全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊圆冤院园圆苑园 耀 园圆苑源允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园圆鄄园圆苑园鄄园缘
狗蔷薇类原球茎遗传转化体系的建立
毕摇 玲员 摇 刘凤栾员 摇 董爱香圆 摇 周晓阳员 摇 马摇 男员 摇 赵梁军员
渊员郾 中国农业大学观赏园艺与园林系袁北京摇 员园园员怨猿曰 圆郾 北京市园林科学研究所袁 北京摇 员园园员园圆冤
摘摇 要院在本实验室建立的狗蔷薇渊砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬冤类原球茎渊孕蕴月冤再生途径基础上袁以类原球茎为转化受
体袁采用根癌农杆菌渊粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽袁郧灾猿员园员 菌株冤介导法袁通过评价类原球茎 郧哉杂 基因瞬时
表达率袁采用正交试验设计优化狗蔷薇遗传转化条件袁建立遗传转化体系遥 最佳转化条件为院用 韵阅远园园值
为 园郾 远 的农杆菌菌液侵染狗蔷薇类原球茎 猿园皂蚤灶袁然后在含有 员园园滋皂燥造 辕 蕴乙酰丁香酮的 酝杂培养基上共
培养 圆凿袁利用此优化的转化系统袁经组织化学染色及 孕悦砸检测获得了转 郧哉杂基因阳性植株遥
关键词院狗蔷薇曰 类原球茎曰 根癌农杆菌曰 遗传转化
耘杂栽粤月蕴陨杂匀酝耘晕栽 韵云 郧耘晕耘栽陨悦 栽砸粤晕杂云韵砸酝粤栽陨韵晕 杂再杂栽耘酝
陨晕 孕砸韵栽悦韵砸酝 蕴陨运耘鄄月韵阅再 渊孕蕴月冤 燥枣 砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬
月陨 蕴蚤灶早员 摇 蕴陨哉 云藻灶早鄄造怎葬灶员 摇 阅韵晕郧 粤蚤鄄曾蚤葬灶早圆 摇 在匀韵哉 载蚤葬燥鄄赠葬灶早员 摇 酝粤 晕葬灶员 摇 在匀粤韵 蕴蚤葬灶早鄄躁怎灶员
渊员郾 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 韵则灶葬皂藻灶贼葬造 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 蕴葬灶凿泽糟葬责藻 粤则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻袁悦澡蚤灶葬 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员怨猿曰
圆郾 月藻蚤躁蚤灶早 蚤灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 造葬灶凿泽糟葬责藻 葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员园圆冤
粤遭泽贼则葬糟贼院郧藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 燥枣 砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬 憎葬泽 藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 孕蕴月泽 渊 责则燥贼燥糟燥则皂鄄造蚤噪藻 遭燥凿蚤藻泽冤
则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责则燥贼燥糟燥造 凿藻增藻造燥责藻凿 遭赠 燥怎则 造葬遭援 月赠 藻增葬造怎葬贼蚤灶早 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 郧哉杂 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶袁 泽藻增藻则葬造 枣葬糟贼燥则泽 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿 憎澡蚤糟澡
皂葬赠 葬枣枣藻糟贼 早藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 皂藻凿蚤葬贼藻凿 遭赠 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽 渊郧灾猿员园员 泽贼则葬蚤灶冤 援 郧藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 憎葬泽
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贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽 燥灶 贼澡藻 皂藻凿蚤怎皂 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 员园园滋皂燥造 辕 蕴 葬糟藻贼燥泽赠则蚤灶早燥灶藻 枣燥则 圆凿援 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 燥枣 砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬 憎藻则藻
蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 遭赠 郧哉杂 澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 泽贼葬蚤灶蚤灶早 葬灶凿 孕悦砸 贼藻泽贼蚤灶早援
运藻赠 憎燥则凿泽院砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬曰 责则燥贼燥糟燥则皂鄄造蚤噪藻 遭燥凿蚤藻泽曰 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽曰 早藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶
收稿日期院圆园员员鄄园远鄄园远摇 接受日期院圆园员员鄄园怨鄄员圆
基金项目院国家自然科学基金渊猿员员苑员怨怨猿冤袁农业部行业科研专项渊圆园园怨园猿园圆园冤
作者简介院毕摇 玲渊员怨愿缘鄄冤袁女袁山东济南人袁硕士袁研究方向为观赏植物分子育种遥 耘鄄皂葬蚤造院遭蚤造蚤灶早员员圆愿岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院赵梁军渊员怨缘远鄄冤袁男袁山西运城人袁教授袁研究方向为观赏植物发育生理与分子生物学遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡葬燥造躁缘园苑猿岳 泽蚤灶葬援 糟燥皂
摇 摇 狗蔷薇渊 砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬冤是原产于欧洲的落叶灌
木咱员暂 袁因其根系良好尧生长强健尧抗性强等特点常作为
切花月季的优良砧木咱圆暂 遥 我国引入的狗蔷薇不同程
度地遭受白粉病尧黑斑病和冠瘿病等病虫害及其他逆
境的侵害咱猿暂 袁需要采用基因工程的手段对其进行定向
改良遥 本实验室利用狗蔷薇建立了一种新的高效稳定
的再生体系袁首次在蔷薇属植物上提出了类原球茎
渊责则燥贼燥糟燥则皂鄄造蚤噪藻 遭燥凿蚤藻泽袁孕蕴月泽冤的概念袁并将该途径称为
类原球茎渊孕蕴月冤再生途径咱源暂 袁其发生过程为院叶片外植
体寅类根体寅类原球茎寅再生植株遥 该途径的再生率
相对较高袁具有一定的普遍性咱缘暂 遥 石蜡及半薄切片研
究发现袁类原球茎是包括胚性细胞及薄壁细胞的体胚
聚合体咱源袁远暂 袁被认为是潜在的理想遗传转化受体遥 本
研究以狗蔷薇类原球茎为转化受体袁采用根癌农杆菌
介导法袁通过正交试验设计研究了影响狗蔷薇遗传转
化的因素袁建立遗传转化体系袁为通过分子育种途径对
狗蔷薇进行遗传改良奠定基础遥
园苑圆
摇 圆 期 狗蔷薇类原球茎遗传转化体系的建立
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料的获取
狗蔷薇取自中国农业大学科学园花圃袁以单芽茎
段为外植体袁通过腋芽诱导及增殖培养获得无菌的组
培苗咱源暂 遥 以组培苗的无菌叶片为外植体袁在附加
员郾 缘皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 的 酝杂 培养基上暗培养 源 周袁温度
圆猿益 依 圆益袁诱导愈伤组织及类根体发生袁再将其转到
员 辕 圆酝杂 垣圆园皂早 辕 蕴 栽阅在的培养基上光培养 远 周袁诱导类
根体顶端分化类原球茎袁培养条件为 圆缘益 依 圆益袁光强
愿园园园 耀 员园园园园造曾袁光周期为 员远澡光 辕 愿澡暗曰将获得的类原
球茎转入选择培养基 酝杂 垣圆郾 园皂早 辕 蕴 远 原 月粤 垣园郾 员皂早 辕 蕴
陨月粤 垣园郾 员皂早 辕 蕴 郧粤猿 垣 员缘皂早 辕 蕴 潮霉素 垣 猿园园皂早 辕 蕴 羧苄
青霉素袁以最终存活的类原球茎为转化受体遥
员郾 圆摇 农杆菌菌株和质粒
采用根癌农杆菌菌株 郧灾猿员园员袁内含双元表达载体
责悦粤酝月陨粤员猿园员袁该载体携带 郧哉杂 报告基因和 匀孕栽 选
择基因袁郧哉杂基因中含有 员 个内含子袁因此只在植物细
胞中表达袁不在农杆菌中表达遥
员郾 猿摇 遗传转化体系的正交试验设计
选用 源 因素渊菌液浓度 韵阅远园园尧侵染时间尧共培养时
间尧乙酰丁香酮浓度冤猿 水平的 蕴怨 渊猿源 冤正交试验渊表员冤袁设置 圆 次重复袁每个处理 猿园 个 孕蕴月泽袁共培养结束
后袁统计 孕蕴月泽 的 郧哉杂 基因瞬时表达率渊有 郧哉杂 基因
瞬时表达的外植体数 辕总外植体数冤袁采用 杂孕杂杂 员员郾 缘
软件对数据进行方差分析遥
表 员摇 正交试验的供试因素及水平
栽葬遭造藻 员摇 韵则贼澡燥早燥灶葬造 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 枣葬糟贼燥则泽 葬灶凿 造藻增藻造泽
水平
造藻增藻造
因素 枣葬糟贼燥则
菌液浓度
遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊韵阅远园园 冤
侵染时间
蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻渊皂蚤灶冤
共培养时间
糟燥鄄糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 贼蚤皂藻渊凿冤
乙酰丁香酮浓度
葬糟藻贼燥泽赠则蚤灶早燥灶藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊滋皂燥造 辕 蕴冤
员 园郾 源 员园 员 缘园
圆 园郾 远 圆园 圆 员园园
猿 园郾 愿 猿园 猿 圆园园
员郾 源摇 根癌农杆菌的活化及侵染
取保存于 原 愿园益冰箱中的菌液袁在附加 员园园皂早 辕 蕴
卡那霉素和 员园园皂早 辕 蕴利福平的 再耘月 固体培养基上划
线袁圆愿益倒置培养至单菌落产生袁挑取单菌落于附加
员园园皂早 辕 蕴卡那霉素和 员园园皂早 辕 蕴 利福平的 再耘月 液体培
养基中袁圆愿益员愿园则 辕 皂蚤灶 震荡培养过夜袁活化过夜的农
杆菌按 员颐 缘园 的比例接种在相同的 再耘月 液体培养基中
继续培养至对数期袁缘园园园则 辕 皂蚤灶 离心 缘皂蚤灶袁收集菌体袁
用 员 辕 圆酝杂液体培养基重悬菌液至 韵阅远园园为 园郾 源 耀 园郾 愿袁
将 孕蕴月渊附带叶片尧愈伤组织及类根体冤浸入菌液中袁
轻轻震荡 员园 耀 猿园皂蚤灶袁用灭菌滤纸吸干残留菌液袁转到
附加 缘园 耀 圆园园滋皂燥造 辕 蕴 乙酰丁香酮的分化培养基中共
培养 员 耀 猿凿遥 培养结束后袁统计 孕蕴月的转化植株袁计算
转化效率和植株再生率遥
员郾 缘摇 组织化学染色
参照 允藻枣枣藻则泽燥灶 等咱苑暂的 郧哉杂 染色法进行染色遥 将
共培养结束后的 孕蕴月浸入 郧哉杂染色液中袁猿苑益避光保
温过夜后袁用 苑园豫乙醇和透明剂渊水合氯醛冤脱色袁
晕陨运韵晕实体显微镜渊 杂酝在愿园园冤下观察 孕蕴月 的 郧哉杂 染
色情况遥
员郾 远摇 孕悦砸检测
采用植物基因组 阅晕粤 提取试剂盒渊康为世纪生
物公司冤提取狗蔷薇基因组 阅晕粤袁根据载体中 栽鄄阅晕粤
上 匀孕栽渊长度为 猿苑缘遭责冤基因的序列合成 圆 对特异引物
渊 上 海 生 工 冤袁 上 游 引 物 孕员院 缘忆鄄
郧悦栽郧郧郧郧悦郧栽悦郧郧栽栽栽悦悦粤悦栽粤栽悦郧郧鄄猿忆袁 下 游 引 物
孕圆院 缘忆鄄悦郧悦粤栽粤粤悦粤郧悦郧郧栽悦粤栽栽郧粤悦栽郧郧粤郧悦鄄猿忆遥
孕悦砸反应体系为 圆缘滋造袁反应条件院怨源益起始变性 缘皂蚤灶曰
怨源益变性 猿园泽袁 远园益复性 猿园泽袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁猿圆 个循
环曰苑圆益最终延伸 员园皂蚤灶遥 孕悦砸 反应结束后取样 员园滋造
在 员豫琼脂糖凝胶上进行电泳检测遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 各因素对狗蔷薇遗传转化的影响
统计狗蔷薇 孕蕴月 的 郧哉杂 基因瞬时表达率袁采用极
差分析渊表 圆冤及 杂孕杂杂软件方差分析渊表 猿冤袁结果表明院
各因素对转化效率的提高影响均很明显袁但各因子的影
响强度不同袁表现为院菌液浓度 跃乙酰丁香酮浓度 跃共
培养时间 跃侵染时间遥 由此可见袁根癌农杆菌活力是影
响遗传转化最重要的因素遥 为筛选出最佳的遗传转化
体系袁对各因素内不同水平之间进行了多重比较分析遥
员苑圆
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
表 圆摇 正交试验极差分析结果
栽葬遭造藻 圆摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 则葬灶早藻 蚤灶 燥则贼澡燥早燥灶葬造 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼
处理
贼则藻葬贼皂藻灶贼
菌液浓度
遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
渊韵阅远园园 冤
侵染时间
蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻
渊皂蚤灶冤
共培养时间
糟燥鄄糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶
贼蚤皂藻渊凿冤
乙酰丁香酮浓度
葬糟藻贼燥泽赠则蚤灶早燥灶藻
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊滋皂燥造 辕 蕴冤
郧哉杂基因瞬时表达率
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 郧哉杂
早藻灶藻渊豫 冤
员 园援 源 员园 员 缘园 员员援 远缘
圆 园援 源 圆园 圆 员园园 圆远援 苑园
猿 园援 源 猿园 猿 圆园园 员愿援 猿缘
源 园援 远 员园 圆 圆园园 猿缘
缘 园援 远 圆园 猿 缘园 缘员援 苑缘
远 园援 远 猿园 员 员园园 远缘
苑 园援 愿 员园 猿 员园园 源园
愿 园援 愿 圆园 员 圆园园 员园
怨 园援 愿 猿园 圆 缘园 远园
极差 则葬灶早藻渊砸冤 猿员援 远愿 员愿援 怨园 员员援 远怨 圆圆援 苑愿
表 猿摇 杂孕杂杂方差分析结果
栽葬遭造藻 猿摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 增葬则蚤葬灶糟藻 遭赠 杂孕杂杂
变异来源 泽燥怎则糟藻 燥枣 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 平方和 杂杂 自由度 阅云 均方 酝杂 云
菌液浓度
遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊韵阅远园园 冤 猿园圆远郾 猿圆猿 圆 员缘员猿郾 员远圆 圆苑园郾 源源怨鄢鄢
侵染时间
蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻渊皂蚤灶冤 员猿愿源郾 怨圆园 圆 远怨圆郾 源远园 员圆猿郾 苑远源鄢鄢
共培养时间
糟燥鄄糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 贼蚤皂藻渊凿冤 源圆缘郾 员园猿 圆 圆员圆郾 缘缘圆 猿苑郾 怨怨园鄢鄢
乙酰丁香酮浓度
葬糟藻贼燥泽赠则蚤灶早燥灶藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 渊滋皂燥造 辕 蕴冤 员愿缘源郾 愿园猿 圆 怨圆苑郾 源园圆 员远缘郾 苑缘缘鄢鄢
误差 藻则则燥则 缘园郾 猿缘缘 怨 缘郾 缘怨缘
总计 贼燥贼葬造 圆怨圆苑苑郾 员缘园 员愿
校正总计 糟燥则则藻糟贼藻凿 贼燥贼葬造 远苑源员郾 缘员 员苑
摇 摇 注院鄢鄢表示在 园郾 园员 水平差异显著遥
晕燥贼藻院鄢鄢蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 责 越 园郾 园员郾
圆郾 圆摇 菌液浓度对转化效率的影响
菌液浓度是影响基因转化的重要因素袁当农杆菌
处于对数生长期时袁菌株活力最大袁最有利于农杆菌的
侵染遥 试验发现当菌液浓度渊韵阅远园园冤为 园郾 远 时袁类原球
茎 郧哉杂基因瞬时表达率最高渊缘园郾 缘愿豫 冤袁菌液浓度过
高或过低袁表达率都下降袁而且不同浓度对转化效率的
影响差异达到极显著水平渊表 源冤袁故选择用于遗传转
化的菌液浓度 韵阅远园园 越 园郾 远遥
圆郾 猿摇 侵染时间对转化效率的影响
农杆菌的侵染时间对转化结果也有一定的影响袁
侵染时间太短袁农杆菌不能充分与植物转化受体接触袁
不利于基因的转化袁侵染时间太长袁农杆菌会对植物细
胞产生毒害作用遥 结果表明院郧哉杂 基因瞬时表达率随
农杆菌侵染时间的延长而增大袁当侵染时间为 猿园皂蚤灶
时袁郧哉杂基因瞬时表达率最高袁且与其他 圆 个水平相比
差异达极显著水平渊表 源冤袁因此遗传转化时侵染时间
选择 猿园皂蚤灶遥
圆郾 源摇 共培养时间对转化效率的影响
根癌农杆菌与植物转化受体的共培养过程是植物
基因转化过程中非常重要的环节遥 在这一过程中袁农
杆菌将其质粒上的 栽鄄阅晕粤 区域整合到植物的基因组
中袁因而必须选择最佳的共培养时间遥 表 源 结果表明袁
共培养 圆凿后 郧哉杂基因瞬时表达率最大袁与共培养 猿凿
的结果差异显著袁同时考虑到共培养时间过长袁农杆菌
过度增殖而造成外植体伤害袁降低转化率袁因此将最佳
共培养时间确定为 圆凿遥
圆郾 缘摇 乙酰丁香酮浓度对转化效率的影响
大量试验表明酚类化合物如乙酰丁香酮对 灾蚤则 区
基因的活化有重要作用袁可促进 栽鄄阅晕粤区域整合入植
物体中遥 本研究将乙酰丁香酮添加到共培养基中袁以
期提高共培养过程中 栽鄄阅晕粤 的转化效率遥 试验结果
渊表 源冤表明袁乙酰丁香酮浓度为 员园园滋皂燥造 辕 蕴时袁郧哉杂基
因瞬时表达率最大渊源猿郾 怨园豫 冤袁浓度为 圆园园滋皂燥造 辕 蕴 时袁
转化效率反而下降袁因此确定遗传转化时添加乙酰丁
圆苑圆
摇 圆 期 狗蔷薇类原球茎遗传转化体系的建立
香酮的最适浓度为 员园园滋皂燥造 辕 蕴遥
表 源摇 各因素不同水平均值多重比较结果
栽葬遭造藻 源摇 砸藻泽怎造贼泽 燥枣 皂怎造贼蚤责造藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 葬遭燥怎贼 枣葬糟贼燥则泽
因素
枣葬糟贼燥则
水平
造藻增藻造
郧哉杂基因瞬时表达率
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 郧哉杂 早藻灶藻渊豫 冤
菌液浓度渊韵阅远园园 冤 园郾 源 员愿郾 怨园 糟悦遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 园郾 远 缘园郾 缘愿 葬粤园郾 愿 猿远郾 远苑 遭月
侵染时间 员园 圆愿郾 愿愿 遭月
蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 渊皂蚤灶冤 圆园 圆怨郾 源愿 遭月猿园 源苑郾 苑愿 葬粤
共培养时间 员 圆愿郾 愿愿 糟月
糟燥鄄糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 贼蚤皂藻渊凿冤 圆 源园郾 缘苑 葬粤猿 猿远郾 苑园 遭粤
乙酰丁香酮浓度 渊滋皂燥造 辕 蕴冤 缘园 源员郾 员猿 葬粤
葬糟藻贼燥泽赠则蚤灶早燥灶藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 员园园 源猿郾 怨园 葬粤圆园园 圆员郾 员员 遭月
摇 摇 注院采用 阅怎灶糟葬灶爷泽袁大小写字母分别表示 园郾 园员 和 园郾 园缘 水平差异显
著遥
晕燥贼藻院月赠 阅怎灶糟葬灶爷 泽袁 糟葬责蚤贼葬造 葬灶凿 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼
凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 责 越 园郾 园员葬灶凿 责 越 园郾 园缘 造藻增藻造袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
圆郾 远摇 郧哉杂染色及抗性植株 孕悦砸检测
根据前述试验袁确定遗传转化的最佳条件为院菌液
浓度 韵阅远园园 越 园郾 远袁侵染 猿园皂蚤灶袁共培养 圆凿袁添加乙酰丁
香酮 员园园滋皂燥造 辕 蕴遥 转化后的狗蔷薇 孕蕴月 的 郧哉杂 染色
情况如图 员 所示遥 利用已优化的转化系统获得了 远 株
孕蕴月再生的抗性植株渊图 圆冤袁经 孕悦砸 检测袁其中 缘 株
扩增出特异条带袁与阳性对照位置相同渊图 猿冤袁其中
郧哉杂 基因转化效率为 员远郾 苑豫 袁类原球茎分化率为
员猿郾 猿豫 袁平均再生植株 圆郾 园遥
图 员摇 狗蔷薇类原球茎 郧哉杂基因瞬时表达染色情况
云蚤早援 员摇 匀蚤泽贼燥造燥早蚤糟葬造 葬泽泽葬赠 燥枣 贼则葬灶泽蚤藻灶贼 郧哉杂 早藻灶藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 孕蕴月泽 燥枣 砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬 渊遭葬则 越 员皂皂冤
猿摇 讨论
在农杆菌介导的遗传转化研究中袁转化受体的选
择十分重要遥 云蚤则燥燥扎葬遭葬凿赠等咱苑暂研究了月季耶王威爷渊砸援
匀赠遭则蚤凿葬 砸燥赠葬造贼赠冤的叶尧茎尧叶柄及花器官袁结果只有松
脆的胚性愈伤转化成功遥 高丽萍等咱愿暂报道了月季耶萨
图 圆摇 狗蔷薇类原球茎再生的抗性植株
云蚤早援 圆摇 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 早藻灶藻则葬贼藻凿
枣则燥皂 孕蕴月泽 燥枣 砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬
粤院未转化植株曰月袁悦院抗性植株
粤院怎灶贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽曰月袁悦院则藻泽蚤泽贼葬灶贼 责造葬灶贼泽渊遭葬则 越 员园皂皂冤
图 猿摇 狗蔷薇抗性植株 孕悦砸检测
云蚤早援 猿摇 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
砸燥泽葬 糟葬灶蚤灶葬 枣燥则 匀孕栽 早藻灶藻
酝院阅晕粤分子量标准渊栽则葬灶泽圆运 责造怎泽冤曰员院阳性对照曰圆院未
转化的对照植株曰猿尧源尧缘尧远尧愿院阳性植株曰苑院假阳性植株
酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则渊栽则葬灶泽圆运 责造怎泽冤曰员院责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰圆院灶燥灶鄄
贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 糟燥灶贼则燥造曰 猿袁 源袁 缘袁远袁愿院 责燥泽蚤贼蚤增藻 责造葬灶贼泽曰 苑院 枣葬造泽藻
责燥泽蚤贼蚤增藻 责造葬灶贼泽
蔓莎爷的试管苗叶片不能转化袁而胚性愈伤组织则可
以转化遥 蕴蚤 等咱怨暂以月季耶悦葬则藻枣则藻藻 月藻葬怎贼赠爷的叶片尧未
分化的愈伤组织以及初级胚性愈伤组织为受体袁仅从
转化的初级胚性愈伤组织中诱导出转基因植株遥 孕蕴月
最初是用来描述兰科植物组织培养过程中发生的类似
于原球茎的特殊组织结构袁并作为遗传转化受体在热
带兰上研究较多咱员员 耀 员猿暂 遥 本研究以狗蔷薇的 孕蕴月 为转
化受体袁发现其 郧哉杂 基因转化率最高达 远缘豫 袁这主要
是由于该再生体系再生率较高袁且重复性较好袁并且狗
蔷薇的 孕蕴月是胚性细胞和薄壁细胞的体胚聚合体咱远暂 袁
胚性细胞分裂能力较强袁易于接受外源基因遥 由此可
见袁孕蕴月是蔷薇属植物理想的转化受体材料遥
根癌农杆菌菌液浓度以及侵染时间对不同植物转
化受体有一定的差异遥 菌液浓度一般在 韵阅远园园 越 园郾 园缘耀 园郾 苑 之间袁对农杆菌较为敏感的转化受体袁一般需要
较低的菌液浓度遥 侵染时间的选择也十分重要袁若侵
染时间太短袁菌液未与受体充分接触袁因而不能转化曰
但侵染时间太长袁容易引起细菌对植物细胞的毒害作
用袁因而一般侵染时间不超过 猿园皂蚤灶遥 以月季的胚性
猿苑圆
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊圆冤院园圆苑园 耀 园圆苑源
愈伤组织为转化受体袁菌液 韵阅远园园值为 园郾 缘 耀 园郾 愿袁农杆
菌侵染 圆园 皂蚤灶咱员园暂 遥 兰科植物以类原球茎为转化受体
时袁韵阅远园园一般为 园郾 圆 耀 园郾 远袁侵染时间 猿园皂蚤灶咱员员 耀 员缘暂 遥 本
研究结果表明袁以狗蔷薇的 孕蕴月 为转化受体时袁适合
的菌液浓度 韵阅远园园 越 园郾 远袁侵染 猿园皂蚤灶遥
共培养时间是影响基因转化是否成功的重要因
素袁在这个阶段农杆菌会将其 栽鄄阅晕粤区域整合到植物
基因组中袁完成转化遥 有研究报道袁对于没有伤口的转
化受体袁如胚性愈伤组织袁通常需要添加一定浓度的乙
酰丁香酮咱员远袁员苑暂 遥 狗蔷薇的 孕蕴月作为一种无伤口受体袁
添加一定浓度的乙酰丁香酮渊员园园滋皂燥造 辕 蕴冤并共培养
圆凿袁能够明显提高基因转化效率遥
源摇 结论
通过正交试验设计方法袁优化了影响遗传转化的
因子袁建立了狗蔷薇以类原球茎为受体的遗传转化体
系袁并获得了转 郧哉杂基因阳性植株遥 证明狗蔷薇的类
原球茎是一种理想的遗传转化受体袁可以用于蔷薇属
植物的分子育种遥
参考文献院
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