全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊员员冤院圆园怨猿 耀 圆员园圆允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园源鄄猿园摇 接受日期院圆园员缘鄄园苑鄄园缘
基金项目院福建省大宗蔬菜产业体系渊圆园员圆运愿猿员猿怨圆怨源冤袁福建省自然基金渊圆园员圆允园员园愿圆冤袁福建农林大学校重点建设项目渊远员员圆糟园源园怨冤
作者简介院高世超袁男袁主要从事蔬菜生理生态研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 源缘源缘怨缘苑远源岳 择择援 糟燥皂
通讯作者院钟凤林袁男袁副教授袁主要从事蔬菜生理生态研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 在云蕴员园猿园缘岳 员圆远援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤员员鄄圆园怨猿鄄员园
青花菜 月则耘砸云圆基因的 砸粤悦耘克隆与模拟
酸雨胁迫下的表达分析
高世超摇 钟凤林摇 林义章摇 赵瑞丽摇 林俊芳摇 杨碧云摇 胡海非
渊福建农林大学园艺学院袁福建 福州摇 猿缘园园园圆冤
摘摇 要院为探讨青花菜在模拟酸雨胁迫下 耘砸云 基因的表达变化袁应用 砸粤悦耘 克隆技术袁克隆获得青花菜
的 耘砸云因的 员 条 糟阅晕粤全长序列袁命名为 月则耘砸云圆遥 应用生物信息学方法袁对该基因编码蛋白的氨基酸
组成尧理化性质尧跨膜结构域尧信号肽导肽尧疏水性 辕亲水性尧二级结构尧亚细胞定位尧保守结构域等方面进
行了预测和分析遥 结果表明院获得 糟阅晕粤 全长为 怨缘愿 遭责袁开放阅读框为 愿园源 遭责袁编码 圆远苑 个氨基酸袁
砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸结果分析表明模拟酸雨胁迫下 月则耘砸云圆 基因的表达量发生变化袁模拟酸雨胁迫初期表达
量显著增大袁随时间延长袁又开始下降袁表明其可能参与了青花菜抗酸雨胁迫的应答机制遥 本研究为青
花菜的抗酸雨胁迫研究奠定了基础遥
关键词院青花菜曰耘砸云曰砸粤悦耘克隆曰生物信息学曰表达
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 员员援 圆园怨猿
摇 摇 乙烯应答因子渊藻贼澡赠造藻灶藻 则藻泽责燥灶泽蚤增藻 枣葬糟贼燥则袁耘砸云冤是
乙烯响应元件结合蛋白渊粤孕圆 辕 耘砸耘月孕冤家族成员之一袁
是植物特有的转录因子袁参与植物细胞发育尧抗病尧激
素应答尧抗生物与非生物逆境反应袁在植物体内分布广
泛咱员暂 遥 目前袁在拟南芥中已经发现 远缘 个 耘砸云 类转录
因子袁小麦中 源苑 个袁水稻中 苑怨 个咱圆暂 遥 每个成员都含有
员 个由大约 远园 个氨基酸组成的较为保守的 阅晕粤 结合
域咱猿 原 源暂 袁且主要由 阅晕粤 结合域尧转录调控域和核定位
信号 猿 个功能结构域组成袁部分成员还具有寡聚化位
点和磷酸化修饰位点咱缘暂 遥 耘砸云 转录因子在非生物胁
迫中的作用已有较多报道袁郧葬燥 等咱远暂将番茄 栽耘砸云员 基
因转入水稻后袁提高了其抗旱和耐盐能力曰棉花 耘砸云
转录因子 陨载葬组中的 怨 个成员可以参与乙烯和茉莉酸
信号途径袁是 圆 个途径联系的关键点咱苑暂 曰郧怎 等咱愿暂报道
番茄 孕贼蚤源 基因可能是乙烯信号转导途径和水杨酸信
号转导途径的交叉点曰小麦 栽葬耘砸云员 基因在干旱尧盐
迫尧低温及病菌侵害后迅速诱导表达袁栽葬耘砸云员 基因在
烟草中表达既可以提高植株抗旱耐盐能力袁又能提高
植株抵御真菌侵害的能力咱怨 原 员园暂 遥
青花菜渊月则葬泽泽蚤糟葬 燥造藻则葬糟藻葬 增葬则援 蚤贼葬造蚤糟葬冤属十字花科
芸薹属袁一尧二年生草本植物袁是国际市场十分畅销的
一种名特蔬菜遥 目前袁对 耘砸云 转录因子的研究很多袁
但在青花菜方面开展的研究较少遥 据报道袁酸雨污染
对国民健康生活尧植物正常生产等产生威胁袁已成为全
球备受关注的环境问题咱员员 原 员远暂 遥 其中对青花菜生长发
育和产品质量危害严重袁而 耘砸云转录因子在植物抗性
机制中具有重要作用遥 本研究利用 砸粤悦耘技术克隆青
花菜 耘砸云基因 糟阅晕粤全长袁并对其核苷酸序列和编码
蛋白的氨基酸进行生物信息学分析袁应用 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻
孕悦砸 技术探究该基因在酸雨胁迫不同时间的表达情
况袁旨在探索青花菜 耘砸云 基因的结构尧功能和酸雨胁
迫下 耘砸云的表达特点袁为进一步研究其在青花菜生长
发育中的作用和酸雨胁迫下 耘砸云 的抗性机制奠定基
础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 青花菜的培养和酸雨处理
试验材料为卓越青花菜种子袁由福建立信种苗有
限公司提供遥 选取饱满度一致的种子袁浸种催芽后袁点
猿怨园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
播于 员园园 穴的育苗盘内袁待植株长至 圆 片叶子尧约 缘 糟皂
高时袁选取生长健壮尧长势一致的青花菜植株袁移栽于
含有混合营养基质的营养钵内袁培育青花菜遥 福建地
区的酸雨主要以硫酸根为主咱员苑暂 袁因此用分析纯 匀圆杂韵源
和 晕匀源晕韵猿 配制成 杂韵源圆 原和 晕韵猿 原的当量比为 源郾 员怨 的
模拟酸雨母液渊责匀 值 员郾 园冤遥 取适量母液用蒸馏水稀
释袁配制 责匀值为 圆郾 园 的模拟酸雨渊用上海三信仪表厂
的 责匀杂 原 圆悦 酸度计调节 责匀 值冤遥 待青花菜幼苗长至
源 耀 缘 叶期袁选取生长良好的青花菜袁在 责匀值为 圆郾 园 的
酸雨胁迫下喷洒袁叶片滴液时停止喷洒袁每天处理 员
次袁共处理 怨 凿袁分别取 园尧猿尧远尧怨 凿 的叶片液氮处理保
存遥
表 员摇 引物序列
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 泽藻择怎藻灶糟藻泽
克隆片段
孕则蚤皂藻则 枣怎灶糟贼蚤燥灶
引物名称
孕则蚤皂藻则 灶葬皂藻
引物序列
孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻
逆转录
砸栽 粤孕
缘忆鄄郧郧悦悦粤悦郧悦郧栽悦郧粤悦栽粤郧栽粤悦栽栽栽栽
栽栽栽栽栽栽栽栽栽栽栽栽栽鄄猿忆
猿 端序列
悦造燥灶蚤灶早 燥枣 猿忆 耘砸云猿 原 苑愿 缘忆鄄郧粤栽粤粤悦郧郧郧粤悦郧悦悦郧粤粤粤悦鄄猿忆
耘砸云猿 原 怨怨 缘忆鄄粤郧郧粤郧粤粤粤栽粤悦粤郧粤郧郧粤郧郧栽郧鄄猿忆
粤哉粤孕 缘忆鄄郧郧悦悦粤悦郧悦郧栽悦郧粤悦栽粤郧栽粤悦鄄猿忆
缘 端序列
悦造燥灶蚤灶早 燥枣 缘忆 耘砸云缘 原 员圆猿 缘忆鄄粤悦郧郧悦粤悦悦栽悦悦栽悦栽郧栽粤栽栽鄄猿忆
耘砸云缘 原 员园怨 缘忆鄄郧栽粤栽栽栽悦栽悦悦栽悦悦郧栽栽栽悦郧鄄猿忆
哉孕酝 缘忆鄄栽粤粤栽粤悦郧粤悦栽悦粤悦栽粤栽粤郧郧郧悦粤粤郧悦粤郧栽郧郧栽粤栽悦粤粤悦郧悦粤郧粤郧栽 鄄猿忆
晕哉孕 缘忆鄄粤粤郧悦粤郧栽郧郧栽粤栽悦粤粤悦郧悦粤郧粤郧栽 鄄猿忆
开放阅读框
韵责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 耘鄄云 粤栽郧郧郧郧粤粤粤粤粤郧粤栽栽栽栽粤郧粤栽郧栽栽栽栽郧粤悦
耘鄄砸 栽栽粤栽郧悦粤粤悦栽栽悦郧悦粤悦栽栽悦粤悦悦
实时荧光定量 孕悦砸 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 耘鄄云晕 粤粤郧悦粤栽栽粤悦粤郧粤郧郧粤郧栽郧粤郧粤悦粤郧
耘鄄砸晕 栽悦悦粤悦郧郧粤粤粤郧栽栽悦粤郧悦粤粤郧郧
内参基因
砸藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻 员愿杂鄄云 缘忆鄄悦郧粤郧粤悦悦栽悦粤郧悦悦栽郧悦栽粤粤悦栽粤郧鄄猿忆
员愿杂鄄砸 缘忆鄄栽悦粤粤粤悦栽栽悦悦栽栽郧郧悦悦栽粤粤粤悦郧鄄猿忆
员郾 圆摇 青花菜 砸晕粤的提取和逆转录
取保存的经酸雨处理 园 凿的叶子袁采用 栽则蚤扎燥造法提
取青花菜叶片的总 砸晕粤袁栽则蚤扎燥造 试剂由 陨灶增蚤贼则燥早藻灶渊美
国冤公司提供袁参考其说明书进行试验遥 应用逆转录
试剂盒 杂怎责藻则泽糟则蚤责贼栽酝 芋 云蚤则泽贼鄄杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽
杂赠泽贼藻皂 枣燥则 砸栽鄄孕悦砸渊 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司袁美国冤合成 猿忆端
糟阅晕粤袁其中需要用引物 粤孕 代替试剂盒引物遥 应用
杂酝粤砸栽栽酝 砸粤悦耘 糟阅晕粤 粤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶 运蚤贼 试 剂 盒
咱悦造燥灶贼藻糟澡渊美国冤公司暂合成 缘忆端 糟阅晕粤遥
员郾 猿摇 青花菜 月则耘砸云圆 的 砸粤悦耘克隆
前期袁福建农林大学园艺学院蔬菜系分子实验室
利用 糟阅晕粤鄄粤云蕴孕 技术分析青花菜在酸雨胁迫下表达
谱的变化袁获得与埃塞俄比亚芥渊月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬则蚤灶葬贼葬 冤
耘砸云圆 转录因子渊云允苑愿愿怨源圆郾 员冤基因同源性较高的 栽阅云
差异片段袁大小为 圆怨苑 遭责遥
猿忆砸粤悦耘克隆院以合成的 猿忆端 糟阅晕粤 为模板袁并设
计上游引物为 耘砸云猿 原 苑愿 和 耘砸云猿 原 怨怨袁下游引物为通
用引物 粤哉粤孕渊表 员冤袁反应体系为 糟阅晕粤 员 滋蕴尧上游引
物渊员园 滋皂燥造窑滋蕴 原员冤员 滋蕴尧下游引物渊员园 滋皂燥造窑滋蕴 原员 冤员
滋蕴尧圆 伊 酝葬泽贼藻则酝蚤曾 员圆郾 缘 滋蕴尧凿匀圆韵 怨郾 缘 滋蕴袁共 圆缘 滋蕴 的
体系遥 孕悦砸扩增程序院怨源益预变性 缘 皂蚤灶曰怨源益变性 猿园
泽袁在引物退火温度下 猿园 泽袁苑圆益延伸 猿园 泽袁猿园 个循环曰
苑圆益延伸 员园 皂蚤灶曰源益下停止遥 猿忆砸粤悦耘采用 圆 轮反应袁
第 员 轮反应体系以 耘砸云猿 原 苑愿 和 粤哉粤孕 为引物袁退火
温度为 缘愿郾 猿益袁孕悦砸 扩增结束后袁产物稀释 员园园 倍作
为第 圆 轮扩增模板袁引物为 耘砸云猿 原 怨怨 和 粤哉粤孕袁退火
温度为 缘园郾 苑益遥 对目的片段回收尧连接尧转化尧验证与
测序参照陈琼娥咱员愿暂的方法遥
源怨园圆
摇 员员 期 青花菜 月则耘砸云圆 基因的 砸粤悦耘克隆与模拟酸雨胁迫下的表达分析
摇 摇 缘忆砸粤悦耘克隆院以合成的 缘忆端 糟阅晕粤 为模板袁并设
计下游引物为 耘砸云缘 原员圆猿 和 耘砸云缘 原 员园怨袁上游引物为
哉孕酝和 晕哉孕渊表 员冤遥 缘忆砸粤悦耘 采用 圆 轮反应袁第 员 轮
反应体系以 耘砸云缘 原 员圆猿 和 哉孕酝 为引物袁退火温度为
缘圆郾 圆益袁延伸时间为 员皂蚤灶袁孕悦砸 扩增结束后袁产物稀释
员园园 倍作为第 圆 轮扩增模板袁引物为 耘砸云缘 原 员园怨 和
晕哉孕袁退火温度为 缘园郾 圆益袁延伸时间为 员皂蚤灶袁其他的反
应体系和程序同 猿忆砸粤悦耘遥 对目的片段回收尧连接尧转
化尧验证与测序参照陈琼娥咱员愿暂的方法遥
利用 阅晕粤酝粤晕 远郾 园 软件把克隆得到 猿忆端片段尧缘忆
端片段和原来的差异片段序列进行拼接遥
员郾 源摇 开放阅读框验证
通过 晕悦月陨网站的 韵砸云 云蚤灶凿藻则工具查找拼接基因
全长袁将起始密码子和终止密码子做上标记袁在其附近
设计开放性阅读框的上下游引物 耘鄄云 和 耘鄄砸渊表 员冤遥
退火温度为 缘远郾 猿益袁延伸时间为 愿园泽袁其他的反应体系
和程序同 猿忆砸粤悦耘袁扩增后对目的片段回收尧测序遥
注院粤院猿忆砸粤悦耘曰 月院缘忆砸粤悦耘曰 悦院 开放阅读框遥
晕燥贼藻院粤院 猿忆砸粤悦耘援 月院 缘忆砸粤悦耘援 悦院 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 则藻泽怎造贼 燥枣 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻泽援 酝院 阅蕴圆园园园 阅晕粤 酝葬则噪藻则援
图 员摇 青花菜 月则耘砸云圆 孕悦砸结果电泳图
云蚤早援 员摇 粤早葬则燥泽藻 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 月则燥糟糟燥造蚤 月则耘砸云圆 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼
员郾 缘摇 月则耘砸云圆 的生物信息学分析
利用 孕则燥贼责葬则葬皂在线分析工具对该基因编码蛋白
的一级结构进行预测曰利用 栽皂责则藻凿工具对跨膜结构域
进行预测曰利用 杂蚤早灶葬造孕 源郾 员 工具对信号肽进行预测分
析袁栽葬则早藻贼孕员郾 员杂藻则增藻则 进行导肽分析曰孕则燥贼杂糟葬造藻咱员怨暂进行
疏水性 辕亲水性在线分析曰利用 郧韵砸 陨灾在线分析工具
进行二级结构预测分析曰使用 孕则燥枣怎灶 圆郾 圆 杂藻则增藻则 工具
进行功能预测曰利用 孕泽燥则贼咱圆园暂在线分析软件进行亚细胞
定位曰使用 晕悦月陨 的 悦阅阅 数据库进行同源性分析曰
阅晕粤酝粤晕远郾 园 软件进行序列比对曰软件 酝耘郧粤缘郾 圆 绘制
系统进化树遥
员郾 远摇 月则耘砸云圆 基因在酸雨胁迫下的表达分析
分别取 园尧猿尧远尧怨凿 的叶片提取总 砸晕粤袁用逆转录
试剂盒 杂怎责藻则泽糟则蚤责贼栽酝 芋 云蚤则泽贼鄄杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽
杂赠泽贼藻皂 枣燥则 砸栽鄄孕悦砸 进行逆转录袁用 粤孕 代替试剂盒引
物遥 荧光定量 孕悦砸 仪为 月蚤燥砸葬凿 蚤糟赠糟造藻则 蚤匝渊美国冤袁上
游引物为 耘鄄云晕袁下游引物为 耘鄄砸晕渊表 员冤遥 反应体系
和程序按照 栽葬运葬砸葬 公司渊日本冤的 杂再月砸 襃 孕则藻皂蚤曾
耘曾 栽葬择栽酝渊栽造蚤 砸灶葬泽藻匀 孕造怎泽冤试剂盒进行袁孕悦砸 扩增程
序为 怨源益预变性 圆园 泽曰怨源益变性 员园 泽袁缘愿益退火 圆园 泽袁
源园 个循环遥 试验以 员愿杂为内参基因袁重复 猿 次袁圆 原 驻驻悦贼
法计算不同时间 月则耘砸云圆 基因的相对表达量遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 月则耘砸云圆 的 砸粤悦耘克隆
通过 猿忆砸粤悦耘 扩增袁得到了 圆源猿 遭责 左右的片段
渊图 员 原 粤冤遥 测序结果应用 月造葬泽贼灶 工具进行比对袁与埃
塞俄比亚芥 耘砸云圆 转录因子的 皂砸晕粤 相似度为 愿猿豫 袁
说明 猿忆砸粤悦耘 获得的片段与通过 糟阅晕粤鄄粤云蕴孕 技术获
得的差异片段属于同一基因遥
通过 缘忆砸粤悦耘 扩增袁得到了 苑愿猿 遭责 左右的片段
渊图 员 原 月冤遥 测序结果应用 月造葬泽贼灶 工具进行比对袁与埃
缘怨园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
塞俄比亚芥 耘砸云圆 转录因子的 皂砸晕粤 相似度为 愿缘豫 袁
说明 缘忆砸粤悦耘 获得的片段与通过 糟阅晕粤鄄粤云蕴孕 技术获
得的部分差异片段属于同一基因遥
将 栽阅云 片段尧猿忆砸粤悦耘 和 缘忆砸粤悦耘 获得的序列用
阅晕粤酝粤晕 远郾 园 软件进行拼接袁得到 员 条 怨缘愿 遭责的全长
糟阅晕粤序列袁包含 员 个 愿园源 遭责的开放阅读框袁编码的蛋
白质含有 圆远苑 个氨基酸渊图 圆冤遥 由于该基因与埃塞俄
比亚芥渊月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬则蚤灶葬贼葬 冤转录因子渊云允苑愿愿怨源圆郾 员冤基
因 耘砸云圆 同源性为 愿圆豫 袁因此命名为青花菜 月则耘砸云圆袁
郧藻灶月葬灶噪登录号院运云苑员缘愿缘圆遥
圆郾 圆摇 月则耘砸云圆 的开放阅读框分析
用 员豫的琼脂糖凝胶电泳检测开放性阅读框 孕悦砸
产物袁得到 员 条 苑缘园 遭责左右大小的片段渊图 员 原 悦冤袁对
该条带回收尧测序袁所得序列和编码氨基酸如图 圆 中 猿
原愿园远 部分序列渊下划线为非编码区袁灰色显示的是编
码区的起始密码子和终止密码子冤遥
表 圆摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的氨基酸组成
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆 辕 豫
氨基酸
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽
比例
孕则燥责燥则贼蚤燥灶
氨基酸
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽
比例
孕则燥责燥则贼蚤燥灶
氨基酸
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽
比例
孕则燥责燥则贼蚤燥灶
氨基酸
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽
比例
孕则燥责燥则贼蚤燥灶
氨基酸
粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽
比例
孕则燥责燥则贼蚤燥灶
粤造葬渊粤冤 怨郾 苑园 郧造灶渊匝冤 员郾 怨园 蕴藻怎渊蕴冤 苑郾 缘园 杂藻则渊杂冤 怨郾 源园 孕赠造渊韵冤 园
粤则早渊砸冤 远郾 苑园 郧造怎渊耘冤 愿郾 远园 蕴赠泽渊运冤 苑郾 怨园 栽澡则渊栽冤 源郾 怨园 杂藻糟渊哉冤 园
粤泽灶渊晕冤 猿郾 苑园 郧造赠渊郧冤 缘郾 远园 酝藻贼渊酝冤 员郾 怨园 栽则责渊宰冤 员郾 缘园 粤泽曾渊月冤 园
粤泽责渊阅冤 缘郾 圆园 匀蚤泽渊匀冤 员郾 员园 孕澡藻渊云冤 源郾 员园 栽赠则渊再冤 圆郾 圆园 郧造曾渊在冤 园
悦赠泽渊悦冤 员郾 缘园 陨造藻渊陨冤 猿郾 苑园 孕则燥渊孕冤 苑郾 员园 灾葬造渊灾冤 缘郾 远园 载葬葬渊载冤 园
表 猿摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的导肽预测
栽葬遭造藻 猿摇 郧怎蚤凿藻 责藻责贼蚤凿藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
名称 晕葬皂藻 长度 蕴藻灶早澡 辕 遭责 叶绿体 糟栽孕 线粒体 皂栽孕 分泌途径 杂孕 其他 韵贼澡藻则 可信级 砸悦
序列 杂藻择怎藻灶糟藻 圆远苑 园郾 园愿员 园郾 员源园 园郾 员员苑 园郾 远缘愿 猿
临界值 悦怎贼 燥枣枣 原 园郾 园园园 园郾 园园园 园郾 园园园 园郾 园园园
摇 摇 注院野 原 冶院无遥
晕燥贼藻院耶 原 爷院晕燥贼澡蚤灶早援
圆郾 猿摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的一级结构预测
利用 孕则燥贼责葬则葬皂在线分析工具对该基因编码蛋白
的一级结构预测分析袁该蛋白包含 圆远苑 个氨基酸袁相对
分子量为 圆怨 远圆愿郾 缘 阅葬袁等电点渊责陨冤为 愿郾 圆缘袁判断为碱
性蛋白遥 分子式为 悦员猿园苑 匀圆园远怨 晕猿远苑 韵源园员 杂怨袁原子总数为源 员缘猿遥理论推导半衰期为 猿园澡遥 不稳定系数为 远园郾 怨苑袁
表示该蛋白不稳定遥 脂肪指数为 远怨郾 愿缘袁亲水性评估
值为 原园郾 缘远猿袁为亲水性蛋白遥 该蛋白由 圆园 种氨基酸
组成袁带负电残基渊粤泽责 垣 郧造怎冤总数为 猿苑袁带正电残基
渊粤则早 垣 蕴赠泽冤总数为 猿怨渊表 圆冤袁其中 粤造葬 含量最高袁为
怨郾 苑豫 袁其次为 杂藻则渊怨郾 源豫 冤和 郧造怎渊愿郾 远豫 冤含量相对较
多袁匀蚤泽 含量最低袁为 员郾 员豫 袁不含 孕赠造尧 杂藻糟尧粤泽曾尧郧造曾尧
载葬葬遥
圆郾 源摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的跨膜分析
栽皂责则藻凿是一种专门预测跨膜区的在线分析工具袁
该工具依据 员 个跨膜蛋白数据库对所测蛋白进行分
析袁从而得出每个序列的一些附加信息袁如跨膜结构区
域的数量尧跨膜结构域的位置及其侧翼序列的情况遥
经 栽皂责则藻凿工具对该基因编码蛋白的跨膜结构域预测袁
得出该基因不具有跨膜结构域渊图 猿冤遥
圆郾 缘摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的信号肽和导肽预测和分析
应用 杂蚤早灶葬陨孕 源郾 员 工具对该基因编码蛋白的信号
肽进 行 预 测 分 析袁 没 有 发 现 信 号 肽遥 利 用
栽葬则早藻贼孕员郾 员杂藻则增藻则 进行导肽分析袁结果表明袁该蛋白划
分为叶绿体转运蛋白渊分值为 园郾 园愿员冤尧线粒体转运蛋
白渊分值为 园郾 员源园冤尧分泌途径中的转运蛋白渊分值为
园郾 员员苑冤的分值较低袁可能性比较小袁而划分为其他不
含信号肽的蛋白分值较高渊园郾 远缘愿冤袁进一步说明该基
因编码蛋白不含信号肽渊表 猿冤遥
圆郾 远摇 月则耘砸云圆 编码蛋白疏水性 辕亲水性的预测和分析
使用 孕则燥贼杂糟葬造藻在线工具对 月则耘砸云圆 编码蛋白进行
蛋白疏水性 辕亲水性分析袁结果表明袁在 圆远位分值最高袁
为 圆郾 圆员员袁疏水性最强曰在 圆缘员 位分值最低袁为 原 猿郾 猿缘远袁
亲水性最强渊图 源冤遥 总体而言袁整条多肽链疏水区不明
显袁且前面 月则耘砸云圆编码氨基酸序列的亲水性评估值为
原园郾 缘远猿袁因此袁推测其编码蛋白质为亲水蛋白遥
远怨园圆
摇 员员 期 青花菜 月则耘砸云圆 基因的 砸粤悦耘克隆与模拟酸雨胁迫下的表达分析
注院上下 圆 部分划线序列袁属于完整序列的起始和末端曰灰色部分是开放阅读框的起始密码子 粤栽郧和
终止密码子 栽郧粤曰方框部分为 阅晕粤结合域遥
晕燥贼藻院 栽澡藻 怎责责藻则 葬灶凿 凿燥憎灶 泽藻择怎藻灶糟藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿 葬则藻 遭藻早蚤灶灶蚤灶早 葬灶凿 藻灶凿 燥枣 憎澡燥造藻 泽藻择怎藻灶糟藻援 栽澡藻 泽贼葬则贼 糟燥凿燥灶渊粤栽郧冤 葬灶凿
泽贼燥责 糟燥凿燥灶 渊栽郧粤冤燥枣 韵砸云 蚤泽 泽澡葬凿藻凿 遭赠 早则藻赠 遭葬糟噪早则燥怎灶凿援 栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 憎蚤贼澡 糟澡葬则葬糟贼藻则 遭燥则凿藻则泽 葬则藻 阅晕粤 遭蚤灶凿蚤灶早 泽蚤贼藻援
图 圆摇 青花菜 月则耘砸云圆 糟阅晕粤 的序列及编码氨基酸序列
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 月则燥糟糟燥造蚤 月则耘砸云圆
圆郾 苑摇 月则耘砸云圆 编码蛋白二级结构的预测和分析
应用 郧韵砸 陨灾 在线分析工具对 月则耘砸云圆 编码蛋白
进行二级结构预测和分析袁结果表明该蛋白二级结构
由 琢 原螺旋渊葬造责澡葬 澡藻造蚤曾冤尧延伸链渊藻曾贼藻灶凿藻凿 泽贼则葬灶凿冤和
无规则卷曲渊 则葬灶凿燥皂 糟燥蚤造冤猿 种形式组成袁其中无规则
卷曲含量最高为 缘猿郾 员愿豫 渊表 源尧图 缘冤遥
圆郾 愿摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的功能预测
应用 孕则燥枣怎灶 圆郾 圆 杂藻则增藻则 工具对青花菜 月则耘砸云圆 编
码蛋白进行功能预测渊表 缘冤遥 结果表明袁该蛋白可能
涉及的功能有中间代谢尧脂肪酸代谢尧调控功能尧复制
和转录 尧翻译 袁功能分类中翻译功能的概率最大
表 源摇 月则耘砸云圆 编码蛋白二级结构预测
栽葬遭造藻 源摇 杂藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣
藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
名称 晕葬皂藻 数目 晕怎皂遭藻则 百分比 孕则燥责燥则贼蚤燥灶 辕 豫
琢 原螺旋 粤造责澡葬 澡藻造蚤曾 愿怨 猿猿郾 猿猿
延伸链 耘曾贼藻灶凿藻凿 泽贼则葬灶凿 猿远 员猿郾 源愿
无规则卷曲 砸葬灶凿燥皂 糟燥蚤造 员源圆 缘猿郾 员愿
茁 原螺旋 月藻贼葬 贼怎则灶 园 园
渊圆郾 员怨怨冤遥 此外袁该蛋白也可能是连接酶和生长因子
的一种袁其中作为生长因子的概率最大渊圆郾 远园猿冤遥
苑怨园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 猿摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的跨膜结构域分析
云蚤早援 猿摇 栽则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿
责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
图 缘摇 月则耘砸云圆 编码蛋白二级结构预测
云蚤早援 缘摇 杂藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
图 源摇 月则耘砸云圆 编码蛋白氨基酸疏水性 辕亲水性预测
云蚤早援 源摇 栽澡藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥灶 澡赠凿则燥责澡燥遭蚤糟 辕 澡赠凿则燥责澡蚤造蚤糟 燥枣
藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
圆郾 怨摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的亚细胞定位
利用 孕泽燥则贼在线分析软件对该基因编码蛋白进行
亚细胞定位渊表 远冤遥 结果显示袁该蛋白在细胞核内的
概率最大袁为 园郾 怨远遥
表 缘摇 月则耘砸云圆 编码蛋白功能预测
栽葬遭造藻 缘摇 云怎灶糟贼蚤燥灶 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
功能类别 云怎灶糟贼蚤燥灶葬造 糟葬贼藻早燥则赠 概率 韵凿凿泽
中间代谢 悦藻灶贼则葬造赃蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬则赠赃皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂 员郾 苑远源
脂肪酸代谢 云葬贼贼赠赃葬糟蚤凿赃皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂 员郾 源园员
调控功能 砸藻早怎造葬贼燥则赠赃枣怎灶糟贼蚤燥灶泽 员郾 远苑源
复制和转录 砸藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶赃葬灶凿赃贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 员郾 员猿愿
翻译 栽则葬灶泽造葬贼蚤燥灶 圆郾 员怨怨
酶 耘灶扎赠皂藻 员郾 园怨猿
连接酶 蕴蚤早葬泽藻 员郾 圆苑源
生长因子 郧则燥憎贼澡赃枣葬糟贼燥则 圆郾 远园猿
表 远摇 月则耘砸云圆 编码蛋白亚细胞定位
栽葬遭造藻 远摇 杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬贼蚤燥灶 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
名称 晕葬皂藻 概率 韵凿凿泽
细胞核 晕怎糟造藻怎泽 园郾 怨远
线粒体基质空间 酝蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 皂葬贼则蚤曾 泽责葬糟藻 园郾 员园
内质网渊膜冤耘灶凿燥责造葬泽皂蚤糟 则藻贼蚤糟怎造怎皂 渊皂藻皂遭则葬灶藻冤 园郾 园园
内质网渊腔冤耘灶凿燥责造葬泽皂蚤糟 则藻贼蚤糟怎造怎皂 渊造怎皂藻灶冤 园郾 园园
圆郾 员园摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的保守结构域分析
应用 保 守 结 构 域 数 据 库 渊 糟燥灶泽藻则增藻凿 凿燥皂葬蚤灶
凿葬贼葬遭葬泽藻袁悦阅阅冤在线分析可知袁该基因编码蛋白属于
粤孕圆 超基因家族袁位于氨基酸序列的 员缘愿 耀 圆员怨 处渊图
愿怨园圆
摇 员员 期 青花菜 月则耘砸云圆 基因的 砸粤悦耘克隆与模拟酸雨胁迫下的表达分析
远冤袁具有 阅晕粤结合域渊阅晕粤 遭蚤灶凿蚤灶早 泽蚤贼藻冤 咱猿暂 曰该域含有
远圆 个氨基酸渊图 圆冤袁可以与 郧糟糟鄄月燥曾 结合袁阅晕粤 结合
域存在于植物的转录调控因子中袁如 粤孕耘栽粤蕴粤圆 和
耘砸耘月孕等乙烯响应结合蛋白遥
图 远摇 月则耘砸云圆 编码蛋白保守结构域分析
云蚤早援 远摇 悦燥灶泽藻则增藻凿 凿燥皂葬蚤灶 燥枣 藻灶糟燥凿藻凿 责则燥贼藻蚤灶 遭赠 月则耘砸云圆
注院埃塞俄比亚芥渊粤悦再苑源猿愿圆郾 员冤袁 欧洲油菜 渊粤悦再苑源猿愿员郾 员冤袁 拟南芥渊晕孕赃员怨怨缘猿猿郾 员冤袁 甘蓝 渊粤月阅远源怨缘员郾 员冤遥
晕燥贼藻院 月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬则蚤灶葬贼葬渊粤悦再苑源猿愿圆郾 员冤袁 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽渊粤悦再苑源猿愿员郾 员冤袁 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬造葬渊晕孕赃员怨怨缘猿猿郾 员冤袁 月则葬泽泽蚤糟葬 燥造藻则葬糟藻葬 渊粤月阅远源怨缘员郾 员冤 援
图 苑摇 青花菜 月则耘砸云圆 编码蛋白的氨基酸与其他物种的氨基酸序列比对
云蚤早援 苑摇 匀燥皂燥造燥早赠 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 月则耘砸云圆 藻灶糟燥凿藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 蚤灶 遭则燥糟糟燥造蚤 憎蚤贼澡 贼澡燥泽藻 枣则燥皂 燥贼澡藻则 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
圆郾 员员摇 月则耘砸云圆 编码蛋白的氨基酸同源性分析
利用 阅晕粤酝粤晕 远郾 园 软件袁将 月则耘砸云圆 编码蛋白的
氨基酸序列与其他植物进行同源性比较袁发现该基因
与埃塞俄比亚芥 渊 月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬则蚤灶葬贼葬 冤尧 欧洲油菜
渊月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽冤尧拟南芥渊 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬造葬冤尧甘蓝
渊月则葬泽泽蚤糟葬 燥造藻则葬糟藻葬冤的相似性分别为 苑缘豫 尧苑猿豫 尧远苑豫 尧
怨怨豫 渊图 苑冤遥
圆郾 员圆摇 月则耘砸云圆 的系统进化分析
用 酝耘郧粤 缘郾 圆 软件对该基因编码蛋白作系统进化
分析遥 将该基因序列编码的氨基酸序列在 晕悦月陨 上进
行 遭造葬泽贼责 搜索袁发现青花菜 月则耘砸云圆 编码的蛋白与大
豆尧百脉根尧鹰嘴豆尧空心李尧苹果尧毛果杨尧可可尧棉花尧
拟南芥尧琴叶拟南芥尧甘蓝尧埃塞俄比亚芥尧欧洲油菜等
植物具有同源性遥 将青花菜与上述植物用 酝耘郧粤 缘郾 圆
软件通过 晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早渊晕允冤 法构建氨基酸序列的
进化树渊图 愿冤袁经过 员 园园园 次 月燥燥贼鄄泽贼则葬责 计算发现青花
菜与甘蓝的的乙烯应答元件结合因子关系最近遥 由进
化树可知袁相同科的植物聚为一类袁如大豆尧百脉根尧鹰
嘴豆 猿 个豆科植物聚为一类曰空心李树和苹果树蔷薇
科植物聚为一类曰青花菜尧拟南芥尧琴叶拟南芥尧甘蓝尧
埃塞俄比亚芥尧欧洲油菜十字花科植物聚为一类遥 其
中青花菜与甘蓝尧拟南芥与琴叶拟南芥尧埃塞俄比亚芥
与欧洲油菜又分别聚为一类袁进化聚类值为 员园园曰可可
与棉花虽属不同科袁在聚类分析中却可聚为一类袁这表
怨怨园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 愿摇 青花菜 月则耘砸云圆 与其它植物的系统进化树分析
云蚤早援 愿摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 月则燥糟糟燥造蚤 月则耘砸云圆 憎蚤贼澡 燥贼澡藻则 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
明植物 月则耘砸云圆 编码蛋白在同一科属之间有很高的同
源性袁不同科间也有一定程度的同源性袁推测其在进化
上是相当保守的遥
圆郾 员猿摇 月则耘砸云圆 基因在酸雨胁迫下的表达分析
为了进一步研究 月则耘砸云圆 的响应与青花菜对酸雨
胁迫抗性的关系袁利用实时荧光定量 孕悦砸 技术分析
月则耘砸云圆 在酸雨胁迫不同时间的表达情况遥 结果表明袁
在酸雨处理 猿 凿后袁该基因的表达量比对照显著增强袁
相对表达量由 员 升高到 缘郾 员愿袁增加了 源郾 员愿 倍曰在胁迫
远 凿后袁该基因的表达量逐渐下降袁显著低于胁迫 猿 凿
后的表达量袁仍高于对照袁为对照的 员郾 猿远 倍曰胁迫 怨 凿
后袁该基因的表达量显著低于对照袁为对照的 猿苑豫 渊图
怨冤遥 该基因表达量在酸雨胁迫后迅速上升袁之后逐渐
下降袁可以推测该基因可能在青花菜的抗酸雨胁迫中
发挥了调控作用遥
图 怨摇 月则耘砸云圆 基因在酸雨胁迫下的表达量比较
云蚤早援 怨摇 栽澡藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽
燥枣 月则耘砸云圆 怎灶凿藻则 葬糟蚤凿 则葬蚤灶 泽贼则藻泽泽
猿摇 讨论
砸粤悦耘 渊 则葬责蚤凿 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 糟阅晕粤 藻灶凿泽冤技术即
糟阅晕粤末端快速扩增技术袁是一种基于 孕悦砸 从低丰度
的转录本中快速扩增 糟阅晕粤的 缘忆和 猿忆末端以获得全长
皂砸晕粤的分子生物学技术咱圆员暂 遥 该技术具有简单尧快
速尧廉价尧稳定的特点袁相比于 砸栽鄄孕悦砸袁对模板质量要
求不严袁且扩增效果好尧重复性高袁目前在克隆基因尧
砸晕粤病毒基因组研究尧建立 糟阅晕粤 文库和 耘杂栽泽 研究
等领域广泛应用咱圆圆暂 遥
本研究利用 猿忆砸粤悦耘 和 缘忆砸粤悦耘 技术袁克隆获得
青花菜 月则耘砸云圆 糟阅晕粤 全长袁具有开放阅读框为
愿园源 遭责袁编码 圆远苑 个氨基酸袁是一种不稳定蛋白遥
月则耘砸云圆 编码蛋白与拟南芥尧欧洲油菜等其它植物的
耘砸云蛋白在 阅晕粤结合域具有高度同源性袁该域是 粤孕圆
超基因家族的典型特征袁含有大约 远园 个氨基酸袁与前
人研究结果一致咱怨暂 遥 一方面可以直接和 阅晕粤 结合调
控下游基因的转录袁另一方面作为重要的调控因子参
与植物抗逆信号转导咱圆猿 原 圆缘暂 遥 系统发育树显示青花菜
月则耘砸云圆 和甘蓝 耘砸云圆 亲缘关系最近袁进一步表明本研
究克隆所得基因为青花菜 月则耘砸云圆遥
本研究中袁应用 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 技术对 耘砸云 转录
因子在酸雨胁迫不同时间的表达量进行分析袁其相对
表达量呈先上升后下降的趋势袁并在胁迫 猿 凿 后表达
量最高袁表明 月则耘砸云圆 可能参与了青花菜抗酸性机制遥
根据 郧燥灶扎佗造藻扎等咱圆远暂 尧月藻贼澡噪藻 等咱圆苑暂 尧晕葬噪葬灶燥 等咱圆愿暂 尧莫纪
波等咱圆怨暂的研究结果可以推测袁在青花菜受到酸雨逆境
胁迫时袁月则耘砸云圆 被诱导上调袁通过磷酸化修饰和与其
园园员圆
摇 员员 期 青花菜 月则耘砸云圆 基因的 砸粤悦耘克隆与模拟酸雨胁迫下的表达分析
他蛋白互作等途径袁调控一些启动子中含有 郧悦悦 盒的
下游靶标基因作用袁以维持体内物质和能量代谢平衡袁
提高青花菜在酸雨逆境中的适应能力遥 月则耘砸云圆 的表
达量在达到最大值时逐渐下降袁这可能是因为酸雨侵
入细胞袁降低细胞内 责匀 值袁线粒体尧叶绿体等细胞结
构被破坏袁月则耘砸云圆 皂砸晕粤 等核糖核酸合成受阻袁使得
月则耘砸云圆 基因表达量降低曰月则耘砸云圆 基因诱导的下游表
达基因大量表达后袁使青花菜对逆境已经适应袁不再诱
导 月则耘砸云圆 表达或诱导能力减弱曰下游基因的表达对
月则耘砸云圆 产生抑制作用袁导致 月则耘砸云圆 表达量下降遥 此
外袁其相对表达量的变化趋势袁也可能是青花菜在不同
生长不育阶段本身表达的差异袁由于本试验没有设计
不同取样时间未经过酸雨处理的对照袁该基因表达量
的变化是否受青花菜在不同生长不育阶段本身表达差
异的影响袁还待后续试验继续探讨遥
同源比对发现袁除 阅晕粤结合域外袁青花菜 月则耘砸云圆
编码蛋白与拟南芥尧甘蓝等其它植物的 耘砸云蛋白存在
多个氨基酸序列完全一致袁如 酝再郧匝尧孕杂杂悦云栽耘杂宰尧
砸灾晕杂郧耘孕阅孕灾砸陨等袁这些序列的生物学功能也需要进
行深入探索遥
源摇 结论
本研究应用 砸粤悦耘 技术对青花菜 耘砸云 基因进行
克隆袁获得了全长为 怨缘愿 遭责的 糟阅晕粤袁 郧藻灶月葬灶噪登录号
为 运云苑员缘愿缘圆遥 该基因编码的蛋白定位于细胞核袁是亲
水碱性蛋白袁二级结构多为无规则卷曲袁其中 粤造葬含量
最高袁并含有一个 阅晕粤 结合域袁没有跨膜结构域和信
号肽遥 该基因编码的蛋白是一种生长因子的可能性最
大袁而其具有翻译功能的可能性居次遥 荧光定量分析
表明袁该基因参与了青花菜抗酸雨胁迫的应答机制遥
本试验结果为进一步研究该基因在青花菜生长发育中
的作用和酸雨胁迫下 耘砸云的抗性机制奠定了基础袁也
为青花菜的抗酸性育种积累了资料遥
参考文献院
咱 员 暂摇 郧怎贼贼藻则泽燥灶 晕袁 砸藻怎遭藻则 栽 蕴援 砸藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 凿蚤泽藻葬泽藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 责葬贼澡憎葬赠泽
遭赠 粤孕圆 辕 耘砸云 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽 咱 允暂 援 悦怎则则藻灶贼 韵责蚤灶蚤燥灶 蚤灶 孕造葬灶贼
月蚤燥造燥早赠袁 圆园园源袁 苑渊源冤院 源远缘 原 源苑员
咱 圆 暂摇 在澡怎葬灶早 允袁 悦澡藻灶 允 酝袁 再葬燥 匝 匀袁 载蚤燥灶早 云袁 杂怎灶 悦匀 悦袁 在澡燥怎 载 砸袁
在澡葬灶早 允袁 载蚤燥灶早 粤 杂援 阅蚤泽糟燥增藻则赠 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
粤孕圆 辕 耘砸云 枣葬皂蚤造赠 早藻灶藻泽 枣则燥皂 栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂 咱 允 暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则
月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼泽袁 圆园员员袁 猿愿渊圆冤院 苑源缘 原 苑缘猿
咱 猿 暂摇 粤造造藻灶 酝 阅袁 再葬皂葬泽葬噪蚤 运袁 韵澡皂藻 栽葬噪葬早蚤 酝袁 栽葬贼藻灶燥 酝袁 杂怎扎怎噪蚤 酝援 粤
灶燥增藻造 皂燥凿藻 燥枣 阅晕粤 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 遭赠 葬 茁 原 泽澡藻藻贼 则藻增藻葬造藻凿 遭赠 贼澡藻
泽燥造怎贼蚤燥灶 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 贼澡藻 郧悦悦鄄遭燥曾 遭蚤灶凿蚤灶早 凿燥皂葬蚤灶 蚤灶 糟燥皂责造藻曾 憎蚤贼澡
阅晕粤咱允暂援 栽澡藻 耘酝月韵 允燥怎则灶葬造袁 员怨怨愿袁 员苑渊员愿冤院 缘源愿源 原 缘源怨远
咱 源 暂 摇 韵噪葬皂怎则燥 允 运袁 悦葬泽贼藻则 月袁 灾蚤造造葬则则燥藻造 砸袁 灾葬灶 酝燥灶贼葬早怎 酝袁 允燥枣怎噪怎 运
阅援 栽澡藻 粤孕圆 凿燥皂葬蚤灶 燥枣 粤孕耘栽粤蕴粤圆 凿藻枣蚤灶藻泽 葬 造葬则早藻 灶藻憎 枣葬皂蚤造赠 燥枣
阅晕粤 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 咱 允 暂 援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻
晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 员怨怨苑袁 怨源渊员猿冤院 苑园苑远 原 苑园愿员
咱 缘 暂 摇 卢丞文袁 潘晓琪袁 朱本忠援 耘砸云泽 转录因子及其在植物胁迫应答
中的作用咱允暂 援 生物技术通报袁 圆园员圆袁 渊猿冤院 圆圆 原 圆苑
咱 远 暂 摇 郧葬燥 杂袁 在澡葬灶早 匀袁 栽蚤葬灶 再袁 蕴蚤 云袁 在澡葬灶早 在 匀袁 蕴怎 载袁 悦澡藻灶 载袁 匀怎葬灶早
砸援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 栽耘砸云员 蚤灶 则蚤糟藻 则藻早怎造葬贼藻泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 泽贼则藻泽泽鄄
则藻泽责燥灶泽蚤增藻 早藻灶藻泽 葬灶凿 藻灶澡葬灶糟藻泽 贼燥造藻则葬灶糟藻 贼燥 凿则燥怎早澡贼 葬灶凿 澡蚤早澡鄄泽葬造蚤灶蚤贼赠
咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 砸藻责燥则贼泽袁 圆园园愿袁 圆苑渊员员冤院 员苑愿苑 原 员苑怨缘
咱 苑 暂 摇 悦澡葬皂责蚤燥灶 粤袁 匀佴遭则葬则凿 耘袁 孕葬则则葬 月袁 月燥怎则灶葬怎凿 悦袁 酝葬则皂藻赠 孕袁
栽则葬灶糟澡葬灶贼 悦 匀袁 晕蚤糟燥造藻 酝援 酝燥造藻糟怎造葬则 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 葬灶凿 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
燥枣 糟燥贼贼燥灶 耘砸云 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽 则藻增藻葬造 贼澡葬贼 早则燥怎责 陨载葬 皂藻皂遭藻则泽 葬则藻
则藻泽责燥灶泽蚤增藻 贼燥 躁葬泽皂燥灶葬贼藻袁 藻贼澡赠造藻灶藻 葬灶凿 载葬灶贼澡燥皂燥灶葬泽咱 允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则
孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 员园渊源冤院 源苑员 原 源愿缘
咱 愿 暂 摇 郧怎 再 匝袁 再葬灶早 悦袁 栽澡葬则葬 灾 运袁 在澡燥怎 允袁 酝葬则贼蚤灶 郧 月援 孕贼蚤源 蚤泽 蚤灶凿怎糟藻凿
遭赠 藻贼澡赠造藻灶藻 葬灶凿 泽葬造蚤糟赠造蚤糟 葬糟蚤凿袁 葬灶凿 蚤贼泽 责则燥凿怎糟贼 蚤泽 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼藻凿 遭赠
贼澡藻 孕贼燥 噪蚤灶葬泽藻咱 允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造 韵灶造蚤灶藻袁 圆园园园袁 员圆渊缘冤院 苑苑员 原
苑愿缘
咱 怨 暂 摇 李聪袁 郭天麒袁 梁小红袁 王英博袁 韩烈保援 植物 耘砸云泽 类转录因
子在逆境胁迫中的作用咱允暂 援 生物技术通报袁 圆园员员袁 渊源冤院 员 原 远
咱员园暂摇 载怎 在 杂袁 载蚤葬 蕴 匝袁 悦澡藻灶 酝袁 悦澡藻灶早 载 郧袁 在澡葬灶早 砸 再袁 蕴蚤 蕴 悦匀袁
在澡葬燥 再 载袁 蕴怎 再袁 晕蚤 在匀 再袁 蕴蚤怎 蕴援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则
糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂 蕴援 藻贼澡赠造藻灶藻鄄则藻泽责燥灶泽蚤增藻
枣葬糟贼燥则 员 渊 栽葬耘砸云员 冤 贼澡葬贼 蚤灶糟则藻葬泽藻泽 皂怎造贼蚤责造藻 泽贼则藻泽泽 贼燥造藻则葬灶糟藻 咱 允暂 援
孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 远缘渊远冤院 苑员怨 原 苑猿圆
咱员员暂摇 张赟袁 李代兴援 我国酸雨污染现状及其防治措施初探咱允暂 援 北方
环境袁 圆园员员袁 猿渊愿冤院 员圆员 原 员圆圆
咱员圆暂摇 解淑艳袁 王瑞斌袁 郑皓皓援 圆园园缘 原 圆园员员 年全国酸雨状况分析
咱允暂 援 环境监控与预警袁 圆园员圆袁 源渊缘冤院 猿猿 原 猿苑
咱员猿暂摇 田海军袁 宋存义援 酸雨的形成机制窑危害及治理措施咱 允暂 援 农业
灾害研究袁 圆园员圆袁 圆渊缘冤院 圆园 原 圆圆
咱员源暂摇 孙水娟袁 文倩袁 谢平袁肖吉林援 酸雨对生物圈的影响研究咱 允暂 援
安徽农业科学袁 圆园员圆袁 源园渊员园冤院 远员缘远 原 远员缘怨
咱员缘暂摇 侯维袁 潘远智援 酸雨对勋章菊保护酶活性及叶绿素荧光参数的
影响咱允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁 圆苑 渊苑冤院 员园缘源 原 员园缘怨
咱员远暂摇 匀燥早葬灶 郧 阅援 耘枣枣藻糟贼 燥枣 泽蚤皂怎造葬贼藻凿 葬糟蚤凿 则葬蚤灶 燥灶 责澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 早则燥憎贼澡 葬灶凿
枣燥造蚤葬则 灶怎贼则蚤藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 泽怎早葬则 皂葬责造藻 咱 允暂 援 悦澡藻皂燥泽责澡藻则藻袁
员怨怨愿袁 猿远渊源冤院 远猿猿 原 远猿愿
咱员苑暂摇 赵卫红援 福建省城市酸性降水特征及变化趋势咱允暂 援 云南环境科
学袁 圆园园远袁 圆缘渊猿冤院 源愿 原 缘员
咱员愿暂摇 陈琼娥援 草莓果实 糟阅晕粤鄄粤云蕴孕 技术体系构建及 哉云郧栽 基因克
隆咱阅暂援 福州院 福建农林大学袁 圆园员圆院源怨 原 缘缘
咱员怨暂摇 张晓琳袁 柴晓杰袁 张婷袁 余祝君袁 薛飞援 盐藻 悦阅孕运 基因的克隆
与生物信息学分析咱允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁 圆苑渊源冤院 源员愿 原 源圆源
咱圆园暂摇 孙宏伟袁 李艳军袁 王雅琴袁 刘永昌袁 薛飞袁 孙杰援 棕色棉 郧澡粤晕杂
基因的克隆与表达分析咱允暂 援 核农学报袁 圆园员源袁圆愿渊圆冤院 圆园园 原 圆园苑
咱圆员暂摇 耘造蚤扎葬遭藻贼澡 杂 蕴袁 阅怎 郧 宰袁 云则燥澡皂葬灶 酝 粤援 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 缘忆 藻灶凿
糟阅晕粤 憎蚤贼澡 灶藻憎 砸粤悦耘 咱允暂 援 晕葬贼怎则藻 孕则燥贼燥糟燥造泽袁 圆园园苑袁 员 渊远冤院猿园缘远
原 猿园远员
员园员圆
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊员员冤院圆园怨猿 耀 圆员园圆
咱圆圆暂 摇 徐烨袁 刘雅婷袁 代文琼袁 朱晓媛袁 陈雪娇袁 仵发静袁 智龙袁 王曼
君援 几种主要的 砸粤悦耘 技术及应用咱 允暂 援 中国农业科技导报袁
圆园员圆袁 员源渊圆冤院 愿员 原 愿苑
咱圆猿暂 摇 在澡葬灶早 在袁 再葬燥 宰袁 阅燥灶早 晕袁 蕴蚤葬灶早 匀袁 蕴蚤怎 匀袁 匀怎葬灶早 砸援 粤 灶燥增藻造
耘砸云 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 葬糟贼蚤增葬贼燥则 蚤灶 憎澡藻葬贼 葬灶凿 蚤贼泽 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 噪蚤灶藻贼蚤糟泽 葬枣贼藻则
责葬贼澡燥早藻灶 葬灶凿 澡燥则皂燥灶藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 咱 允 暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造
月燥贼葬灶赠袁 圆园园苑袁 缘愿渊员员冤院 圆怨怨猿 原 猿园园猿
咱圆源暂 摇 运蚤扎蚤泽 阅援 酝葬蚤扎藻 阅砸耘 ‐ 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 阅月云员 葬灶凿 阅月云圆 葬则藻
蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 则葬遭员苑 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 贼澡则燥怎早澡 贼澡藻 凿则燥怎早澡贼 ‐ 则藻泽责燥灶泽蚤增藻
藻造藻皂藻灶贼 蚤灶 葬灶 粤月粤 ‐ 凿藻责藻灶凿藻灶贼 责葬贼澡憎葬赠咱 允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁
圆园园圆袁 猿园渊远冤院 远苑怨 原 远愿怨
咱圆缘暂 摇 蕴燥则藻灶扎燥 韵袁 孕蚤择怎藻则葬泽 砸袁 杂佗灶糟澡藻扎鄄杂藻则则葬灶燥 允 允袁 杂燥造葬灶燥 砸援
耘栽匀再蕴耘晕耘 砸耘杂孕韵晕杂耘 云粤悦栽韵砸员 蚤灶贼藻早则葬贼藻泽 泽蚤早灶葬造泽 枣则燥皂 藻贼澡赠造藻灶藻
葬灶凿 躁葬泽皂燥灶葬贼藻 责葬贼澡憎葬赠泽 蚤灶 责造葬灶贼 凿藻枣藻灶泽藻咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造 韵灶造蚤灶藻袁
圆园园猿袁 员缘渊员冤院 员远缘 原 员苑愿
咱圆远暂 摇 郧燥灶扎佗造藻扎鄄蕴葬皂燥贼澡藻 砸袁 月燥赠造藻 孕袁 阅怎造怎凿藻 粤袁 砸燥赠 灾袁 造藻扎蚤灶鄄阅燥怎皂遭燥怎
悦袁 运葬怎则 郧 杂袁 月燥怎葬则葬遭 运袁 阅藻泽责则藻泽 悦 匀袁 月则蚤泽泽燥灶 晕援 栽澡藻
贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造 葬糟贼蚤增葬贼燥则 孕贼蚤源 蚤泽 则藻择怎蚤则藻凿 枣燥则 贼澡藻 则藻糟则怎蚤贼皂藻灶贼 燥枣 葬
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