全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园愿远猿 耀 园愿苑园允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园员鄄员猿摇 接受日期院圆园员员鄄园猿鄄猿园
基金项目院国家自然科学基金渊猿园愿苑员源远怨冤袁中央高校基本科研业务费专项资金渊圆园园怨匝晕粤远园圆远冤
作者简介院吴丽丽渊员怨愿远鄄冤袁女袁安徽阜阳人袁硕士袁主要从事水稻分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院憎怎造蚤造蚤远员远岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院郭万里渊员怨苑苑鄄冤袁男袁河南驻马店人袁讲师袁主要从事植物分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院憎造早怎燥岳 扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
陈坤明渊员怨苑员鄄冤袁男袁甘肃天水人袁教授袁主要从事植物生理与分子研究遥 栽藻造院园圆怨鄄愿苑园愿员远圆苑曰耘鄄皂葬蚤造院噪怎灶皂蚤灶早糟澡藻灶岳 灶憎泽怎葬枣援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园愿远猿鄄园愿
水稻 韵杂晕粤阅运猿基因的克隆及其遗传转化
吴丽丽员 摇 周丛义圆 摇 高永生员 摇 丛悦玺圆 摇 陈坤明猿 摇 郭万里圆
渊员郾 中国计量学院生命科学学院袁 浙江 杭州摇 猿员园园员愿曰 圆郾 浙江大学农业与生物技术学院作物科学研究所袁 浙江 杭州摇 猿员园园圆怨曰
猿郾 西北农林科技大学生命科学学院袁 陕西 杨凌摇 苑员圆员园园冤
摘摇 要院从韩国浦项科技大学渊孕燥澡葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁孕韵杂栽耘悦匀冤水稻 栽鄄阅晕粤插入突
变体库 孕云郧 赃猿粤鄄园源愿苑员郾 砸 株系中筛选到一个 晕粤阅运猿 渊晕粤阅 运蚤灶葬泽藻 猿冤激酶渊 蕴韵悦赃韵泽园缘早猿圆圆员园冤基因
韵杂晕粤阅运猿 表达缺失的突变杂合体遥 与其野生型 阅燥灶早躁蚤灶早 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 增葬则援 躁葬责燥灶蚤糟葬 糟增 阅燥灶早躁蚤灶早冤比
较袁该 韵杂晕粤阅运猿 基因突变杂合体表现出明显的植株矮小尧花发育异常以及不育等特点遥 为明确水稻
晕粤阅运猿 激酶的功能袁我们利用 砸栽鄄孕悦砸的方法克隆了水稻渊阅燥灶早躁蚤灶早冤 韵杂晕粤阅运猿 基因的编码区渊悦阅杂冤袁
将 韵杂晕粤阅运猿 导入表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园员院院猿缘杂院院郧云孕渊 责悦郧冤中袁构建了 韵杂晕粤阅运猿 和绿色荧光蛋白
渊郧云孕冤融合表达载体 责悦粤酝月陨粤员猿园员院院猿缘杂院院 晕粤阅运猿院院郧云孕渊责悦晕郧冤袁该融合表达载体能够在拟南芥叶中
表达袁亚细胞组织定位分析表明袁韵杂晕粤阅运猿 在拟南芥细胞质中表达袁表明该酶是细胞质定位的酶类遥 然
后袁利用农杆菌介导的方法侵染水稻愈伤组织袁获得了 圆源 株独立的转基因水稻植株遥 经 孕悦砸 初步鉴
定袁目的片段 韵杂晕粤阅运猿 已经成功整合到水稻基因组中袁为进一步深入研究水稻 韵杂晕粤阅运猿 的功能与作
用机制奠定了基础遥
关键词院水稻曰晕粤阅运猿曰郧云孕曰遗传转化
悦蕴韵晕陨晕郧 粤晕阅 郧耘晕耘栽陨悦 栽砸粤晕杂云韵砸酝粤栽陨韵晕 韵云 韵杂晕粤阅运猿 郧耘晕耘 陨晕 砸陨悦耘
宰哉 蕴蚤鄄造蚤员 摇 在匀韵哉 悦燥灶早鄄赠蚤圆 摇 郧粤韵 再燥灶早鄄泽澡藻灶早员 摇 悦韵晕郧 再怎藻鄄曾蚤圆 摇 悦匀耘晕 运怎灶鄄皂蚤灶早猿 摇 郧哉韵 宰葬灶鄄造蚤圆
渊员郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 悦澡蚤灶葬 允蚤造蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁匀葬灶早扎澡燥怎袁在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园员愿曰
圆郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园圆怨曰
猿郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻袁 晕燥则贼澡 宰藻泽贼 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁再葬灶早造蚤灶早袁 杂澡葬葬灶曾蚤摇 苑员圆员园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 澡藻贼藻则燥扎赠早燥贼藻 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 早藻灶藻 噪灶燥糟噪燥怎贼 皂怎贼葬灶贼 燥枣 则蚤糟藻 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 栽鄄阅晕粤 蚤灶泽藻则贼蚤燥灶 皂怎贼葬灶贼 造蚤灶藻
孕云郧赃 猿粤鄄园源愿苑员郾 砸袁 憎澡蚤糟澡 憎葬泽 燥则凿藻则藻凿 枣则燥皂 孕燥澡葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠 渊 孕韵杂栽耘悦匀冤援 栽澡藻
澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽 皂怎贼葬灶贼 憎蚤贼澡 韵杂晕粤阅运猿 早藻灶藻 噪灶燥糟噪燥怎贼 澡葬泽 凿蚤泽贼蚤灶糟贼 责澡藻灶燥贼赠责藻泽 枣则燥皂 憎蚤造凿 贼赠责藻 阅燥灶早躁蚤灶早 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 增葬则援
躁葬责燥灶蚤糟葬 糟增 阅燥灶早躁蚤灶早冤袁 泽怎糟澡 葬泽 泽皂葬造造 责造葬灶贼泽袁 葬遭灶燥则皂葬造 枣造燥憎藻则蚤灶早 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼袁 泽贼藻则蚤造藻 泽藻藻凿泽袁 葬灶凿 泽燥 燥灶援 栽燥 早藻贼 枣怎则贼澡藻则
蚤灶泽蚤早澡贼 燥灶 贼澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 渊晕粤阅 运蚤灶葬泽藻 猿冤袁 贼澡藻 悦阅杂 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 早藻灶藻 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 枣则燥皂 则蚤糟藻 渊糟增
阅燥灶早躁蚤灶早冤 遭赠 皂藻葬灶泽 燥枣 砸栽鄄孕悦砸援 云怎泽蚤燥灶 藻曾责则藻泽泽蚤灶早 增藻糟贼燥则 责悦粤酝月陨粤员猿园员院院 猿缘杂院院 晕粤阅运猿院院 郧云孕 渊 责悦晕郧 冤 憎葬泽
糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 早藻灶藻 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 枣怎泽蚤灶早 蚤灶 枣则葬早皂藻灶贼 憎蚤贼澡 贼澡藻 责悦粤酝月陨粤员猿园员院院猿缘杂院院郧云孕 渊 责悦郧冤援 粤 贼则葬灶泽蚤藻灶贼
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 贼藻泽贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 增藻糟贼燥则 责悦晕郧 糟燥怎造凿 遭藻 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 葬灶凿 韵杂晕粤阅运猿 蚤泽 葬 糟赠贼燥责造葬泽皂蚤糟
藻灶扎赠皂藻 葬糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻 泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶援 粤贼 贼澡藻 泽葬皂藻 贼蚤皂藻袁 责悦晕郧 憎葬泽 蚤灶贼则燥凿怎糟藻凿 蚤灶贼燥 则蚤糟藻 糟葬造造怎泽 憎蚤贼澡
葬早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 皂藻贼澡燥凿 葬灶凿 圆源 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 责则燥增蚤凿藻凿 葬 早燥燥凿 责则藻枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶 枣燥则
枣怎则贼澡藻则 泽贼怎凿蚤藻泽 贼燥 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿 贼澡藻 枣怎灶糟贼蚤燥灶 葬灶凿 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 蚤灶 泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽藻 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 则蚤糟藻援
猿远愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
运藻赠 憎燥则凿泽院则蚤糟藻 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤曰 晕粤阅运猿曰 郧云孕曰 早藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶
摇 摇 晕粤阅激酶渊晕粤阅 噪蚤灶葬泽藻袁 晕粤阅运冤是生物体内普遍
存在的一种酶袁是唯一催化 晕粤阅 和 粤栽孕 从头合成
晕粤阅孕的酶袁在 晕粤阅孕 依赖的合成代谢途径中起着重
要的调控作用咱员 耀 缘暂 遥 晕粤阅渊孕冤和 晕粤阅渊孕冤匀 是细胞代
谢途径中多种酶的辅酶渊如氧化还原酶类冤遥 大部分
氧化还原酶利用 晕粤阅渊匀冤和 晕粤阅孕 渊 匀 冤产生 匀圆韵圆
和 韵 原圆 袁从而影响细胞的氧化代谢速率和途径咱远 耀 愿暂 遥晕粤阅运调控 晕粤阅渊匀冤和 晕粤阅孕渊匀冤的相对水平袁因而
在生物体内氧化还原平衡维持尧逆境胁迫响应以及正
常发育调控等生理过程中具有重要作用遥
绿色荧光蛋白渊郧云孕冤是从水母渊粤藻择怎燥则藻葬 增蚤糟贼燥则蚤葬冤
中分离出来的袁可在 猿远园 耀 源园园灶皂 的 哉灾 或者 源源园 耀
缘园园灶皂 的蓝光激发下发射 缘园怨灶皂 的绿色光谱遥 郧云孕
作为基因标记分子能在细胞内稳定存在袁对细胞无毒
害作用袁不需要内外源辅助因子和底物袁已经大量成功
运用于转基因临界评估咱怨 耀 员员暂 遥 郧云孕 和其他基因的融
合表达载体在真核细胞中所表达的融合蛋白袁具有目
的基因和绿色荧光蛋白的双重活性袁因此从 郧云孕 的荧
光强度即能准确反映基因的表达水平袁同时还能对目
的基因进行亚细胞定位分析咱员圆暂 遥
本研究利用韩国浦项科技大学渊孕燥澡葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠
燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁孕韵杂栽耘悦匀冤的水稻 栽鄄阅晕粤
插入 突 变 体 系 孕云郧 赃 猿粤鄄园源愿苑员郾 砸袁 筛 选 得 到 了
韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失的突变杂合子袁在对该突变杂
合体表型特征研究的基础上袁构建了绿色荧光蛋白
渊郧云孕冤与水稻 韵杂晕粤阅运猿 基因两者融合的表达载体
责悦粤酝鄄晕粤阅运猿鄄郧云孕袁通过根癌农杆菌介导转入水稻品
种 阅燥灶早躁蚤灶早袁获得了阳性转基因植株袁并对其在拟南芥
中的表达进行分析和对该基因编码的蛋白进行定位袁
以期为进一步深入研究该基因的功能打下基础遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 材料
供试水稻品种为粳稻品种 阅燥灶早躁蚤灶早 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬
蕴援 增葬则援 躁葬责燥灶蚤糟葬 糟增援 阅燥灶早躁蚤灶早冤袁韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失
栽鄄阅晕粤插入突变体株系为 孕云郧赃猿粤鄄园源愿苑员郾 砸袁均购自
韩国浦项科技大学渊 孕燥澡葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿
栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁孕韵杂栽耘悦匀冤遥 按照 孕韵杂栽耘悦匀 提供的方法
以两引物法鉴定突变体遥 突变体 孕悦砸 鉴定所用的引
物为院左引物 渊 蕴孕冤院缘忆鄄郧粤郧郧郧郧粤栽栽悦悦悦粤悦栽栽栽粤郧悦鄄
猿忆曰右引物渊砸孕冤院缘忆鄄粤悦郧栽悦粤粤粤栽栽悦栽悦悦粤郧郧粤悦 郧鄄猿忆曰
栽鄄阅晕粤 边 界 引 物 渊 月孕 冤院 缘忆鄄粤粤郧悦悦栽郧
粤栽悦粤粤栽栽悦悦粤悦粤郧鄄猿忆遥 组织亚细胞组织定位表达所
用拟南芥为 悦燥造鄄园袁购自美国 杂葬造噪 陨灶泽怎贼蚤贼怎贼藻 郧藻灶燥皂蚤糟
粤灶葬造赠泽蚤泽 蕴葬遭燥则贼燥则赠遥
耘悦韵砸 陨尧载遭葬 陨和 运责灶 陨限制性内切酶尧栽源鄄阅晕粤连
接酶尧酝葬则噪藻则 阅蕴员缘园园园 和 阅蕴圆园园园 购自 栽葬运葬砸葬 公司曰
栽葬择 阅晕粤聚合酶购自上海申能博彩公司曰砸栽鄄孕悦砸 试
剂盒购自 栽韵再韵月韵 公司袁高保真 栽葬择 阅晕粤 聚合酶
运韵阅鄄孕造怎泽 孕悦砸 试剂盒购自 栽韵再韵月韵 公司曰 曾鄄早葬造 和
陨孕栽郧均购自 杂蚤早皂葬 公司曰孕悦砸 凝胶回收试剂盒购自
粤曾赠郧耘晕公司曰抗生素尧粤杂 购自北京鼎国生物技术有
限公司产品曰其余试剂均为国产分析纯遥
责酝阅员怨鄄栽克隆载体为 栽葬运葬砸葬 公司产品曰大肠杆
菌渊 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤冤感受态细胞 栽则葬灶泽缘琢 悦澡藻皂蚤糟葬造造赠
悦燥皂责藻贼藻灶贼 悦藻造造 为北京全式金生物技术有限公司产品曰
根癌农杆菌渊粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽冤 耘匀粤员园缘尧质粒
责载在孕园园愿 和 责悦酝月陨粤员猿园员 均由本实验室保存遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 韵杂晕粤阅运猿 基因 悦阅杂 的克隆 摇 根据 砸蚤糟藻 郧藻鄄
灶燥皂藻公布的水稻序列 蕴韵悦赃韵泽园缘早猿圆圆员园渊晕粤阅运猿冤设
计 晕粤阅运猿鄄杂院 缘忆鄄栽栽悦栽粤郧粤粤郧粤栽粤郧栽栽悦粤粤栽郧郧粤粤栽鄄
悦粤郧粤郧粤郧郧鄄猿忆袁下划线处为 载遭葬 陨 酶切位点曰晕粤阅运猿鄄
粤院 缘忆鄄粤郧郧栽粤悦悦粤悦栽郧悦粤粤悦粤郧郧郧悦悦粤栽悦粤粤粤悦郧粤鄄猿忆袁
下划线处为 运责灶 陨 酶切位点袁扩增片段为 员缘园愿遭责遥 引
物由金思特科技渊南京冤有限公司合成遥 利用 栽则蚤扎燥造 试
剂提取水稻叶片总 砸晕粤袁晕葬灶燥凿则燥责 测定 砸晕粤 浓度袁电
泳检测 砸晕粤 的完整性袁根据高性能 砸栽鄄孕悦砸 试剂盒
砸藻增藻则栽则葬 阅葬泽澡合成第 员 链 糟阅晕粤遥 燥蕴蚤早燥渊凿贼冤圆园 圆滋造尧模
板 砸晕粤 圆滋造尧砸晕葬泽藻 云则藻藻 匀圆韵 圆园滋造 混匀后 远缘益 缘皂蚤灶袁
取出后冰上加 缘 伊 月怎枣枣藻则 愿滋造尧凿晕栽孕 源滋造尧砸晕葬泽藻 蚤灶澡葬遭鄄
蚤贼燥则 圆滋造和 砸藻增藻则 栽则葬灶 粤悦 圆滋造袁混匀后在 孕悦砸 仪渊月蚤燥鄄
砸葬凿鄄阅赠葬凿冤上进行 孕悦砸 反应遥 孕悦砸 反应条件院猿园益袁
员园皂蚤灶曰源园益袁圆园皂蚤灶曰愿缘益袁缘皂蚤灶遥 然后以 糟阅晕粤 为模板
进行 孕悦砸 扩增袁扩增条件为院怨源益袁源皂蚤灶曰怨源益袁猿园泽曰
远园益袁猿园泽曰苑圆益袁圆皂蚤灶曰循环扩增 猿猿 次袁最后 苑圆益下延
伸 员园皂蚤灶遥 扩增产物于 员豫琼脂糖凝胶上电泳袁割胶袁
利用回收试剂盒渊粤曾赠郧耘晕冤 纯化回收目的 阅晕粤片段遥
利用 栽源 蕴蚤早葬泽藻将回收目的基因片段连接至克隆载体
责酝阅员怨鄄增藻糟贼燥则上袁并转化到大肠杆菌 栽则葬灶泽 缘葬 的感受
态细胞中袁经蓝白斑筛选尧菌液 孕悦砸鉴定和测序渊上海
英俊生物技术有限公司冤袁得到重组克隆载体 责酝阅员怨鄄
栽鄄晕粤阅运猿遥 序列分析软件为 月蚤燥藻凿蚤贼尧晕悦月陨 月蕴粤杂栽袁所
源远愿
摇 缘 期 水稻 韵杂晕粤阅运猿 基因的克隆及其遗传转化
图 员摇 表达载体 责悦晕郧构建示意图
云蚤早援 员摇 杂糟澡藻皂葬贼蚤糟 糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 燥枣 责悦晕郧
用数据库为 砸蚤糟藻 郧藻灶燥皂藻遥
员郾 圆郾 圆摇 责悦粤酝月陨粤员猿园员院院猿缘杂院院 晕粤阅运猿院院郧云孕渊 责悦晕郧冤
表达载体构建和农杆菌转化摇 载遭葬 陨和 耘悦韵砸 陨酶切改
造的质粒 责悦粤酝月陨粤员猿园员院院猿缘杂院院郧哉杂渊本实验室提供冤
和质粒 责载在孕园园愿渊含有 郧云孕 编码序列冤袁经割胶回收尧
连接转化构建表达载体 责悦郧遥 用 载遭葬 陨 和 运责灶 陨 酶切
原核表达质粒 责悦郧 和克隆载体 责酝阅员怨鄄栽鄄晕粤阅运猿 质
粒袁经连接转化袁将 韵杂晕粤阅运猿 基因片段插入到原核表
达质粒 责悦郧的多克隆位点上袁通过菌液 孕悦砸和酶切构
建重组质粒 责悦晕郧袁如图 员 所示遥 利用冻融法将重组质
粒 责悦晕郧转入根癌农杆菌 耘匀粤员园缘 菌株中咱员猿暂 遥
员郾 圆郾 猿摇 农杆菌介导的水稻遗传转化和植株再生摇 利
用水稻品种 阅燥灶早躁蚤灶早 成熟去壳水稻种子胚袁苑园豫乙醇
消毒 缘皂蚤灶和 园郾 员豫升汞消毒 圆园皂蚤灶 后袁无菌水水洗 源
次袁滤纸吸干后置于诱导培养基袁于 圆远益 耀 圆愿益连续
光照条件下培养袁诱导水稻愈伤组织遥 愈伤组织在
圆远益 耀 圆愿益暗处继代 猿 次后袁预培 源凿袁利用农杆菌
渊韵阅远园园园郾 缘 耀 员冤侵染水稻愈伤组织 圆园皂蚤灶袁置于共培养
基上于 圆远益 耀 圆愿益暗处共培养 猿凿袁灭菌水清洗 远 耀 怨
次至无絮状沉淀遥 利用含头孢 渊 悦藻枣冤和羧苄霉素
渊悦葬则冤浓度分别为 圆园园 和 圆缘园皂早 辕 蕴 的无菌水浸泡
员园皂蚤灶袁将水稻愈伤移至滤纸吸干水分袁在含潮霉素
渊匀赠早 猿园皂早 辕 蕴冤筛选培养基 员 上袁筛选 员 代袁在含 匀赠早
渊缘园皂早 辕 蕴冤的筛选培养基 圆 上筛选两代袁最后在分化再
生培养基上先暗培养 源凿后转移至光下培养袁培养条件
为院远园豫 湿度尧 圆苑益 光照培养 员源澡袁 圆缘郾 缘益 暗培养
员园澡咱员源 耀 员苑暂 遥
晕月员 诱导培养基院晕月 垣 蔗糖渊猿园早 辕 蕴冤 垣水解酪
蛋白 渊 悦粤 冤 渊 猿园园皂早 辕 蕴 冤 垣 郧造灶 渊 缘园园皂早 辕 蕴 冤 垣 孕则燥
渊缘园园皂早 辕 蕴冤 垣 圆郾 源 原 阅渊圆皂早 辕 蕴冤 垣 粤早葬则渊源郾 远早 辕 蕴冤袁责匀
缘郾 苑 耀 缘郾 愿曰
晕月圆 继代培养基院 晕月 垣 蔗糖 渊猿园早 辕 蕴冤 垣 悦粤
渊猿园园皂早 辕 蕴冤 垣 郧造灶渊缘园园皂早 辕 蕴冤 垣 孕则燥渊缘园园皂早 辕 蕴冤 垣 圆郾 源
原 阅渊园郾 缘皂早 辕 蕴冤 垣 粤早葬则渊源郾 远早 辕 蕴冤袁责匀 缘郾 苑 耀 缘郾 愿曰
预培养基院晕月圆 垣 葡萄糖 员园早 辕 蕴 垣 粤杂 员园园滋皂燥造 辕
蕴 垣 粤早葬则渊源郾 远早 辕 蕴冤袁责匀 缘郾 园 耀 缘郾 圆曰
粤粤酝 原 粤杂浸染液院粤粤酝大量 垣 月缘 有机 垣 月缘 微
量 垣 悦粤渊缘园园皂早 辕 蕴冤 垣 蔗糖渊猿园早 辕 蕴冤 垣 葡萄糖渊员园早 辕
蕴冤 垣 圆郾 源 原 阅渊园郾 缘皂早 辕 蕴冤 垣 粤杂 员园园滋皂燥造 辕 蕴袁责匀 缘郾 园 耀
缘郾 圆曰
共培养培养基院 晕月圆 垣 葡萄糖 员园早 辕 蕴 垣 粤杂 员园园
滋皂燥造 辕 蕴 垣 粤早葬则 苑 耀 愿早 辕 蕴袁责匀 缘郾 园 耀 缘郾 圆曰
筛选培养基 员院 晕月员 垣 匀赠早 渊 猿园皂早 辕 蕴 冤 垣 糟藻枣
渊圆园园皂早 辕 蕴冤 垣 糟葬则 渊圆缘园皂早 辕 蕴冤 垣 粤早葬则 渊源郾 远早 辕 蕴冤袁 责匀
缘郾 苑 耀 缘郾 愿曰
筛选培养基 圆院 晕月员 垣 匀赠早 渊 缘园皂早 辕 蕴冤 垣 糟藻枣
渊圆园园皂早 辕 蕴冤 垣 糟葬则 渊圆缘园皂早 辕 蕴冤 垣 粤早葬则 渊源郾 远早 辕 蕴冤袁 责匀
缘郾 苑 耀 缘郾 愿曰
再生培养基院酝杂 垣 远月粤渊员皂早 辕 蕴冤 垣 运栽渊园郾 缘皂早 辕
蕴冤 垣 在栽渊园郾 圆皂早 辕 蕴冤 垣 晕粤粤渊园郾 缘皂早 辕 蕴冤 垣 匀赠早渊缘园皂早 辕
蕴冤 垣 悦粤渊园郾 猿早 辕 蕴冤 垣 蔗糖渊猿园早 辕 蕴冤 垣 琼脂粉渊缘早 辕 蕴冤袁
责匀缘郾 愿遥
员郾 圆郾 源 摇 水稻转基因植株的鉴定 摇 参 照 悦栽粤月
法咱员愿 耀圆园暂 遥 从转基因水稻植株叶片中提取基因组 阅晕粤遥
利用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则缘郾 园 软件以跨载体 责悦晕郧 中 郧云孕 基
因片段和 韵杂晕粤阅运猿 基因片段设计引物院郧晕猿鄄杂院 缘忆鄄
悦郧粤栽郧郧郧郧郧栽郧栽栽悦栽郧悦栽郧栽粤郧鄄猿忆袁 郧晕猿鄄粤院 缘忆鄄
粤悦悦栽郧粤郧郧粤粤郧粤郧悦悦粤郧栽悦郧栽栽栽郧粤鄄猿忆遥 再以非转化水
稻 阅燥灶早躁蚤灶早 阅晕粤为阴性对照袁以质粒 责悦晕郧为阳性对照
进行 孕悦砸 扩增遥 反应条件为 怨源益袁源皂蚤灶曰怨源益袁猿园泽曰
缘缘益袁猿园泽曰苑圆益袁员皂蚤灶曰猿猿 个扩增循环袁苑圆益袁员园皂蚤灶遥
员郾 圆郾 缘摇 韵杂晕粤阅运猿 的亚细胞定位摇 根据 杂澡藻藻灶 等的方
法略做改动提取拟南芥叶肉细胞原生质体并转化咱圆员暂 遥
选取 猿 周龄的拟南芥叶片袁切成 园郾 缘 耀 员皂皂 的细条遥
将这些细条放入 园郾 缘皂燥造 辕 蕴 皂葬灶灶蚤贼燥造 中预处理袁转入三
角瓶中袁加入 员园皂造酶液暗处酶解 猿澡遥 用 猿缘 耀 苑缘 目的
筛子过滤酶解液袁倒入 缘园皂造圆底离心管中遥 加入等体
积的 宰缘渊员缘源皂皂燥造 辕 蕴 晕葬悦造尧员圆缘皂皂燥造 辕 蕴 悦葬悦造圆尧圆皂皂燥造 辕
缘远愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
蕴 酝藻泽渊责匀缘郾 苑冤尧缘皂皂燥造 辕 蕴 运悦造冤稀释袁然后在 源益尧员圆园早
下离心袁使原生质体沉入管底遥 用 宰缘 溶液清洗沉淀
两次后袁用 员皂造 酝酝郧 溶液 渊员缘皂皂燥造 辕 蕴 酝早悦造圆尧园郾 源皂燥造 辕蕴 皂葬灶灶蚤贼燥造 和 源皂燥造 辕 蕴 酝藻泽冤重悬原生质体遥 于 圆皂造 离
心管中加入 员园滋造 阅晕粤渊员园 耀 圆园滋早 约 缘 耀 员园噪遭 的质粒
阅晕粤冤袁加 员园园滋造 原生质体袁轻柔混匀遥 加入 员员园滋造
孕耘郧溶液渊员园园皂皂燥造 辕 蕴 悦葬悦造圆尧园郾 圆皂燥造 辕 蕴 皂葬灶灶蚤贼燥造尧源园豫渊宰 辕 灾冤 孕耘郧鄄源园园园冤袁轻柔拍打离心管使完全混合遥 放
置 圆缘皂蚤灶后袁室温下用 源园园 耀 源源园滋造 宰缘 溶液稀释转化
混合液袁轻柔颠倒摇动离心管使之混合完好以终止转
化反应袁然后在 圆猿益尧员圆园早 下离心 圆皂蚤灶遥 弃上清袁加
员皂造 宰陨 渊源皂皂燥造 辕 蕴 酝耘杂 渊责匀 缘郾 苑冤尧园郾 缘皂燥造 辕 蕴 皂葬灶灶蚤贼燥造
和 圆园皂皂燥造 辕 蕴 运悦造冤轻柔重悬原生质体于 远 孔组织培养
皿中遥 然后置于 圆猿益袁弱光下孵育 员圆 耀 圆园澡遥 荧光材
料在 在藻蚤泽泽 蕴杂酝缘员园 酝耘栽粤型共聚焦激光扫描显微镜下
观察遥 使用 源愿愿灶皂 激光激发袁缘园缘 耀 缘猿园灶皂 的滤光片
检测信号袁输出 陨皂葬早蚤灶早图像遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失 栽鄄阅晕粤插入突变体的
筛选及其表型
韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失 栽鄄阅晕粤 插入突变体 孕悦砸
筛选的结果如图 圆鄄葬 所示遥 植株 员 为野生型对照袁蕴孕
垣 砸孕组合扩增出 员 条 员园苑猿遭责的片段袁蕴孕 垣 月孕未能扩
增出片段曰植株 圆尧猿 和 缘 为突变体杂合子袁蕴孕 垣 砸孕 组
合扩增出 员 条 员园苑猿遭责的片段袁同时 砸孕 垣 月孕 也扩增出
员 条 苑缘园遭责左右的片段曰植株 源 为野生型袁用两组引物
组合扩增出和野生型对照同样的 员 条带遥 本研究中袁
没有纯合突变体植株被鉴定出来袁根据对获得的杂合
体表型的分析袁我们判断 韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失 栽鄄
阅晕粤插入突变体纯合体可能是致死的遥 对获得的 猿
株突变杂合体初步研究表明袁该杂合体表现为植株明
显矮小尧花发育异常等性状渊图 圆鄄遭尧糟 和 凿冤遥 为进一
步获得关于该突变体的表型特征袁本研究利用稻桩扩
繁了该杂合体及其野生型植株袁分别选取 员园 株
韵杂晕粤阅运猿 基因突变杂合体和野生型 阅燥灶早躁蚤灶早 植株袁测
定剑叶长度尧 宽度和株高袁 结 果 如 表 员 所 示遥
韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失 栽鄄阅晕粤 插入突变杂合体与其
野生型 阅燥灶早躁蚤灶早相比袁在生物量上存在显著差异袁其剑
叶宽度仅为野生型的 愿苑郾 远豫 袁长度为野生型的
苑愿郾 源豫 袁株高仅为野生型的 苑苑郾 猿豫 遥 对其花发育过程
的进一步观察表明袁韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失 栽鄄阅晕粤
插入突变杂合体表现为花絮畸形袁小花数量减少袁颍壳
分散等特征渊图 圆鄄凿冤遥 对其结实情况的分析还表明袁
该杂合体完全不育遥 由此推测 韵杂晕粤阅运猿 基因表达完
全缺失可能具有致死效应袁因此无法获得该基因突变
的纯合植株遥
图 圆摇 韵杂晕粤阅运猿 基因表达 栽鄄阅晕粤
插入突变体的筛选及其表型
云蚤早援 圆摇 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责澡藻灶燥贼赠责藻泽 燥枣 韵杂晕粤阅运猿
栽鄄阅晕粤 蚤灶泽藻则贼蚤燥灶 皂怎贼葬灶贼
葬院韵杂晕粤阅运猿 基因表达 栽鄄阅晕粤 插入突变体 孕悦砸 鉴定曰遭院开花期
的野生型和突变杂合体植株表型曰糟院开花期野生型和突变杂合
体小穗曰凿院开花期野生型和突变杂合体籽粒曰藻院韵杂晕粤阅运猿渊蕴韵悦赃
韵泽园缘早猿圆圆员园冤的基因结构图及 栽鄄阅晕粤 插入位点遥 宰栽院野生型对
照曰图 葬中 孕云郧赃猿粤鄄园源愿苑员郾 砸为待测突变体植株袁员尧猿尧缘尧苑尧怨院所
用引物组合为 蕴孕 垣 砸孕曰圆尧源尧远尧愿尧员园院所用引物组合为 砸孕 垣 月孕遥
葬院 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 栽鄄阅晕粤 皂怎贼葬灶贼 憎蚤贼澡 孕悦砸曰 遭院 栽澡藻 憎蚤凿藻
贼赠责藻 葬灶凿 皂怎贼葬灶贼 蚤灶 枣造燥憎藻则蚤灶早 泽贼葬早藻曰 糟院 杂责蚤噪藻造藻贼 燥枣 憎蚤凿藻 贼赠责藻 葬灶凿
皂怎贼葬灶贼 蚤灶 枣造燥憎藻则蚤灶早 泽贼葬早藻曰 凿院 运藻则灶葬造 燥枣 憎蚤凿藻 贼赠责藻 葬灶凿 皂怎贼葬灶贼 蚤灶
枣造燥憎藻则蚤灶早 泽贼葬早藻曰 藻院韵杂阅晕阅运猿 渊蕴韵悦赃韵泽园缘早猿圆圆员园冤 早藻灶藻 泽贼则怎糟贼怎则藻援 陨灶
枣蚤早怎则藻 葬 造蚤灶藻 孕云郧赃猿粤鄄园源愿苑员郾 砸 憎葬泽 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼 贼燥 遭藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿曰 员袁 猿袁
缘袁 苑袁 怨院蕴孕 垣 砸孕 憎葬泽 怎泽藻凿曰 圆袁 源袁 远袁 愿袁 员园院 蕴孕 垣 砸孕 憎葬泽 怎泽藻凿援
圆郾 圆摇 韵杂晕粤阅运猿 基因 悦阅杂克隆载体的构建
通过 砸栽鄄孕悦砸扩增得到如图 猿 所示 韵杂晕粤阅运猿 基
因片段袁将酶解产物割胶回收后连接到 责酝阅员怨鄄栽克隆
载体上袁经菌液 孕悦砸 鉴定和测序后得到阳性克隆
责酝阅员怨鄄栽鄄晕粤阅运猿遥 测序结果表明克隆的基因和
郧藻灶燥皂藻数据库中 蕴韵悦赃韵泽园缘早猿圆圆员园 序列相同遥
远远愿
摇 缘 期 水稻 韵杂晕粤阅运猿 基因的克隆及其遗传转化
表 员摇 野生型和 韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失
栽鄄阅晕粤插入突变杂合体基本农艺性状
栽葬遭造藻 员摇 悦燥皂责葬则蚤燥灶 燥枣 葬早则燥灶燥皂蚤糟 贼则葬蚤贼泽 遭藻贼憎藻藻灶
憎蚤凿藻 贼赠责藻 葬灶凿 澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽 皂怎贼葬灶贼
材料
皂葬贼藻则蚤葬造
叶长
造藻葬枣 造藻灶早贼澡 渊糟皂冤
叶宽
造藻葬枣 憎蚤凿贼澡 渊糟皂冤
株高
责造葬灶贼 澡藻蚤早澡贼 渊糟皂冤
野生型 憎蚤凿藻 贼赠责藻 猿怨郾 源苑 依 猿郾 怨愿葬 员郾 远缘 依 园郾 园苑园葬 怨远郾 圆 依 猿郾 愿远葬
基因突变杂合体
澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽 皂怎贼葬灶贼 圆圆郾 圆猿 依 猿郾 园源遭 员郾 源员 依 园郾 员苑园遭 远远郾 怨 依 源郾 源猿遭
图 源摇 责悦晕郧载体鉴定
云蚤早援 源摇 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 责悦粤酝鄄晕粤阅运猿鄄郧云孕
葬院 责悦郧 酶切电泳检测图袁员 和 圆 为经 耘悦韵砸 陨与 载遭葬 陨酶切的质粒 责悦郧袁猿 为未经酶切的质粒 责悦郧曰遭院责悦晕郧大肠杆菌菌液 孕悦砸电泳检
测图袁员 为阴性对照渊凿凿匀圆韵冤袁圆 为阳性对照渊质粒 责酝阅员怨鄄栽鄄晕粤阅运猿冤袁猿 耀 缘 为重组大肠杆菌单克隆菌株曰糟院责悦晕郧 质粒酶切电泳检测
图袁员 和 圆 分别为经 载遭葬 陨 和酶切质粒 责悦晕郧袁猿 为未经酶切的质粒 责悦晕郧曰凿院 责悦晕郧 农杆菌菌液 孕悦砸 电泳检测图袁 员 为阴性对照
渊凿凿匀圆韵冤袁圆 为阳性对照渊大肠杆菌质粒 责悦晕郧冤袁猿 耀 缘 为重组农杆菌单克隆菌株遥 酝为 阅蕴圆园园园遥
葬院 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 责悦郧袁 员 葬灶凿 圆 葬则藻 责悦郧 凿燥怎遭造藻 凿蚤早藻泽贼蚤藻凿 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠 遭赠 耘悦韵砸 陨 葬灶凿 载遭葬 陨袁 猿 蚤泽 灶燥灶鄄凿蚤早藻泽贼蚤增藻 责员猿园员鄄
猿缘泽鄄郧云孕曰 遭院 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤葬 造蚤择怎蚤凿 孕悦砸 燥枣 责悦晕郧 蚤灶 耘 糟燥造蚤袁 员 蚤泽 凿凿匀圆韵 葬泽 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造袁 圆 蚤泽 责造葬泽皂蚤凿 责酝阅员怨鄄栽鄄晕粤阅运猿 葬泽
责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造袁 猿 耀 缘 葬则藻 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 糟造燥灶藻 蚤灶 耘援 糟燥造蚤曰 糟院 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 责悦晕郧袁 员 葬灶凿 圆 葬则藻 责悦晕郧 凿燥怎遭造藻 凿蚤早藻泽贼蚤藻凿 遭赠
载遭葬 陨 葬灶凿 运责灶 陨袁 猿 蚤泽 灶燥灶鄄凿蚤早藻泽贼蚤增藻 责悦晕郧曰 凿院 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤葬 造蚤择怎蚤凿 孕悦砸 燥枣 责悦晕郧 蚤灶 耘匀粤员园缘袁 员 蚤泽 凿凿匀圆韵 葬泽 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 圆
蚤泽 责造葬泽皂蚤凿 责悦晕郧 燥枣 耘援 糟燥造蚤 葬泽 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造袁 猿 耀 缘 葬则藻 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 糟造燥灶藻泽 蚤灶 耘匀粤员园缘曰 酝 蚤泽 阅蕴圆园园园援
圆郾 猿摇 原核表达质粒的构建和亚细胞定位
载遭葬 陨 和 耘糟燥砸 陨 酶切重组质粒 责悦郧袁结果显示有
员噪遭大小的片段袁表明构建成功渊图 源鄄葬冤遥 酶切测序正
确的重组质粒 责酝阅员怨鄄栽鄄晕粤阅运猿和质粒 责悦郧袁经 载遭葬 陨和
运责灶 陨酶切尧纯化回收基因片段和连接转化构建重组质
粒 责悦晕郧遥 通过菌液 孕悦砸尧碱裂解法咱圆圆暂提取重组质粒酶
切等方法进行阳性克隆筛选袁挑选 缘个单克隆摇菌进行
菌液 孕悦砸遥 结果有员缘园愿遭责左右的片段渊图源鄄遭冤出现曰提
取重组质粒渊上述 缘个单克隆中的任意 圆个冤袁利用 载遭葬
图 猿摇 砸栽鄄孕悦砸扩增水稻 韵杂晕粤阅运猿 基因
云蚤早援 猿摇 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 韵杂晕粤阅运猿 遭赠 砸栽鄄孕悦砸
酝院阅蕴圆园园园曰员 和 圆 院砸栽鄄孕悦砸扩增产物
酝院 阅蕴圆园园园曰 员 葬灶凿 圆院 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼 燥枣 砸栽鄄孕悦砸
陨和 运责灶 陨进行双酶切袁电泳检测渊图源鄄糟冤显示有员缘园愿遭责
左右大小片段遥 菌液 孕悦砸和酶切双重验证表明重组质
粒 责悦晕郧大肠杆菌菌株构建成功遥 将构建成功的大肠
杆菌重组质粒 责悦晕郧 通过农杆菌转化的方法转入根癌
农杆菌 耘匀粤员园缘菌株中利用菌液 孕悦砸的方法检测袁电泳
苑远愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
结果显示 猿 耀缘泳道中有 员缘园愿遭责 左右的片段袁证明原核
表达载体 责悦粤酝鄄晕粤阅运猿鄄郧云孕 构建成功渊图 源鄄凿冤遥 利用
孕耘郧介导法将质粒 责悦粤酝鄄晕粤阅运猿鄄郧云孕导入拟南芥原生
质体袁激光共聚焦显微镜下看到 韵杂晕粤阅运猿 主要存在细
胞质中渊图 缘冤遥
图 远摇 转基因植株再生过程
云蚤早援 远摇 砸藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
葬院 水稻成熟种子胚经诱导培养基生成的水稻愈伤组织曰 遭院水稻愈伤组织的继代培养曰 糟院 农杆菌和水稻愈伤组织的共培养曰 凿院 筛选培养基
上筛选愈伤组织曰 藻院 水稻愈伤组织的再生分化培养曰枣院 再生的水稻转基因植株遥
葬院 则蚤糟藻 糟葬造造蚤 枣则燥皂 皂葬贼怎则藻 则蚤糟藻 泽藻藻凿 燥灶 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 皂藻凿蚤怎皂曰 遭院 泽怎遭糟怎造贼怎则藻 燥枣 则蚤糟藻 糟葬造造怎泽曰 糟院 糟燥鄄糟怎造贼怎贼藻 燥枣 糟葬造造怎泽 葬灶凿 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽曰 凿院
泽藻造藻糟贼蚤燥灶 燥枣 则蚤糟藻 糟葬造造怎泽 燥灶 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 皂藻凿蚤怎皂曰 藻院 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 糟怎造贼怎则藻 燥枣 则蚤糟藻 糟葬造造怎泽 曰 早院 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻 责造葬灶贼泽 枣则燥皂 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶援
圆郾 源摇 农杆菌介导的水稻遗传转化和植株再生
取 圆园园 粒水稻成熟种子在光诱导培养基上生长
员缘凿袁员苑源 粒诱导出颗粒状尧淡黄色胚性愈伤组织袁诱导
率渊诱导出愈伤组织种子数 辕种子总数冤为 愿苑郾 园豫 渊图
远鄄葬冤遥 圆远益 耀圆愿益暗处继代 猿 次袁每次 员源凿袁图 远鄄遭 为
继代培养基上生长的水稻愈伤组织袁农杆菌侵染预培
养 猿凿 的水稻愈伤组织袁共培养基加一层灭菌滤纸
圆远益 耀圆愿益暗处共培养 猿凿渊图 远鄄糟冤遥 筛选培养基上筛
选两次袁抗性愈伤组织转化率渊抗性愈伤数 辕侵染愈伤
数冤为 缘苑郾 愿豫 渊图 远鄄凿冤遥 分化培养基上暗处培养 源凿袁
光照培养袁圆 耀 猿 周后长出绿芽渊图 远鄄藻冤袁转移至 员缘园皂造
三角瓶中袁继续在分化培养基上培养至长出幼苗渊图
远鄄枣冤遥 共获得 圆源 株水稻再生抗性苗遥
圆郾 缘摇 郧云孕和 韵杂晕粤阅运猿 融合表达转基因植株的鉴定
提取抗性植株的基因组 阅晕粤袁利用植物表达载体
携带的 郧云孕 和 韵杂晕粤阅运猿 序列设计引物 郧晕猿鄄杂 和
郧晕猿鄄粤袁预期扩增长度为 远圆猿遭责遥 以未侵染的植株作为
对照袁未能扩增出 远圆猿遭责 的条带袁而抗性植株扩增出
远圆猿遭责 的条带遥 结果表明袁植株 猿 耀 员猿 和 员缘 耀 员愿 均能
扩增出 远圆猿遭责的条带袁植株 员源 未能扩增出 远圆猿遭责的条
带袁可以初步确定植株 猿 耀 员猿 和 员缘 耀 员愿 均是阳性转基
因植株渊图 苑冤遥
猿摇 讨论
晕粤阅运是植物中发现的第 员 个 悦葬酝 依赖酶袁植物
中 悦葬酝依赖的 晕粤阅运间接提供还原物来促进 悦葬圆 垣介
导的细胞活性氧爆发防御病原菌途径咱圆猿 耀 圆缘暂 遥 从目前
已有的资料看袁生物体内的 晕粤阅 和 晕粤阅孕 至少参与
猿园园 多种不同的氧化还原反应遥 催化这些反应的酶常
常是 晕粤阅 或 晕粤阅孕 依赖性的袁也就是说这两种辅酶
参与了不同的代谢途径遥 在体内 晕粤阅 主要参与分解
代谢袁而 晕粤阅孕 则主要参与合成代谢遥 糖类分解中袁
晕粤阅参与糖酵解和三羧酸循环袁而 晕粤阅孕则参与磷酸
戌糖途径遥 细胞内 晕粤阅 与 晕粤阅孕 的相对水平直接影
响不同代谢途径的相对活性袁因此二者的相对水平必
然受到严格的控制遥 晕粤阅运 通过影响 晕粤阅 渊匀冤和
愿远愿
摇 缘 期 水稻 韵杂晕粤阅运猿 基因的克隆及其遗传转化
图 缘摇 韵杂晕粤阅运猿 的亚细胞定位
云蚤早援 缘摇 杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 韵杂晕粤阅运猿
葬院自然光下的细胞曰遭院红光激发下的细胞曰糟院蓝光激发下的细胞曰凿院遭
和 糟交叠的结果遥 标尺为 缘滋皂遥
葬院 憎澡蚤贼藻 造蚤早澡贼曰 遭院 则藻凿 葬怎贼燥枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 泽蚤早灶葬造泽 憎藻则藻 怎泽藻凿 葬泽 糟澡造燥则燥责造葬泽贼
皂葬则噪藻则泽曰 糟院 早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 泽蚤早灶葬造泽 憎藻则藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 葬 造葬泽藻则 糟燥灶枣燥糟葬造鄄
泽糟葬灶灶蚤灶早 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻曰 凿院 燥增藻则造葬责 蚤皂葬早藻 燥枣 糟 葬灶凿 凿援 栽澡藻 遭葬则 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽
缘滋皂援
图 苑摇 转基因植株 孕悦砸验证电泳图
云蚤早援 苑摇 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻 责造葬灶贼泽 遭赠 孕悦砸
酝院阅蕴圆园园园曰员院阴性对照渊未转基因的水稻 阅燥灶早躁蚤灶早 阅晕粤冤曰圆院阳性对照渊质粒 责悦晕郧冤冤曰猿 耀 员愿院水稻转基因植株
酝院 阅蕴圆园园园曰 员院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊阅晕粤 燥枣 灶燥灶鄄贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻 阅燥灶早躁蚤灶早 冤曰 圆院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊责造葬泽皂蚤凿 责悦晕郧 蚤灶 耘援 悦燥造蚤冤曰
猿 耀 员愿院 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻 责造葬灶贼泽
晕粤阅孕渊匀冤的相对水平而调控生物体内不同代谢途径
的相对活性咱圆远暂 遥 随着 悦葬酝 信使系统在植物细胞信号
转导中的作用逐渐被揭示袁植物体内 悦葬酝 依赖性的
晕粤阅运的研究也逐渐成为人们关注的又一新课题遥
本研究利用 韵杂晕粤阅运猿 基因表达缺失 栽鄄阅晕粤插入
突变体株系 孕云郧赃猿粤鄄园源愿苑员郾 砸袁通过 孕悦砸鉴定袁筛选出
突变体杂合子袁该突变杂合体与其比较袁表现出明显的
植株矮小尧花发育异常和不育等特点袁揭示 韵杂晕粤阅运猿
激酶在水稻发育中具有重要作用遥 鉴于该酶基因表达
缺失突变杂合体就显示出如此强烈的表型袁我们推测
该酶基因表达缺失突变纯合体可能具有致死效应袁这
可能也是本试验中未能鉴定到突变纯合子的原因遥 与
野生型相比较袁突变杂合子花发育异常尧整个小穗籽粒
间距大以及颍壳分散袁不能聚拢保护柱头袁可能是其无
法完成授粉导致不育的原因遥 但目前尚没有更确切的
试验证据证实袁需要后续研究加以厘清遥
鉴于 晕粤阅运在植物生长发育和逆境胁迫响应以
及在调控活性氧产生关键酶要晕粤阅孕匀 氧化酶活性中
的重要作用咱圆苑暂 袁晕粤阅运 酶基因表达及其功能的阐明袁
已经成为当前该领域研究的热点内容之一咱圆愿 耀 猿园暂 遥 当
前袁晕粤阅运基因已经在人类尧酵母菌尧细菌尧拟南芥中成
功克隆咱源袁缘袁猿员袁猿圆暂 袁目前水稻中还未见报道遥 最近我们通
过搜索 郧藻灶藻遭葬灶噪数据库发现袁水稻 晕粤阅运有 远 个同工
酶院 晕粤阅运员尧 晕粤阅运圆尧 晕粤阅运猿尧 晕粤阅运源尧 晕粤阅运缘尧
晕粤阅运远袁 分 别 由 远 个 基 因 编 码 渊 韵泽园员早园怨缘苑园园园尧
韵泽园怨早园圆怨源园园园尧 韵泽园缘早园猿愿愿源园园尧 韵泽员员早园员怨员源园园尧
韵泽园愿早园猿源圆源园园尧韵泽员员早园员愿怨怨园园冤袁其中 郧藻灶藻遭葬灶噪 数据中
韵泽园缘早园猿愿愿源园园 对应 砸蚤糟藻 郧藻灶燥皂藻 数据库中 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早猿圆圆员遥 本研究通过构建 韵杂晕粤阅运猿 和绿色荧光
蛋白渊郧云孕冤融合表达载体 责悦粤酝鄄晕粤阅运猿鄄郧云孕袁发现水
稻 韵杂晕粤阅运猿 是一个细胞质定位的酶袁该研究结果以
及该酶遗传体系的建立对了解 晕粤阅运 激酶的功能具
有重要意义袁并为进一步深入细致研究 晕粤阅运 功能和
细胞定位打下基础遥
参考文献院
咱 员 暂摇 酝糟郧怎蚤灶灶藻泽泽 耘 栽袁 月怎贼造藻则 允 砸援 晕粤阅 噪蚤灶葬泽藻院 葬 则藻增蚤藻憎 咱 允 暂 援
陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁员怨愿缘袁 员苑院员 原 员员
咱 圆 暂摇 在蚤藻造蚤灶泽噪蚤 砸 耘援 悦葬造皂燥凿怎造蚤灶 葬灶凿 糟葬造皂燥凿怎造蚤灶 鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶
责造葬灶贼泽 咱允暂 援 粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠 葬灶凿 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则
月蚤燥造燥早赠袁员怨怨愿袁 源怨院 远怨苑 原 苑圆缘
咱 猿 暂摇 运葬憎葬蚤 杂袁 酝燥则蚤 杂袁 酝怎噪葬蚤 栽袁 杂怎扎怎噪蚤 杂袁 匀葬泽澡蚤皂燥贼燥 宰袁 再葬皂葬凿葬 栽袁
酝怎则葬贼葬 运援 陨灶燥则早葬灶蚤糟责燥造赠责澡燥泽责澡葬贼藻 辕 粤栽孕鄄晕粤阅 噪蚤灶葬泽藻 燥枣 酝蚤糟则燥糟燥糟糟怎泽
枣葬增怎泽 葬灶凿 酝赠糟燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎遭藻则糟怎造燥泽蚤泽 匀猿苑砸增 咱允暂 援 月蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造 葬灶凿
怨远愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊缘冤院园愿远猿 耀 园愿苑园
月蚤燥责澡赠泽蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡 悦燥皂皂怎灶蚤糟葬贼蚤燥灶泽袁圆园园园袁 圆苑远院 缘苑 原 远猿
咱 源 暂 摇 运葬憎葬蚤 杂袁 酝燥则蚤 杂袁 酝怎噪葬蚤 栽袁 匀葬泽澡蚤皂燥贼燥 宰袁 酝怎则葬贼葬 运援 酝燥造藻糟怎造葬则
糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬鄄糟燥造蚤 晕粤阅 噪蚤灶葬泽藻 咱 允 暂 援 耘怎则燥责藻葬灶
允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园员袁 圆远愿院 源猿缘怨 原 源猿远缘
咱 缘 暂 摇 运葬憎葬蚤 杂袁 杂怎扎怎噪蚤 杂袁 酝燥则蚤 杂袁 酝怎则葬贼葬 运援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟造燥灶蚤灶早 葬灶凿
蚤凿藻灶贼蚤枣造糟葬贼蚤燥灶 燥枣 哉栽砸员燥枣 葬 赠藻葬泽贼 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 糟藻则藻增蚤泽蚤葬藻 葬泽 葬 早藻灶藻
藻灶糟燥凿蚤灶早 葬灶 晕粤阅 噪蚤灶葬泽藻 咱 允暂 援 云藻皂泽 酝蚤糟则燥遭蚤燥造 蕴藻贼贼袁 圆园园员袁 圆园园院
员愿员 原 员愿源
咱 远 暂摇 郧则燥泽藻 允 匀袁 允燥泽泽 蕴袁 灾藻造蚤糟噪 杂 云袁 砸燥贼澡 允 砸援 耘增蚤凿藻灶糟藻 贼澡葬贼 枣藻藻凿遭葬糟噪
蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 燥枣 晕粤阅 噪蚤灶葬泽藻 糟燥灶贼则燥造泽 则藻泽责燥灶泽藻泽 贼燥 燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 泽贼则藻泽泽咱 允暂 援
栽澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻 哉杂粤袁圆园园远袁员园猿渊圆园冤院苑远园员
原 苑远园远
咱 苑 暂 摇 孕燥灶糟藻贼鄄酝燥灶贼葬灶早藻 郧袁 粤泽泽葬蚤则蚤 蕴袁 粤则燥造凿 杂袁 孕燥糟澡藻贼 杂袁 蕴葬遭藻泽泽藻 郧援
杂怎遭泽贼则葬贼藻鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 糟葬贼葬造赠泽蚤泽 枣燥则 泽责藻糟蚤枣蚤糟 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 燥枣 晕粤阅 咱 允暂 援
允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园苑袁 圆愿圆渊源苑冤院 猿猿怨圆缘 原 猿猿怨猿源
咱 愿 暂摇 郧怎 悦 匝袁 郧怎葬灶 允 云袁 载蚤 再 云袁 蕴蚤 郧 酝援 悦澡葬灶早藻泽 燥枣 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 蚤灶 晕粤阅
噪蚤灶葬泽藻 葬灶凿 晕粤阅孕 责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻 凿怎则蚤灶早 则蚤责藻灶蚤灶早 葬灶凿 泽藻灶藻泽糟藻灶糟藻 燥枣
贼燥皂葬贼燥 葬灶凿 泽贼则葬憎遭藻则则赠 枣则怎蚤贼泽 咱 允暂 援 粤早则蚤糟怎造贼怎葬造 杂糟蚤藻灶糟藻 蚤灶 悦澡蚤灶葬袁
圆园园圆袁 员渊员员冤院 员圆缘员 原 员圆缘缘
咱 怨 暂 摇 匀藻蚤皂 砸袁 孕则葬泽澡藻则 阅 悦袁 栽泽蚤藻灶 砸 再援 宰葬增藻造藻灶早澡贼 皂怎贼葬贼蚤燥灶泽 葬灶凿
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