全 文 ：核 农 学 报　 ２０１３，２７（１１）：１７０４ ～ １７０８
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
收稿日期：２０１２⁃１１⁃２９　 接受日期：２０１３⁃０８⁃０５
基金项目：国家自然科学基金（３１０６０２７２）
作者简介：汤庆莉，女，副教授，主要从事食品生物技术研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｑｌｔａｎｇ２００２＠ ａｌｉｙｕｎ． ｃｏｍ
通讯作者：吴天祥，男，教授，主要从事发酵工程教学与科研工作。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｗｕｔｉａｎｘｉａｎｇ０８０８＠ ａｌｉｙｕｎ． ｃｏｍ
文章编号：１０００⁃８５５１（２０１３）１１⁃１７０４⁃０５
灰树花胞外多糖提取工艺优化
汤庆莉１ 　 张　 洪２ 　 张　 勇２ 　 王　 娜２ 　 付红伟３ 　 吴天祥２
（ １ 贵州大学化学与化工学院，贵州 贵阳　 ５５００２５；２贵州大学生命科学学院，贵州 贵阳　 ５５００２５；
３ 浙江大学生物医学工程与仪器科学学院，浙江 杭州　 ３１００２７）
摘　 要：通过对乙醇浓度、醇沉时间、醇沉温度 ３ 个单因素试验对灰树花胞外多糖提取过程中的变化规律
进行研究，并且通过正交试验法，以灰树花 ＥＰＳ提取量为考察指标，对灰树花胞外多糖提取工艺条件进
行优化。 结果表明：灰树花胞外多糖的最佳提取条件为乙醇浓度 ９５％ 、醇沉时间 １０ｈ、醇沉温度 ４℃。
在此条件下灰树花胞外多糖的提取量为 ３２１􀆰 ９４ｍｇ·Ｌ － １，较未优化的灰树花胞外多糖提取条件提高了
５７􀆰 ７９％ 。
关键词：灰树花；胞外多糖（ＥＰＳ）；提取条件；正交试验
　 　 灰树花（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）隶属于担子菌亚门、层菌
纲、非褶菌目、多孔菌科，树花属是一种药食同源、价值
较高的珍贵真菌。 灰树花营养成分丰富，是一种高蛋
白质、高维生素 Ｅ 和富含多种矿物质元素的营养食
品［１ － ２］。 其中灰树花多糖具有重要的生物活性，如抗
肿瘤［３］、调节机体免疫力［４ － ５］、抗 ＨＩＶ［６］、抗氧化和清
除自由基［７］等。 Ｎａｎｂａ Ｈ［８］研究表明：灰树花在所有
真菌生物活性物质中抗肿瘤活性最强，且绝大多数真
菌多糖制剂口服无效，而灰树花多糖则例外。 采用生
物技术方法利用液体发酵培养灰树花菌丝体，并利用
发酵液提取灰树花多糖是目前最经济、最环保的方法。
但发酵培养后发酵液成分复杂，灰树花多糖的分离提
取存在很大困难［９］。 目前，对灰树花多糖的提取普遍
使用醇沉法，其中乙醇浓度、醇沉时间和醇沉温度等因
素对灰树花多糖的提取量存在影响。 为此，本研究以
灰树花胞外多糖提取量为考察指标对上述 ３ 个因素进
行单因素试验，并通过正交试验，得到灰树花胞外多糖
的最优提取工艺。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 菌株
灰树花菌株（菌种编号：５１６１６），购于中国农业微
生物菌种保藏管理中心。
１􀆰 ２　 实验仪器与药品
紫外可见分光光度计（ＵＶ － ７５０２ＰＣ 型，上海欣茂
仪器有限公司）；电子天平［ＣＰ１１４ 型，奥豪斯仪器（上
海）有限公司）］；恒温振荡器（ＴＳ － ２１０２Ｃ 型，上海天
呈仪器有限公司）；立式灭菌锅（ＢＸＭ － ３０Ｒ 型，上海
博讯实业有限公司医疗设备厂）；Ｃ６Ｈ１２Ｏ６ （天津市大
茂化学试剂厂）；蛋白胨（上海盛思生化科技有限公
司）；酵母膏（上海盛思生化科技有限公司）；ＫＨ２ＰＯ４
（天津市福晨化学试剂厂）；ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ（天津市瑞金
特化学品有限公司）；无水乙醇（成都金山化学试剂有
限公司）；其他试剂均为市售分析纯。
１􀆰 ３　 试验方法
１􀆰 ３􀆰 １ 　 培养基 　 斜面培养基： 马铃薯 （去皮 ）
２００ｇ·Ｌ － １，葡萄糖 ２０ｇ·Ｌ － １，蛋白胨 ２ｇ·Ｌ － １，ＫＨ２ＰＯ４
２ｇ·Ｌ － １，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ １ｇ·Ｌ － １，琼脂 ２０ｇ·Ｌ － １；ｐＨ 值自
然。
液体种子培养基：葡萄糖 ３０ｇ·Ｌ － １，蛋白胨
２ｇ·Ｌ － １，酵母膏 ６ｇ·Ｌ － １，ＫＨ２ＰＯ４ ０􀆰 ５ｇ·Ｌ － １，ＭｇＳＯ４·
７Ｈ２Ｏ ０􀆰 ５ｇ·Ｌ － １；ｐＨ值自然。
发酵培养基： 葡萄糖 ５０ｇ·Ｌ － １，蛋白胨 ５ｇ·Ｌ － １，酵
母膏 ６ｇ·Ｌ － １，ＫＨ２ＰＯ４２ｇ·Ｌ － １，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ２ｇ·Ｌ － １；ｐＨ
值自然。
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　 １１ 期 灰树花胞外多糖提取工艺优化
１􀆰 ３􀆰 ２　 培养方法　 斜面种子培养：于母种试管中切取
黄豆粒大小的菌丝块接于 ＰＤＡ斜面中部，置于 ２５℃恒
温培养箱中，培养至菌丝长满整个斜面。
液体种子培养：将培养好的斜面菌种用接种扒切
取蚕豆大小颗粒，接种于液体种子培养基中，一支
ＰＤＡ 斜面接种一瓶。 ２５０ｍＬ 三角锥形瓶装液量
１００ｍＬ、２５℃、１５０ｒ·ｍｉｎ － １、摇床培养 ７ ｄ，三角锥形瓶中
应长出大量细小、均匀的菌丝球且菌液清亮。
发酵培养基：按 １０％的接种量接种。 用移液管量取
液体种子 １０ｍＬ，接种于发酵培养基中。 ２５０ｍＬ三角锥形
瓶装液量为 １００ｍＬ、２５℃、１５０ｒ·ｍｉｎ －１、摇床培养 ７ｄ。
１􀆰 ４　 试验方法
１􀆰 ４􀆰 １　 灰树花胞外多糖提取工艺流程　 灰树花恒温
振荡发酵培养（培养温度 ２５℃、转速 １５０ｒ·ｍｉｎ － １、培养
时间 ７ｄ） →灰树花发酵培养液→离心沉淀除菌体
（４０００ｒ·ｍｉｎ － １，１０ｍｉｎ）→灰树花发酵液→醇沉→灰树
花粗多糖。
１􀆰 ４􀆰 ２　 乙醇浓度的影响　 经离心处理后的灰树花菌
体发酵上清液，在醇沉温度 ４℃，醇沉时间为 １２ ｈ的条
件下，分别设定 ７０％ 、７５％ 、８０％ 、８５％ 、９０％ 、９５％和
９８％的乙醇浓度，进行试验，沉淀离心，沉淀用 ９５％乙
醇清洗 ２ 次，再离心（４０００ｒ·ｍｉｎ － １，１０ｍｉｎ），沉淀置于
６０℃烘箱中去除残余乙醇，加入一定量的水重溶，采用
苯酚 －硫酸法测定其多糖提取量。
１􀆰 ４􀆰 ３　 醇沉时间的影响　 经离心处理后的灰树花菌
体发酵上清液，在乙醇浓度 ９５％ ，醇沉温度 ４℃的条件
下，分别设定 ２、４、６、８、１０、１２ 和 １４ ｈ 的醇沉时间，进
行试验，沉淀离心，沉淀用 ９５％乙醇清洗 ２ 次，再离心
（４０００ｒ·ｍｉｎ － １，１０ｍｉｎ），沉淀置于 ６０℃烘箱中去除残
余乙醇，加入一定量的水重溶，采用苯酚 －硫酸法测定
其多糖提取量。
１􀆰 ４􀆰 ４　 醇沉温度的影响　 经离心处理后的灰树花菌
体发酵上清液，在乙醇浓度 ９５％ ，醇沉时间 １０ ｈ 的条
件下，分别设定 ２、４、８、１８ 和 ３０℃的醇沉时间，进行试
验，沉淀离心，沉淀用 ９５％ 乙醇清洗 ２ 次，再离心
（４０００ｒ·ｍｉｎ － １，１０ｍｉｎ），沉淀置于 ６０℃烘箱中去除残
余乙醇，加入一定量的水重溶，采用苯酚 －硫酸法测定
其多糖提取量。
１􀆰 ４􀆰 ５　 灰树花胞外多糖提取工艺的正交试验　 采用
正交试验设计方案，根据单因素试验结果进行 Ｌ９（３） ３
正交试验方法分析［１０］。
１􀆰 ５　 分析方法
１􀆰 ５􀆰 １　 多糖含量测定的标准曲线［１１］ 　 多糖标准曲线
制作（０􀆰 ０４ｍｇ·ｍＬ － １）：准确称取在 ８０℃条件下烘干至
恒重的葡萄糖 ２０ ｍｇ置于 ５００ｍＬ 容量瓶中，加水至刻
度，分别吸取 ０􀆰 ４、 ０􀆰 ６、 ０􀆰 ８、 １􀆰 ０、 １􀆰 ２、 １􀆰 ４、 １􀆰 ６ 和
１􀆰 ８ｍＬ，各以水补至 ２􀆰 ０ｍＬ，然后加入 ６％苯酚 １􀆰 ０ｍＬ
及浓硫酸 ５􀆰 ０ｍＬ，静止 １０ｍｉｎ，摇匀，室温放置 ２０ｍｉｎ
后于 ４９０ ｎｍ测光密度，以 ２􀆰 ０ｍＬ 水按同样显色操作
作为空白，以横坐标为多糖含量，纵坐标为光密度值，
得标准曲线，见图 １。 由图 １ 可知，多糖测定标准曲线
的回归方程为 ｙ ＝ ０􀆰 ００６５ｘ － ０􀆰 ００５４，Ｒ２ ＝ ０􀆰 ９９７５，在所
选取浓度的范围内，二者相关系数较高，呈现出良好的
线性关系。
图 １　 葡萄糖标准曲线
Ｆｉｇ． １　 Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｃｕｒｖｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
１􀆰 ５􀆰 ２　 胞外多糖的测定　 发酵液经离心所得的上清
液合并，减压浓缩到发酵液体积的 ２ ／ ５ ～ ３ ／ ５，加入无
水乙醇到乙醇含量为 ９５％ ，静置于 ４℃冰箱中 １０ ｈ，离
心，沉淀用 ９５％乙醇清洗 ２ 次，再离心（４０００ｒ·ｍｉｎ － １，
１０ｍｉｎ），沉淀置于 ６０℃烘箱中去除残余乙醇，加入一
定量的水重溶，采用苯酚 －硫酸法测定多糖提取量。
２　 结果与分析
２􀆰 １　 灰树花胞外多糖提取单因素试验
２􀆰 １􀆰 １　 乙醇浓度对灰树花胞外多糖提取量的影响　
由图 ２ 可知，灰树花胞外多糖提取量随乙醇浓度的增
大而增加，当乙醇浓度为 ９５％ 时达到最大 （３０８􀆰 ５１
ｍｇ·Ｌ － １），随乙醇浓度的继续增大灰树花胞外多糖的
提取量不再增加反而有所下降。 结果表明，９５％乙醇
浓度为灰树花胞外多糖提取的最佳乙醇浓度。
２􀆰 １􀆰 ２　 醇沉时间对灰树花胞外多糖提取量的影响　
由图 ３ 可知，在 ２ ～ １０ ｈ，灰树花胞外多糖提取量随醇
沉时间的增加而缓慢增加，当醇沉时间为 １０ ｈ 时达到
最大（３２６􀆰 ４２ｍｇ·Ｌ － １）。 随醇沉时间的继续增加灰树
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核　 农　 学　 报 ２７ 卷
图 ２　 乙醇浓度对灰树花胞外多糖提取量的影响
Ｆｉｇ． ２　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｔｈａｎｏｌ ｖｏｌｕｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｎ
ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＥＰＳ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ
图 ３　 醇沉时间对灰树花胞外多糖提取量的影响
Ｆｉｇ． ３　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ
ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＥＰＳ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ
花胞外多糖的提取量呈现下降的趋势。 试验数据显
示，醇沉 １０ ｈ为灰树花胞外多糖提取的最佳时间。
表 １　 正交试验因素水平表
Ｔａｂｌｅ １　 Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素 Ｆａｃｔｏｒｓ
Ａ 乙醇浓度
Ａ Ｅｔｈａｎｏｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ／ ％
Ｂ 醇沉时间
Ｂ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｔｉｍｅ ／ ｈ
Ｃ 醇沉温度
Ｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ／ ℃
１ ９０ ８ ２
２ ９５ １０ ４
３ ９８ １２ ８
２􀆰 １􀆰 ３　 醇沉温度对灰树花胞外多糖提取量的影响　
由图 ４ 可知，灰树花胞外多糖提取量在 ２℃到 ４℃逐渐
上升并达到最大（３３２􀆰 ３９ｍｇ·Ｌ － １），之后随着醇沉温度
的升高灰树花多糖的提取量呈现下降的趋势。 研究表
明，４℃为灰树花胞外多糖提取的最佳温度。
图 ４　 醇沉温度对灰树花胞外多糖提取量的影响
Ｆｉｇ． ４　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＥＰＳ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ
２􀆰 ２　 正交试验优化灰树花胞外多糖提取条件
对影响灰树花胞外多糖提取量的因素乙醇浓度、
醇沉时间、醇沉温度进行正交试验分析，确定灰树花胞
外多糖提取工艺的最优条件。 本试验采用的是 Ｌ９
（３） ３ 正交试验，本试验取各因素的最大值作为中间水
平，各因素选取水平，正交试验因素水平设计见表 １。
试验结果及分析见表 ２ 和表 ３。
　 　 由正交试验结果可以看出各因素对灰树花胞外多
糖提取量的影响：乙醇浓度 ＞醇沉温度 ＞醇沉时间，其
中乙醇浓度对多糖提取量的影响较为显著。 由图 ５ 可
知，三个因素的最佳组合为 Ａ２Ｂ２Ｃ２，即乙醇浓度为
９５％ ，醇沉时间为 １０ ｈ，醇沉温度为 ４℃。 按照所得出
的最佳组合进行实验，计算其平均值，最后得到灰树花
６０７１
　 １１ 期 灰树花胞外多糖提取工艺优化
表 ２　 正交试验结果及分析
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
试验号
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
因素 Ｆａｃｔｏｒｓ
Ａ Ｂ Ｃ
胞外多糖含量
Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ／ （ｍｇ·Ｌ － １）
１ １ １ １ ２６３􀆰 ７３
２ １ ２ ２ ２７８􀆰 ６６
３ １ ３ ３ ２８４􀆰 ６３
４ ２ １ ２ ３１４􀆰 ４８
５ ２ ２ ３ ２９８􀆰 ０６
６ ２ ３ １ ２９３􀆰 ５８
７ ３ １ ３ ２８０􀆰 １５
８ ３ ２ １ ２９２􀆰 ０９
９ ３ ３ ２ ２８４􀆰 ６３
ｋ１ ８２７􀆰 ０２ ８５８􀆰 ３６ ８４９􀆰 ４０
ｋ２ ９０６􀆰 １２ ８６８􀆰 ８１ ８７７􀆰 ７７
ｋ３ ８５６􀆰 ８７ ８６２􀆰 ８４ ８６２􀆰 ８４
􀭰ｋ１ ２７５􀆰 ６７３ ２８６􀆰 １２０ ２８３􀆰 １３３
􀭰ｋ２ ３０２􀆰 ０４０ ２８９􀆰 ６０３ ２９２􀆰 ５９０
􀭰ｋ３ ２８５􀆰 ６２３ ２８７􀆰 ６１３ ２８７􀆰 ６１３
Ｒ ２６􀆰 ３６７ ３􀆰 ４８３ ９􀆰 ４５７
表 ３　 正交试验方差分析结果
Ｔａｂｌｅ ３　 Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ
方差来源
Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｅａｕｃｅ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ ｓｑｕａｒｅｓ
自由度
ｄｆ
Ｆ比
Ｆ Ｒａｔｉｏｎ
Ｆ临界值
Ｆ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｖａｌｕｅ
显著性
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
乙醇浓度
Ｅｔｈａｎｏｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ／ ％
１０６３􀆰 ７１１ ２ ０􀆰 ３５６ １９􀆰 ０００ ∗∗∗
醇沉时间
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｔｉｍｅ ／ ｈ
１８􀆰 ３２４ ２ ０􀆰 ００６ １９􀆰 ０００ ∗
醇沉温度
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ／ ℃
１３４􀆰 ２６６ ２ ０􀆰 ０４５ １９􀆰 ０００ ∗∗
误差
Ｅｒｒｏｒ ｍａｒｇｉｎ
１２１６􀆰 ３０ ６
胞外多糖的提取量为 ３２１􀆰 ９４ｍｇ·Ｌ － １，较前期的提取条
件（乙醇浓度 ８０％ ，醇沉时间 １２ ｈ，醇沉温度 ４℃）所
提取出的多糖含量 ２０４􀆰 ０３ｍｇ·Ｌ － １，提高了 ５７􀆰 ７９％ ，从
而保证了灰树花发酵液的有效利用。
３　 讨论
（１）通过单因素试验对灰树花胞外多糖提取的条
件进行优化，通过对多糖提取量在不同乙醇浓度、醇沉
时间和醇沉温度下的变化情况进行分析，依次确定了
灰树花胞外多糖提取条件中的最佳乙醇浓度、最佳醇
沉时间和最佳醇沉温度。
（２）对三组因素进行 Ｌ９（３） ３ 正交试验分析，以灰
树花胞外多糖提取量为考察指标，确定灰树花胞外多
糖提取的最佳条件为乙醇浓度 ９５％ 、醇沉时间 １０ｈ、醇
沉温度 ４℃。 在此提取条件下，灰树花发酵液中胞外
多糖的提取量可达 ３２１􀆰 ９４ｍｇ·Ｌ － １，较前期的提取条
件提高了 ５７􀆰 ７９％ ，从而提高了灰树花发酵液的利用
率。
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Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
２０１３，２７（１１）：１７０４ ～ １７０８
图 ５　 各因素水平与灰树花胞外多糖提取量关系图
Ｆｉｇ． ５　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ＥＰＳ ｃｏｎｔｅｎｔ
ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ
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［１０］　 丁宏伟． 超声波结合微波辅助提取米糠多糖的研究［Ｊ］ ． 核农学
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［１１］　 张惟杰． 糖复合物生化研究技术［Ｍ］． 杭州： 浙江大学出版社，
１９９９
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ Ｆｒｏｎｄｏｓａ
ＴＡＮＧ Ｑｉｎｇ⁃ｌｉ１ 　 ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ１ 　 ＺＨＡＮＧ Ｙｏｎｇ２ 　 ＷＡＮＧ Ｎａ２ 　 Ｆｕ Ｈｏｎｇ⁃ｗｅｉ３ 　 ＷＵ Ｔｉａｎ⁃ｘｉａｎｇ２∗
（ １ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ， Ｇｕｉｚｈｏｕ　 ５５００２５；
２ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ， Ｇｕｉｚｈｏｕ　 ５５００２５； ３． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ　 ３１００２７）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｖｏｌｕｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ
ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＥＰＳ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ｗｅｒｅ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｉｎｇｌｅ⁃
ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ＥＰＳ ｃｏｎｔｅｎｔ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＥＰＳ ｗｅｒｅ
ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｏ ｂｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｔ ４℃ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ １０ ｈ ｉｎ ｅｔｈａｎｏｌ ｗｉｔｈ ａ ｖｏｌｕｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ａｄｊｕｓｔｅｄ ｔｏ ９５％ ， ｉｎ
ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＥＰＳ ｆｒｏｍ Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｏ ３２１􀆰 ９４ｍｇ·Ｌ － １， ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｂｙ ５７􀆰 ７９％ ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｕｎｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｇｒｏｕｐ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ； Ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ （ＥＰＳ）； Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ； Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｄｅｓｉｇｎ
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