全 文 ：Sep．2008
· 60·
生物加工过程
ChineseJournalofBioproeessEngineering
第6卷第5期
2008年9月
苍术体外抑茵活性的初步研究
胡定慧1，赵晓姬2，单志萍1，张永海1
(1．绵阳师范学院 生命科学与技术学院，绵阳621000；
2．绵阳市第三人民医院检验科，绵阳621000)
摘要：对苍术的体外抑茵活性进行初步的研究。通过用体积分数为50％乙醇浸泡、有机溶剂萃取、薄层层析对苍
术抑茵活性物质进行初步分析，用纸片法检测其抑茵活性，用琼脂稀释法测最低抑茵浓度(MIC)。结果表明：苍术
提取液对金黄色葡萄球茵的抑菌作用较明显，对白色念珠茵和大肠杆菌的抑菌作用次之，其最低抑茵质量浓度分
别为0．7g／mL，1．0S／mL和1．2S／mL；以正丁醇作为萃取液抑茵效果最佳，薄层层析实验结果表明，可值为0．76
的展开点具有抑茵活性。
关键词：苍术；抑茵活性；萃取
中图分类号：R961 文献标志码：A 文章编号：1672—3678(2008)05—0060—04
Invitroantibacterialact vitiesofextractsfromRhizomaAtractylodis
HUDing．huil，ZHAOXiao-ji2，SHANZhi—pin91，ZHANGYong．hail
(1．DepartmentofBiology，MianyangNormalU iversity，Mianyang621000，China；
2．ClinicalLaboratory，theThirdPeoples’HospitalofMianYang，Mianyang621000，China)
Abstract：Theantibaeterialact vitiesofrootextractsfromRhizomaAtr ctylodiswereinvestigated．Theae—
tivecomponentsfromRhizomaAtractylodiswereextractedwithfourkindsoforganicsolventsandepara—
tedwiththinlayerchromatography(TLC)．Theextractby50％alcohols wedantibacterialeffecton
Staphylococcusaure ，Escherichiacol ，andCandidaalbicans．Theminimuminhibitionconcentrationon
Staphylococcusaureu ，Escherichiacol ，andCandidaalbicanswa0．7g／mL，1．2g／mL，and1．0
s／mL，respectively．Theoptimalantibacterialact vitieswereobtainedinthextractformbutan01．TheRf
oftheffectiveingredientwas0．76onTLC．
Keywords：RhizomaAtractylodis；antibacterialactivi y；extract
苍术(Rh／zomaAtractylodis)，别名赤术、山刺冲击
茅术、枪头菜，为菊科苍术属植物茅苍术(茅术)Atrac-
tylodeslancea(Thunb．)DC．(AtractflislanceaThunb．)
和北苍术Atractylodeschinensis(DC．)‰沈．(Atractylis
chinensisDC．)的根状茎⋯。具有燥湿健脾、祛风散
寒、明目，治疗食欲不振、消化不良，寒湿吐泻、胃腑胀
满、水肿、湿痰留饮、夜盲症、佝偻病、湿疹等症的功
效口1。其药理作用广泛，能抗菌消炎、增强胃肠道功
能、增强免疫功能及利尿口矗J。本研究以苍术的根状
茎为原料，研究其对几种常见致病菌的抑菌作用，并
对其抑菌活性物质进行初步的分离，为进一步开发苍
术的药用价值提供一定的理论基础。
收稿13期：2008-05-06
基金项目：绵阳市应用技术研究与开发资助项目(06N029—06)
作者简介：胡定慧(1977一)，女，四川自贡人，讲师，硕士．研究方向：药理学。E-mail：Stella0608@hotmail．cocrl
万方数据
2008年9月 胡定慧等：苍术体外抑菌活性的初步研究 · 61 ·
1材料和方法
1．1实验材料
1．1．1 苍术
购买于绵阳师范学院校医院，经成都中医药大
学马家华博士鉴定为正品。
1．1．2供试菌
大肠杆菌Escherichiacoli和金黄色葡萄球菌
Staphy’lococcusaureus购自中科院微生物所，由绵阳
师范学院分子生物与微生物制药重点实验室保存；
绿脓杆菌Pseudomonasaeruginosa、白色念珠菌Can．
didaalbicans、肺炎克雷伯菌Kelbsiellapneumoniae由
绵阳市第三人民医院检验科提供。
1．1．3培养基
采用牛肉膏．蛋白胨培养基。
1．1．4试剂
硅胶GF254、羧甲基纤维素钠(CMC)、牛肉膏、
蛋白胨、琼脂、无水乙醇、氯化钠、甲醇、正丁醇、乙
酸乙酯、石油醚、乙醚等试剂皆为国产分析纯。
1．1．5主要仪器
SANYO全自动高压灭菌锅(SANYO)，高速冷
冻离心机(Backman)，RE．52AA旋转蒸发仪(上海
亚荣)，HH一6恒温水浴锅(上海康华)，JTl2001电子
天平(上海精天)，SB．JC．IA超净工作台(上海康
华)，微量移液器(Eppendoff)，隔水式电热恒温培养
箱(上海康华)。
1．2实验方法
1．2．1苍术粗提液的制备
准确称取苍术20g，体积分数为50％乙醇200
mL浸泡24h，离心得上清液，沉淀重复处理3次，合
并滤液得粗提液，减压浓缩至10mL，该溶液分别用
正丁醇、乙酸乙酯、石油醚、乙醚萃取，Sevage脱蛋白，
充分振荡，静置，直到两相液面完全分开。用分液漏
斗将有机溶剂相与水相分开，收集有机溶剂进行抑菌
活性研究。
1．2．2抑菌活性测定——纸片法
用移液枪移取20¨L供试菌(大肠杆菌、金黄
色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、肺炎克雷伯
菌)悬液，接种在固体培养基上，涂布棒将菌液均匀
涂布于平皿上。将直径为5mm的灭菌滤纸圆片浸
泡于中药苍术的浸提液中，取出隔一定距离平铺于
含菌培养皿中，在适宜的温度下(大肠杆菌、白色念
珠菌、肺炎克雷伯菌37℃，金黄色葡萄球菌、绿脓杆
菌27℃)培养16—24h，观察结果，用游标卡尺测
量抑菌圈直径，取其平均值，计算抑菌率归]。以不
含待测样的试液作空白对照，每个样品做两个平
行，实验重复3次。抑菌率用下述公式计算¨¨11]，
抑菌率(％)=
麴塑型骂掣貔磐善笋遂避×100％空白滤纸片直径 ⋯ “
I．2．3最低抑菌浓度(MIC)的测定——琼脂稀释法
取不同量的苍术提取液加入无菌培养皿中，加
入冷却至50c|C的融化的牛肉膏蛋白胨培养基中，迅
速混匀，制成含药物浓度梯度的培养基。用移液枪
移取20汕金黄色葡萄菌、大肠杆菌、白色念珠菌悬
液均匀涂布于平皿上。培养16—24h，观察实验结
果。以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓
度为最低抑菌浓度¨2|。以无菌蒸馏水作为空白对
照，每个样品做两个平行，实验重复3次¨3|。
1．2．4苍术萃取液的硅胶薄层层析
将硅胶GF254和黏合剂羧甲基纤维素钠水溶
液以1g与3mL的比例研磨后铺板，晾干后用铅笔
在下端1em处划一平行于底边的细线。毛细管点
样，在立式玻璃展开槽中以／3(石油醚)：∥(甲醇)=
3：5为展开剂，进行线性上行展开，以碘染色。将展
开点及其中间的空白部分刮下，甲醇溶解，检测上
清液的抑菌活性，以甲醇作为空白对照¨3|。
2 结 果
2．1 提取液抑菌实验结果
苍术50％乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑
菌作用最明显，对白色念珠菌、大肠杆菌的抑菌作
用次之，对绿脓杆菌抑菌作用较弱，对肺炎克雷伯
菌几乎没有抑菌作用，结果如图1所示。
2．2药物浓度与抑菌率的关系
苍术提取物对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、
大肠杆菌都有较好的抑制作用。当生药量为
2g／mL时，对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆
菌的抑制率分别为138％、80％、74％；当生药量为
1．25g／mL时，对金黄色葡萄球菌的抑制率为58％，
对白色念珠菌的抑制率为6％。当生药量稀释到
1 g／mL时，苍术提取液对白色念珠菌和大肠杆菌都
没有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑制率仅为
32％。苍术提取液对3种菌的抑制作用随着药物质
万方数据
· 62· 生物加工过程 第6卷第5期
量浓度的增高逐渐增强，其抑菌率和质量浓度之间
具有剂量依赖关系，结果见图2。
图1 苍术提取液的抑茵效果
Fig．1Theinhibittingeffectofextractingsolutionof
Rh／zomaAtractylodisonbacterium
0．75 1．O 1．25 1．5 1．75 2．0 2．25
生药量／(g·mL“)
+金黄色葡萄球菌一．¨大肠杆菌一+一白色念珠菌
图2 不同质量浓度的苍术提取液与抑菌率的关系
Fig．2TheinhibittingrateofRh／zomaAtractylodis
extractonbacterium
2．3最低抑菌浓度(MIC)
用琼脂稀释法制成含不同质量浓度的苍术浸
提液药物平板，检测其对金黄色葡萄球菌、大肠杆
菌、白色念珠菌的最低抑菌质量浓度。实验结果表
明，苍术浸提液对金黄色葡萄球菌的MIC值最低，
白色念珠菌次之，对大肠杆菌的MIC值最高，其
MIC值分别为0．7g／mL，1．0g／mL和1．2g／mL。
2．4萃取液抑菌实验结果
对苍术4种萃取有机溶液进行活性检测，结果
表明，正丁醇萃取液抑菌作用最强，对金黄色葡萄
球菌、白色念珠菌和大肠杆菌都有抑制作用，乙酸
乙酯、石油醚、乙醚萃取液几乎没有抑菌作用。
2．5薄层层析实验结果
苍术正丁醇萃取液以”(石油醚)：”(甲醇)为
3：5展开剂薄层层析，在薄层板上展开得到3个点，
展开点1，2，3的彤分别为0．12，0．23，0．76。抑菌
实验结果表明Rf=0．76的展开点具有一定的抑菌
活性，其他两个展开点没有抑菌作用。
3讨论
本实验选用了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿
脓杆菌、白色念珠菌、肺炎克雷伯菌5种常见致病菌
为供试菌，其中，大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和绿脓杆
菌都为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌和白色念球
菌为革兰氏阳性菌。抑菌实验结果表明苍术对革
兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌活性。研究
苍术对这儿种菌的抑制作用具有临床意义。
在抑菌活性检测中采用r纸片法，纸片法操作
简便，设备简单，效果明显。在用纸片法测得的抑
菌率的基础上，选择r琼脂稀释法测定最低抑菌浓
度，本法优点是可在一个平板E同时作多株菌MIC
测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼
脂平板费时费力。
在对抑菌活性物质的分离中，采取有机溶剂萃
取，硅胶薄层层析技术，但薄层层析图谱不是很理
想，可能是活性物质极性的原因，或者由于展开剂
选择不当，因此苍术中抑菌活性物质的分离及其抑
菌机理还有待进一步研究。
参考文献：
[1]李帏．不同炮制方法对苍术挥发油含量的影响[J]．中医研究。
2001．2(3)：56—58．
LiWei．Studiesontheffectstothecontentof aphthainRhizoma
Atractylodisthroughdifferentco coctme hod[J]．TraditionalChi—
neseMedicinalResearch．2001，2(3)：56-58．
[2]俞宜年，俞长荣．俞晓峰应用苍术的经验[J]．辽宁中医杂志。
2004，31(2)：45．
YuYinian，YoChangrong．ClinicalexperienceofYuXiaofengap-
plyingChineseatractylodes[J]．LiaoningoumalofTraditional
ChineseMedicine，2004，3l(2)：45．
[3]王金华，薛宝云，梁爱华，等．苍术有效成分口-桉叶醇对小鼠
小肠推进功能的影响[J]．中国药学杂志．2002，37(4)：
266-268．
WangJinhua，XueBaoyun，LiangAihua，eta1．Effectsof口一eu-
calypt01．∞activeconsituentfromRhizomaAtractylodis0nsmall
intestinemovementinrats[J]．ChinesePharmaceuticalJourn l，
2002，37(4)：266-268．
[4]甄录旭．吴海林。方宗华，等．辛苍胶囊挥发油提取及舻环糊
精包合的实验研究[J]．安徽医药，2007．Il(7)：588-589．
ZhenLuxu．WuHailin．FangZon hua．Theexperimentstudieson
distillingnaphthafromRhizomaAtractylodisandoncombiningwith
加加∞∞∞∞加。
零、讲坦器
万方数据
2008年9月 胡定慧等：苍术体外抑菌活性的初步研究 · 63·
产alpha-dextrin[J]．AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal，
2007，11(7)：588-589．
[5]NakaiY，K doT，HashimotoK，eta1．Effectof herhizomesofAt—
ractylodesLarweaanditsconstituentsonthedelayofgastricempty—
ing[J]．JEthnopharmaeol，2003，84(1)：51．
[6]苏德摩．肉丁汤治疗d,JL慢性腹泻30例[J]．实用中医药杂
志，2007，23(7)：451．
SuDemo．Thirtyexamplesonctlrew al]chronicdiarrheathrough
usingfrieddicedporksoup[J]．JournalofPracticalTr ditional
ChineseMedicine，2007．23(7)：451．
[7]苏丽霞．中药苍术用于导管室空气消毒的I临床观察[J]．护理
研究，2007，21(7)：1744．1745．
SuLixia．ClinicalobservationOnatractylodesrhizomeus dfor
catheterizationloomairsterilization[J]．ChineseNursingRe-
search．2007．21(7)：1744-1745．
[8]朱惠京，张}【英，马玉莲．苍术正丁醇萃取物对大鼠心肌缺血
及缺血一再灌注损伤保护作用[J]．中剧中医药科技，2000．7
(3)：173—174．
ZhuHuijing，ZhangHongying，MaYuli n．Protectiveeffectsof
L．n-ButlAlcoholExtractfromRhizomaAtractylocleoninjuryin-
ducedbymyocardicalis hemicreperfusion[J]．Chineseournalof
TraditionalMedicalScienceandTechnology，2000，7(3)：
／‘ⅧI-_’。Ⅶ．t一‘’¨¨·．d·’¨¨l-·“‘¨7“I¨．_一·-’¨“·H‘‘’o⋯‘
173—174．
[9]程丽娟，唐明，袁静，等．微生物学实验技术[M]．北京：科学技
术出版社，1993：57，
[10]胡定慧，丁建刚，阮期甲．延胡索提取物抑菌活性的初步研究
[J]．辽宁中医杂志，2007，34(18)：496-．497．
ttuDinghui，DingJia ang．ZhangMin．Studiesonantibacterial
propertiesisolatedfromRhizomaCorydalis[J]．LiaoningJournalof
TraditionalChineseMedicine，2007，34(18)：496-497．
[11]于平儒，邵红军，冯俊涛，等．62种植物样品对菌丝活性的测
定[J]．西北农林科技大学学报：自然科学版，，2001，29(6)：
65-69．
YuPingru，ShaoHongjun．Preliminarystudyonantifungalactivity
of62plantextracts[J]。JournalofN rthwestSci-TeehUniversity
ofA咖cultureandForestry：NaturalScienceEdition，2001，29
(6)：65-69．
[12]周帮靖．中草药抗菌活性研究方法[M]．重庆：重庆科技出版
社，1987．
[13]刘欣，郝淑贤，赵力超，等．荸荠英抑菌沉浮粉活性跟踪方法的
研究[J]．食品科学，2005，26(7)：78-81．
LiuXin，HaoShuxian．ZhaoLiehao．StudyOiltrackingbacterio·
staticcomponentsinpuchiin[J]．FoodScience，2005，26(7)：
78-81．
生物柴油产业化示范项目正式启动
我国的生物柴油产业化示范项目正式启动，正式批准了中石油南充炼油化工总厂6万t／a、中石化贵州
分公司5万t／a和中海油海南6万t／a的3个小油桐生物柴油产业化示范项目。国家发展改革委员会相关
负责人透露，菲粮燃料乙醇稳步推进的同时，开展市场空间及潜力更大的生物柴油产业化示范工作的时机
已成熟。据悉，国家发展改革委员会在2007年9月叫停了新增的玉米深加工项目，发展生物燃料的进程一
度停止。广东省油气协会油品部部长姚达明表示，目前由国际油价高导致的批零倒挂日益严重，替代燃料
石油的各种燃料理应受到重视。
(朱宏阳)
万方数据