全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊远冤院员员远源 耀 员员远愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园远鄄员园摇 接受日期院圆园员员鄄员园鄄圆园
基金项目院浙江省科技计划项目渊圆园园愿悦猿圆园员愿冤
作者简介院王彩霞渊员怨苑愿 原 冤袁女袁湖南石门人袁助理研究员袁主要从事植物生物技术研究遥 耘 原 皂葬蚤造院 憎葬灶早糟葬蚤曾蚤葬员员圆员岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园远鄄员员远源鄄园缘
忽地笑体细胞无性系变异的 陨杂杂砸分析
王彩霞摇 杨志玲摇 欧阳彤
渊中国林业科学研究院亚热带林业研究所袁浙江 富阳摇 猿员员源园园冤
摘摇 要院以外植体母株为对照袁利用 陨杂杂砸标记对来自同一忽地笑鳞茎诱导袁通过不定芽和体胚发生途径
形成的再生一代和二代植株的体细胞无性系变异进行了分析遥 结果表明袁再生植株出现不同程度的
陨杂杂砸位点变异袁表现为新增加带和缺失带遥 体胚发生途径出现的 陨杂杂砸 位点变异率高于不定芽形成途
径遥 第二世代的变异率高于第一世代遥 体胚发生途径形成的第一和第二世代植株 陨杂杂砸 位点平均变异
率分别为 园援 苑豫和 员援 源豫 袁而不定芽途径形成的第一和第二世代植株 陨杂杂砸位点平均变异率分别为 园援 源豫
和 园援 愿豫 遥 来自相同途径的同一世代的各单株间袁陨杂杂砸 位点变异率差别较大袁在 粤月员 原 猿尧粤月员 原 愿 和
杂耘员 原 圆 中未检测到 陨杂杂砸位点变异袁而 粤月员 原圆 和 杂耘员 原 员 的 陨杂杂砸位点变异率分别达到 园援 远豫和 员援 园豫 遥
第一世代发生变异的植株袁其再生第二世代植株中这种变异依然存在遥
关键词院忽地笑曰 体细胞无性系变异曰 陨杂杂砸
粤晕粤蕴再杂陨杂 韵云 杂韵酝粤悦蕴韵晕粤蕴 灾粤砸陨粤栽陨韵晕 月再 陨杂杂砸 陨晕 蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬
宰粤晕郧 悦葬蚤鄄曾蚤葬摇 再粤晕郧 在澡蚤鄄造蚤灶早摇 韵哉再粤晕郧 栽燥灶早
渊砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 杂怎遭贼则燥责蚤糟葬造 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 云怎赠葬灶早袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员员源园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 泽燥皂葬糟造燥灶葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽 燥枣 贼澡藻 枣蚤则泽贼 葬灶凿 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 凿藻则蚤增藻凿 枣则燥皂 遭怎造遭 燥枣 蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬 遭赠
葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 葬灶凿 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 憎藻则藻 葬灶葬造赠扎藻凿 憎蚤贼澡 陨杂杂砸 皂葬则噪藻则泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻则藻
憎藻则藻 葬遭泽藻灶糟藻 燥枣 阅晕粤 枣则葬早皂藻灶贼泽 葬灶凿 灶藻憎造赠 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭葬灶凿泽 蚤灶 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 泽燥皂葬糟造燥灶葬造泽援 栽澡藻 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽
遭赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 泽澡燥憎藻凿 澡蚤早澡藻则 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 贼澡葬灶 贼澡葬贼 遭赠 葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶袁 葬灶凿 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿
则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 澡葬凿 澡早澡藻则 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 贼澡葬灶 贼澡藻 枣蚤则泽贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽援 栽澡藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 贼澡藻 枣蚤则泽贼
葬灶凿 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 憎藻则藻 园援 苑豫 葬灶凿 员援 源豫 袁 憎澡蚤造藻 贼澡藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣
贼澡藻 枣蚤则泽贼 葬灶凿 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 憎藻则藻 园援 源豫 葬灶凿 园援 愿豫 袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻则藻
憎藻则藻 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 燥枣 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 葬皂燥灶早 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 枣则燥皂 燥灶藻 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 遭赠 贼澡藻 泽葬皂藻 憎葬赠援 栽澡藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠
燥枣 粤月员 原 圆 葬灶凿 杂耘员 原 员 憎葬泽 园援 远豫 葬灶凿 员援 园豫 袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 遭怎贼 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 憎葬泽 灶燥贼 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 粤月员 原 猿袁 粤月员 原 愿 葬灶凿
杂耘员 原 圆援 杂葬皂藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 憎葬泽 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 葬泽 贼澡藻 枣蚤则泽贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责葬则藻灶贼 责造葬灶贼泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬曰 泽燥皂葬糟造燥灶葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶曰 陨杂杂砸
摇 摇 忽地笑渊蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬冤又名黄花石蒜袁为石蒜科
渊粤皂葬则赠造造蚤凿葬糟藻葬藻冤石蒜属渊蕴赠糟燥则蚤泽 匀藻则遭援 冤多年生鳞茎草
本植物袁具有较高的观赏价值和药用价值遥 忽地笑花
型奇特雅致尧花色鲜丽尧且花期恰逢夏末秋初少花季节
而被广泛用于园林造景及鲜切花和盆花生产咱员暂 遥 忽
地笑的鳞茎中含有多种生物碱袁部分生物碱已成为临
床治疗的重要药物袁如石蒜碱经氢化后有抗阿米巴痢
疾的作用袁为吐根的代用品咱圆暂 袁加兰他敏是治疗小儿
麻痹后遗症的特效药袁并因在治疗阿尔茨海默病和改
善记忆障碍方面的疗效稳定及无肝毒性而成为首选药
源远员员
摇 远 期 忽地笑体细胞无性系变异的 陨杂杂砸分析
物咱猿暂 遥
我国具有丰富的野生忽地笑资源袁但近年来由于
生境的严重破坏及人为的过度采挖袁野生资源濒临枯
竭遥 利用组织培养进行离体快速繁殖不仅能为生产提
供大量种苗袁同时也是种质保存的重要途径之一遥 体
细胞无性系变异是植物组织培养过程中普遍存在的现
象袁其变异频率一般高于自然突变频率咱源暂 袁而且变异
的产生没有种属特异性咱缘暂 遥 体细胞无性系变异可产
生一系列有益的新性状袁对植物种质改良和新品种选
育具有重要意义咱远暂 遥 然而袁对于种质保存尧遗传转化
等袁体细胞无性系变异又成为需要克服的难题之一遥
继表型尧细胞学尧同工酶等分析方法后袁基于 孕悦砸技术
的各种分子标记被广泛用于植物体细胞无性系变异的
研究咱苑 耀 怨暂 遥 忽地笑的离体快繁已经成功咱员园袁 员员暂 袁但其体
细胞无性系变异的研究尚未见报道遥 本研究利用
陨杂杂砸标记袁对在相同组培条件下袁忽地笑不定芽途径
和体胚发生途径的再生一代和二代植株 阅晕粤 的变化
进行了分析袁以便了解体细胞无性系变异的特点袁为利
用组培技术进行忽地笑种质保存尧种苗扩繁尧种质改良
及遗传转化提供参考遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 材料
野生忽地笑植株采自湖南衡山袁种植于浙江省富
阳市中亚苗业种苗基地遥
员援 圆摇 不定芽和体胚发生
选取生长健壮的鳞茎袁剥去外层褐色鳞片袁切除颈
部及根系遥 经洗涤剂刷洗袁流水冲洗 圆澡 后袁于超净工
作台上用 苑缘豫酒精浸泡 缘皂蚤灶袁园援 员豫升汞浸泡 员园皂蚤灶袁
无菌水冲洗 缘 次遥 取靠近鳞茎盘端 员 辕 猿 鳞茎渊带鳞茎
盘冤袁纵向切割成 源 耀 愿 份接种培养遥 基本培养基为
酝杂袁附加 员援 缘皂早 辕 蕴 远 原 月粤尧园援 缘皂早 辕 蕴 运栽尧圆皂早 辕 蕴 晕粤粤尧
猿园皂早 辕 蕴 孕灾孕尧缘园皂早 辕 蕴 灾糟尧员园园皂早 辕 蕴 再耘袁缘园早 辕 蕴 蔗糖袁
愿早 辕 蕴 琼脂袁 责匀缘援 愿遥 光照周期 员源澡 辕 凿袁光照强度约
员源园园造曾袁培养温度 圆缘益 依员益遥 不定芽形成途径和体胚
发生途径再生植株均在上述培养基及培养条件下进
行遥
员援 猿摇 体细胞无性系变异的 陨杂杂砸分析
供试材料是由同一忽地笑鳞茎通过不定芽和体胚
发生两种途径获得的一代和二代再生植株袁以外植体
母株为对照遥 每种发生途径尧每个世代各取 愿 株袁分别
记为 粤月员 原员 耀 愿渊不定芽形成第一世代冤尧粤月圆 原 员 耀 愿
渊不定芽形成第二世代冤尧杂耘员 原 员 耀 愿渊体胚发生第一世
代冤尧杂耘圆 原 员 耀 愿渊体胚发生第二世代冤遥 不定芽和体胚
发生途径的再生二代植株分别从再生一代鳞茎 粤月员 原
圆 和 杂耘员 原 远 诱导产生遥 体胚发生途径再生植株产生
于未经继代培养的愈伤组织袁这些再生一代和二代植
株在形态上与母株无差异遥
待再生植株长出第三片叶时袁取鲜嫩叶片少许在
液氮中碾磨袁采用改良的 悦栽粤月 法少量提取 阅晕粤遥
园郾 愿豫琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测 阅晕粤纯
度及浓度袁栽耘稀释至 缘园灶早 辕 滋造于 原圆园益保存备用遥
陨杂杂砸反应体系 圆园滋造包括 缘园灶早模板 阅晕粤袁员 伊 孕悦砸
缓冲液袁园郾 圆滋皂燥造 辕 蕴 引物袁园郾 圆皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕袁圆皂皂燥造 辕 蕴
酝早悦造圆 和 员哉 栽葬择 阅晕粤聚合酶遥 在 孕悦砸仪渊月陨韵 原 砸粤阅悦员园园园冤上按如下程序扩增院怨源益预变性 缘皂蚤灶曰怨源益变
性 员皂蚤灶袁源缘益 耀远愿益渊视引物而定冤退火 员皂蚤灶袁苑圆益延
伸 员援 缘皂蚤灶袁猿愿 个循环曰苑圆益延伸 愿皂蚤灶曰源益保温遥 引物
为 哉月悦 愿园员 耀 怨园园袁共 员园园 条袁参照哥伦比亚大学公布
的序列由上海生工合成遥
扩增产物用 愿豫聚丙烯酰胺凝胶电泳分离袁经硝
酸银染色后在凝胶成像系统渊上海复日袁云砸 原 圆园园粤冤
下观察拍照袁发现多态性扩增后重复试验 圆 耀 猿 次遥 对
清晰并在重复试验中稳定出现的谱带进行统计袁计算
变异频率遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 不定芽和体胚发生
将带鳞茎盘的鳞茎块接种在培养基上袁缘凿 后鳞片
开始膨大并向内弯曲遥 大约 圆缘豫鳞茎块仅在鳞片切
割边缘形成极少量的愈伤组织袁约 圆园凿 后自鳞片之间
陆续长出白色小鳞芽渊图 员鄄粤袁月冤袁将小鳞芽分开转接
到新鲜培养基中培养 圆园凿 左右长出根遥 其余约 苑缘豫
鳞茎块在 员缘 耀 猿园凿后自靠近鳞茎盘的鳞片切割处形成
松散的颗粒状愈伤组织遥 将愈伤组织转接到新鲜培养
基中继续培养袁愈伤组织不断增殖袁并在约 源园凿后开始
分化出大量体细胞胚渊图 员鄄悦袁阅冤袁体细胞胚逐渐长大
形成完整植株遥
不定芽途径形成的小鳞芽和体胚发生途径形成的
小苗在培养基上分别培养 员园 耀 员圆 个月尧怨 耀 员员 个月
后袁鳞茎直径达到 员糟皂 左右遥 此时袁将鳞茎再次切割
接种培养遥 单个鳞茎单个世代袁通过不定芽途径再生
的植株数约为 员园 个袁而以体胚发生途径再生的植株数
约 员圆园 个遥
圆援 圆摇 陨杂杂砸引物筛选
以外植体母株 阅晕粤 为模板袁对 员园园 条 陨杂杂砸 引物
缘远员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 员摇 忽地笑不定芽形成渊粤尧月冤和体胚发生渊悦尧阅冤
云蚤早援 员摇 粤凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 渊粤袁 月冤 葬灶凿 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 渊悦袁 阅冤 燥枣 蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬
进行筛选遥 其中袁苑圆 条引物具有扩增产物袁可扩增引
物占 苑圆豫 遥 苑圆 条引物共扩增出 源愿圆 个 阅晕粤 片断袁大
小约 员园园 耀 圆园园园遭责袁每条引物可扩增的片断数目变化
于 员 耀 员缘 个之间袁平均每条引物可扩增约 远援 远怨 个片
断遥
圆援 猿摇 体细胞无性系 陨杂杂砸位点的变异
利用筛选获得的具有扩增产物的 苑圆 条 陨杂杂砸 引
物袁对通过不定芽和体胚发生途径获得的再生一代和
二代体细胞无性系材料进行分析袁检测其基因组 陨杂杂砸
位点的变异情况遥 结果表明袁苑圆 条引物在体细胞无性
系材料中均能扩增出条带遥 与对照母株相比袁不定芽
和体胚发生途径获得的再生一代和二代体细胞无性系
出现不同程度的 陨杂杂砸位点变异渊图 圆鄄粤袁月冤袁表现为新
增加带和缺失带遥 在所有单株中共检测到 源远 个 陨杂杂砸
位点发生变异袁这些变异位点来自 猿员 条引物扩增的产
物遥
如表 员 所示袁不同发生途径尧不同世代尧不同单株
之间的 陨杂杂砸位点变异表现不同遥 通过体胚发生途径
出现的 陨杂杂砸位点变异率高于不定芽途径遥 与对照母
株相比袁第二世代的变异率高于第一世代遥 体胚发生
形成的第一和第二世代植株 陨杂杂砸 位点平均变异率分
别为 园援 苑豫和 员援 源豫 袁而不定芽形成的第一和第二世代
植株 陨杂杂砸位点平均变异率分别为 园援 源豫和 园援 愿豫 遥 因
此袁在忽地笑组织培养中袁体胚发生途径比不定芽形成
途径更易引起变异袁并且 陨杂杂砸变异位点随再生世代的
增加而累积增多遥 来自相同途径的同一世代的各单株
间袁陨杂杂砸位点变异率差别较大袁如在 粤月员 原 猿尧粤月员 原 愿
和 杂耘员 原 圆 中未检测到 陨杂杂砸 位点变异袁而 粤月员 原 圆 和
杂耘员 原 员 的变异率分别达到 园援 远豫和 员援 园豫 遥 第一世代
发生变异的植株袁其再生第二世代植株中这种变异依
然存在遥 如图 圆鄄月 所示 哉月悦愿缘缘 扩增的结果袁通过体
胚发生途径获得的第一世代植株 杂耘员 原 远 新增 员 条约
猿园园遭责的条带袁其再生植株 杂耘圆 原 员 耀 愿 均具有这条新
增带遥 由此可见袁这些体细胞离体系变异在无性繁殖
中是稳定存在的遥
猿摇 讨论
随着生物技术的不断发展袁植物组织培养作为一
种常规技术手段已被广泛应用于植物的快繁尧种质保
存尧种质创新等方面遥 植物体细胞无性系变异袁又称植
物体细胞克隆变异袁泛指在植物细胞尧组织和器官培养
过程中袁培养细胞和再生植株中产生的遗传变异或表
观遗传变异咱员圆暂 袁作为一种创造突变的人工诱变技术袁
已广泛应用于各种作物种质资源创新和品种改良袁育
成的新品种已在生产中得到应用咱员猿袁 员源暂 遥 然而袁这种不
可预见的变异在基于组织培养技术的植物快繁尧种质
保存和基因工程遗传转化中袁对于保持材料的原有性
状极为不利遥 根据已有的研究袁体细胞无性系变异来
源于染色体变异尧基因突变尧转座子活化尧阅晕粤 甲基化
远远员员
摇 远 期 忽地笑体细胞无性系变异的 陨杂杂砸分析
以及外植体预先存在的变异等咱远袁 员缘暂 遥 体细胞无性系
变异的发生受多种因素影响袁主要包括基因型尧外植体
类型和状态尧器官再生途径尧继代时间尧培养世代尧激素
等咱员缘袁 员远暂 遥
表 员摇 忽地笑体细胞无性系 陨杂杂砸位点的变异
栽葬遭造藻 员摇 杂燥皂葬糟造燥灶葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 燥灶 陨杂杂砸 造燥糟蚤 燥枣 蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬
编号
晕燥援
缺失
凿藻造藻贼蚤燥灶
新增
葬凿凿蚤贼蚤燥灶
多态
责燥造赠皂燥则责
澡蚤泽皂
变异率
增葬则蚤葬贼蚤燥灶
枣则藻择怎藻灶糟赠
渊豫 冤
编号
晕燥援
缺失
凿藻造藻贼蚤燥灶
新增
葬凿凿蚤贼蚤燥灶
多态
责燥造赠皂燥则责
澡蚤泽皂
变异率
增葬则蚤葬贼蚤燥灶
枣则藻择怎藻灶糟赠
渊豫 冤
粤月员 原 员 圆 园 圆 园援 源 杂耘员 原 员 源 员 缘 员援 园
粤月员 原 圆 圆 员 猿 园援 远 杂耘员 原 圆 园 园 园 园
粤月员 原 猿 园 园 园 园 杂耘员 原 猿 猿 员 源 园援 愿
粤月员 原 源 员 圆 猿 园援 远 杂耘员 原 源 员 圆 猿 园援 远
粤月员 原 缘 圆 园 圆 园援 源 杂耘员 原 缘 园 源 源 园援 愿
粤月员 原 远 园 圆 圆 园援 源 杂耘员 原 远 圆 猿 缘 员援 园
粤月员 原 苑 员 圆 猿 园援 远 杂耘员 原 苑 圆 猿 缘 员援 园
粤月员 原 愿 园 园 园 园 杂耘员 原 愿 圆 园 圆 园援 源
平均 葬增藻则葬早藻 员援 园 园援 怨 员援 怨 园援 源 平均 葬增藻则葬早藻 员援 愿 员援 愿 猿援 缘 园援 苑
粤月圆 原 员 圆 员 猿 园援 远 杂耘圆 原 员 圆 猿 缘 员援 园
粤月圆 原 圆 员 猿 源 园援 愿 杂耘圆 原 圆 缘 圆 苑 员援 缘
粤月圆 原 猿 猿 员 源 园援 愿 杂耘圆 原 猿 猿 缘 愿 员援 苑
粤月圆 原 源 源 员 缘 员援 园 杂耘圆 原 源 圆 缘 苑 员援 缘
粤月圆 原 缘 源 圆 远 员援 圆 杂耘圆 原 缘 源 源 愿 员援 苑
粤月圆 原 远 圆 猿 缘 员援 园 杂耘圆 原 远 远 猿 怨 员援 怨
粤月圆 原 苑 圆 圆 源 园援 愿 杂耘圆 原 苑 猿 源 苑 员援 缘
粤月圆 原 愿 员 园 员 园援 圆 杂耘圆 原 愿 员 猿 源 园援 愿
平均 葬增藻则葬早藻 圆援 源 员援 远 源援 园 园援 愿 平均 葬增藻则葬早藻 猿援 猿 猿援 远 远援 怨 员援 源
注院粤月员院不定芽形成再生一代植株曰粤月圆院不定芽形成再生二代植株曰杂耘员院体胚发生再生一代植株曰杂耘圆院体胚发生再生二代植株遥
晕燥贼藻院 粤月员 皂藻葬灶泽 贼澡藻 枣蚤则泽贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶曰 粤月圆 皂藻葬灶泽 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶曰 杂耘员
皂藻葬灶泽 贼澡藻 枣蚤则泽贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽曰 杂耘圆 皂藻葬灶泽 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽援
图 圆摇 忽地笑体细胞无性系 陨杂杂砸位点的变异
云蚤早援 圆摇 杂燥皂葬糟造燥灶葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 燥灶 陨杂杂砸 造燥糟蚤 燥枣 蕴赠糟燥则蚤泽 葬怎则藻葬
粤尧月分别为引物 哉月悦愿源源 和 哉月悦愿缘缘 的扩增结果曰酝院皂葬则噪藻则曰悦运院母株对照曰粤月员院不定芽形成再生一代植株曰
粤月圆院不定芽形成再生二代植株曰杂耘员院体胚发生再生一代植株曰杂耘圆院体胚发生再生二代植株遥
粤 葬灶凿 月 泽澡燥憎 贼澡藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭葬灶凿泽 燥枣 哉月悦愿源源 葬灶凿 哉月悦愿缘缘袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠曰 酝院 皂葬则噪藻则曰 悦运院 责葬则藻灶贼 责造葬灶贼曰 粤月员院 贼澡藻 枣蚤则泽贼
则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶曰 粤月圆院贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 葬凿增藻灶贼蚤贼蚤燥怎泽 遭怎凿 枣燥则皂葬贼蚤燥灶曰
杂耘员院 贼澡藻 枣蚤则泽贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽曰 杂耘圆院 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 遭赠 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽援
苑远员员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊远冤院员员远源 耀 员员远愿
摇 摇 目前袁忽地笑的组织培养多采用鳞茎诱导不定芽
或通过愈伤组织诱导体胚发生袁后者的繁殖系数远大
于前者遥 本试验通过对忽地笑鳞茎在相同培养基中以
不定芽和体胚发生途径形成的 圆 个世代植株的 陨杂杂砸
位点变异进行分析袁发现体胚发生途径比不定芽途径
更易引起变异袁前人在对葡萄咱员苑暂 尧河北杨咱员愿暂等的研究
中也发现了同样的现象袁可能是由于体胚发生途径经
历了愈伤组织阶段袁愈伤组织处于相对无组织的单个
独立状态或联系松散的团块状态袁细胞对所处的物理
和化学环境胁迫的缓冲能力差袁阅晕粤 复制和染色体分
裂容易出现错误袁从而变异的几率较大遥 试验中还发
现 陨杂杂砸变异位点随再生世代的增加而累积增多袁这些
变异在无性繁殖中稳定存在遥 因此袁对于忽地笑的快
繁袁综合考虑繁殖系数和体细胞无性系变异袁以通过愈
伤组织诱导体胚发生途径的繁殖速度快袁但需不时采
集自然环境中生长的鳞茎作为外植体接种培养袁以避
免高世代累积较多的变异而影响品质遥 若以体细胞无
性系变异改良忽地笑的药用品质和观赏性状等袁则在
通过愈伤组织诱导体胚发生的高世代植株中筛选到目
标植株的几率较大遥 对于忽地笑种质保存而言袁虽然
不定芽形成途径较体胚发生途径更适宜袁但前者仍然
具有一定程度的 阅晕粤变异袁其形成的一代和二代植株
陨杂杂砸位点平均变异率分别为 园援 源豫和 园援 愿豫 遥 新的忽
地笑种质保存方法袁如超低温保存咱员怨暂及其与稳定的快
繁技术相结合咱圆园暂有待进一步研究建立遥
达克东等咱怨暂在 员缘 株苹果一代体细胞胚胎再生植
株中未发现 砸粤孕阅位点变异袁在 苑 株二代再生植株中
也仅发现 员 株出现多态性带遥 而冯霞等咱愿暂对多年生黑
麦草的体细胞无性系变异进行 砸粤孕阅 分析时袁员源 株再
生植株均呈现多态性带遥 这些变异株率的差异可能与
植物材料的遗传背景不同有关袁遗传基础不同袁发生错
误的大小和类型不同袁细胞自身去修复错误的能力不
同袁从而产生各种各样的变异遥 此外袁孕葬贼扎葬噪咱圆员暂采用不
同的分子标记对啤酒花茎尖分生组织离体培养再生植
株变异进行分析时发现袁利用 砸云蕴孕 和 杂栽杂 未检测到
变异袁采用 砸粤孕阅和 陨杂杂砸分别从 缘 株中检测到 员 株出
现变异袁而利用 粤云蕴孕 技术在所有再生植株与其母本
间均检测到多态性带遥 由此可见袁选用的技术也影响
检测的有效性袁检测位点越多袁分布越广袁检出变异的
可能性越大遥 本文利用 陨杂杂砸 标记在忽地笑不定芽途
径和体胚发生途径的第一世代 愿 株植株中分别检测到
远 株和 苑 株出现变异袁表明忽地笑具有较高的体细胞
无性系变异株率袁陨杂杂砸标记适用于忽地笑体细胞无性
系变异的筛选及其相关的育种鉴定等遥
参考文献院
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