
４００ ～ ５００ ｎｍ，高约 ２ ～ ３ ｎｍ。 图 ６ 为 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的高
分辨（Ｂａｒ ＝ ７５０ ｎｍ）ＡＦＭ 图。 由图 ６ 可知，环是由
多股链聚合而成。 与图 ５ 对比可以发现，２５ 和 １０
μｇ ／ ｍＬ的 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的 ＡＦＭ 形貌不同，这主要是因
为：浓度能影响多糖分子的聚集状态［１］，多糖为大
分子聚合物，糖链间存在大量氢键及其他弱作用
５２　 第 ４ 期 窦佩娟等：碱提工艺对茶树菇多糖形貌特征和构象及其生物活性的影响
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力。 在高浓度下，糖链间相互作用增强，在晾干的
过程中发生了局部的聚集，形成雪花状，周围均匀
分布的颗粒，可能是提取过程中碱液的破坏作用，
至于每一个颗粒是否是单个糖链分子卷曲聚合而
成，还有待进一步研究；在低浓度时，多糖依旧以多
股链缠绕的形式存在。
图 ４　 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的原子力显微镜观测图
Ｆｉｇ． ４　 ＡＦＭ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２
图 ５　 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的原子力显微镜观测图
Ｆｉｇ． ５　 ＡＦＭ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２
６２ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
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图 ６　 １０ μｇ ／ ｍＬ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的高分辨率（Ｂａｒ ＝７５０ｎｍ）ＡＦＭ观测图
Ｆｉｇ． ６　 ＡＦＭ ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ １０ μｇ ／ ｍＬ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２（Ｂａｒ ＝７５０ ｎｍ）
２􀆰 ３􀆰 ３　 提取方式对茶树菇多糖的影响
对比图 ４（ａ′）和图 ５（ｃ′）可见，不同提取方式对
多糖形貌有一定影响，水提多糖得到的 ＡＦＭ 图
４（ａ′）中多糖交织呈较大的网状，链间相互缠绕，分
子间作用力较大，碱提方式的 ＡＦＭ 图 ５（ｃ′）中有较
多小颗粒，由散布其中的为直径约 ４５０ ～ ７００ ｎｍ 的
雪花状对比可知，碱液作用在一定程度上破坏了多
糖分子间的相互作用，使大分子断裂为较小的片
段。 这与 ＳＥＭ观测的结果相符。
２􀆰 ４　 茶树菇多糖的刚果红实验分析
刚果红可以与具有螺旋结构的分子发生配位化
合，配位化合物的最大吸收波长较纯刚果红发生红
移［１３］。 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 与刚果红的最大吸收波
长随碱浓度变化结果见图 ７。 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２均
不能和刚果红发生配位化合［１４ － １５］，说明其本身不具
有螺旋结构。 多糖在溶液中有 ３ 种构型：三股螺旋、
单股螺旋、自由卷曲，因此 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在水
溶液中均为自由卷曲构象。
２􀆰 ５　 茶树菇多糖的圆二色谱分析
图 ８ 为 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在不同温度（２０、６０
和 １００ ℃）处理 ３０ ｍｉｎ后冷却至室温后的 ＣＤ谱图。
加热与冷却使得多糖分子有一个变性与复性相对
图 ７　 不同 ＮａＯＨ浓度下 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ＋刚果红、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ＋刚果红的最大吸收波长
Ｆｉｇ． ７　 Ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ
ｏｆ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ ＋ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ａｎｄ Ｃｏｎｇｏ
ｒｅｄ ＋ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ
的可逆过程，但超过某一温度，无论怎样不能完全
恢复到原来的状态。 从图 ８（ａ）可以看出，随着温度
升高到 ６０ ℃，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的 ＣＤ谱在 ２００ ～ ２２０ ｎｍ出
现了正相峰，至 １００ ℃正峰略有变强并且发生少量
蓝移，说明随着温度的增强 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的分子不对称
性增强，存在的微小突变说明其本身有少量有序结
构；图 ８（ｂ）中随温度升高，各正峰、负峰峰强略有增
加，说明分子手性增强，但均未出现突变，表明经高
温处理后，多糖分子中氢键结合较弱的部分可能解
７２　 第 ４ 期 窦佩娟等：碱提工艺对茶树菇多糖形貌特征和构象及其生物活性的影响
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聚，分子舒展，但在冷却后多糖分子间的相互作用
又增强而产生更大的聚集作用，不对称性增强，因
此表明 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 主要以无序结构存在。
为进一步研究温度对构象的影响，即测定分子
的伸展度与对应立体构型的关系，采用程序升温方
式（由 ３０ ℃逐渐升温至 ９０ ℃）测定 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ＣＤ
谱图结果见图 ９。 由图 ９ 可知：３０ ～ ６０ ℃时 ＣＤ 谱
峰形相同，１９０ ｎｍ 峰强度在 ７０ ℃有个小的跳跃变
化；３０ ℃在 １９０、２６０ ｎｍ 有正相峰，在 ２１０ ｎｍ 有负
的 Ｃｏｔｔｏｎ效应。 随着温度的升高，圆二色谱的峰值
减弱，９０ ℃时 １９０ ｎｍ的正相峰变至负向，说明随温
度的升高，其分子伸展，不对称性降低；由于正负峰
在 １９０ ｎｍ发生突变，则推测 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在溶液中有
部分有序构象，但比较少［１１］。
图 ８　 经不同温度处理的 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的 ＣＤ谱
Ｆｉｇ． ８　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ＣＤ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２
图 １０　 刚果红对茶树菇多糖 ＣＤ谱的影响
Ｆｉｇ． １０　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ ｏｎ ＣＤ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２
图 ９　 程序升温处理 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的 ＣＤ谱
Ｆｉｇ． ９　 ＣＤ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｔｒｅａｔｅｄ ａｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
　 　 图 １０ 为刚果红对茶树菇多糖 ＣＤ 谱图的影响。
由图 １０ 可知，ＣＤ谱图中主峰位置、峰形均未发生大
的改变，即 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 多糖分子均未和刚
果红发生特征的螺旋络合作用，说明 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２中不存在螺旋结构，这与刚果红实验测定
结果相符。
２􀆰 ６　 茶树菇多糖的体外抗氧化活性
茶树菇多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｊ⁃
ＡＣＰ２⁃２ 对 ＤＰＰＨ·的清除能力结果见图 １１。 由图
１１ 可知，在实验浓度范围内，４ 种多糖的体外抗氧化
活性都呈剂量关系，随着多糖质量浓度的增加，其
对 ＤＰＰＨ·的清除率越明显。在多糖质量浓度小于
０􀆰 ８ ｍｇ ／ ｍＬ时，各多糖清除率对比不明显，大于 ０􀆰 ８
ｍｇ ／ ｍＬ时，水提、碱提茶树菇多糖组分二 Ｓ⁃ＡＣＰＰ２⁃
２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的清除率均大于组分一 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、 Ｊ⁃
ＡＣＰ２⁃１ 的清除率；对比组分 １、２ 可见，当多糖浓度
大于 ０􀆰 ４ ｍｇ ／ ｍＬ时，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的清除率与 Ｓ⁃ＡＣＰＰ２⁃
２ 对比达到显著水平，并在 ０􀆰 ８、１􀆰 ０ ｍｇ ／ ｍＬ 时达到
８２ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
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极显著水平； Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 的清除率与 Ｓ⁃ＡＣＰＰ２⁃１ 对
比，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 大于 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１，并达到显著水平，这与
文献［１６］中茶树菇粗多糖的结果相似，推测组
分———Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 中含有部分蛋白质，其
抗氧化活性大小与含有的蛋白含量有关。
２􀆰 ７　 茶树菇多糖的体外抗肿瘤活性
茶树菇多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的体外抗肿瘤活性结果见表 １。 由表 １ 可
以看出，４ 种多糖对体外培养的 Ｋ５６２ 细胞增殖表现
出一定的抑制作用，且抑制趋势都是随着浓度的增
大而增大。 在低浓度范围（２５ 和 ５０ μｇ ／ ｍＬ），高相
对分子质量的 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 抑制率不明
显。 在相同浓度时，低相对分子质量的 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 和
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 的抑制率与对照组相比达显著（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）
与极显著水平（Ｐ ＜ ０􀆰 ０１）。 随着多糖质量浓度的增
加，４ 种多糖的抑制率都达到极显著水平。 对比水
提和碱提的多糖，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 相对于 Ｓ⁃ＡＰ２⁃１ 在质量
　 　 　 　 　
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 与 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 对比：∗为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５，∗∗为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０１；
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 与 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 对比：∗为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５，∗∗为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０１。
图 １１　 茶树菇多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 对 ＤＤＰＨ·的清除作用
Ｆｉｇ． １１　 Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｏｎ ＤＰＰＨ·ｒａｄｉｃａｌ
浓度为２００、４００ μｇ ／ ｍＬ时达到显著水平，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 相
对于 Ｓ⁃ＡＰ２⁃２ 在质量浓度为 １００、２００ 和 ４００ μｇ ／ ｍＬ
时达到极显著水平，８００ μｇ ／ ｍＬ达显著水平。
表 １　 茶树菇多糖 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 和 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 对人白血病细胞 Ｋ５６２ 的影响
Ｔａｂｌｅ １　 Ｔｈｅ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ ａｎｄ Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ
组别 质量浓度 ／（μｇ·ｍＬ － １）
ＯＤ４９２
（􀭰ｘ ± ｓ，ｎ ＝ ３）
ＲＩ ／ ％
对照 ０􀆰 ３４０ ８ ± ０􀆰 ０１７ ６
２５ ０􀆰 ３３４ ７ ± ０􀆰 ０２９ ７ —
５０ ０􀆰 ３２１ ９ ± ０􀆰 ０１１ ３ —
Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ １００ ０􀆰 ３２３ ６ ± ０􀆰 ０１３ ４ —
２００ ０􀆰 ３０６ ４ ± ０􀆰 ０１８ ９ １０􀆰 ０９
４００ ０􀆰 ２９０ １ ± ０􀆰 ０１７ ６ａ １４􀆰 ８８
８００ ０􀆰 ２６０ ０ ± ０􀆰 ０２０ ７ｂ ２３􀆰 ７１
２５ ０􀆰 ３０５ ４ ± ０􀆰 ０３８ ５ １０􀆰 ３９
５０ ０􀆰 ３１３ ４ ± ０􀆰 ０１８ ２ —
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ １００ ０􀆰 ３００ ４ ± ０􀆰 ０１７ １ａ １１􀆰 ８５
２００ ０􀆰 ２９７ ９ ± ０􀆰 ０２１ ５ｃ １２􀆰 ５９
４００ ０􀆰 ２６０ ４ ± ０􀆰 ０１４ ３ｂｃ ２３􀆰 ６
８００ ０􀆰 ２３５ ０ ± ０􀆰 ０１９ ６ｂ ３１􀆰 ０４
２５ ０􀆰 ２９０ ５ ± ０􀆰 ０２２ ２ａ １４􀆰 ７６
５０ ０􀆰 ２３３ ３ ± ０􀆰 ０１２ １ｂ ３１􀆰 ５４
Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ １００ ０􀆰 ２２１ ４ ± ０􀆰 ０２３ ３ｂ ３５􀆰 ０３
２００ ０􀆰 １９３ ８ ± ０􀆰 ０１７ ６ｂ ４３􀆰 １３
４００ ０􀆰 １８９ ６ ± ０􀆰 ００４ ９ｂ ４４􀆰 ３７
８００ ０􀆰 １７５ ５ ± ０􀆰 ００４ ４ｂ ４８􀆰 ５
２５ ０􀆰 ２５７ ６ ± ０􀆰 ０５５ ６ａ ２２􀆰 ５７
５０ ０􀆰 ２５５ ５ ± ０􀆰 ０１１ ３ｂ ２３􀆰 １９
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ １００ ０􀆰 １１０ ０ ± ０􀆰 ０１９ ５ｂｆ ６５􀆰 ８７
２００ ０􀆰 １０７ ２ ± ０􀆰 ０２４ ０ｂｆ ６６􀆰 ７６
４００ ０􀆰 １１９ ２ ± ０􀆰 ０２０ ２ｂｆ ６２􀆰 ６５
８００ ０􀆰 １５４ ０ ± ０􀆰 ０１６ １ｂｅ ５２􀆰 ９７
　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 注：抑制率低于 １０％ ；与对照组对比（ａ为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５，ｂ为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０１）；与 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 对比（ｃ为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５，
ｄ为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０１）；与 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 对比（ｅ为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５，ｆ为 Ｐ ＜ ０􀆰 ０１）。
９２　 第 ４ 期 窦佩娟等：碱提工艺对茶树菇多糖形貌特征和构象及其生物活性的影响
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３　 结　 论
ＳＥＭ分析发现：在无水状态下， Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、 Ｊ⁃
ＡＣＰ２⁃１ 试样均呈现丝状外貌，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１ 为较粗的
表面光滑的丝状，刚性较强；Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１ 呈较细的相
互缠绕的丝状，柔性较强；Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 试样
均呈现片状或碎屑状形貌，Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 为较大的片
状，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在大的片状周围有很多细小的碎屑。
ＡＦＭ分析发现：温度和浓度对 ＡＦＭ 观测时试
样有显著影响，加热可使多糖稀溶液发生分子自组
装，多糖链缔合成长链、粗链的超分子结构；高浓度
溶液的分子链间或链内氢键以及其他弱作用力加
强。 碱液作用在一定程度上破坏了多糖分子间的
相互作用，使大分子断裂为较小的片段。
刚果红实验发现：Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在水溶
液中为自由卷曲构型。 ＣＤ 分析结果：不同温度处
理及程序升温处理的 ＣＤ 谱显示 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２ 本身的
有序结构比较少，Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 在溶液中为无序构型存
在，这与刚果红实验的结果相符。
不同提取方式对多糖外观形貌及显微构象的
影响：通过横向比较 ＳＥＭ和 ＡＦＭ 观测结果可知，提
取方式对多糖形貌有一定影响，碱液对多糖分子有
一定破坏作用，使部分大分子多糖断裂为小片段或
者小颗粒。
体外抗氧化活性测定发现：分子较小的组分 Ｓ⁃
ＡＣＰ２⁃２、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 活性高于分子较大的 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、
Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１，碱液作用的多糖 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 活性高于 Ｓ⁃
ＡＣＰ２⁃２，这与 ＮａＯＨ一定程度上对多糖分子的破坏
作用有关。
体外抗肿瘤活性测定显示：４ 种多糖对体外培
养的 Ｋ５６２ 细胞增殖表现出一定的抑制作用，且抑
制趋势都是随着浓度的增大抑制率在增大。 综合
比较，碱液作用的多糖 Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｊ⁃ＡＣＰ２⁃２ 活性高
于 Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃１、Ｓ⁃ＡＣＰ２⁃２。
碱液提取的多糖分子活性显著高于水提的多
糖分子，这与不同提取方式获得的多糖的溶液行
为和链构象的差异存在一定的相关性，关于多糖
高级结构和生物活性的关系还须要进一步的实验
分析。
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