全 文 ：第９卷第５期
２０１１年９月
生　物　加　工　过　程
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．９Ｎｏ．５
Ｓｅｐ．２０１１
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１１．０５．０１３
收稿日期：２０１１－０４－０４
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０７０６０１７）；鲁东大学校科研基金资助项目（ＬＹ２００８３３０５）
作者简介：程仕伟（１９７６—），男，山东潍坊人，博士，讲师，研究方向：酶工程，Ｅｍａｉｌ：ｓｗｂｉｏｔｅｃｈ＠ｙｅａｈ．ｎｅｔ
酶法制备甲壳低聚糖研究的进展
程仕伟１，孙爱友２
（１．鲁东大学 生命科学学院，烟台 ２６４０２５；２．华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 ２００２３７）
摘　要：甲壳低聚糖具有多种重要的生理活性，可作为食品添加剂、生物农药和新型药物，是低聚糖研发的新热点。
与壳聚糖相比，由于多糖链缩短使其水溶性好、黏度低且容易吸收。本文对酶法制备甲壳低聚糖的催化剂种类和
特性、生物反应器选用及其工艺优化的最新进展进行综述，对酶法生产甲壳低聚糖进行总结并展望未来的研发
重点。
关键词：生物反应器；壳聚糖酶；甲壳低聚糖；酶法
中图分类号：Ｑ８１４９　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２０１１）０５－００６５－０６
Ａｄｖａｎｃｅｉｎｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｗｉｔｈｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄ：ａｒｅｖｉｅｗ
ＣＨＥＮＧＳｈｉｗｅｉ１，ＳＵＮＡｉｙｏｕ２
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＬｕｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ２６４０２５，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｒｅａｃｔｏｒＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
ＥａｓｔＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２３７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｈａｄｓｈｏｗｎｖａｒｉｏｕｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｍａｎｙ
ｆｉｅｌｄｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｆｏｏｄｉｎｇ，ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｈｉｔｏｓａｎ，ｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ｗｅｒｅｒｅａｄｉｌｙｓｏｌｕｂｌｅｉｎｗａｔｅｒｄｕｅｔｏｔｈｅｉｒｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｌｅｎｇｔｈｓ，ｌｏｗｖｉｓｃｏｓｉｔｙａｎｄｅａｓｉｌｙａｂｓｏｒｂｅｄｉｎｖｉｖｏ．Ｉｎ
ｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｗｅｒｅｄｉｓｃｕｓｓｅｄａｂｏｕｔｔｙｐｅｓａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｕｓｅｄｅｎｚｙｍｅｓ，ｂｉｏｒｅａｃ
ｔｏｒｓｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒ
ｍｏｒｅ，ｉｔｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｎｄｏｕｔｌｏｏｋｔｈｅｆｕｔｕｒｅｅｍｐｈａｓｉｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｂｙｕｓｉｎｇｅｎｚｙｍａｔｉｃ
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ；ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ；ｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｅｔｈｏｄ
　　几丁质是除纤维素外的第二大生物聚合物，壳
聚糖是几丁质部分或完全脱乙酰基的衍生物，主要
由Ｄ 氨基葡萄糖通过 β １，４ 糖苷键连接形成。
在过去几十年里，壳聚糖作为潜在的生物活性物质
被广泛研究，但仍具有一些缺陷，如生理条件下的
低溶解性和高黏度［１］。将壳聚糖降解使其相对分
子质量在３０００以下，分子质量减小导致晶体结构
变化，热稳定性降低，具有优良的水溶性［２－３］，是近
几年糖类研究和应用开发的热点之一。
　　甲壳低聚糖是由壳聚糖经水解后产生的一类
聚合度在 ２～２０的可溶于水的氨基糖类化合物，是
近年来新兴发展的功能性低聚糖，具有独特的生理
活性和优越的功能性质［４］。甲壳低聚糖可作为功
能性食品添加剂和防腐剂［５－６］；在农业上可作为植
物调节剂和生物防治剂，亦可开发为一种无公害的
新型生物农药［７］；在医药上可作为抗癌、免疫系统
药物［８］。
　　甲壳低聚糖的制备方法有酶法、氧化法以及酸
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降解法。酶法生产甲壳低聚糖具有条件温和，可以
控制降解速率和甲壳低聚糖相对分子质量，不产生
二次污染等优点［９］，因而受到广泛关注。但是，甲
壳低聚糖的溶解性和生理功能与其聚合度有密切
关系，当其聚合度低于５和６时具有较好的水溶性，
且体内吸收迅速，但是其生理效应不高。相反，当
甲壳低聚糖聚合度大于６时，溶解性变得较差［１０］。
　　甲壳低聚糖制备的关键是使其最终产物中五
聚体和六聚体的含量尽可能高，这样既可保持其
水溶性，又有较高的生理活性。壳五糖和壳六糖
只是酶法制备过程的中间产物，最终产物多为氨
基葡萄糖单体、壳二糖和壳三糖，因此，严格控制
水解反应过程是获得高质量甲壳低聚糖的关键。
要控制水解反应过程，首先考虑的是所用催化剂
的特性，其次是选择合适的催化反应装置和工艺。
本文对酶法制备甲壳低聚糖的前沿动态进行归纳
和概括。
１　甲壳低聚糖生产用酶
　　酶法降解壳聚糖的酶来源分为专一性用酶和
非专一性用酶两类。
１１　专一性酶
　　专一性酶主要是指壳聚糖酶（ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ），多
来源于微生物，在植物组织中也有分布。壳聚糖酶
根据其作用位点不同，可分为三类：１）可以水解
ＧｌｃＮ ＧｌｃＮ键及 ＧｌｃＮＡｃ Ｇ１ｃＮ键；２）只能水解
Ｇ１ｃＮ ＧｌｃＮ键；３）既可水解Ｇ１ｃＮ ＧｌｃＮ键又可水
解Ｇ１ｃＮ ＧｌｃＮＡｃ键。所有壳聚糖酶有１个共同催
化性质，就是要求糖苷键的一侧至少有 １个 Ｇ１ｃＮ
残基，而不能催化 ＧｌｃＮＡｃ Ｇ１ｃＮＡｃ键的断裂［１１］。
壳聚糖酶水解底物作用化学键位点不同导致产物
聚合度的不同，如 ＢａｃｉｌｕｓｃｅｒｅｕｓＳ１来源壳聚糖酶
水解底物产生的壳寡糖聚合度为２～４，主要是三聚
体［１２］；而 Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｒａｃｉｌｉｓ来源的壳聚糖酶催化
产生的产物相对分子质量则高达９５００［１３］。
　　不同来源的壳聚糖酶除了水解位点不同外，其
催化特性也存在差异，如催化反应最适 ｐＨ（４０～
８０）、最适温度（３０～８０℃）等差别较大［１４］。因此
要获得一定聚合度的甲壳低聚糖，首先要选择合适
来源的酶制剂。在筛选合适壳聚糖酶来源的基础
上，考虑酶水解壳聚糖作用位点的不同，还需要阐
明壳聚糖酶对部分乙酰化壳聚糖的作用方式。如
对于只切断 ＧｌｃＮ ＧｌｃＮ糖苷键的壳聚糖酶，壳聚
糖的乙酰化度高，可以得到较高聚合度的甲壳低聚
糖；而壳聚糖乙酰化度低，可以把降解过程中产生
的甲壳低聚糖继续降解，容易得到聚合度较小的
寡糖。
１２　非专一性酶
　　由于专一性酶（壳聚糖酶）存在底物特异性，用
于商业化的很少［１２］，因此很多学者尝试用非专一性
酶解法生产甲壳低聚糖。目前报道的非专一性酶
主要有胃蛋白酶／木瓜蛋白酶／蛋白酶［１５］、脂肪
酶［１６］、纤维素酶［１７］、半纤维素酶［１８］、溶菌酶［１９］、果
胶酶［２０］等。
　　从作用效果及酶的来源看，各类非专一性酶似
乎并不存在共同的催化基团，其壳聚糖降解机制颇
让人疑惑，有学者认为是底物分子链上的羟基对酶
解起重要作用［２１］。尽管如此，非专一性水解酶降解
壳聚糖过程仍存在一定共同特点［２２］：１）酶主要以内
切方式作用，在水解初期溶液黏度下降很快；２）大
部分反应不遵循 ＭｉｃｈａｅｌｉｓＭｅｎｔｅｎ动力学方程，无
论提高底物浓度还是提高酶浓度都有可能提高反
应速率；３）水解最适宜 ｐＨ一般为３～５；４）产物相
对分子质量分布范围较广。
　　非专一性酶法能制备水溶性低相对分子质量
的壳聚糖。尽管有研究报道某些酶（如胃蛋白
酶［１５］）在特定反应条件下催化壳聚糖降解优于壳聚
糖酶，但同等条件下多数酶催化产生的甲壳低聚糖
含量比壳聚糖酶少，生理生化活性低［２３］。不仅如
此，采用非专一性酶解法生产周期长，需要酶添加
量比壳聚糖酶多［２４］，因此，甲壳低聚糖酶法生产的
研究重点是壳聚糖酶催化不同脱乙酰度的壳聚糖
降解。
２　甲壳低聚糖的酶法生产工艺
　　酶法生产甲壳低聚糖的生产工艺设计难点主
要是：１）底物壳聚糖溶液的高黏度，２）产物是靠
β １，４ 糖苷键连接构成的不同聚合度低聚糖混合
物，且多数是催化反应的中间产物。因此，要针对
催化反应特点选择合适的生物催化装置和工艺，尽
量避免产生的低聚合度产物再次被水解。
２１　连续搅拌批次反应生产甲壳低聚糖
　　以游离酶为催化剂，使用批次搅拌反应装置生
产甲壳低聚糖现已很少使用，原因是壳聚糖酶价格
较贵，由于游离酶不能回收利用导致生产成本升
高［２５］。但是将壳聚糖酶固定化后，催化剂具备一定
６６ 生　物　加　工　过　程　　 第９卷　
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的固体形态，可在反应完毕后通过过滤或离心等方
法方便收集回收，因此固定化酶生产甲壳低聚糖的
工艺中，连续搅拌的批次反应装置占有相当比例。
　　Ｋｕｒｏｉｗａ等［２６－２７］采用自动控温的批次连续搅拌
反应装置，固定化壳聚糖酶催化０５％ ～１５％壳聚
糖溶液生产甲壳低聚糖，发现载体表面酶浓度、载
体粒径、温度、搅拌转速、初始底物浓度显著影响产
物构成，产物中生理活性较大的壳五糖和壳六糖浓
度随载体表面酶量和反应温度的增加而减小，其余
因素对其影响则相反，在最优反应条件下，甲壳低
聚糖得率达４０％［２６］。
　　Ｍｉｎｇ等［２８２９］通过多点连接方法将壳聚糖酶直
接固定在有琼脂凝胶涂层的５个叶轮上，采用新型
连续搅拌反应装置，电机带动叶轮旋转搅拌物料同
时，固定在叶轮钢丝网间凝胶上的酶与底物接触，
水解高黏度的壳聚糖（质量分数０５％～２０％）底物
溶液生产甲壳低聚糖（图 １）。该装置的优点表现
在：１）可以适应高黏度的底物溶液；２）实现较好的
物料转换，催化效率高；３）提供较大的载体面积用
于固定化；４）固定化酶稳定性较好，连续运行５个
批次酶活没有丢失。通过优化反应条件，在酶负载
量为 ３４０Ｕ／ｍ２时，五聚体和六聚体的得率超过
２２％，高于传统酸水解法的结果。
１—搅拌器；２—加热器；３—叶轮；４—反应器；５—水浴
图１　连续搅拌批次反应装置
Ｆｉｇ．１　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｐｐａｒａｔｕｓｏｆｂａｔｃｈｒｅａｃｔｏｒ
　　连续搅拌反应装置可以做到底物与酶的充分
接触，但是，在甲壳低聚糖的生产中也存在一定缺
陷，主要是产物尤其是聚合度较高（大于６）的中间
产物不能做到及时分离，导致最终高活性的产物得
率不高。
２２　填充柱反应装置生产甲壳低聚糖
　　固定化壳聚糖酶填充柱反应装置催化壳聚糖
降解生成甲壳低聚糖的工艺流程见图２［３０－３１］。２％
壳聚糖溶液水浴（３５℃）保温后，用泵输送到装有固
定化壳聚糖酶颗粒的填充柱底部（同样水浴保温），
催化反应生成的产物从填充柱顶端流出。经条件
优化后，在达姆科勒数（Ｄａ）为０１２时，壳五糖和壳
六糖得率超过３５％，连续运行１个月［３１］。
图２　填充柱反应装置生产甲壳低聚糖
Ｆｉｇ．２　Ｐａｃｋｅｄｂｅｄｒｅａｃｔｏｒｓｙｓｔｅｍｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ
ｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
　　填充柱反应器在固定化酶催化合成目的产物
时被广泛使用，但是，在甲壳低聚糖生产中由于底
物壳聚糖在酸性溶液中溶解后，黏度较高，加入固
定化酶催化装置中流动性较差，仍然存在柱堵塞
问题［２９］。
２３　膜生物反应器生产甲壳低聚糖
　　膜反应器可以连续反应，并且能够很好地做到
底物催化和产物分离的过程耦合。该系统中底物
连续进入反应系统而产物不断地移出反应系统，通
过不同孔径的膜可以截留不同相对分子质量的产
物，在酶法生产高附加值产品过程中广泛应用。
　　Ｋｕｒｏｉｗａ等［３２］利用固定形式短小芽孢杆菌来源
的壳聚糖酶在膜反应器中生产甲壳低聚糖。反应
器是连续搅拌反应装置并在反应器的底部装有
２０００的超滤膜（图３），反应过程中酶和底物壳聚糖
因为相对分子质量大被膜截流，而产物透过膜实现
产物分离。在反应过程中，利用通入的 Ｎ２将５％壳
聚糖底物溶液压入反应装置。经优化操作条件，系
统中五聚体和六聚体的产物量达到２３ｇ／Ｌ（产率
４６％）。整个反应连续运行 １个月，经估算连续运
行条件下整个反应系统的半衰期达到５０ｄ，具备工
业化应用潜力。
　　甲壳低聚糖酶法生产的另一类型膜式反应装
置见图４，该反应器与图３中膜反应器的区别在于
７６　第５期 程仕伟等：酶法制备甲壳低聚糖研究的进展
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图３　连续搅拌膜反应 分离耦合装置
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｆｌｏｗｓｔｉｒｒｅｄｔａｎｋｍｅｍｂｒａｎｅｒｅａｃｔｏｒ
连续搅拌反应装置与产物膜分离装置分开。Ｊｅｏｎ
等［３３］采用图 ４的反应装置，催化剂为 Ｂａｃｉｌｕｕｓ
ｐｕｍｉｌｕｓＢＮ ２６２来源壳聚糖酶，催化降解脱乙酰度
为８９％的壳聚糖，在优化条件下，聚合度３～６的产
物得率高达８０％。Ｌｉｎ等［３４］从ＢａｃｉｌｕｓｃｅｒｅｕｓＮＴＵ
ＦＣ ４中纯化得到３种壳聚糖酶（ＣＢＣＩ，ＣＢＣＩ，ＣＢ
ＣＩＩ），其中ＣＢＣＩＩ催化壳聚糖水解生成产物的聚合
度≥６，以纯化后 ＣＢＣＩＩ在膜反应器（图４）中降解
壳聚糖，高聚体产物的得率超过４８％。
图５　双反应器系统连续生产甲壳低聚糖
Ｆｉｇ．５　Ｄｕａｌｒｅａｃｔｏｒｓｙｓｔｅｍｆｏｒｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｈｉｔｏｓａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
　　值得注意的是，膜反应器在甲壳低聚糖酶法
生产中仍存在较大限制，比较突出的是高黏度壳
聚糖底物对膜造成堵塞和污染问题［２９］，在壳聚糖
脱乙酰度越低和底物浓度越高时尤其明显。因此
在反应器选择和催化工艺条件选择上，要充分考
虑该问题。
图４　超滤膜酶反应系统生产甲壳低聚糖
Ｆｉｇ．４　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｈｉｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎ
ＵＦｍｅｍｂｒａｎｅｒｅａｃｔｏｒｓｙｓｔｅｍ
２４　填充固定化酶柱和超滤膜双反应器系统生产
甲壳低聚糖
　　Ｊｅｏｎ等［３５］采用 ＢａｃｉｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓＢＮ ２６２来源
壳聚糖酶催化脱乙酰度８９％的壳聚糖底物制备甲
壳低聚糖，其反应装置如图５所示。利用双反应器
系统，首先在装有固定化酶的柱式反应器中将壳聚
糖降解为相对分子质量低的聚合物，使其黏度降
低，避免对膜反应装置的堵塞；降解后低相对分子
质量壳聚糖用泵输送到连续搅拌反应装置（ＣＳＴＲ）
中继续用固定化酶催化反应，生成相对分子质量更
低的甲壳低聚糖，产物经超滤膜分离流出反应体
系，经离心、干燥获得产品；而相对分子质量高的中
间产物、固定化酶被膜截流，用泵重新打入 ＣＳＴＲ反
应装置循环水解。该反应装置的最大优势是很好
地克服了高黏度底物对膜堵塞的问题，且反应后生
８６ 生　物　加　工　过　程　　 第９卷　
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成的甲壳低聚糖能及时移出反应体系，避免降解为
聚合度更低的产物，可获得所需的甲壳低聚糖。研
究发现泵输送底物的流速对膜界面特性有显著影
响，最佳流速为５ｍＬ／ｍｉｎ。该装置稳定性较好，连
续运行４８ｈ，膜压力没有任何变化。选用相对分子
质量为１０００的超滤膜，经分析发现，高聚甲壳低聚
糖含量远高于单纯采用膜反应器的产物得率
（８０％，聚合度为３～６）。
２５　膜反应器与反胶束微反应器联合生产高聚合
度的甲壳低聚糖
　　在水溶液反应系统中的转糖基反应发生几率
很小，原因是中间产物的水解速率远远大于转糖基
反应的速率，造成产物的聚合度低。利用膜反应器
和反胶束微反应器联合生产高聚合度的甲壳低聚
糖，设计原理是壳聚糖相对分子质量较大，很难进
入反胶束与酶接触进而反应，因此首先用膜反应器
降解为低相对分子质量产物，壳聚糖降解后的中间
产物进入琥珀酸二（２ 乙基己基）酯磺酸钠／异辛烷
反胶束微反应器，与反胶束内酶接触。由于底物浓
度增加和水含量减少，造成转糖基反应几率增加，
在Ｗ０＝１１８６时获得最大量的壳七糖、壳八糖和壳
九糖［３６］。膜反应器与反胶束微反应器双系统提供
了一种合成高聚合度甲壳低聚糖的新方法，其充分
考虑了水相系统中被忽略的转糖基反应，从而能够
合成更高聚合度的甲壳低聚糖，但是能否适应工业
规模生产甲壳低聚糖，还有待深入研究。
３　总结与展望
　　甲壳低聚糖具有重要生理活性且能克服壳聚
糖在中性溶液中难溶的缺点，市场潜力巨大。从环
境友好与产品质量角度出发，实现酶解法工业化生
产甲壳低聚糖迫在眉睫，近年来受到相关领域研究
人员的广泛重视，在酶生产菌株的筛选或重组表
达、催化剂选择、酶法降解底物特性等方面进行了
诸多研究。但是，目前的研究多注重于酶催化活性
及其影响因素，降解机制研究少，规模化连续酶法
生产甲壳低聚糖的报道少之又少，研究成果还停留
在实验室阶段，尚未见大规模产业化报道。但是随
着研究的逐步深入，酶法生产不同聚合度甲壳低聚
糖产品的时代必然到来。
　　要实现酶法生产甲壳低聚糖的工业化，笔者认
为需要深入如下几方面：１）适应甲壳低聚糖生产要
求的新型催化剂筛选，获得能生产高质量和高产率
产品的生物催化剂；２）理清酶催化作用模式和机
制。只有对降解模式和机制研究透彻，才能有效优
化和控制反应条件，为工业化放大提供依据；３）催
化反应装置选择与过程控制研究。考虑底物壳聚
糖高黏度及高聚合度甲壳低聚糖产物为催化过程
中间产物的特性，选择合适的生物反应器，优化过
程控制条件，重视生物反应器工程和生物过程工程
研究；４）反应 分离耦合新技术的研究开发。原位
反应分离耦合技术是生物分离工程的重要新方向，
反应过程中能及时将产物分离，对于甲壳低聚糖是
降解反应中间产物的产品来说尤为适合，是今后甲
壳低聚糖生产工艺开发的重要方向。
参考文献：
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０７ 生　物　加　工　过　程　　 第９卷　
＼＼ＤＺ１９＼Ｄ＼孙桂云＼生物加工２０１１＼第５期＼ＳＷ１１０５．ＰＳ　６校样　排版：孙桂云　修改日期：２０１１／０９／２８