全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊源冤院园源园愿 耀 园源员苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园源鄄园源园愿鄄员园
桃果实铜锌超氧化物歧化酶基因
孕责悦怎在灶杂韵阅的克隆与分析
吴军帅摇 李培环摇 李鼎立摇 董晓颖摇 段艳欣
渊青岛农业大学园林园艺学院 辕青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室袁山东 青岛摇 圆远远员园怨冤
摘摇 要院从已构建的硬肉桃渊孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬 蕴援 冤双久红果实 杂杂匀 文库中获得 源 条铜锌超氧化物歧化酶
渊悦怎在灶杂韵阅冤基因的 耘杂栽泽袁通过 遭造葬泽贼比对和电子克隆后进行了序列拼接和经 砸栽鄄孕悦砸 方法袁获得桃果实
铜锌超氧化物歧化酶基因 孕责悦怎在灶杂韵阅 全长 糟阅晕粤 序列渊郧藻灶月葬灶噪 登录号院允载圆员苑苑源猿冤遥 该基因全长
远远缘遭责袁包含一个 源缘怨遭责的 韵砸云渊员圆园遭责 原 缘苑愿遭责冤袁编码 员缘圆 个氨基酸袁推测蛋白分子量为 员缘援 猿愿噪阅葬袁理论
等电点为 缘援 远园遥 该基因具有典型的高度保守的 悦怎圆 垣和 在灶圆 垣活化中心及特征信号袁其氨基酸序列与其
他植物的 悦怎在灶杂韵阅具有很高的相似性遥 生物信息学分析结果表明袁该蛋白定位于细胞质中袁是非跨膜
的非分泌性亲水蛋白遥 二级结构分析结果表明袁该蛋白主要由无规则卷曲和延伸链等蛋白质二级结构
元件构成袁三维结构预测结果显示袁孕责悦怎在灶杂韵阅 有 猿 个转角环和 愿 个折叠构成桶状的活性中心遥 系统
进化分析结果表明 孕责悦怎在灶杂韵阅 与小金海棠渊酝葬造怎泽 曾蚤葬燥躁蚤灶藻灶泽蚤泽冤 泽燥凿圆 同源关系最近袁而与荔枝渊 蕴蚤糟澡蚤
糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤尧龙眼渊阅蚤皂燥糟葬则责怎泽 造燥灶早葬灶冤和拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼则蚤枣燥造蚤葬贼藻冤等亲缘关系较远遥 匝孕悦砸 结果表明袁
孕责悦怎在灶杂韵阅在幼果中表达量最高袁雌蕊和雄蕊次之袁花瓣和叶片中表达量最少曰果实成熟前后袁
孕责悦怎在灶杂韵阅在硬肉芽变桃双久红果实中的表达量显著高于软肉桃川中岛白桃中的表达量袁表明该基因
可能在维持果实质地和硬度方面有一定作用遥 本研究结果为进一步研究该基因在桃果实成熟软化中的
作用奠定了基础遥
关键词院桃曰孕责悦怎在灶杂韵阅基因曰克隆曰生物信息学曰基因表达
收稿日期院圆园员圆鄄园苑鄄园圆摇 接受日期院圆园员圆鄄员员鄄圆猿
基金项目院国家青年基金渊晕杂云悦袁 猿园怨园园怨苑远冤
作者简介院吴军帅渊员怨愿苑鄄冤袁男袁山东临朐人袁硕士研究生袁研究方向为果树分子生物学袁栽藻造院 园缘猿圆鄄愿愿园猿园缘员猿曰耘鄄皂葬蚤造院 憎躁泽缘员圆猿岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院段艳欣渊员怨苑愿鄄冤袁女袁河北武强人袁博士袁副教授袁研究方向为果树分子生物学及转基因方面的工作袁栽藻造院 园缘猿圆鄄愿愿园猿园缘员猿曰耘鄄皂葬蚤造院
凿怎葬灶赠葬灶曾蚤灶岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援 糟灶
悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦燥责责藻则鄄扎蚤灶糟鄄泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 阅蚤泽皂怎贼葬泽藻
郧藻灶藻 渊孕责悦怎在灶杂韵阅冤 枣则燥皂 孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬
宰哉 允怎灶鄄泽澡怎葬蚤摇 蕴陨 孕藻蚤鄄澡怎葬灶摇 蕴陨 阅蚤灶早鄄造蚤摇 阅韵晕郧 载蚤葬燥鄄赠蚤灶早摇 阅哉粤晕 再葬灶鄄曾蚤灶
渊匝蚤灶早凿葬燥 运藻赠 蕴葬遭 燥枣 酝燥凿藻则灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 匝怎葬造蚤贼赠 葬灶凿 杂葬枣藻贼赠 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 辕 悦燥造造藻早藻 燥枣
蕴葬灶凿泽糟葬责藻 葬灶凿 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则藻袁 匝蚤灶早凿葬燥 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匝蚤灶早凿葬燥袁 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆远远员园怨冤
粤遭泽贼则葬糟贼院云燥怎则 糟燥责责藻则 辕 扎蚤灶糟鄄泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 早藻灶藻 耘杂栽泽 枣则燥皂 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 杂杂匀 造蚤遭则葬则赠 燥枣 泽贼燥灶赠 澡葬则凿 责藻葬糟澡 渊孕则怎灶怎泽
责藻则泽蚤糟葬 蕴援 冤 耶杂澡怎葬灶早躁蚤怎澡燥灶早爷 憎藻则藻 枣燥怎灶凿袁 葬灶凿 葬枣贼藻则 泽藻择怎藻灶糟藻 遭造葬泽贼蚤灶早袁 泽蚤造蚤糟燥 糟造燥灶蚤灶早袁 泽藻择怎藻灶糟藻 泽责造蚤糟蚤灶早袁 葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸袁
葬 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 孕援 责藻则泽蚤糟葬 糟燥责责藻则鄄扎蚤灶糟鄄泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 早藻灶藻 渊孕责悦怎在灶杂韵阅袁 郧藻灶月葬灶噪 粤糟糟藻泽泽蚤燥灶
灶燥院 允载圆员苑苑源猿冤 憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿援 栽澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 憎葬泽 远远缘遭责袁 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 葬 源缘怨遭责 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻
渊韵砸云冤 憎澡蚤糟澡 藻灶糟燥凿藻泽 葬 员缘圆鄄葬皂蚤灶燥鄄葬糟蚤凿 责则燥贼藻蚤灶援 栽澡藻 责则藻凿蚤糟贼藻凿 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 燥枣 贼澡藻 责则燥贼藻蚤灶 憎葬泽 员缘援 猿愿 噪阅葬 憎蚤贼澡 贼澡藻
愿园源
摇 源 期 桃果实铜锌超氧化物歧化酶基因 孕责悦怎在灶杂韵阅的克隆与分析
责陨 燥枣 缘援 远园援 孕责悦怎在灶杂韵阅 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 贼赠责蚤糟葬造 澡蚤早澡造赠 糟燥灶泽藻则增藻凿 藻灶扎赠皂藻 糟燥则藻 燥枣 悦怎圆 垣 葬灶凿 在灶圆 垣 袁 葬灶凿 憎葬泽 澡蚤早澡造赠 泽蚤皂蚤造葬则 贼燥
燥贼澡藻则泽援 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 责则燥贼藻蚤灶 憎葬泽 造燥糟葬贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 糟赠贼燥责造葬泽皂 葬灶凿 憎葬泽 葬 澡赠凿则燥责澡蚤造蚤糟袁 灶燥灶鄄
贼则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 葬灶凿 灶燥灶鄄泽藻糟则藻贼燥则赠 责则燥贼藻蚤灶援 栽澡藻 皂葬蚤灶 皂燥贼蚤枣 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 蚤灶 泽藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻 憎葬泽 则葬灶凿燥皂 糟燥蚤造泽 葬灶凿
藻曾贼藻灶凿藻凿 泽贼则葬灶凿泽援 栽澡藻 贼澡则藻藻鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶 泽贼则怎糟贼怎则藻 皂燥凿藻造蚤灶早 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 孕责悦怎在灶杂韵阅 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 猿 澡藻造蚤曾藻泽 葬灶凿 愿 泽澡藻藻贼泽袁
葬灶凿 澡葬凿 葬 糟赠造蚤灶凿藻则 皂燥贼蚤枣 葬灶凿 贼澡则藻藻 藻曾贼藻则灶葬造 造燥燥责泽 蚤灶 贼澡藻 藻灶扎赠皂藻 糟燥则藻援 栽澡藻 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 孕责悦怎在灶杂韵阅
憎葬泽 糟造燥泽藻泽贼 贼燥 酝葬造怎泽 曾蚤葬燥躁蚤灶藻灶泽蚤泽 泽燥凿圆 葬灶凿 枣葬则贼澡藻则 贼燥 蕴蚤糟澡蚤 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽袁 阅蚤皂燥糟葬则责怎泽 造燥灶早葬灶袁 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼则蚤枣燥造蚤葬贼藻援
匝孕悦砸 则藻增藻葬造藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 憎葬泽 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 蚤灶 赠燥怎灶早 枣则怎蚤贼泽袁 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 责蚤泽贼蚤造泽 葬灶凿 泽贼葬皂藻灶泽袁 葬灶凿
造藻葬泽贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 憎葬泽 燥遭泽藻则增藻凿 蚤灶 造藻葬增藻泽 葬灶凿 责藻贼葬造泽援 月藻枣燥则藻 葬灶凿 葬枣贼藻则 枣则怎蚤贼 则蚤责藻灶蚤灶早袁 贼澡藻 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 憎葬泽
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 澡蚤早澡藻则 蚤灶 贼澡藻 枣蚤则皂鄄枣造藻泽澡藻凿 皂怎贼葬灶贼 耶杂澡怎葬灶早躁蚤怎澡燥灶早爷 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶 贼澡藻 泽燥枣贼鄄枣造藻泽澡藻凿 耶运葬憎葬灶葬噪葬躁蚤皂葬 匀葬噪怎贼燥爷袁
憎澡蚤糟澡 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 孕责悦怎在灶杂韵阅 皂蚤早澡贼 责造葬赠 葬 则燥造藻 蚤灶 皂葬蚤灶贼葬蚤灶蚤灶早 贼澡藻 枣则怎蚤贼 贼藻曾贼怎则藻 葬灶凿 枣蚤则皂灶藻泽泽援 栽澡蚤泽 泽贼怎凿赠 造葬蚤凿 贼澡藻
枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶 枣燥则 枣怎则贼澡藻则 则藻泽藻葬则糟澡 燥灶 贼澡藻 则燥造藻 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 蚤灶 责藻葬糟澡 枣则怎蚤贼 则蚤责藻灶蚤灶早 葬灶凿 泽燥枣贼藻灶蚤灶早援
运藻赠 憎燥则凿泽院孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬曰 悦燥责责藻则鄄扎蚤灶糟鄄泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 早藻灶藻 渊孕责悦怎在灶杂韵阅冤 曰 悦造燥灶蚤灶早曰 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽曰 郧藻灶藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
摇 摇 超氧化物歧化酶渊泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻袁杂韵阅冤在植
物中普遍存在袁具有清除自由基尧维持活性氧代谢平
衡尧保护膜结构的功能及延缓器官衰老的作用咱员暂 遥 根
据酶活性中心辅基部位结合的金属离子的不同袁杂韵阅
可分为 猿 种类型院铜锌超氧化物歧化酶渊悦怎在灶杂韵阅冤尧
锰超氧化物歧化酶 渊酝灶杂韵阅冤和铁超氧化物歧化酶
渊云藻杂韵阅冤袁酝灶杂韵阅 和 云藻杂韵阅 存在于线粒体尧过氧化物
酶体和叶绿体中袁悦怎在灶杂韵阅 主要存在于叶绿体尧胞质
和过氧化物酶体中咱圆暂 袁是 猿 种歧化酶中含量最丰富的
一种袁是活性氧清除酶系统中最重要的酶袁具有减轻膜
脂过氧化的作用遥 大量研究发现袁提高植物体内抗氧
化酶活性和增强抗氧化代谢的水平是提高植物抗逆性
的有效途径咱猿 原 远暂 遥 桃果实成熟后袁质地下降快袁果肉迅
速变软袁货架期缩短遥 这与活性氧代谢密切相关袁膜质
过氧化作用是引起果实软化的重要因素之一咱苑暂 遥 果
实成熟后袁硬肉桃芽变双久红果实中的 杂韵阅尧孕韵阅 和
悦粤栽活性均明显的高于同期对照川中岛白桃咱苑暂 遥 前
人对 草 莓 渊 云则葬早葬则蚤葬 葬灶葬灶葬泽泽葬 阅怎糟澡援 冤 咱愿暂 尧 番 荔 枝
渊粤灶灶燥灶葬 泽择怎葬皂燥泽葬 蕴援 冤 咱怨暂 尧桃渊孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬 蕴援 冤 咱员园暂等
果实成熟软化的研究表明袁杂韵阅 酶活性与果实硬度密
切相关遥 本研究利用硬肉桃芽变双久红和母本川中岛
白桃构建了果实 杂杂匀 文库袁从硬肉桃中分离了
孕责悦怎在灶杂韵阅基因袁结合生物信息学方法预测了该基因
编码蛋白的理化性质尧保守序列尧结构域尧疏水特性尧二
级尧三维结构以及与其他植物同源基因的进化关系袁同
时对该基因的组织特异性表达和整个发育过程中的表
达变化进行了研究袁为进一步研究该基因在硬肉芽变
中的作用及其在桃果实成熟软化中的作用奠定了基
础遥
员摇 材料和方法
员援 员摇 材料与试剂
员援 员援 员摇 植物材料摇 硬肉桃芽变双久红及其母本川中
岛白桃袁果实均采自山东省临朐县龙岗镇双埠村桃试
验园遥 随机区组设计袁分别选择 员园 株长势基本一致的
桃树取样遥 从成熟渊成熟期以两个品种各自的果实发
育天数计算院川中岛白桃 员圆园凿 和双久红 员猿园凿冤前 圆园凿
开始袁每隔 缘凿取样一次袁直到成熟后 圆园凿结束袁即川中
岛白桃花后 员源园凿 为成熟期袁双久红花后 员缘园凿 为成熟
期遥 每次均随机取座果部位相同尧成熟期一致的果实袁
洗净尧去皮袁 果肉组织以液氮处理后袁置于 原 苑园益超低
温冰箱中保存备用遥
员援 员援 圆摇 菌株和载体
大肠杆菌渊耘援 糟燥造蚤冤菌株 阅匀缘琢袁责郧耘酝鄄栽载体购自
北京 栽陨粤晕郧耘晕公司青岛代理遥
员援 员援 猿摇 主要生化试剂
引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合
成遥 反转录用 砸藻增藻则贼粤蚤凿栽酝 云蚤则泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽
运蚤贼和 孕悦砸 运蚤贼试剂盒购自欧洲 云藻则皂藻灶贼泽 公司青岛代
理袁克隆载体试剂盒 责郧耘酝鄄栽 增藻糟贼燥则 泽赠泽贼藻皂 和 阅晕粤 回
收试剂盒购自北京 栽陨粤晕郧耘晕 公司青岛代理遥 其他化
学试剂均为国产分析纯遥
员援 圆摇 方法
员援 圆援 员 摇 砸晕粤 提取与 皂砸晕粤 的分离纯化 摇 桃果实总
砸晕粤的提取采用刘莉等咱员员暂的方法进行遥 皂砸晕粤 的分
离纯化按 孕燥造赠栽贼则葬糟贼誖 皂砸晕粤 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 杂赠泽贼藻皂泽 陨陨陨 试剂
盒说明书进行遥 纯化的 皂砸晕粤于 原苑园益保存备用遥
员援 圆援 圆摇 杂杂匀文库的构建及阳性克隆的测序摇 根据抑
怨园源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
制消减杂交原理袁应用 孕悦砸鄄杂藻造藻糟贼 糟阅晕粤 杂怎遭贼则葬糟贼蚤燥灶试
剂盒渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶冤袁将两种材料果肉不同发育阶段的总
砸晕粤分别分离出 皂砸晕粤 后等量混合袁用于双链 糟阅晕粤
的合成袁形成两个 糟阅晕粤文库渊糟阅晕粤 责燥燥造冤渊双久红袁杂鄄
责燥燥造曰川中岛白桃袁悦鄄责燥燥造冤遥 分别以两种 糟阅晕粤 责燥燥造 互
为耶贼藻泽贼藻则爷和耶凿则蚤增藻则爷杂交袁对消减后产物进行两轮抑
制 孕悦砸反应袁并将 孕悦砸产物克隆进 栽 载体中袁转化大
肠杆菌袁在涂有 载鄄郧粤蕴 辕 陨孕栽郧 和氨苄青霉素渊粤皂责冤的
蕴月平板上挑取白色菌落渊阳性克隆冤袁从而构建双向
的 糟阅晕粤抑制消减文库遥
员援 圆援 猿摇 铜锌超氧化物歧化酶基因渊悦怎在灶杂韵阅冤的获得
摇 从所构建的 杂杂匀文库中挑取阳性克隆进行测序袁从
硬肉桃双久红库中获得 源 个 悦怎在灶杂韵阅片段袁通过 遭造葬泽贼
比对和电子克隆后进行了在线 悦粤孕猿 序列拼接获得一
条长度为 愿园员遭责的序列袁设计特异性引物渊上游引物院
粤悦悦粤悦粤栽悦郧郧悦粤栽粤粤悦粤栽悦悦曰 下 游 引 物院
栽栽栽栽郧悦郧栽栽悦粤郧栽栽悦悦悦栽悦栽冤进行 砸栽鄄孕悦砸 扩增序列袁
扩增区域为包含整个 韵砸云 在内的长度为 远远缘遭责 的片
段遥 扩增体系院上尧下游引物渊员园滋皂燥造窑蕴 原员 冤各 员滋蕴袁
糟阅晕粤 模板 员滋蕴袁圆 伊 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 用 员圆援 缘滋蕴袁终体积
圆缘滋蕴遥 扩增程序为院怨源益 猿皂蚤灶袁 怨源益 猿园 泽袁 缘圆益 猿园泽袁
苑圆益 缘园泽袁 共 猿缘 个循环袁最后 苑圆益 员园皂蚤灶遥 孕悦砸 产物
经回收尧栽 载体连接尧转化和克隆至 阅匀缘琢 后袁随机选
取送 远 个单克隆至上海英俊公司进行测序遥
员援 圆援 源摇 实时荧光定量 孕悦砸渊砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼蚤增藻 孕悦砸袁
匝孕悦砸冤检测摇 采用 孕则蚤皂藻则 缘援 园 软件进行 匝孕悦砸引物设
计渊阅鄄孕责悦怎在灶杂韵阅鄄云院粤粤悦栽郧郧粤悦悦郧悦粤栽栽栽悦粤粤栽悦曰阅鄄
孕责悦怎在灶杂韵阅鄄砸院 郧悦郧粤郧粤郧郧粤粤栽悦栽郧悦栽栽郧栽悦冤遥 使用
粤月陨 苑缘园园 仪器进行 匝孕悦砸检测遥 总体积 员园援 园滋蕴袁包括
员援 园滋蕴 糟阅晕粤模板尧员园滋皂燥造窑蕴 原员上下游引物各 园援 源滋蕴尧
缘援 园滋蕴 圆载 杂再月砸 郧则藻藻灶 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤尧 砸晕葬泽藻鄄云则藻藻
宰葬贼藻则遥 反应程序为 怨源益预变性 猿园泽袁怨源益 缘泽袁远园益
猿源泽袁共 源园 个循环遥 每次 孕悦砸 设阴性对照遥 匝孕悦砸 的
数据分析采用 圆 原吟吟悦栽方法遥 每次试验设置 猿 次重复遥
员援 猿摇 序列分析
多序列比对工具为 悦造怎泽贼葬造宰渊澡贼贼责院椅憎憎憎援 藻遭蚤援 葬糟援
怎噪 辕 糟造怎泽贼葬造憎 辕 冤遥 应 用 耘曾孕粤杂赠 孕则燥贼藻燥皂蚤糟泽 杂藻则增藻则 的
孕则燥贼责葬则葬皂程序渊澡贼贼责院椅葬怎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责则燥贼责葬则葬皂援
澡贼皂造冤分析蛋白的氨基酸序列组成尧相对分子质量尧等
电点等理化性质遥 利用 晕悦月陨 网站的 悦阅鄄杂藻葬则糟澡 服务
器 渊 澡贼贼责院 椅 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 杂贼则怎糟贼怎则藻 辕 糟 凿凿 辕
憎则责泽遭援 糟早蚤冤分析桃果实 悦怎在灶杂韵阅氨基酸序列的保守结
构域遥 用 栽酝责则藻凿 工具分析蛋白质跨膜区和跨膜方
向袁用在线 栽酝责则藻凿 渊 澡贼贼责院 椅 憎憎憎援 糟澡援 藻皂遭灶藻贼援 燥则早 辕
泽燥枣贼憎葬则藻 辕 栽酝孕砸耘阅赃枣燥则皂援 澡贼皂造冤和 栽酝匀酝渊澡贼贼责院椅憎憎憎援
糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 栽酝匀酝酝 原 圆援 园 辕 冤袁利用 杂蚤早灶葬造孕
猿援 园 杂藻则增藻则渊 澡贼贼责院椅憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 杂 蚤早灶葬造孕
原 猿援 园 辕 冤程序分析预测蛋白 晕 原末端的信号肽序列曰用
责则燥泽蚤贼藻渊澡贼贼责院椅责则燥泽蚤贼藻援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 冤程序分析蛋白的潜
在修饰位点曰蛋白质二级结构分析用 孕则藻凿蚤糟贼孕则燥贼藻蚤灶 工
具渊 澡贼贼责院椅憎憎憎援 责则藻凿蚤糟贼责则燥贼藻蚤灶援 燥则早 辕 冤和 杂韵孕酝粤渊澡贼贼责院
椅灶责泽葬鄄责遭蚤造援 蚤遭糟责援 枣则 辕 糟早蚤鄄遭蚤灶 辕 灶责泽葬赃葬怎贼燥皂葬贼援 责造钥 责葬早藻 越
灶责泽葬赃泽 燥责皂葬援 澡贼皂造冤袁采用 孕则燥贼杂糟葬造藻 程序渊澡贼贼责院椅憎藻遭援
藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 糟早蚤鄄遭蚤灶 辕 责则燥贼泽糟葬造藻 辕 责则燥贼泽糟葬造藻援 责造冤进行疏水性
分析曰宰韵蕴云 孕杂韵砸栽渊澡贼贼责院椅憎燥造枣责泽 燥则贼援 燥则早 辕 冤和在线工
具 孕杂韵砸栽渊澡贼贼责院椅责泽燥则贼援 澡早糟援 躁责 辕 枣燥则皂援 澡贼皂造冤进行蛋白亚
细胞定位预测曰蛋白质结构域分析用 陨灶贼藻则孕则燥 工具
渊澡贼贼责院椅 憎憎憎援 藻遭蚤援 葬糟援 怎噪 辕 蚤灶贼藻则责则燥 冤袁三维结构预测
渊澡贼贼责院椅泽憎蚤泽泽皂燥凿藻造援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 冤袁利用 阅晕粤酝粤晕 缘援 园
和 悦造怎泽贼葬造载 员援 愿猿 进行不同物种间同源基因的氨基酸
序列比对袁并结合 酝耘郧粤 缘援 园 软件构建系统进化树遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 差异筛选消减 糟阅晕粤文库与阳性克隆
对构建的 糟阅晕粤文库进行差异筛选袁双久红库渊杂
库冤得到 圆源缘 个阳性克隆袁川中岛白桃库渊悦 库冤得到
员怨怨 个阳性克隆遥 去掉低质量序列渊 约 员园园遭责冤和重复
序列后袁 杂 库与 悦 库中分别得到 圆园员 条和 员圆愿 条
哉灶蚤耘杂栽泽遥 利用 月蕴粤杂栽曾 辕 月蕴粤杂栽灶在 晕悦月陨 上进行同源
序列比对袁注释这些 哉灶蚤耘杂栽泽的生物学功能袁从 杂库中
筛选到了 源 条桃铜锌超氧化物歧化酶相关序列遥
圆援 圆摇 桃铜锌超氧化物歧化酶 孕责悦怎在灶杂韵阅基因的克隆
将从 杂库得到的 源 条桃铜锌超氧化物歧化酶的
糟阅晕粤片段袁通过 遭造葬泽贼 比对和电子克隆后进行在线
悦粤孕猿 序列拼接获得一条长度为 愿园员遭责的片段袁暂命名
为 孕责悦怎在灶杂韵阅渊郧藻灶月葬灶噪 登录号院允载圆员苑苑源猿冤袁其 韵砸云
为 源缘怨遭责袁根据得到序列设计特异引物袁以硬肉桃双久
红果实 糟阅晕粤为材料进行 孕悦砸 扩增袁扩增产物测序结
果与所拼接序列一致渊图 员冤遥 扩增得到了包含整个
韵砸云区的 远远缘遭责的片段袁粤栽郧 起始密码子下游渊 垣 源冤
位为 郧袁符合 运燥扎葬噪 规则渊粤 辕 郧晕晕粤栽郧郧冤袁且该基因起
始密码子 原远 位有终止密码子 栽郧粤袁又通过与其他物
种中该基因序列的比对袁发现该起始密码子是正确的遥
因此确定该基因的 韵砸云 编码一个由 员缘圆 个氨基酸残
基组成的蛋白质 渊图 圆 冤遥 用 晕悦月陨 的 悦燥灶泽藻则增藻凿
阅燥皂葬蚤灶泽 程序预测该蛋白的保守区域袁 发现桃
孕责悦怎在灶杂韵阅基因编码的氨基酸序列属于 悦怎鄄在灶 超氧
园员源
摇 源 期 桃果实铜锌超氧化物歧化酶基因 孕责悦怎在灶杂韵阅的克隆与分析
摇 摇 摇 摇 摇
图 员摇 孕责悦怎在灶杂韵阅基因的 孕悦砸扩增片段
云蚤早援 员摇 孕责悦怎在灶杂韵阅 早藻灶藻 枣则葬早皂藻灶贼 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭赠 孕悦砸
员 和 圆院 孕责悦怎在灶杂韵阅基因 孕悦砸扩增的结果
酝院 标准分子量 酝葬则噪藻则 渊阅蕴圆园园园冤
员 葬灶凿 圆 院 孕悦砸鄄葬皂责造蚤枣蚤藻凿 孕责悦怎在灶杂韵阅
早藻灶藻 枣则燥皂 责藻葬糟澡摇 酝院 阅晕粤 蕴葬凿凿藻则 渊阅蕴圆园园园冤
图 圆摇 桃 孕责悦怎在灶杂韵阅基因的 糟阅晕粤序列及 韵砸云氨基酸序列
云蚤早援 圆摇 糟阅晕粤 葬灶凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 糟阅晕粤
双下划线表示起始密码子和终止密码子袁单下划线表示预测蛋白的特征信号序列曰
绎表示二硫键形成位点曰鄢 表示翻译终止
阅燥怎遭造藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻 凿藻灶燥贼藻泽贼澡藻 蚤灶蚤贼蚤葬贼蚤燥灶 糟燥凿燥灶 葬灶凿 贼澡藻 贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 糟燥凿燥灶援 杂蚤灶早造藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻 凿藻灶燥贼藻泽 泽蚤早灶葬贼怎则藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽援
栽澡藻 泽贼葬则 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 凿蚤泽怎造枣蚤凿藻 遭燥灶凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻援 栽澡藻 葬泽贼藻则蚤泽噪 凿藻灶燥贼藻泽 贼澡藻 贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶 贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 葬灶凿 早则葬赠 糟燥造燥则 凿藻灶燥贼藻泽 贼澡藻 责则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿
化物氧化酶超家族渊图 猿冤袁具有典型的 悦怎圆 垣和 在灶圆 垣结
合位点遥
圆援 猿摇 桃 孕责悦怎在灶杂韵阅基因序列的同源性分析
将推断的桃 孕责悦怎在灶杂韵阅 基因编码的氨基酸序列
在 郧藻灶月葬灶噪上进行 月造葬泽贼责检索后袁发现桃 孕责悦怎在灶杂韵阅
与其他植物的同源序列高度相似渊图 源冤袁其中与小金
海棠渊酝葬造怎泽 曾蚤葬燥躁蚤灶藻灶泽蚤泽冤的同源基因相似性最高为 怨员
豫 袁与 拟 南 芥 的 相 似 性 为 愿苑豫 袁 与 荔 枝 渊 蕴蚤糟澡蚤
糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤尧龙眼渊阅蚤皂燥糟葬则责怎泽 造燥灶早葬灶冤尧马铃薯渊杂燥造葬灶怎皂
贼怎遭藻则燥泽怎皂 蕴援 冤等同源序列相似性也都在 愿猿豫以上遥 用
酝藻早葬缘 的邻近相接法渊晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早冤对不同物种的
悦怎在灶杂韵阅氨基酸序列进行比对分析袁构建进化树渊图
缘冤遥 分析结果显示袁桃 孕责悦怎在灶杂韵阅 与小金海棠 杂燥凿圆
亲缘关系最近袁其进化分歧时间较早袁与拟南芥
渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼则蚤枣燥造蚤葬贼藻冤尧萝卜渊砸葬责澡葬灶怎泽 泽葬贼蚤增怎泽冤尧荔枝尧
龙眼等亲缘关系较远遥
员员源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 猿摇 桃铜锌超氧化物歧化酶蛋白 孕责悦怎在灶杂韵阅保守域分析
云蚤早援 猿摇 孕怎贼葬贼蚤增藻 糟燥灶泽藻则增藻凿 凿燥皂葬蚤灶泽 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅
图 源摇 孕责悦怎在灶杂韵阅所推导的氨基酸序列与其他物种相似蛋白的多序列比对
云蚤早援 源摇 酝怎造贼蚤责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 葬灶凿 澡燥皂燥造燥早燥怎泽 责则燥贼藻蚤灶泽 枣则燥皂 燥贼澡藻则 泽责藻糟蚤藻泽
星号标记二硫键形成位点
栽澡藻 泽贼葬则蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 凿蚤泽怎造枣蚤凿藻 遭燥灶凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻
圆员源
摇 源 期 桃果实铜锌超氧化物歧化酶基因 孕责悦怎在灶杂韵阅的克隆与分析
图 缘摇 孕责悦怎在灶杂韵阅与其他植物
悦怎在灶杂韵阅蛋白基因的系统进化树
云蚤早援 缘摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣
孕责悦怎在灶杂韵阅 葬灶凿 燥贼澡藻则 责造葬灶贼 悦怎在灶杂韵阅泽
基于 晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早 方法构建袁酝耘郧粤缘曰各节点处数字
表示自引值袁重复 员 园园园 次
栽澡藻 贼则藻藻 憎葬泽 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 遭赠 贼澡藻晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早 皂藻贼澡燥凿袁 酝耘郧粤缘援
栽澡藻 灶怎皂遭藻则泽 葬贼 藻葬糟澡 灶燥凿藻 则藻责则藻泽藻灶贼藻凿 贼澡藻 遭燥燥贼泽贼则葬责 增葬造怎藻袁 憎蚤贼澡 员园园园
摇 摇 摇 则藻责造蚤糟葬贼藻泽
图 远摇 孕责悦怎在灶杂韵阅 的疏水性与亲水性分析预测
云蚤早援 远摇 孕则藻凿蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 澡赠凿则燥责澡燥遭蚤糟蚤贼赠 辕 澡赠凿则燥责澡蚤造蚤糟蚤贼赠 枣燥则 孕责悦怎在灶杂韵阅
圆援 源摇 桃 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白理化性质预测
用 孕则燥贼责葬则葬皂预测桃果实 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白的理论
等电点为 缘援 远园袁相对分子量为 员缘援 猿愿园 噪阅葬袁蛋白分子
式为 悦远远猿匀员园源怨晕员怨苑韵圆员怨杂猿袁总原子数为 圆员猿员曰蛋白氨基酸
组成为 粤造葬渊怨袁缘援 怨 豫 冤袁粤则早渊猿袁圆援 园 豫 冤袁粤泽灶渊苑袁源援 远
豫 冤袁粤泽责 渊员员袁苑援 圆 豫 冤袁悦赠泽 渊圆袁员援 猿 豫 冤袁郧造灶 渊源袁圆援 远
豫 冤袁郧造怎渊远袁猿援 怨 豫 冤袁郧造赠 渊圆怨袁员怨援 员 豫 冤袁匀蚤泽 渊怨袁缘援 怨
豫 冤袁陨造藻渊员员袁苑援 圆 豫 冤袁蕴藻怎渊怨袁缘援 怨 豫 冤袁蕴赠泽渊苑袁源援 远 豫 冤袁
酝藻贼渊员袁园援 苑 豫 冤袁孕澡藻渊缘袁猿援 猿 豫 冤袁孕则燥渊愿袁缘援 猿 豫 冤袁杂藻则
渊愿袁缘援 猿 豫 冤袁栽澡则渊员猿袁愿援 远 豫 冤袁灾葬造渊员园袁远援 远 豫 冤遥 负电
荷残基渊粤杂孕 垣 郧造怎冤总数为 员苑袁正电荷残基 渊粤则早 垣
蕴赠泽冤总数为 员园遥 该蛋白 晕末端为酝藻贼袁半衰期为 猿园 澡袁
不稳定系数为 员远援 员猿袁是稳定蛋白遥 脂溶指数为 苑远援
猿圆袁总平均疏水性为 原园援 圆怨源袁推测为亲水性脂溶蛋白遥
圆援 缘摇 桃 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白跨膜结构域和信号肽预测
分析
利用 栽酝匀酝酝 杂藻则增藻则 增援 圆援 园 和 栽酝责则藻凿 杂藻则增藻则软件
对桃 孕责悦怎在灶杂韵阅进行蛋白质跨膜结构域预测袁结果均
表明该蛋白不存在跨膜结构域袁整条肽链都位于细胞
膜外遥 采用 杂蚤早灶葬造孕猿援 园 程序选择神经网络 渊 灶藻怎则葬造
灶藻贼憎燥则噪泽袁 晕晕 冤 法和隐马 氏 模 型 渊 澡蚤凿凿藻灶 酝葬则噪燥增
皂燥凿藻造泽袁 匀酝酝冤法对桃 孕责悦怎在灶杂韵阅 蛋白的 晕 端的前
苑园 个氨基酸序列进行信号肽预测遥 结果表明桃
孕责悦怎在灶杂韵阅为非分泌型蛋白渊晕燥灶 泽藻糟则藻贼燥则赠 责则燥贼藻蚤灶冤袁
其在细胞质中合成后袁 不进行蛋白质的外运袁推测它
定位于胞质中遥 存在信号肽的可能性渊杂蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻
责则燥遭葬遭蚤造蚤贼赠冤为 园援 园源圆袁可能的酶切位点在 员远 号到 员苑 号
氨基酸之间遥
圆援 远摇 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白疏水性 辕亲水性预测和分析
利用 耘曾孕粤杂赠 孕则燥贼藻燥皂蚤糟泽 杂藻则增藻则的 孕则燥贼杂糟葬造藻程序分
析该蛋白的亲水性和疏水性袁基于氨基酸分值越低亲
水性越强和分值越高疏水性越强的规律袁分析结果
渊图 远冤显示 孕责悦怎在灶杂韵阅 中亲水性区域占到 远苑援 源 豫 袁
而疏水性区域仅占 猿圆援 远 豫 袁两端为疏水区遥 多肽链第
苑圆位 粤造葬具有最低的分值 原 圆援 猿猿猿 和最强的亲水性曰
猿员源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
第 员员源 位 粤则早 具有最高的分值 员援 怨远苑 和最强的疏水
性遥 由此看来袁桃 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白应该是亲水性蛋白
渊匀赠凿则燥责葬贼澡蚤糟蚤贼赠冤袁又因前面理化性质预测结果中也提
到该蛋白为亲水性质溶蛋白袁故推测该蛋白为亲水性
蛋白遥
圆援 苑摇 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白潜在修饰位点分析
孕砸韵杂陨栽耘 皂燥贼蚤枣 泽藻葬则糟澡 蛋白位点分析显示袁发现
孕责悦怎在灶杂韵阅中含有 悦怎在灶杂韵阅 蛋白的特征信号序列 员
和 圆渊表 圆冤袁该特征序列在图 圆 中已标注遥
图 苑摇 孕责悦怎在灶杂韵阅二级结构分析
云蚤早援 苑摇 孕则藻凿蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻泽 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅
长竖线区院 琢 原螺旋曰 中竖线区院 延伸连曰 次中竖线区院 茁 原转角曰 短竖线区院 无规则卷曲
蕴燥灶早 增藻则贼蚤糟葬造 造蚤灶藻 葬则藻葬院 粤造责澡葬 澡藻造蚤曾曰 增藻则贼蚤糟葬造 葬则藻葬院 藻曾贼藻灶凿藻凿 泽贼则葬灶凿曰 泽澡燥则贼藻则 增藻则贼蚤糟葬造 葬则藻葬院 遭藻贼葬 贼怎则灶曰 责怎则责造藻 泽澡燥则贼 增藻则贼蚤糟葬造 造蚤灶藻 葬则藻葬院 则葬灶凿燥皂 糟燥蚤造
表 圆摇 蛋白潜在修饰位点的预测结果
栽葬遭造藻 圆摇 孕则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 责燥贼藻灶贼蚤葬造 皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻 蚤灶 贼澡藻 孕责悦怎在灶杂韵阅 责则燥贼藻蚤灶
修饰位点
酝燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽
保守序列
悦燥灶泽藻则增藻凿 泽藻择怎藻灶糟藻
氨基酸位置
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 责燥泽蚤贼蚤燥灶
氨基酸序列
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻
悦燥责责藻则 辕 在蚤灶糟 泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 泽蚤早灶葬贼怎则藻 员 咱郧粤暂 原 咱 陨酝云粤栽暂 原 匀 原 咱蕴陨灾云暂 原 匀 原 喳 杂札 原 曾 原咱郧孕暂 原 咱杂阅郧暂 原 曾 原 咱杂栽粤郧阅耘暂 源猿 原 缘猿 郧云匀灾匀耘云郧阅栽栽
悦燥责责藻则 辕 在蚤灶糟 泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 泽蚤早灶葬贼怎则藻 圆 郧 原 咱 郧晕匀阅 暂 原 咱 杂郧粤 暂 原 咱 郧砸 暂 原 曾鄄砸鄄曾 原咱杂郧粤宰砸灾暂 原 悦鄄曾渊圆冤 原 咱陨灾暂 员猿苑 原 员源愿 郧晕粤郧郧砸栽粤悦郧陨陨
圆援 愿摇 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白质亚细胞定位
为了更精细地确定该酶的定位信息袁用在线工具
孕杂韵砸栽进行分析袁结果表明该蛋白定位于细胞质尧微
体尧溶酶体和线粒体基质的置信度分别为 园援 源缘园尧园援
猿远缘尧园援 圆远远 和 园援 员园园遥 用 酝蚤贼燥孕则燥贼陨陨鄄增员援 员园员 分析该蛋
白没有切割位点袁且在线粒体的可信度为 园援 园缘远圆遥 以
上结果表明该蛋白主要存在于细胞质袁故推测该蛋白
属于胞质 悦怎在灶杂韵阅蛋白遥
圆援 怨摇 桃 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白质的高级结构预测
圆援 怨援 员摇 蛋白质二级结构预测摇 用 杂韵孕酝粤 结构预测程
序咱员圆暂预测桃 悦怎在灶杂韵阅 蛋白的二级结构遥 分析表明
孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白的二级结构中包括 圆援 远猿 豫的 琢 原螺旋
渊粤造责澡葬 澡藻造蚤曾冤尧猿远援 员愿 豫的延伸链渊耘曾贼藻灶凿藻凿 泽贼则葬灶凿冤尧愿援
缘缘 豫的 茁 原转角渊月藻贼葬 贼怎则灶冤和 缘圆援 远猿 豫的无规则卷曲
渊砸葬灶凿燥皂 糟燥蚤造冤遥 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白的二级结构中无规则
卷曲和片层结构占大多数袁预测形成 琢 原螺旋的氨基酸
很少袁不含形成 茁 原折叠的氨基酸渊图 苑冤遥
圆援 怨援 圆摇 蛋白质三维结构预测摇 跟据同源建模的预测
方法袁应用 杂憎蚤泽泽鄄皂燥凿藻造 构建的 孕责悦怎在灶杂韵阅 蛋白高级
结构模型渊图 愿 原 粤冤袁该蛋白模型是基于 砸阅灾 原子结
构 员栽韵缘 的 粤链模型进行构建的袁两者序列一致性达
到 远圆援 远苑豫 遥 预测结果表明 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白质包含 猿
个小的 琢 螺旋袁愿 个 茁 折叠片袁员猿 个卷曲和 苑 个转角
结构遥 该蛋白结构的 晕端区主要是 愿 个反向平行的 茁
折叠片构成的 员 个桶状结构袁悦端区主要为 员 个拧成 猿
股 琢 螺旋的松散环结构遥 酶活性中心处于靠近 茁 折
叠片的结构域边缘遥 本文前面曾经提到酶的活性中心
与金属离子结合部位非常保守袁这一点在图 愿 原 月 中
也恰恰得到了证明袁其中 匀蚤泽源缘尧 匀蚤泽源苑尧 匀蚤泽远圆 和
匀蚤泽员员怨 以 悦怎原子为中心形成 员 个活性单位结构袁而
匀蚤泽远圆尧匀蚤泽苑园尧匀蚤泽苑怨 和 粤泽责愿圆 与 在灶原子结合构成另外
一个活性单位结构袁这两个活性单位结构共同构成了
该蛋白的活性中心袁而活性中心主要处于 孕责悦怎在灶杂韵阅
的靠近 悦端的区域遥
圆援 员园摇 桃 孕责悦怎在灶杂韵阅的组织特异性表达分析
如图 怨 所示袁匝孕悦砸表达分析表明袁孕责悦怎在灶杂韵阅 在
两个桃品种相同组织和同一品种不同组织中的表达均
有一定差异遥 孕责悦怎在灶杂韵阅在幼果中的表达量最高袁特
别是双久红幼果中的表达量显著高于其他组织袁其次
是在雌蕊中袁雄蕊与雌蕊表达差异不显著袁在花瓣和叶
片中的表达量相对最低遥
源员源
摇 源 期 桃果实铜锌超氧化物歧化酶基因 孕责悦怎在灶杂韵阅的克隆与分析
图 愿摇 构建的 孕责悦怎在灶杂韵阅亚基与 在灶圆 垣和 悦怎圆 垣结合的 猿阅结构模型
云蚤早援 愿摇 栽澡藻 猿阅 泽贼则怎糟贼怎则藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 葬灶凿 在灶圆 垣 袁 悦怎圆 垣 遭蚤灶凿蚤灶早 泽怎遭怎灶蚤贼 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 遭赠 杂憎蚤泽泽鄄皂燥凿藻造
图 怨摇 桃不同组织 孕责悦怎在灶杂韵阅 砸栽鄄孕悦砸表达分析
云蚤早援 怨摇 砸栽鄄孕悦砸 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 蚤灶 增葬则蚤燥怎泽 贼蚤泽泽怎藻泽 蚤灶 责藻葬糟澡
圆援 员员摇 果实不同发育时期 孕责悦怎在灶杂韵阅 匝孕悦砸表达分
析
在成熟前后共 源园凿 的果实发育过程中袁两个桃品
种的 孕责悦怎在灶杂韵阅的表达量均有所变化并存在较大差
异渊图 员园冤袁其中袁双久红中 孕责悦怎在灶杂韵阅的表达量变化
波动偏大袁成熟前 圆园凿开始逐渐下降袁并一直维持在相
对较低的表达水平袁而成熟 缘凿 后基因表达量迅速升
高袁在成熟后 员园凿最高袁然后开始降低但一直维持在较
高水平遥 川中岛白桃中该基因表达水平的变化与双久
红基本一致袁但整体水平低于双久红遥 孕责悦怎在灶杂韵阅 在
两品种桃果实成熟后 员园 耀 圆园凿 维持较高水平的表达袁
说明其可能参与维持果实质地和抗氧化过程遥
猿摇 讨论
本研究从硬肉桃芽变体双久红果实的 杂杂匀 文库
中筛选获得了 悦怎在灶杂韵阅基因的 糟阅晕粤片段袁克隆了桃
果实的 杂韵阅 基因渊孕责悦怎在灶杂韵阅冤编码区全长 糟阅晕粤 序
列遥 同源性比较结果表明袁孕责悦怎在灶杂韵阅 与 郧藻灶月葬灶噪 中
注册的 杂韵阅基因序列的同源性均在 愿猿豫以上遥 通过
缘员源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 员园摇 花后不同时长 孕责悦怎在灶杂韵阅 砸栽鄄孕悦砸表达分析
云蚤早援 员园摇 砸栽鄄孕悦砸 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕责悦怎在灶杂韵阅 蚤灶 责藻葬糟澡 枣则怎蚤贼泽 葬枣贼藻则 遭造燥燥皂蚤灶早
生物信息学分析更进一步明确了该基因的相关特征和
信息袁包括 孕责悦怎在灶杂韵阅蛋白的理化性质尧亚细胞定位尧
跨膜区与信号肽尧亲水性和疏水性以及二尧三级结构
等袁孕责悦怎在灶杂韵阅有较多的保守位点袁蛋白质分子上与
悦怎圆 垣和 在灶圆 垣两金属离子相结合的位点十分保守曰除此
之外袁缘远 位和 员源缘 位的半胱氨酸组成一个二硫键袁在
所有报道的 悦怎在灶杂韵阅 序列中也是非常保守的袁例如
莲咱员猿暂和银杏咱员源暂 遥 悦怎圆 垣和 在灶圆 垣之间通过共同连接的组
氨酸 匀蚤泽远圆 形成野咪唑桥冶结构遥
大量研究表明袁果实成熟衰老与活性氧代谢有关遥
韵 原圆 裔窑在果实后熟衰老时明显增加袁可能是调节果实
成熟衰老的一种重要的自由基咱员缘 原 员远暂 遥 杂韵阅 酶是生物
体内专一清除 韵 原圆 裔窑的酶袁具有减轻膜脂过氧化的
作用遥 随着果实衰老袁活性氧积累诱导 杂韵阅酶活性增
高袁但由于自由基数量大大超出了 杂韵阅酶等自由基清
除剂的清除能力袁最终导致果实衰老咱员苑暂 遥 果实发育过
程中袁杂韵阅酶活性的提高是相应于 韵 原圆 裔窑含量增加
的应急解毒措施袁是使细胞免受毒害的调节反应袁通过
提高 杂韵阅活性来增强果实对不良环境的抵抗力和适
应性遥 油桃中 杂韵阅 酶活性的变化说明袁果实衰老时袁
杂韵阅 酶活性的下降袁意味着果实清除活性氧自由基
渊韵 原圆 裔窑冤的能力下降袁歧化产物 匀圆韵圆 累积咱员愿暂 遥
对桃不同组织中 孕责悦怎在灶杂韵阅 相对表达量的研究
发现袁在两品种桃中袁在幼果中的表达量最高袁其次是
在雌蕊中袁雌蕊中表达量较高可能与将来发育成果实
有关遥 本课题组前期刘炳辉等咱苑暂报道的芽变硬肉桃
果实 杂韵阅酶活性在果实成熟后急剧上升袁持续一段时
间后下降袁但在此期间一直高于对照品种川中岛白桃
的 杂韵阅酶活性袁这与本研究中 砸栽鄄孕悦砸 的结果基本吻
合曰除此之外袁本研究中双久红中 孕责悦怎在灶杂韵阅 的相对
表达量相对于川中岛白桃一直处在较高水平袁说明高
水平的 孕责悦怎在灶杂韵阅 基因表达和 杂韵阅酶活性能够较好
的清除氧自由基袁这可能是双久红品种果实成熟后能
维持较大硬度的一个重要原因遥 悦葬皂藻躁燥 等咱员怨暂以未成
熟和成熟后的桃为材料做过抗氧化方面的研究袁结果
表明成熟后的桃 杂韵阅 酶活性高于未成熟桃袁其中
悦怎在灶杂韵阅酶有的同工酶活性在桃中变化较大袁特别是
在成熟桃中有一种同工酶消失袁另外两种同工酶活性
较高且与成熟呈正相关袁但没有说明成熟后的相关情
况袁这与本文对照品种川中岛白桃的结果一致遥 两品
种桃成熟后 员园 耀 圆园 凿 表达量依然均较高袁说明
孕责悦怎在灶杂韵阅可能参与维持果实质地和抗氧化清除自
由基的过程遥 本文研究了 孕责悦怎在灶杂韵阅 基因在桃上的
组织特异性表达以及果实成熟前后 圆园 凿 整个过程中
的表达情况袁虽然其他物种已有该基因的相关报道袁但
本研究是在桃上发现了该基因袁同时由于该基因是在
川中岛白桃的硬肉芽变双久红 杂杂匀 文库中发现袁故认
为该基因与维持双久红桃果实的质地稳定有关袁现阶
段在桃上对该基因研究较少袁针对该基因在果实成熟
过程中的具体作用及作用的相关机理有待于进一步研
究遥
参考文献院
咱 员 暂摇 月燥憎造藻则 悦袁 增葬灶 悦葬皂责 宰袁 增葬灶 酝燥灶贼葬早怎 酝袁 陨灶扎佴 阅袁 粤泽葬凿葬 运援
杂怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 蚤灶 责造葬灶贼泽 咱 允 暂 援 悦则蚤贼蚤糟葬造 砸藻增蚤藻憎泽 蚤灶 孕造葬灶贼
杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 员怨怨源袁 员猿院 员怨怨 原 圆员愿
咱 圆 暂摇 郑荣梁援 生物学自由基咱酝暂援 北京院 高等教育出版社袁 员怨怨圆院 员
原 圆
咱 猿 暂摇 酝糟运藻则泽蚤藻 月 阅袁 悦澡藻灶 再袁 凿藻 月藻怎泽 酝袁 月燥憎造藻赠 杂 砸袁 月燥憎造藻则 悦袁 陨灶扎佴
阅袁 阅 鸳匀葬造造怎蚤灶 运袁 月燥贼贼藻则皂葬灶 允援 杂怎责藻则燥曾蚤凿藻 凿蚤泽皂怎贼葬泽藻 藻灶澡葬灶糟藻泽
贼燥造藻则葬灶糟藻 燥枣 枣则藻藻扎蚤灶早 泽贼则藻泽泽 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 葬造枣葬造枣葬 渊酝藻凿蚤糟葬早燥 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤
远员源
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊源冤院园源园愿 耀 园源员苑
咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 员怨怨猿袁 员园猿院 员员缘缘 原 员员远猿
咱 源 暂 摇 酝蚤贼贼造藻则 砸袁 在蚤造蚤灶泽噪葬泽 月 粤援 砸藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 责藻葬 糟赠贼燥泽燥造蚤糟 葬泽糟燥则遭葬贼藻
责藻则燥曾蚤凿葬泽藻 葬灶凿 燥贼澡藻则 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 藻灶扎赠皂藻泽 凿怎则蚤灶早 贼澡藻 责则燥早则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
凿则燥怎早澡贼 泽贼则藻泽泽 葬灶凿 枣燥造造燥憎蚤灶早 则藻糟燥增藻则赠 枣则燥皂 凿则燥怎早澡贼 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼
允燥怎则灶葬造袁 员怨怨源袁 缘院 猿怨苑 原 源园缘
咱 缘 暂 摇 栽葬灶葬噪葬 再袁 匀蚤遭蚤灶燥 栽袁 匀葬赠葬泽澡蚤 再援 杂葬造贼 贼燥造藻则葬灶糟藻 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻
燥增藻则藻曾责则藻泽泽蚤灶早 赠藻葬泽贼 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 酝灶 原 杂韵阅 蚤灶 糟澡造燥则燥责造葬泽贼泽 咱 允暂 援
孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 员怨怨怨袁 员源愿院 员猿员 原 员猿愿
咱 远 暂 摇 云燥赠藻则 悦 匀袁 阅藻泽糟燥怎则增蚤藻则藻泽 孕袁 运怎灶藻则贼 运 允援 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 燥曾赠早藻灶
则葬凿蚤糟葬造泽院 葬灶 蚤皂责燥则贼葬灶贼 凿藻枣藻灶泽藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 泽贼怎凿蚤藻凿 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
责造葬灶贼泽 咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼袁 员怨怨源袁 员苑渊缘冤院 缘园苑 原 缘圆猿
咱 苑 暂摇 刘炳辉袁董晓颖袁李志军袁李培环援 硬肉桃果实成熟前后几种与
果实软化相关的生理指标的变化咱 允暂 援 植物生理学通讯袁 圆园园愿袁
源源渊缘冤院 愿愿苑 原 愿怨园
咱 愿 暂摇 关军锋袁管雪强袁高华君袁束怀瑞援 成熟度和采后处理对草莓品
质尧杂韵阅 活性和蛋白质含量的影响咱 允暂 援 果树科学袁 员怨怨苑袁 员源
渊员冤院 圆源 原 圆苑
咱 怨 暂摇 陈蔚辉袁 张福平援 番荔枝采后贮藏期间的生理变化咱允暂 援 植物生
理学通迅袁 圆园园园袁 猿远渊圆冤院 员员源 原 员员愿
咱员园暂摇 杨剑平袁 韩涛等袁李丽萍袁 陈小宁援 热处理对桃贮藏期间膜脂过
氧化作用的影响咱允暂 援 园艺学报袁 员怨怨远袁 圆猿渊员冤院 愿怨 原 怨园
咱员员暂摇 刘 莉袁 段艳欣袁 樊连梅袁 刘更森袁 原永兵援 红肉桃果实总 砸晕粤
提取方法的研究咱 允暂 援 青岛农业大学学报院自然科学版袁 圆园员园袁
圆苑渊猿冤院 圆园缘 原 圆园愿
咱员圆暂摇 郧藻燥怎则躁燥灶 悦袁 阅藻造佴葬早藻 郧袁 杂韵孕酝粤院 杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 蚤皂责则燥增藻皂藻灶贼 蚤灶
责则燥贼藻蚤灶 泽藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 遭赠 糟燥灶泽藻灶泽怎泽 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 枣则燥皂
皂怎造贼蚤责造藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼泽援 悦葬遭蚤燥泽咱酝暂援 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽袁 员怨怨缘袁 员员院 远愿员 原
远愿源
咱员猿暂摇 朱虹琳袁 董 臣袁 刁 英袁 李国林袁 周明全袁 胡中立援 莲铜锌超氧
化物歧化酶 糟阅晕粤的克隆和序列分析咱允暂 援 武汉大学学报院理学
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