全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员源愿苑 耀 员源怨猿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园远鄄圆源摇 接受日期院圆园员缘鄄园源鄄圆苑
基金项目院国家自然科学基金项目渊猿员源园员愿苑员冤袁江苏省自主创新资金项目渊悦载渊员圆冤圆园园源冤袁江苏省科技支撑项目渊月耘圆园员源猿远怨冤
作者简介院张振超袁男袁助理研究员袁主要从事蔬菜遗传育种与栽培技术研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎扎糟远缘源猿圆员岳 择择援 糟燥皂
通讯作者院戴忠良袁男袁研究员袁主要从事蔬菜种质资源重新与遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院凿葬蚤扎澡燥灶早造蚤葬灶早圆园园愿岳 员远猿援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园愿鄄员源愿苑鄄园苑
青花菜与甘蓝型油菜小孢子共培养技术研究
张振超员 摇 潘跃平员 摇 毛忠良员 摇 颜志明圆 摇 吴国平员 摇 姚悦梅员
秦文斌员 摇 解振强圆 摇 戴忠良员
渊员 江苏丘陵地区镇江农业科学研究所袁江苏 句容摇 圆员圆源园园曰圆 江苏农林职业技术学院袁江苏 句容摇 圆员圆源园园冤
摘摇 要院研究易出胚基因型与难出胚基因型小孢子共培养袁可促进难出胚基因型小孢子胚胎发育袁提高产
胚率遥 本研究以易出胚甘蓝型油菜渊在杂苑缘愿冤基因型与难出胚青花菜渊匝员 和 匝圆冤基因型为试材进行小孢
子混合培养袁研究不同数量花蕾混合共培养对青花菜小孢子胚胎诱导效率尧胚胎发育过程尧胚状体数量
及类型和植株再生遥 结果表明院共培养中青花菜和油菜小孢子胚胎发育过程基本一致曰不同处理中袁
栽员 原 猿渊圆 个青花菜 匝员 花蕾 垣员园 个 在杂苑缘愿 花蕾冤和 栽圆 原 猿渊圆 个青花菜 匝圆 花蕾 垣 员园 个 在杂苑缘愿 花蕾冤每蕾
平均出胚数分别为 员圆郾 缘 个和 员源郾 员 个尧子叶型胚比例分别为 苑愿郾 猿豫和 愿员郾 苑豫 尧小孢子胚萌发率分别为
怨圆郾 远豫和 愿苑郾 远豫 袁均显著高于对照曰栽员 原 圆渊远 个青花菜 匝员 花蕾 垣远 个 在杂苑缘愿 花蕾冤和 栽圆 原 圆渊远 个青花菜
匝圆 花蕾 垣远 个 在杂苑缘愿 花蕾冤获得的青花菜小孢子再生植株数最多袁分别为 员猿 株和 圆苑 株曰青花菜和油菜
小孢子再生植株形态特征差异显著袁易于区分遥 此方法不仅能有效促进难出胚青花菜基因型胚胎发育
获得胚状体袁而且提高了子叶型胚所占比例袁对提高小孢子培养应用效率具有重要意义遥
关键词院青花菜曰小孢子培养曰胚胎发生曰共培养
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园愿援 员源愿苑
摇 摇 游离小孢子培养技术在种质资源创新尧双单倍体
渊阅匀冤纯系获取尧分子生物学及遗传育种方面所具有
广阔的应用前景咱员 原 猿暂 遥 在前人共同努力下袁青花菜游
离小孢子培养技术体系得以不断优化并初步建立袁然
而受到环境条件尧基因型尧培养技术等的影响袁基因型
应用范围尧胚胎发生率尧胚的质量等存在很大差异袁从
而限制了小孢子培养技术在青花菜遗传育种和基础研
究中的进一步应用咱源 原 苑暂 遥
研究发现袁小孢子胚胎发生能力主要是受基因型
影响袁而且是可以遗传的咱愿暂 遥 刘泽等咱怨暂 尧方淑桂等咱员园暂
分别用甘蓝型油菜尧芥菜型油菜和结球甘蓝易出胚基
因型与顽固基因型杂交种进行游离小孢子培养袁发现
顽固基因型获得了一定的胚胎发生能力袁而其胚产量
受母本的影响较大遥 陈文辉等咱员员暂以甘蓝和青花菜的
杂种及相应亲本为试验材料袁发现亲本相同的 云员 正反
交材料出胚率没有明显差异袁杂种的出胚率介于父母
本之间遥 张凤兰等咱员圆暂研究甘蓝型油菜小孢子胚胎发
育能力的遗传规律时发现袁多数 云员 的胚产量与易出胚
亲本相近袁部分的胚产量与双亲中亲值接近袁由此认为
甘蓝型油菜胚胎发生能力主要由基因的加性效应控
制袁胚胎发生能力由基因的加性和显性效应控制袁以加
性效应为主遥 不同基因型间小孢子胚胎发育状况存在
差异袁表明小孢子胚胎发生能力具有受基因调控的遗
传特性遥 因此可以通过有性杂交袁将易出胚基因型具
有的胚胎发生能力转移到低或无反应的基因型上遥
前人在单子叶和茄科作物花药 辕小孢子培养时与
同源或异源子房共培养袁明显促进了胚胎发育袁并最终
获得了绿体植株咱员猿 原 员缘暂 袁但在芸薹属作物小孢子共培养
方面的研究鲜见报道遥 本文以 圆 个青花菜品种 匝员 和
匝圆 与油菜 在杂 苑缘愿 游离小孢子共培养袁研究共培养过
程中小孢子胚胎发育尧植株再生及小孢子植株群体中
植株类型鉴定等袁为小孢子培养技术应用提供新思
路遥
苑愿源员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
以镇江农科所蔬菜花卉研究室选育的 圆 个青花菜
品种渊匝员尧匝圆冤及甘蓝型油菜品种 在杂苑缘愿 为试材袁试验在
镇江农科所行香基地进行遥 青花菜于 圆园员猿 年 愿 月下旬
采用基质 垣穴盘育苗袁怨 月下旬优选生长旺盛尧无病虫
害的植株定植于连栋温室遥 油菜在 圆园员猿 年 怨 月中下旬
田间育苗袁猿 耀 源 片叶时移栽到大田遥 圆园员源 年 猿 耀 源 月袁
室外平均温度在 员园 耀圆园益时袁取单核晚期至双核早期的
花蕾进行游离小孢子培养遥 常规田间管理遥
员郾 圆摇 小孢子分离与培养方法
员郾 圆郾 员摇 花蕾的选择摇 分别从无病害植株上选取健康
饱满的青花菜和油菜花序袁显微观察不同大小花蕾小
孢子发育时期袁以 孕 辕 粤渊花瓣 辕花药冤比值作为选取单
核晚期至双核早期花蕾的标准渊青花菜 孕 辕 粤 越 园郾 愿 耀
员郾 圆袁油菜 孕 辕 粤 越 园郾 缘 耀 园郾 苑缘冤 咱员袁员远暂 遥
员郾 圆郾 圆摇 共培养试验设计 摇 圆 个青花菜基因型 匝员 和
匝圆 分别与油菜品种 在杂苑缘愿 花蕾共培养袁每处理选取
员圆 个花蕾袁其数目比值见表 员 和表 圆遥 试验设 猿 次重
复遥
表 员摇 匝员 与 在杂苑缘愿 小孢子共培养的花蕾数目比值
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 遭怎凿 则葬贼蚤燥 燥枣 匝员 葬灶凿 在杂苑缘愿 蚤灶
皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟燥鄄糟怎造贼怎则藻
品种
灾葬则蚤藻贼蚤藻泽
处理 栽则藻葬贼皂藻灶贼泽
悦运员 栽员 原 员 栽员 原 圆 栽员 原 猿 悦运猿
匝员 员圆 员园 远 圆 园
在杂苑缘愿 园 圆 远 员园 员圆
表 圆摇 匝圆 与 在杂苑缘愿 小孢子共培养的花蕾数目比值
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 遭怎凿 则葬贼蚤燥 燥枣 匝圆 葬灶凿 在杂苑缘愿 蚤灶
皂蚤糟则燥泽责燥则藻 糟燥鄄糟怎造贼怎则藻
品种
灾葬则蚤藻贼蚤藻泽
处理 栽则藻葬贼皂藻灶贼泽
悦运圆 栽圆 原 员 栽圆 原 圆 栽圆 原 猿 悦运猿
匝圆 员圆 员园 远 圆 园
在杂苑缘愿 园 圆 远 员园 员圆
员郾 圆郾 猿摇 小孢子分离与培养摇 小孢子分离与培养参照
张振超等咱员暂的方法遥 在开花时袁从植株主花序上选取
愿园 豫处于单核晚期至双核早期的花蕾袁无菌条件下
缘郾 远 豫次氯酸钠溶液消毒 员缘 耀 圆园 皂蚤灶袁后用无菌水冲
洗 猿 耀 缘 次遥 无菌花蕾在 员园 皂蕴 晕蕴晕 原 员猿 培养液渊含
晕蕴晕大量尧微量尧铁盐和有机成分尧员猿 豫蔗糖袁责匀 值
远郾 园冤中轻轻捣碎袁并经 源园 滋皂尼龙网过滤袁滤液用 苑园园
则窑皂蚤灶 原员离心 缘 皂蚤灶袁去上清后加入 源园 皂蕴 晕蕴晕 原 员猿 液
体培养基袁并加入 员园 滴活性炭袁混匀遥 用移液器吸取
源 皂蕴小孢子悬浮液加入到 员园 个直径为 远园 皂皂培养皿
中袁孕葬则葬枣蚤造皂密封后放入到恒温培养箱中黑暗尧猿圆郾 缘 益
热击处理 员 耀 圆 凿后袁转至 圆缘益尧黑暗条件下静置培养遥
员缘凿左右出现肉眼可见胚状体时移至振荡培养箱中振
荡培养渊远园 则窑皂蚤灶 原员冤遥
员郾 猿摇 小孢子发育过程观察
培养过程中袁采用电子倒置显微镜渊 蕴耘陨悦粤 阅酝
陨砸月冤在 源园 伊 员园 倍镜头下对小孢子胚胎发育状况进行
观察袁并用 蕴耘陨悦粤成像系统渊蕴耘陨悦粤 阅云悦 猿园园 云载袁莱卡
显微系统公司袁德国冤进行拍照遥 采用日本 杂韵晕再
阅杂悦鄄宰猿园园 相机对胚状体和胚再生过程拍照遥
员郾 源摇 小孢子胚诱导和植株再生
小孢子胚在 晕蕴晕 原员猿 液体培养基中培养 圆缘 凿 左
右时袁将生长健康的胚状体转接到 月缘 固体分化培养
基渊月缘 培养基 垣 圆缘豫蔗糖 垣 员郾 圆豫琼脂袁责匀 值 远郾 园冤
上袁圆园 凿后统计增殖情况遥 后将生长良好的再生苗转
接到 员 辕 圆 酝杂 固体生根培养基渊员 辕 圆酝杂 培养基 垣 园郾 员
皂早窑蕴 原员 晕粤粤 垣 园郾 员皂早窑蕴 原员 陨粤粤 垣 圆园豫蔗糖 垣 园郾 苑豫琼
脂袁责匀 值 缘郾 愿 耀 远郾 园冤中袁在光照培养室渊圆缘益袁员源 澡 光
照尧员园澡黑暗冤中培养袁圆缘 耀 猿园 凿后进行驯化尧移栽遥
员郾 缘摇 小孢子再生植株移栽及植株类型鉴定
再生植株驯化移栽参照张振超等咱员苑暂的方法遥 将
生长健壮的小孢子再生植株驯化 缘 凿 后袁从培养瓶中
取出袁用自来水将植株根部的固体培养基冲洗干净袁后
栽入到装有育苗基质的穴盘中袁用塑料薄膜和黑色遮
阳网覆盖保湿遥 缘 凿 后光照不强烈时逐渐掀起塑料薄
膜和遮阳网袁给予适当阳光照射曰员园 凿 后去掉塑料薄
膜和遮阳网进行光照曰员缘 凿 后植株连同育苗基质一起
栽入到温室中遥 根据植株形态特征区别尧鉴定再生植
株群体中的植株类型袁统计各个基因型植株数量遥
员郾 远摇 数据分析
所得数据采用 杂粤杂软件进行差异显著性分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 共培养小孢子发育过程细胞学观察
显微镜下观察发现袁单核晚期至双核早期的小孢
子为圆球形渊图 员 原 粤冤袁热击处理 员 凿 后袁部分小孢子
体积明显膨大渊图 员 原 月鄄葬袁遭冤袁而对热击没有反应的小
愿愿源员
摇 愿 期 青花菜与甘蓝型油菜小孢子共培养技术研究
注院粤院热激前小孢子袁源愿园 伊 曰月院热激 员凿的小孢子渊葬为青花菜小孢子袁遭为 在杂苑缘愿 小孢子袁糟为未发育小孢子冤袁源园园 伊 曰悦院培养 缘凿 的小孢子渊凿 为
摇 摇 摇 青花菜小孢子袁藻为 在杂苑缘愿 小孢子袁枣为未发育小孢子冤袁源园园 伊 曰阅院心形胚袁源园 伊 曰耘院鱼雷形胚渊早冤和球形胚渊澡冤袁源园 伊 曰云院胚状体遥
晕燥贼藻院粤院 栽澡藻 皂蚤糟则燥泽责燥则藻泽 遭藻枣燥则藻 澡藻葬贼 泽澡燥糟噪袁 源愿园 伊 援 月院 栽澡藻 皂蚤糟则燥泽责燥则藻泽 葬枣贼藻则 员凿 泽澡燥糟噪 渊葬 蚤泽 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 燥枣 遭则燥糟糟燥造蚤援 遭 蚤泽 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 燥枣 在杂苑缘愿 葬灶凿 糟 蚤泽
怎灶凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 皂蚤糟则燥泽责燥则藻冤院 源园园 伊 援 悦院 栽澡藻 皂蚤糟则燥泽责燥则藻泽 葬枣贼藻则 缘凿 糟怎造贼怎则藻 渊凿 蚤泽 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 燥枣 遭则燥糟糟燥造蚤袁 藻 蚤泽 皂蚤糟则燥泽责燥则藻 燥枣 在杂苑缘愿 葬灶凿 枣 蚤泽 怎灶凿藻增藻造燥责皂藻灶贼
摇 摇 摇 皂蚤糟则燥泽责燥则藻冤 援 阅院 匀藻葬则贼鄄 造蚤噪藻 藻皂遭则赠燥援 耘院 栽燥则责藻凿燥鄄 造蚤噪藻 藻皂遭则赠燥 渊早冤 葬灶凿 早造燥遭葬造 藻皂遭则赠燥 渊澡冤援 云院 耘皂遭则赠燥蚤凿泽援
图 员摇 共培养小孢子胚胎发育变化过程
云蚤早援 员摇 酝蚤糟则燥泽责燥则藻 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 凿怎则蚤灶早 糟燥鄄糟怎造贼怎则藻
孢子体积无明显变化渊图 员 原 月鄄糟冤遥 圆缘益黑暗条件下
培养 缘凿后袁发现无反应的小孢子不再继续发育渊图 员
原 悦鄄枣冤曰膨大小孢子多次对称分裂后形成原胚渊图 员 原
悦鄄凿冤遥 原胚发育迅速袁培养 员缘 凿左右时即可肉眼观察
到心形渊图 员 原 阅冤尧球形渊图 员 原 阅鄄澡冤和鱼雷形胚渊图 员
原 耘鄄早冤遥 培养 圆园凿时袁胚陆续发育形成子叶型胚尧球形
和畸形胚渊图 员 原 云冤遥 然而袁小孢子发育是不同步的袁
除了生长发育较好的子叶型胚状体袁仍可以发现一些
小的尧正在发育的球形尧鱼雷形和子叶型胚状体渊图 员
原 云冤遥 对比发现袁共培养小孢子中的油菜小孢子呈深
黄色渊图 员 原 月鄄遭 和图 员 原 悦鄄藻冤袁其形态和颜色与青花
菜小孢子相比有明显区别遥
圆郾 圆摇 不同共培养处理小孢子胚胎发育情况
培养 圆缘凿左右时袁小孢子发育形成胚状体袁然而不
同处理小孢子出胚率差异明显 渊表 猿尧图 圆冤遥 悦运猿
渊在杂苑缘愿 单独培养冤平均每蕾出胚数最高袁为 员远郾 愿 个袁
与其它处理相比差异明显遥 其次是 栽员 原 猿渊圆 个 匝员 花
蕾 垣员园 个 在杂苑缘愿 花蕾冤和 栽圆 原 猿渊圆 个 匝圆 花蕾 垣 员园 个
在杂苑缘愿 花蕾冤袁平均每蕾出胚数分别为 员圆郾 缘 个和 员源郾 员
个袁两者之间没有明显差异遥 栽圆 原 圆渊远 个 匝圆 花蕾 垣 远
个 在杂苑缘愿 花蕾冤和 栽圆 原 员渊员园 个 匝圆 花蕾 垣 圆 个 在杂苑缘愿
花蕾冤平均每蕾出胚数为 愿郾 远 个和 缘郾 缘 个袁分别高于
栽员 原 圆渊远 个 匝员 花蕾 垣 远 个 在杂苑缘愿 花蕾冤和 栽员 原 员渊员园
个 匝员 花蕾 垣 圆 个 在杂苑缘愿 花蕾冤每蕾出胚数渊源郾 苑 个和
员郾 猿 个冤遥 悦运员渊匝员冤和 悦运圆渊匝圆冤出胚率均较低袁平均
每个花蕾出胚数分别为 园郾 愿 个和 员郾 圆 个遥
通过小孢子培养技术得到的胚状体中袁子叶型胚
更易于直接萌发成苗遥 在表 圆 中袁对照 悦运猿渊在杂苑缘愿冤
出胚率最高袁其中子叶型胚所占比例为 怨园郾 圆豫 袁显著
高于其它处理曰栽员 原 猿 和 栽圆 原 猿 处理中袁在杂苑缘愿 花蕾数
量多于青花菜袁得到的胚状体数量较多袁其中子叶型胚
所占比例分别为 苑愿郾 猿豫和 愿员郾 苑豫 袁显著高于其它共培
养处理遥 栽员 原 圆 和 栽圆 原 圆 获得的子叶型胚所占比例分
别为 源圆郾 远豫 和 缘愿郾 缘豫 袁均大于 栽员 原 员 和 栽圆 原 员 的
圆猿郾 员豫和 猿缘郾 圆豫 遥 悦运员 和 悦运圆 子叶型胚比例均最少
为 园 和 员源郾 怨豫 遥 由此发现袁不同处理中获得的子叶型
胚所占比例与油菜花蕾所占比例呈显著正相关遥 油菜
花蕾数量多时袁子叶型胚状体所占比例也较多遥
结果表明袁在 圆 个青花菜品种渊匝员 和 匝圆冤小孢子
培养中袁与易出胚油菜品种渊在杂苑缘愿冤花蕾共培养不仅
能促进青花菜胚胎发育获得胚状体袁而且能提高子叶
型胚所占比例遥 另外袁基因型障碍也对共培养小孢子
胚胎发育有重要影响遥
怨愿源员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
表 猿摇 不同共培养处理对胚胎发育尧子叶型胚比例尧胚状体萌发尧植株再生和油菜占比的影响
栽葬遭造藻 猿摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥鄄糟怎造贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥灶 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 葬灶凿 责造葬灶贼造藻贼泽 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
处理
栽则藻葬贼皂藻灶贼泽
平均每蕾出胚数
晕燥援 燥枣 藻皂遭则赠燥泽
责藻则 遭怎凿 辕个
子叶型胚比例
云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣糟燥贼赠造藻凿燥灶鄄 贼赠责藻
藻皂遭则赠燥泽 辕 豫
胚状体萌发率
云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 藻皂遭则赠燥
早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 辕 豫
小孢子再生植株数
晕燥援 燥枣 酝阅责造葬灶贼造藻贼泽 辕栋
油菜植株所占比例
云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 燥蚤造泽藻藻凿
责造葬灶贼造藻贼泽 辕 豫
悦运员 园郾 愿藻枣 园郾 园早 园郾 园早 园郾 园澡 园郾 园藻
栽员 原 员 员郾 猿藻 圆猿郾 员枣 猿缘郾 缘藻 远郾 园早 猿园郾 园糟
栽员 原 圆 源郾 苑凿 源圆郾 远凿 远源郾 远凿 猿远郾 园藻枣 远源郾 缘遭
栽员 原 猿 员圆郾 缘遭 苑愿郾 猿遭 愿苑郾 远遭 员猿员郾 园遭糟 怨苑郾 缘葬遭
悦运圆 员郾 圆藻 员源郾 怨 圆愿郾 愿枣 源郾 园早 园郾 园藻
栽圆 原 员 缘郾 缘凿 猿缘郾 圆凿藻 远圆郾 缘凿 源员郾 园藻 猿圆郾 园糟
栽圆 原 圆 愿郾 远糟 缘愿郾 缘糟 苑源郾 远遭糟 苑苑郾 园凿 远缘郾 园遭
栽圆 原 猿 员源郾 员葬遭 愿员郾 苑遭 怨圆郾 远葬 员缘缘郾 园遭 怨远郾 缘葬遭
悦运猿 员远郾 愿葬 怨园郾 圆葬 怨源郾 缘葬 员怨园郾 园葬 员园园郾 园葬
摇 摇 注院根据 阅怎灶糟葬灶测验袁表中各个材料类型的不同小写字母表示差异显著水平渊责 约 园郾 园缘冤遥
晕燥贼藻院 宰蚤贼澡蚤灶 贼澡藻 糟燥造怎皂灶袁 皂藻葬灶泽 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 贼澡藻 泽葬皂藻 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则 葬则藻 灶燥贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬贼 贼澡藻 园郾 园缘 造藻增藻造 燥枣 责则燥遭葬遭蚤造蚤贼赠 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽遥
图 圆摇 不同共培养处理对小孢子胚状体产量的效果
云蚤早援 圆摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥鄄糟怎造贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥灶 藻皂遭则赠燥蚤凿泽 赠蚤藻造凿
圆郾 猿摇 小孢子胚萌发尧植株再生及植株类型鉴定
不同类型胚状体在 晕蕴晕 原 员猿 液体培养基中培养
圆缘 凿左右时袁转接到 月缘 固体培养基上进行培养遥 培
养 员园 凿后观察发现院悦运员 胚状体均为畸形胚袁其萌发
率为 园曰悦运圆 胚萌发率较好为 圆愿郾 愿 豫 曰悦运猿 胚萌发率
最好袁为 怨源郾 缘豫 遥 不同处理中袁栽圆 原 猿 胚萌发率最高为
怨圆郾 远 豫 袁其次是 栽员 原 猿袁萌发率为 愿苑郾 远 豫 袁随后依次为
栽圆 原 圆 跃 栽员 原 圆 跃 栽圆 原 员 跃 栽员 原 员遥
转接培养 猿凿后袁不同类型胚状体形态发育存在差
异遥 子叶型胚表现为直立生长袁上部变绿色袁下部长出
根毛袁并且逐渐从胚顶端生长点处抽生出芽袁继续生长
成苗渊图 猿 原 粤冤曰心形胚和球形胚也变绿色袁长出白色
根毛袁但其不能直接抽生芽袁而是形成愈伤组织袁有部
分会死亡袁也有部分长出苗渊图 猿 原 月冤曰畸形胚在转接
后不久会逐渐白化尧死亡渊图 猿 原 悦冤遥
根系生长健壮的小孢子再生植株经驯化后移栽到
温室遥 自然条件下生长 猿园 凿时袁对群体的植株类型进
行鉴定袁由于青花菜的植株外形与生长势与油菜相比
差异显著袁易于区分遥 结果发现袁共培养得到的植株群
体中 匝员 和 匝圆 数量均多于对照袁其中 栽员 原 圆 和 栽圆 原 圆
得到植株数最多袁分别为 员猿 株和 圆苑 株袁其余均为油菜
再生植株遥
园怨源员
摇 愿 期 青花菜与甘蓝型油菜小孢子共培养技术研究
注院粤院 胚状体直接萌发成苗曰月院 胚状体形成愈伤组织曰悦院 胚状体成苗渊白色箭头指示冤及死亡渊黑色箭头指示冤遥
晕燥贼藻院粤院 耘皂遭则赠燥蚤凿泽 早藻则皂蚤灶葬贼藻凿 蚤灶贼燥 责造葬灶贼造藻贼泽援 月院 耘皂遭则赠燥蚤凿泽 凿藻增藻造燥责藻凿 蚤灶贼燥 糟葬造造怎泽援 悦院 耘皂遭则赠燥蚤凿 早藻则皂蚤灶葬贼藻凿 蚤灶贼燥 责造葬灶贼造藻贼泽
渊憎澡蚤贼藻 葬则则燥憎冤 葬灶凿 凿藻葬凿 渊遭造葬糟噪 葬则则燥憎冤援
图 猿摇 不同类型胚状体萌发情况
云蚤早援 猿摇 郧藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 泽贼葬贼怎泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼赠责藻泽 藻皂遭则赠燥蚤凿泽援
猿摇 讨论
近年来袁虽然青花菜小孢子培养技术体系得到不
断优化和完善袁但基因型障碍依然是影响小孢子出胚
和再生的重要因素遥 前人通过在小孢子诱导培养基中
添加激素咱圆暂 尧甘露醇咱员愿暂 尧秋水仙碱咱员怨暂 尧粤早晕韵猿 咱圆园暂等袁在
培养过程中添加和更换培养基咱圆员暂 袁均能促进小孢子胚
胎发育袁但其效果因不同基因型而异遥 另外袁温度预处
理袁如高温热击袁能有效刺激小孢子从配子体发育途径
转向到孢子体发育途径袁从而诱导小孢子胚胎的形成袁
此方法被广泛使用咱圆圆暂 遥 共培养处理对诱导小孢子胚
状体形成及愈伤组织生芽生根有明显作用遥 在大麦尧
小麦尧玉米和辣椒的花药 辕小孢子培养时袁在培养基中
加入同源或异源子房可以促进多细胞结构和胚型结构
形成袁并最终形成绿体植株袁其效果优于颖壳尧麦芒和
花咱员猿 原 员缘袁 圆猿 原 圆源暂 遥 至于共培养的作用机理袁前人研究认
为袁易出胚基因型材料在共培养过程中可能会释放出
植物生长素类物质袁如 孕粤粤 或类似物袁或其它未知的
看护因子袁它们会改变小孢子细胞结构和营养物质成
分袁促进胚胎发育咱圆缘 原 圆远暂 遥
本试验所选用的 圆 个青花菜基因型 匝员 和 匝圆 在
单独进行小孢子培养时袁出胚率和胚再生率存在差异遥
在获得的胚状体中袁匝员 培养得到的多为球形胚和畸形
胚袁没有健康的子叶型胚袁而 匝圆 子叶型胚所占比例为
员源郾 怨 豫 遥 与 在杂苑缘愿 小孢子共培养后袁不同处理的出胚
率和再生率均得到提高袁而胚状体中子叶型胚所占比
例也有所提高遥 子叶型胚具有萌发生成再生植株的潜
力袁而球形胚和畸形胚多会逐渐白化尧死亡咱圆苑 原 圆怨暂 遥 因
此袁把难出胚青花菜与易出胚油菜基因型小孢子共培
养袁不仅促进了顽固基因型小孢子胚胎发育袁而且提高
了胚状体中子叶型胚的比例袁对胚状体萌发成苗有重
要作用遥 此外不同作物共培养袁其植株形态特征差异
明显袁易于区分袁方法简单袁操作方便遥
源摇 结论
供体植株的基因型障碍是影响青花菜小孢子胚胎
发育和再生的重要因素遥 本试验在前人研究的基础
上袁采用易出胚油菜基因型与不同青花菜基因型小孢
子共培养的方式袁通过显微观察混合小孢子在培养过
程中的发育状况袁明确了油菜与青花菜花蕾数比值为
员颐 员时袁小孢子培养发育和再生效率较高袁得到的青花
菜再生植株数也较多遥 易出胚油菜基因型与难出胚青
花菜小孢子共培养袁对促进顽固基因型小孢子胚胎发
育袁提高胚状体质量及萌发成苗有重要作用袁且油菜与
青花菜植株形态特征差异明显袁在田间生长期间易于
区分遥 虽然不同作物共培养的方法在本试验中取得了
成功袁但在其它作物中是否适用袁有待进一步研究遥
参考文献院
咱 员 暂摇 张振超袁耿鑫鑫袁戴忠良袁潘跃平袁王兵袁许玲袁颜志明袁周伟军援甘
蓝类植物小孢子培养及植株再生研究咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁圆苑
渊苑冤院 怨圆怨 原 怨猿苑
咱 圆 暂摇 王五宏袁叶国锐袁李必元袁岳智臣袁钟新民援 结球甘蓝小孢子胚诱
导与植株再生咱允暂 援核农学报袁圆园员猿袁圆苑渊远冤院 苑员缘 原 苑圆圆
咱 猿 暂摇 顾宏辉袁胡林军袁周伟军援 小孢子培养技术在芸薹属作物育种上
的应用研究进展咱 允暂 援 农业生物技术学报袁圆园园源袁员圆渊圆冤院 圆员怨 原
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咱 缘 暂摇 张延国袁王晓武援小孢子培养技术在青花菜上的应用咱允暂 援中国蔬
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咱 远 暂摇 王春丽袁王涛涛袁张余洋袁李汉霞援青花菜小孢子胚植株再生及倍
性研究咱允暂 援 中国蔬菜袁 圆园员园袁渊源冤院 猿远 原 源园
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蓝和青花菜小孢子胚植株再生咱 允暂 援 植物学报袁圆园员园袁 源缘 渊圆冤院
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生能力的遗传分析咱允暂 援作物学报袁 圆园园园袁 圆远渊员冤院 员园源 原 员园怨
咱员园暂摇 方淑桂袁陈文辉袁曾小玲袁朱朝辉袁牛媛媛袁廖晓珍援 影响青花菜
游离小孢子培养的若干因素咱允暂 援 福建农林大学学报院自然科学
版袁 圆园园缘袁 猿源渊员冤院 缘员 原 缘缘
咱员员暂摇 陈文辉袁方淑桂袁曾小玲袁朱朝辉袁廖晓珍援 甘蓝和青花菜杂种小
孢子培养咱允暂 援 热带亚热带植物学报袁 圆园园远袁 员源渊源冤院 猿圆员 原 猿圆远
咱员圆暂摇 张凤兰袁高田义人援甘蓝型油菜小孢子培养胚发生能力的遗传分
析咱允暂 援 华北农学报袁 圆园园员袁 远渊员冤院 圆苑 原 猿圆
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咱员苑暂摇 张振超袁戴忠良袁潘跃平袁姚悦梅援结球甘蓝自交不亲和系组织快
繁体系研究咱允暂 援 西北植物学报袁 圆园园怨袁 圆怨渊员园冤院 圆员圆猿 原 圆员圆苑
咱员愿暂摇 余凤群袁刘后利援供体材料和培养基成分对甘蓝型油菜小孢子胚
状体产量的影响咱允暂 援 华中农业大学学报袁员怨怨缘袁员源渊源冤院 猿圆苑 原
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咱圆员暂摇 顾宏辉袁张冬青袁周伟军援 换培养液和秋水仙碱处理对白菜型油
菜小孢子胚胎发生的影响咱 允暂 援 作物学报袁 圆园园源袁 猿园 渊员冤院 苑愿 原
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