全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊源冤院园远愿缘 耀 园远怨员允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园源鄄圆员摇 接受日期院圆园员源鄄员园鄄圆员
基金项目院国家科技支撑项目渊圆园员圆月粤阅园圆月园圆尧圆园员猿月粤阅园员月园源鄄远冤
作者简介院张明华袁女袁主要从事茄子遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡葬灶早皂蚤灶早澡怎葬园愿圆圆岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院陈钰辉袁副研究员袁主要从事茄子遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院蚤增枣糟澡藻灶赠怎澡怎蚤岳 员远猿援 糟燥皂
连摇 勇袁研究员袁主要从事茄子遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造蚤葬灶赠燥灶早岳 糟葬葬泽援 糟灶遥 同为通讯作者遥
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园源鄄园远愿缘鄄园苑
农杆菌介导抗根结线虫 月贼 糟则赠远粤基因转化茄子的研究
张明华摇 陈钰辉摇 刘富中摇 张摇 映摇 陈国华摇 谢丙炎摇 连摇 勇
渊中国农业科学院蔬菜花卉研究所袁北京摇 员园园园怨员冤
摘摇 要院本试验以茄子下胚轴和子叶为外植体袁通过对抗生素选择压筛选尧不同抗生素抑菌效果比较尧农
杆菌侵染时间尧预培养时间尧共培养时间等条件优化袁建立了适用于茄子的遗传转化体系袁并利用农杆菌
介导法将抗根结线虫 月贼 糟则赠远粤基因导入茄子中袁以期获得抗线虫的茄子材料袁探索新的抗线虫育种途
径袁为利用茄子转基因技术培育和改良茄子品质提供理论依据遥 结果表明袁苑缘皂早窑蕴 原员的卡那霉素可以
有效地抑制愈伤组织的产生曰圆园园皂早窑蕴 原员特美汀能够完全抑制农杆菌的生长曰最佳侵染外植体为子叶袁
在预培养 源凿袁侵染 员园皂蚤灶袁共培养 员凿时转化率最高曰获得的 缘远 株 运葬灶 抗性植株中有 员缘 株具有 郧哉杂 活
性曰经过 孕悦砸尧砸栽鄄孕悦砸验证袁初步确认 月贼 糟则赠远粤基因已整合至茄子基因组中袁并在转录水平上正常表达曰
根结线虫幼虫接种鉴定表明袁转 月贼 糟则赠远粤基因茄子再生植株对南方根结线虫抗性明显提高遥
关键词院茄子曰植株再生曰遗传转化曰月贼 糟则赠远粤基因曰根结线虫
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园源援 园远愿缘
摇 摇 茄子渊杂燥造葬灶怎皂 皂藻造燥灶早藻灶葬 蕴援 冤营养丰富袁在我国各
地广泛栽培遥 根结线虫渊酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 泽责责援 冤是茄子生
产过程中主要土传病害之一袁每年引起产量损失 员园豫
耀员缘豫 袁严重时损失达 猿园豫 耀 源园豫 袁甚至绝产咱员暂 遥 目
前对根结线虫的防治措施主要有轮作尧嫁接尧土壤高温
消毒尧杀线虫剂等袁这些方法大幅度增加了生产成本袁
极易造成环境污染袁并具有很大的局限性袁不能从根本
上解决问题遥
自国外 员怨愿缘年报道袁月贼晶体蛋白对根结线虫尧根腐
线虫和茎线虫等 员园 多个属的线虫具有活性袁并确定了
晶体蛋白的毒性成分之后袁开发挖掘新的杀线虫 月贼 基
因袁构建杀线虫 月贼工程菌株和培育转基因抗线虫植物袁
成为植物寄生线虫综合防治新的有效途径咱圆 原 愿暂 遥 员怨怨苑
年袁粤则责葬蚤葬等咱怨暂成功将人工优化合成的 糟则赠猿月 基因导入
到茄子中袁阅粤杂鄄耘蕴陨杂粤 检测发现 缘苑 株转基因茄子的叶
片中含有 糟则赠猿月 毒蛋白袁经生物抗虫性测试有 圆猿 株对
悦孕月渊糟燥造燥则葬凿燥 责燥贼葬贼燥 遭藻藻凿藻冤幼虫表现明显抗性遥 员怨怨愿
年袁允藻造藻灶噪燥增蚤糟 等咱员园暂将人工合成后的 糟则赠猿粤 基因导入茄
子后的生物抗虫性测试表明袁有高达远怨豫的转化植株对
悦孕月的成虫和幼虫表现出了明显的抗性袁并且子一代同
亲本表现出一致的抗虫性遥 圆园员园年袁孕澡葬灶等咱员员暂将 月贼的
糟则赠员粤遭基因转入茄子中袁培育出表达 糟则赠员粤遭 蛋白并能
够抑制根结线虫卵孵化的转基因茄子袁证实了转 月贼 茄
子能够防御根结线虫的侵染遥
我国茄子的转基因研究工作较为滞后袁遗传转化
体系中的再生率和转化率普遍低于同科同属的番茄尧
马铃薯以及其它十字花科等蔬菜作物咱员圆 原 员怨暂 遥 员怨怨愿
年袁胡晓琴等咱圆园暂首次成功将水稻巯基蛋白抑制剂基因
韵悦鄄陨 导入至茄子中遥 圆园园员 年袁邹克勤等咱圆员暂应用几丁
质酶和抗菌肽 阅 双价基因对茄子进行遗传转化袁经
孕悦砸和 杂燥怎贼澡藻则灶杂交检测表明外源 阅晕粤 已整合进茄
子的核基因组中遥 林栖凤等咱圆圆暂将海滩耐盐红树中的
阅晕粤使用花粉管通道法导入至茄子中袁结果表明外源
阅晕粤的导入增强了茄子的耐盐性遥 圆园员猿 年袁孟平红
等咱圆猿暂成功构建含冷诱导转录因子 悦月云猿 载体并导入
三月茄中遥
本试验在已建立的茄子离体培养植株再生体系的
基础上袁通过农杆菌介导法将抗根结线虫基因 月贼
缘愿远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
糟则赠远粤导入茄子中袁以期得到抗性植株袁为防治根结线
虫提供更可行尧更有效的新途径遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
茄子圆茄栽培种高代自交系 园苑远愿猿 为供试对象遥
将种子用 苑缘豫酒精浸泡 猿园泽袁无菌水冲洗 员 次袁然后用
员园豫的 晕葬悦造韵溶液浸泡 圆园皂蚤灶袁无菌水冲洗 猿 次后袁接
种到 员 辕 圆 酝杂培养基上萌发袁于 圆远 依 员益袁光照员远澡窑凿 原员
条件下培养成无菌苗作为供试材料遥
由根癌农杆菌菌株 耘匀粤员园缘尧质粒载体 责月陨员圆员袁人
工合成目的基因苏云芽孢杆菌 月贼 糟则赠远粤渊员源圆怨遭责冤袁构
建成的超表达载体 责月陨鄄月贼 糟则赠远粤曰抗性鉴定用 圆 龄南方
根结线虫遥 由中国农业科学院蔬菜所植保室病害课题
组惠赠遥
图 员摇 超表达载体 责月陨鄄月贼 糟则赠远粤结构图
云蚤早援 员摇 栽澡藻 皂葬责 燥枣 燥增藻则鄄藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 责月陨鄄月贼 糟则赠远粤
员郾 圆摇 方法
卡那霉素渊运葬灶冤敏感筛选院取子叶完全展开的 员园凿
苗龄无菌苗遥 无菌条件下将子叶切成渊猿 耀 缘冤 皂皂 伊
缘皂皂小块袁下胚轴切成 园郾 愿 耀 员郾 园糟皂片段袁分别接种到
含 运葬灶浓度为 园尧圆缘尧缘园尧苑缘尧员园园皂早窑蕴 原员的诱导培养基
渊酝杂 垣 在栽 圆郾 园皂早窑蕴 原员 垣 远 原 月粤 员郾 园 皂早窑蕴 原员 垣 陨粤粤
园郾 圆皂早窑蕴 原员袁蔗糖 猿郾 园豫 尧琼脂 园郾 愿豫 袁责匀 值 缘郾 愿冤上袁培
养温度 圆远 依 员益袁光照 员远 澡窑凿 原员袁光强 圆 园园园造曾遥 每处理
接种 猿 个培养皿袁每个培养皿 员园 个外植体袁圆 周继代 员
次袁源 周后统计结果遥
不同抑菌抗生素效果比较院选用羧苄青霉素
渊悦遭冤尧头孢霉素渊悦藻枣冤尧特美汀渊栽蚤皂冤猿 种常见抗生素
进行外植体侵染后的抑菌效果比较袁设置的浓度梯度
处理为 员园园尧圆园园尧猿园园皂早窑蕴 原员遥 将子叶和下胚轴外植体
接种于诱导培养基上预培养 圆凿袁然后使用活化后的农
杆菌渊挑单菌落摇床培养至 韵阅远园园抑园郾 缘袁离心后 员 辕 圆
酝杂液体培养基悬浮袁并添加 圆园园 滋酝窑蕴 原员的乙酰丁香
酮冤侵染 员园皂蚤灶袁在黑暗条件下共培养 圆凿后袁转移至含
不同浓度抑菌素的筛选培养基渊诱导培养基 垣 粤早晕韵猿
缘皂早窑蕴 原员 垣确定浓度 运葬灶冤上培养袁圆 周继代 员 次袁源 周
后统计结果遥
农杆菌介导的转化条件优化院对影响农杆菌中外源
基因转化率的 猿个主要因素袁预培养时间尧侵染时间尧共
培养时间袁分别进行单因素重复试验遥 取无菌苗的子叶
和下胚轴袁接种于诱导培养基中遥 分别对三因素设置时
间梯度处理袁预培养 园尧圆尧源尧远凿袁侵染 园尧缘尧员园尧员缘皂蚤灶袁共培
养 园尧员尧圆尧猿凿遥 之后转移至筛选培养基上培养袁圆 周继代
员次遥 源周后观察统计抗性愈伤诱导情况遥
阳性苗的驯化院当筛选培养基上长出的阳性不定
芽有 圆 耀 源 片真叶袁大约 圆 耀 猿糟皂 左右时袁将其自基部
切下 转 接 于 员 辕 圆 酝杂 生 根 培 养 基 渊附 加 晕粤粤
园郾 员皂早窑蕴 原员尧蔗糖 圆郾 园豫 尧琼脂 园郾 苑豫 尧活性炭 园郾 员豫 袁责匀
值 缘郾 愿冤上生根培养遥 待主根系生长至 圆 耀 猿糟皂 后袁敞
开瓶盖培养 苑凿袁然后用清水洗净根部袁移栽至消毒后
的腐殖土颐蛭石 越源颐 员基质中袁每钵 员 株苗袁继续在培养
箱内培养 苑凿后转移至直径 圆缘糟皂尧高 猿园糟皂 的花盆中袁
于温室条件下培养遥
郧哉杂检测院对从筛选培养基上得到的抗 运葬灶 阳性
植株进行 郧哉杂 活性的组织染色检测袁以转空载体植株
和未转化植株作为对照遥 将待测材料的叶和根及对照
分别放入 员郾 缘 皂蕴 的 耘责责藻灶凿燥则枣 中袁使用 郧哉杂 染色液袁
恒温摇床上 猿苑益袁员园园则窑皂蚤灶 原员温浴过夜遥 根样直接观
察袁叶片用 苑缘豫乙醇脱色至阳性对照为黄白色时再进
行观察袁照相记录结果遥
阳性植株的 孕悦砸 及 砸栽鄄孕悦砸 检测院提取阳性植株
根部总 阅晕粤袁以转入空载体基因的植株作为阴性对
照袁责月陨员圆员 质粒作为阳性对照袁利用 月贼 糟则赠远粤基因的特
异性引物进行 孕悦砸 检测分析遥 转基因植株 孕悦砸 检测
所用的引物序列为院月贼 糟则赠远粤 孕云院缘忆鄄郧悦粤郧粤粤栽郧郧栽郧郧粤
粤栽粤粤粤鄄猿忆袁月贼 糟则赠远粤 孕砸院缘忆鄄悦栽栽郧粤郧悦悦粤悦粤粤悦栽粤粤悦悦鄄
猿忆遥 孕悦砸反应体系渊圆园滋蕴冤院阅晕粤 员滋蕴袁员园 伊 孕悦砸 月怎枣枣藻则
圆滋蕴袁酝早圆 垣 渊圆缘皂酝冤圆滋蕴袁凿晕栽孕渊员园皂酝冤园郾 源滋蕴袁上游引
物渊员园皂酝冤员滋蕴袁下游引物渊员园皂酝冤员滋蕴袁栽葬择 责燥造赠皂藻则葬泽藻
渊缘 哉窑滋蕴 原员冤园郾 源滋蕴袁凿凿 匀圆韵 员圆郾 圆滋蕴遥 孕悦砸 反应程序院怨缘益预变性 员园 皂蚤灶袁怨缘益变性 猿园泽袁缘愿益退火 猿园泽袁苑圆益
延伸 圆皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆益延伸 员园皂蚤灶曰源益终止反应遥
远愿远
摇 源 期 诱发籼稻早熟同型系的研究
孕悦砸产物用浓度为 员豫琼脂糖凝胶进行电泳检测遥 提
取转基因植株根部总 砸晕粤袁用分光光度计测定 砸晕粤
的浓度遥 使用反转录试剂盒进行反转录袁获得 糟阅晕粤
第一链遥 利用茄子看家基因 怎遭蚤择怎贼蚤灶 渊 郧藻灶月葬灶噪
葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶怎皂遭藻则院 载缘愿圆缘猿冤的特异引物渊怎遭蚤 枣燥则憎葬则凿 缘忆鄄
郧栽郧栽郧郧郧悦栽悦粤悦悦栽粤悦郧栽栽栽鄄猿忆和 则藻增藻则泽藻 缘忆鄄粤悦粤粤栽悦悦
悦粤粤郧郧郧栽栽郧栽悦粤悦鄄猿忆冤来调整使各组织的表达量基本
一致袁再利用 孕悦砸检测目标基因的表达情况咱圆源 原 圆缘暂 遥
阳性植株的抗性评估院待阳性植株根系生长稳定尧
真叶 圆 耀 猿 片时袁每株接种 圆园园 头 圆 龄期南方根结线虫
幼虫袁以转空载体基因植株作对照遥 室温 圆园 耀 猿园益袁
进行正常的肥水管理和地上部病虫害防治遥 接根结线
虫 圆 个月后袁将植株从花盆中连根拔起遥 自来水洗净
后使用 园郾 园缘豫的罂红对植株根部的根结线虫卵块进
行染色袁以根上是否存在卵块渊蓝色冤和卵块的数量作
抗性评价遥 采用 粤皂皂蚤则葬躁怎 等咱圆远暂的抗性分级标准院当
根部卵块数小于 圆缘 个时袁定义为抗病级渊砸冤曰当卵块
数大于 圆缘 个时袁为敏感级渊杂冤遥
表 员摇 卡那霉素对茄子外植体愈伤诱导的影响
栽葬遭造藻 员摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 运葬灶 燥灶 蚤灶凿怎糟藻凿 糟葬造造怎泽 燥枣 藻早早责造葬灶贼 藻曾责造葬灶贼泽
运葬灶浓度
悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 运葬灶 辕 渊皂早窑蕴 原员 冤
外植体个数
晕燥援 燥枣 藻曾责造葬灶贼泽 辕个
子叶愈伤诱导率
悦葬造造怎泽 则葬贼藻泽 燥枣 糟燥贼赠造藻凿燥灶泽 辕 豫
下胚轴愈伤诱导率
悦葬造造怎泽 则葬贼藻泽 燥枣 澡赠责燥糟燥贼赠造泽 辕 豫
园 猿园 苑圆郾 苑 远园郾 园
圆缘 猿园 圆远郾 苑 猿猿郾 猿
缘园 猿园 员猿郾 猿 远郾 苑
苑缘 猿园 园郾 园 园郾 园
员园园 猿园 园郾 园 园郾 园
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 茄子外植体对 运葬灶敏感性
外植体对 运葬灶抗生素敏感试验结果显示渊表 员冤院
随着 运葬灶 浓度升高袁外植体的再生能力逐渐下降遥
运葬灶浓度为 缘园皂早窑蕴 原员时袁外植体稍黄化袁子叶与下胚
轴愈伤诱导率下降至 员园豫左右曰苑缘皂早窑蕴 原员的浓度下袁
外植体边缘褐化袁没有愈伤组织产生曰在 运葬灶 浓度为
员园园皂早窑蕴 原员时袁外植体全部枯死遥 因此袁本试验采用筛
选培养基中 运葬灶的选择压为 苑缘皂早窑蕴 原员遥
圆郾 圆摇 不同抗生素抑菌效果比较
筛选培养基中抑制农杆菌生长的不同抗生素效果
比较结果显示 渊表 圆冤院头孢霉素效果最差袁浓度为
猿园园皂早窑蕴 原员时仍不能完全抑菌袁子叶和下胚轴愈伤诱
导率都较低曰其次是羧苄青霉素袁浓度为 圆园园皂早窑蕴 原员时
可完全抑菌曰特美汀的抑菌效果最好袁且浓度达到
猿园园皂早窑蕴 原员时亦不会对再生芽诱导和生长造成太大影
响遥 茄子遗传转化采用的农杆菌抑菌抗生素是 圆园园
皂早窑蕴 原员的特美汀袁最佳筛选培养基为 酝杂 垣 在栽 圆郾 园
皂早窑蕴 原员 垣 远 原 月粤 员郾 园皂早窑蕴 原员 垣 陨粤粤 园郾 圆 皂早窑蕴 原员 垣 运葬灶
苑缘皂早窑蕴 原员 垣 栽蚤皂 圆园园皂早窑蕴 原员遥
圆郾 猿摇 农杆菌介导的转化条件优化
影响茄子农杆菌介导转化效率的预培养时间尧侵
染时间尧共培养时间试验结果如图 圆 所示遥 子叶的预
培养时间以 源凿最佳袁下胚轴以 远凿最佳袁没有预培养的
对照组诱导率明显低于试验组袁说明农杆菌侵染前对
外植体进行适宜的预培养能够显著提高茄子外植体的
转化率曰子叶和下胚轴的最佳侵染时间都为 员园皂蚤灶袁抗
性愈伤诱导率分别为 源苑郾 怨豫和 源猿郾 猿豫 袁侵染时间为
员缘皂蚤灶时袁子叶和下胚轴的抗性愈伤组织诱导率明显
下降袁且会导致外植体培养后期脱菌困难曰子叶的共培
养时间以 员凿最佳袁下胚轴以 圆凿最佳袁共培养时间太长
会降低外植体的转化率袁农杆菌繁殖过于旺盛袁易使外
植体伤口褐化发黑袁甚至污染严重袁无法除去农杆菌遥
此外袁农杆菌侵染后不同部位的外植体分化能力不同袁
子叶的抗性愈伤组织诱导率普遍高于下胚轴袁因此茄
子农杆菌介导遗传转化的最佳外植体为子叶遥
圆郾 源摇 抗性植株的 郧哉杂染色鉴定
应用上述优化后的茄子农杆菌介导遗传转化体
系袁使用子叶和下胚轴外植体袁共获得了 缘远 株抗 运葬灶
再生植株遥 郧哉杂染色检测表明渊图 猿冤袁其中 员缘 株再生
苗渊都来自子叶外植体冤具有 郧哉杂 活性渊染成蓝色冤袁
与阳性对照 责月陨员圆员 空载体转化植株的检测结果一致袁
非转基因植株的各个部位均未检测到 郧哉杂 活性渊呈黄
白色冤遥
圆郾 缘摇 阳性转化植株的 孕悦砸检测
对 郧哉杂 染色检测确定为阳性的超表达载体转化
植株进行驯化移栽袁成活了 远 株袁提取其根部基因组
阅晕粤作为模板袁利用 月贼 糟则赠远粤 基因的特异引物进行
苑愿远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
摇 摇 摇 摇 表 圆摇 不同抗生素抑菌效果及对外植体愈伤诱导的影响
栽葬遭造藻 圆摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟泽 燥灶 葬早则燥遭葬糟贼藻则蚤葬 早则燥憎贼澡 葬灶凿 藻曾责造葬灶贼泽 蚤灶凿怎糟藻凿 糟葬造造怎泽
抗生素
粤灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟泽
浓度
悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕
渊皂早窑蕴 原员 冤
外植体数
晕燥援 燥枣 藻曾责造葬灶贼泽 辕个
平均污染率
粤增藻则葬早藻 糟燥灶贼葬皂蚤灶葬贼蚤燥灶
则葬贼藻 辕 豫
子叶愈伤诱导率
悦葬造造怎泽 则葬贼藻泽 燥枣
糟燥贼赠造藻凿燥灶泽 辕 豫
下胚轴愈伤诱导率
悦葬造造怎泽 则葬贼藻泽 燥枣
澡赠责燥糟燥贼赠造泽 辕 豫
悦运 园 猿园 员园园援 园 圆猿援 猿 员远援 苑
羧苄青霉素 悦遭 员园园 猿园 圆园援 园 缘猿援 猿 缘园援 园
圆园园 猿园 园援 园 愿园援 园 缘猿援 猿
猿园园 猿园 园援 园 苑远援 苑 源远援 苑
头孢霉素 悦藻枣 员园园 猿园 苑园援 园 缘园援 园 员远援 苑
圆园园 猿园 猿远援 苑 远猿援 猿 圆猿援 猿
猿园园 猿园 员猿援 猿 缘远援 苑 源园援 园
特美汀 栽蚤皂 员园园 猿园 员远援 苑 远远援 苑 源猿援 猿
圆园园 猿园 园援 园 愿远援 苑 远园援 园
猿园园 猿园 园援 园 愿园援 园 缘猿援 猿
注院粤院 不同预培养时间对抗性愈伤组织诱导率的影响曰月院 不同侵染时间对抗性愈伤组织诱导率的影响曰悦院 不同共培养
时间对抗性愈伤组织诱导率的影响遥
晕燥贼藻院 粤院 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责则藻鄄糟怎造贼怎藻则 贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 则葬贼藻 燥枣 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 糟葬造造怎泽援 月院 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻
燥灶 贼澡藻 则葬贼藻 燥枣 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 糟葬造造怎泽援 悦院 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥鄄糟怎造贼怎则藻 贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 则葬贼藻 燥枣 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 糟葬造造怎泽援
图 圆摇 农杆菌介导的转化条件优化
云蚤早援 圆摇 韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 皂藻凿蚤葬贼藻凿 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽
注院粤院 转 责月陨鄄月贼 糟则赠远粤基因茄子 郧哉杂染色结果曰月院 未转化茄子 郧哉杂化学染色结果曰员院 叶曰圆院 根遥
晕燥贼藻院 粤院 郧哉杂 澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 葬泽泽葬赠 燥枣 藻早早责造葬灶贼 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 责月陨鄄月贼 糟则赠远粤援 月院 郧哉杂 澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 葬泽泽葬赠 燥枣 怎灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 藻早早责造葬灶贼援 员院 蕴藻葬枣袁 圆院 则燥燥贼援
图 猿摇 转基因茄子的 郧哉杂组织化学染色
云蚤早援 猿摇 郧哉杂 澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 泽贼葬蚤灶蚤灶早 葬泽泽葬赠 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼
愿愿远
摇 源 期 诱发籼稻早熟同型系的研究
注院酝袁酝葬则噪 芋曰悦运员袁责月陨员圆员 质粒曰悦运圆袁转空载体基因植株曰
摇 摇 员 耀 远袁阳性转化植株 蕴员尧蕴圆尧蕴猿尧蕴源尧蕴缘尧蕴远遥
晕燥贼藻院 酝袁 酝葬则噪 芋援 悦运员袁 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 憎蚤贼澡 责造葬泽皂蚤凿 责月陨员圆员
葬泽 贼藻皂责造葬贼藻援 悦运圆袁 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援 员 耀 远袁 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼
摇 摇 蕴员尧蕴圆尧蕴猿尧蕴源尧蕴缘尧蕴远援
图 源摇 转基因茄子的 孕悦砸 检测结果
云蚤早援 源摇 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼
孕悦砸扩增检测遥 结果如图 源 所示袁远 棵植株均可可扩
增出与质粒 责月陨员圆员 一致的条带遥 说明 月贼 糟则赠远粤 基因
已转入了这 远 棵植株渊分别定义为 蕴员尧蕴圆尧蕴猿尧蕴源尧蕴缘
和 蕴远冤的基因组中遥
圆郾 远摇 转 月贼 糟则赠远粤基因再生植株的 砸栽鄄孕悦砸验证
为进一步验证 月贼 糟则赠远粤 基因在 砸晕粤 水平上的表
达袁提取该 远 棵植株以及对照组的转空载体基因植株
的根部总 砸晕粤袁以 怎遭蚤 基因作为内参对照袁进行 砸栽鄄
孕悦砸分析遥 月贼 糟则赠远粤基因在转基因植株中的表达量有
较大差异袁蕴员 耀 蕴缘 植株 砸栽鄄孕悦砸 扩增出目的条带袁其
中 蕴圆尧蕴猿 和 蕴源 的表达量较高袁蕴远 和转空载体基因植
株的对照中未检测到该基因的表达渊图 缘冤遥 砸栽鄄孕悦砸
验证结果说明转基因植株中的 月贼 糟则赠远粤基因在转录水
平上得到了表达遥
圆郾 苑摇 转 月贼 糟则赠远粤基因植株的抗虫性鉴定
为了检测转 月贼 糟则赠远粤 基因茄子的抗虫效果袁对所
获得的 远 棵转基因植株以及对照组的转空载体基因植
株接种 圆 龄南方根结线虫遥 圆 个月后的检测结果显
示袁蕴员 耀 蕴缘 都为抗病级渊砸冤遥 蕴圆尧蕴猿 和 蕴源 植株表现
出明显的抗虫性袁根部根结较少袁卵块数小于 员园曰蕴员 和
蕴缘 对南方根结线虫表现出的抗虫性稍差袁但卵块数仍
小于 圆缘曰蕴远 和对照组的转空载体基因植株的根部发现
了较多的根结遥 试验结果表明袁月贼 糟则赠远粤 基因转入到
茄子中后使之获得了对根结线虫的抗虫能力遥
猿摇 讨论
试验中从筛选培养基上获得的 缘远 株 运葬灶 抗性再
生苗袁对其叶片进 郧哉杂染色检测袁结果只有 员缘 株表现
注院酝袁酝葬则噪 芋 垣 员园园遭责 酝葬则噪曰悦运袁转空载体基因植株曰
员 耀 远袁阳性转化植株 蕴员尧蕴圆尧蕴猿尧蕴源尧蕴缘尧蕴远遥
晕燥贼藻院 酝袁 酝葬则噪 芋 垣 员园园遭责 酝葬则噪援 悦运袁 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
员 耀 远袁 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼 蕴员尧蕴圆尧蕴猿尧蕴源尧蕴缘尧蕴远援
图 缘摇 转基因茄子的 砸栽鄄孕悦砸 检测结果
云蚤早援 缘摇 砸栽鄄孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼
出 郧哉杂活性袁说明再生苗的假阳性率较高袁其可能原
因是院员冤部分下胚轴和子叶外植体产生的再生芽不经
过愈伤组织直接从伤口处长出袁没有接触筛选培养基曰
圆冤外植体的表层细胞稳定表达外源选择抗性基因袁降
低了其周围培养基中 运葬灶 的浓度袁为其他一些非转化
细胞提供了一道屏障袁逃离了选择压力的影响而继续
分裂和分化遥
对驯化后的 远 棵植株提取根部 阅晕粤和 砸晕粤分别
进行 孕悦砸尧砸栽鄄孕悦砸 以及接种线虫后进行抗虫性鉴定袁
初步确认目的基因 月贼 糟则赠远粤 成功转入至茄子基因组
中袁并在转录水平上有不同水平的表达遥 蕴圆尧蕴猿 和 蕴源
的表达量较高袁蕴员 和 蕴缘 表达量较差袁但抗虫检测均表
现为抗病级渊砸冤袁蕴远 未检测到 砸晕粤 的表达袁表现为感
病级渊杂冤遥 这种表达水平和抗虫性能的差异可能是由
于位置效应引起的袁外源基因在植物体内的表达水平
经常受其在宿主染色体上的确切位置影响咱圆苑 原 圆愿暂 遥
本试验获得的抗性植株较少袁但获得的转基因植株
对根结线虫表现出了明显的抗虫作用遥 为获得更多抗
性强尧遗传稳定的转 月贼茄子袁试验应继续加大转化筛选
工作袁扩大转化群体袁对转基因茄子的根结线虫抗性和
外源基因的遗传稳定性做进一步的分析袁并将已经获得
的高抗虫材料用于优良抗根结线虫茄子的培育遥
源摇 结论
本试验建立了适于茄子的遗传转化体系袁利用农
杆菌介导法将 月贼 糟则赠远粤基因成功转入至茄子遥 获得的
怨愿远
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
注院粤员院 转基因茄子的地上生长情况曰粤圆院 转基因茄子的根部生长情况曰月员院 对照组茄子地上生长情况曰月圆院 对照组茄子根部生长情况曰悦员院
摇 摇 摇 未染色根结曰悦圆院 染色后的根结渊乳白色球形为雌虫袁深蓝色部位为卵块冤遥
晕燥贼藻院 粤员院 栽澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 燥增藻则早则燥怎灶凿 责葬则贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼援 粤圆院 栽澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 则燥燥贼泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼援 月员院 栽澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 燥增藻则早则燥怎灶凿 责葬则贼 燥枣
晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援 月圆院 栽澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 则燥燥贼泽 燥枣 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援 悦员院 栽澡藻 怎灶凿赠藻凿 则燥燥贼 灶燥凿怎造藻泽援 悦圆院 栽澡藻 凿赠藻凿 则燥燥贼 灶燥凿怎造藻泽 渊 贼澡藻 皂蚤造噪赠 泽责澡藻则藻 蚤泽 枣藻皂葬造藻泽
摇 摇 摇 葬灶凿 贼澡藻 灶葬增赠鄄遭造怎藻 责葬则贼 蚤泽 藻早早 凿藻责燥泽蚤贼蚤燥灶冤 援
图 远摇 转基因茄子接种 圆 月后的生长和检测结果
云蚤早援 远摇 栽澡藻 早则燥憎贼澡 葬灶凿 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 则藻泽怎造贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 藻早早责造葬灶贼 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿
缘远 株 运葬灶 抗性再生植株袁经 郧哉杂 染色尧孕悦砸尧砸栽鄄孕悦砸
鉴定袁确认 远 株为转 月贼 糟则赠远粤基因植株袁其中 缘 株在转
录水平渊砸晕粤冤上有表达遥 抗虫性鉴定结果表明袁转基
因植株对根结线虫表现出了明显的抗虫能力袁检测到
砸晕粤表达的植株表现为抗病级 渊砸冤遥 结果说明 月贼
糟则赠远粤基因转入和表达对茄子获得抗根结线虫能力起
着重要作用遥
参考文献院
咱 员 暂摇 李红双援 番茄抗根结线虫病基因的分子标记研究咱阅暂援 哈尔滨院
东北农业大学袁 圆园园远
咱 圆 暂 摇 关雄援 苏云金芽孢杆菌研究回顾与展望咱 允暂 援 中国农业科技导
报袁 圆园园远袁 愿渊远冤院 缘 原 员员
咱 猿 暂摇 王利平袁 代林远袁 李鹏援 苏云金芽孢杆菌研究进展咱 允暂 援 中国畜
牧兽医袁 圆园员员袁 猿愿 渊怨冤院 圆圆源 原 圆圆苑
咱 源 暂 摇 宋敏袁 林祥明袁 刘丽军援 悦则赠 基因家族的专利分布研究咱 允暂 援 生
物技术通报袁 圆园员园袁 渊员冤院 员 原 愿
咱 缘 暂摇 罗兰袁谢炳炎袁戴小枫袁杨之为援 苏云金芽孢杆菌杀线虫晶体蛋
白的相关基因咱允暂 援 中国生物防治袁 圆园园缘袁 圆员渊员冤院 源怨 原 缘员
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缘苑 原 远远
咱 苑 暂摇 陈国华袁 杨宇红袁 谢丙炎援 植物抗线虫基因工程新途径及其在
分子育种中的应用咱 允暂 援 植物病理学报袁 圆园园苑袁 猿苑渊圆冤院 员员猿 原
员圆园
咱 愿 暂摇 贾永强袁 刘学钊袁 陈月华袁 严冰袁 蔡峻援 杀线虫基因 糟则赠远粤的克
隆尧表达及序列分析咱允暂 援 南开大学学报院自然科学版袁 圆园园愿袁源员
渊圆冤院 员怨 原 圆圆
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咱员圆暂摇 邹芳玲袁 国艳梅袁 杜永臣袁 祝光涛袁 高建昌袁 胡鸿援 番茄无选择
标记转化体系的研究咱允暂 援 中国蔬菜袁 圆园员猿袁 渊愿冤院 员怨 原 圆缘
咱员猿暂摇 乔亚红袁 郑银英袁 李诗林袁 田桂英袁 张丽丽袁 林涛袁 向本春援 红
番 猿 号加工番茄遗传转化再生体系的建立 咱 允暂 援 核农学报袁
圆园员猿袁 圆苑渊员员冤院 员远猿远 原 员远源猿
咱员源暂摇 载蚤葬灶早 匝 蕴袁 宰藻蚤 允 在袁 栽葬灶 粤袁 粤则燥蚤葬灶 砸 灾援 砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 则燥燥贼鄄噪灶燥贼
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缘渊源冤院 源缘缘 原 源远源
咱员缘暂摇 杨志超袁 陈丽莉袁 卢翠华袁 邸宏袁 姜丽丽袁 张正国援 农杆菌介导
孕圆猿园园 原 责葬 原 愿藻 抗虫基因转化马铃薯的研究咱 允暂 援 中国蔬菜袁
圆园员员袁 渊员愿冤院 怨
咱员远暂摇 马连杰袁 刘海峰袁 王志强袁 代丽丽袁 丁新华袁 储昭辉援 利用 悦则藻 辕
造燥曾特异位点重组系统获得无选择标记转 粤贼酝再月员圆 基因的马铃
薯咱允暂 援 核农学报袁 圆园员员袁 圆缘渊远冤袁 员员员苑 原 员员圆圆
咱员苑暂摇 杨广东袁 朱祯袁 李燕娥袁 朱祝军援 利用根癌农杆菌和基因枪法转
化获得转抗虫融合蛋白基因渊月贼鄄悦责栽陨冤甘蓝植株咱允暂 援 实验生物
学报袁 圆园园圆袁 猿缘渊圆冤院 员员苑 原 员圆圆援
咱员愿暂摇 张永侠袁 郎志宏袁 朱莉袁 杨丽梅袁 张杰袁 苍晶袁 黄大昉援 农杆菌
介导的 月贼 糟则赠员陨葬基因转化花椰菜的研究咱 允暂 援 中国农业科技导
报袁 圆园员员袁 员猿渊员冤院 员缘 原 员怨
咱员怨暂摇 李汉霞袁 尹若贺袁陆芽春袁 张俊红援 悦则赠员粤渊糟冤转基因结球甘蓝的
抗虫性研究咱允暂 援 农业生物技术学报袁 圆园园远袁 员源渊源冤院 缘源远 原 缘缘园
咱圆园暂摇 胡晓琴袁 贾士荣援 水稻巯基蛋白酶抑制剂基因导入马铃薯和茄
子咱允暂 援 园艺学报袁 员怨怨愿袁 圆缘渊员冤院 远缘 原 远怨
咱圆员暂摇 邹克勤袁 张银东袁 王金宁袁 昊代飞袁 曾宪松援 几丁质酶和抗茵肽
阅双价基因转化茄子的研究咱允暂 援 热带作物学报袁 圆园园员袁 圆圆渊圆冤院
缘苑 原 远员
咱圆圆暂摇 林栖凤袁 邓用川袁 黄薇袁 陈菊培袁 李冠一援 红树 阅晕粤 导入茄子
获得耐盐性后代的研究咱 允暂 援 生物工程进展袁 圆园园员袁 圆员渊缘冤院 源园
原 源源
咱圆猿暂摇 孟平红袁 万发香袁 王永清袁 文林宏袁 郭惊涛袁 苏承刚援 冷诱导转
录因子 悦月云猿 转化茄子的初步研究 咱 允暂 援 中国蔬菜袁 圆园员猿袁
渊员园冤院 猿远 原 源猿
咱圆源暂摇 张映袁 陈玉辉袁 张振贤袁 方智远袁 连勇袁 刘富中援 茄子温敏单性
结实抑制差减文库的构建于分析咱允暂 援 中国农业科学袁 圆园员员袁 源源
渊员远冤院 猿猿远愿 原 猿猿苑远
咱圆缘暂摇 何娟娟袁 刘富中袁 陈钰辉袁 杨文才袁 连勇援 茄子航天诱变后代变
异及其 杂杂砸标记多态性研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊猿冤院 源远园
原 源远缘
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