全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员愿源缘 耀 员愿缘圆允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤员圆鄄员愿源缘鄄园愿
文心兰黄化突变体的初步研究
王彩霞摇 田韦韦摇 田摇 敏摇 欧阳彤摇 汪凤珍
渊中国林业科学研究院亚热带林业研究所袁浙江 富阳摇 猿员员源园园冤
摘摇 要院对文心兰品种百万金币的 员园 份体细胞无性系黄化突变体的叶绿素合成和叶绿体结构进行初步
分析遥 结果表明院渊员冤黄绿条纹突变体渊再员 耀 再远冤的总叶绿素渊悦澡造冤和类胡萝卜素渊悦葬则冤含量显著降低袁
分别为正常植株的 圆愿援 源苑豫 耀 愿苑援 圆员豫和 猿缘援 愿圆豫 耀 怨员援 怨愿豫 曰再圆尧再猿尧再缘 和 再远 的叶绿素 葬 辕 遭 比值渊悦澡造
葬 辕 遭冤显著升高袁再源 的 悦澡造 葬 辕 遭 显著降低曰叶绿素合成分别在粪卟啉原芋渊悦燥责则燥早藻灶 芋冤到原卟啉御
渊孕则燥贼燥 御冤渊再员尧再圆尧再猿尧再缘 和 再远冤袁及 孕则燥贼燥 御到镁原卟啉御渊酝早 原 孕则燥贼燥 御冤渊再源冤的位点受阻遥 渊圆冤完
全黄化突变体渊再苑 耀 再员园冤的 悦澡造和 悦葬则含量显著降低袁分别为正常植株的 员园援 怨源豫 耀员缘援 圆圆豫和 圆圆援 园远豫
耀圆愿援 怨源豫 曰悦澡造 葬 辕 遭 显著升高袁悦澡造 辕 悦葬则 显著降低曰叶绿素合成在 悦燥责则燥早藻灶 芋到 孕则燥贼燥 御的位点受阻遥
渊猿冤黄叶组织内叶绿体和基粒片层减少曰部分叶绿体异常袁基粒片层稀疏松散或缺失袁基质中含较多嗜
饿颗粒和囊泡遥 渊源冤利用 陨杂杂砸引物 哉月悦愿圆苑 和 哉月悦愿怨苑 在突变体中各检测出 员 个多态性位点遥 叶绿素
合成受阻和叶绿体发育异常导致叶绿素含量减少是突变体叶片呈现黄色的主要原因遥
关键词院文心兰曰体细胞无性系变异曰黄化突变体曰叶绿素曰叶绿体超微结构曰陨杂杂砸
收稿日期院圆园员猿鄄园猿鄄圆愿摇 接受日期院圆园员猿鄄园远鄄员圆
基金项目院国家自然科学基金渊猿员猿园员愿园员冤袁浙江省自然科学基金渊再猿员园园圆苑圆冤
作者简介院王彩霞袁女袁助理研究员袁主要从事观赏植物组织培养及遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院糟曾憎葬灶早澡灶岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院同第一作者遥
摇 摇 叶色突变是高等植物中常见的一种性状变异袁它
可以自然发生咱员暂 袁但理化诱变和组织培养等诱发叶色
突变更为普遍袁且突变频率也更高咱圆暂 遥 迄今袁已在拟
南芥咱猿暂 尧水稻咱源暂 尧玉米咱缘暂和油菜咱远暂等多种植物中发现
了大量叶色突变体遥 叶色突变体对阐明植物光合作用
机制袁揭示叶绿素生物合成与降解途径袁发掘鉴定光合
作用相关新基因以及了解基因间相互作用具有特殊的
研究价值遥 同时袁叶色突变体在生产实践中具有重要
的应用价值袁如作为标记性状用于简化良种繁育和杂
交制种咱苑鄄愿暂 袁以及培育观赏植物等遥
在观赏植物中袁培育具有较高观叶价值的新品种
是其种质创新的重要目标咱怨暂 遥 观赏植物常采用离体
再生的方式进行无性繁殖袁在此过程中易产生体细胞
无性系叶色变异遥 这些叶色突变体可作为观赏彩叶植
物培育的重要材料来源遥 目前已在花烛咱员园暂 尧菊花咱员员暂 尧
大花蕙兰咱员圆暂和菲白竹咱员猿暂等观赏植物中发现不同类型
的叶色突变体袁并对其光合色素含量和组成尧叶肉细胞
显微结构尧叶绿体超微结构尧叶绿体编码基因的表达袁
以及遗传变异等进行了分析袁不同材料的研究结果不
尽相同遥 文心兰渊韵灶糟蚤凿蚤怎皂冤属于兰科气生兰类袁花形
优美袁花色艳丽袁是一类极具观赏价值而被广泛栽培的
兰花遥 第一作者所在研究组自 圆园园缘 年开始以拟原球
茎诱导途径进行文心兰的组织培养咱员源暂 袁在组培后代中
陆续发现 员缘园 多份叶色突变株袁其叶片呈现完全黄化尧
黄绿条纹尧完全白化尧白绿条纹等遥 本研究以其中生长
增殖状况良好的 员园 份黄化突变体为材料袁测定了叶片
光合色素和叶绿素合成中间产物含量变化袁观察比较
了叶肉细胞和叶绿体超微结构改变袁并利用 陨杂杂砸分子
标记对其遗传变异进行了分析袁旨在为了解其黄化机
理和合理利用这些新种质积累理论基础遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 材料
供 试 材 料 为 文 心 兰 品 种 百 万 金 币
渊耶酝蚤造造蚤燥灶早燥造凿泽爷冤离体再生培养过程中获得的 员园 份体
细胞无性系黄化突变体袁分别命名为 再员 耀 再员园遥 再员 耀
再员园 自 圆园园缘 年开始从拟原球茎诱导途径获得的再生
缘源愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
注院粤援 黄绿条纹突变体曰月援 完全黄化突变体曰悦援 正常植株遥
晕燥贼藻院粤援 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼 憎蚤贼澡 赠藻造造燥憎 泽贼则藻葬噪 造藻葬增藻泽曰月援 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼 憎蚤贼澡 憎澡燥造藻 赠藻造造燥憎 造藻葬增藻泽曰悦援 晕燥则皂葬造 责造葬灶贼援
图 员摇 文心兰体细胞无性系黄化突变体的表型
云蚤早援 员摇 孕澡藻灶燥贼赠责藻泽 燥枣 曾葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 燥枣 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
植株咱员源暂中陆续选出袁其黄化性状在离体增殖培养过程
中保持稳定遥 其中袁再员 耀 再远 的叶片分别呈现深浅不
一尧比例不同的黄绿条纹袁再苑 耀 再员园 的叶片完全黄化
渊图 员冤遥 选取大小相同具 缘 耀 远 叶的突变株和正常植
株用于试验遥
员援 圆摇 叶片光合色素含量测定
选取黄化突变株和正常植株最上部第 圆 叶进行光
合色素含量测定遥 剪取叶片中段袁去叶脉袁精确称取
圆园园 皂早 新鲜叶片袁以 愿园豫丙酮研磨提取叶片光合色
素袁在 哉灶蚤糟葬灶 哉灾猿园园 分光光度计渊栽澡藻则皂燥袁美国冤下测
定溶液吸光度 粤源苑园尧粤远源远 和 粤远远猿遥 按 蕴蚤糟澡贼藻灶贼澡葬造藻则
对 粤皂燥灶修正提出的公式计算叶绿素 葬渊悦澡造燥则燥责澡赠造造 葬袁
悦澡造 葬冤尧叶绿素 遭 渊 悦澡造燥则燥责澡赠造造 葬袁 悦澡造 遭冤尧总叶绿素
渊悦澡造燥则燥责澡赠造造袁悦澡造冤和类胡萝卜素渊悦葬则燥贼藻灶燥蚤凿袁悦葬则冤含
量袁以及叶绿素 葬 辕 遭 比值渊悦澡造 葬 辕 遭冤和总叶绿素 辕类胡
萝卜素比值渊悦澡造 辕 悦葬则冤遥 光合色素含量以 皂早窑渊员园园早
云宰冤 原员表示遥
员援 猿摇 叶绿素合成中间产物含量测定
选取黄化突变株和正常植株最上部第 圆 叶进行叶
绿素合成中间产物含量测定遥 d 原 氨基酮戊酸渊 d 原
粤皂蚤灶燥造藻增怎造蚤灶蚤糟 葬糟蚤凿袁粤蕴粤冤含量参照喻敏等咱员缘暂的方法
测定曰胆色素原渊 孕燥则责澡燥遭蚤造蚤灶燥早藻灶袁孕月郧冤尧尿卟啉原芋
渊哉则燥责燥则责澡赠则蚤灶燥早藻灶 芋袁 哉则燥早藻灶 芋 冤 和 粪 卟 啉 原
渊 悦燥责则燥责燥则责澡赠则蚤灶燥早藻灶 芋袁 悦燥责则燥早藻灶 芋 冤 含 量 采 用
月燥早燥则葬凿 的方法咱员远暂 测定曰原卟啉 渊 孕则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 御袁
孕则燥贼燥 御冤尧镁原卟啉 渊酝早 原 孕则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 御袁酝早 原
孕则燥贼燥 御冤和原叶绿素酸渊 孕则燥贼燥糟澡造燥则燥责澡赠造造袁孕糟澡造冤按照
匀燥凿早蚤灶泽和 增葬灶 匀怎赠泽贼藻藻 的方法咱员苑暂测定遥 中间产物含
量以相对于正常植株含量的百分比渊豫 冤表示遥
员援 源摇 叶肉细胞和叶绿体超微结构观察
选取黄化突变株和正常植株最上部第 圆 叶的中
段袁分别将突变株叶片的黄色和绿色部分袁以及正常株
的叶片切成 员 皂皂 伊 猿 皂皂 小块袁置于 圆援 缘豫 戊二醛
渊园郾 员 皂燥造窑蕴 原员磷酸缓冲液袁责匀 值 苑援 园冤中抽气至完全
下沉袁源益固定过夜袁园援 员 皂燥造窑蕴 原员磷酸缓冲液渊责匀 值
苑郾 园冤漂洗 猿 伊 员缘 皂蚤灶遥 员豫饿酸渊园援 员 皂燥造窑蕴 原员磷酸缓
冲液袁责匀 值 苑援 园冤固定 圆 澡袁再次漂洗遥 依次用 缘园豫 尧
苑园豫 尧愿园豫 尧怨园豫 尧怨缘豫 乙醇梯度脱水袁每次 员缘 皂蚤灶袁
员园园豫乙醇 圆园 皂蚤灶袁丙酮 圆园 皂蚤灶遥 依次用体积比 员颐 员和
员颐 猿的 杂责怎则则包埋剂和丙酮的混合液渗透 员 澡 和 猿 澡遥
纯 杂责怎则则包埋过夜袁苑园益聚合过夜遥 砸藻蚤糟澡藻则贼 超薄切片
机切片制作铜网切片渊愿园 灶皂冤袁醋酸双氧铀和柠檬酸
铅双染袁在 允耘酝 原员圆猿园 透射电镜下观察并拍照遥
员援 缘摇 遗传变异的 陨杂杂砸分析
取黄化突变株和正常植株的幼嫩叶片于液氮中碾
磨袁采用改良的 悦栽粤月法少量提取基因组 阅晕粤遥 园郾 愿豫
琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测 阅晕粤 纯度及
浓度袁稀释至 缘园 灶早窑滋蕴 原员于 原 圆园益保存备用遥 反应
体系渊圆园 滋蕴冤包括 缘园 灶早 模板 阅晕粤袁员 伊 孕悦砸 缓冲液袁
园援 圆 滋酝 引物袁园援 圆 皂酝 凿晕栽孕袁圆 皂酝 酝早悦造圆和 员哉 栽葬择阅晕粤聚合酶遥 在 孕悦砸仪 悦员园园园渊月陨韵 原 砸粤阅袁美国冤上
按如下程序扩增院怨源益预变性 缘 皂蚤灶曰怨源益变性 员 皂蚤灶袁
远源愿员
摇 员圆 期 文心兰黄化突变体的初步研究
源缘 耀 远愿益 渊视引物而定冤退火 员 皂蚤灶袁苑圆益 延伸 员援 缘
皂蚤灶袁猿愿 个循环曰苑圆益延伸 愿 皂蚤灶曰源益保温遥 陨杂杂砸 引物
为 哉月悦愿园员 耀怨园园袁共 员园园 条袁参照哥伦比亚大学公布的
序列由上海生工合成遥 扩增产物用 愿豫聚丙烯酰胺凝
胶电泳分离袁经硝酸银染色后在凝胶成像系统 云砸 原
圆园园粤渊复日袁上海冤下观察拍照遥
以正常植株的基因组 阅晕粤 为模板对 员园园 条 陨杂杂砸
引物进行初步筛选袁其中 远怨 条引物具清晰扩增产物袁
共扩增出 源缘猿 个大小约 员园园 耀 圆园园园 遭责 的 阅晕粤 片断遥
利用这些引物对黄化突变体的遗传变异进行分析遥
员援 远摇 数据分析
叶片光合色素和叶绿素合成中间产物含量的测定
重复 猿 次遥 试验数据处理和分析采用 酝蚤糟则燥泽燥枣贼 耘曾糟藻造
和 杂孕杂杂软件完成遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 突变体叶片光合色素含量和组分的变化
如表 员 所示袁与正常植株相比袁远 份黄绿条纹突变
体渊 再员 耀 再远冤的光合色素含量均显著降低袁 悦澡造 葬尧
悦澡造 遭尧悦澡造和 悦葬则 含量分别为正常植株的 圆怨援 缘源豫 耀
愿苑援 源圆豫 尧圆缘援 愿猿豫 耀 愿远援 源远豫 尧圆愿援 源苑豫 耀 愿苑援 圆员豫 和
猿缘郾 愿圆豫 耀怨员郾 怨愿豫 遥 光合色素含量在除 再缘 和 再远 之
间的各黄绿条纹突变体之间具有显著性差异袁黄色叶
片组织越多袁光合色素含量越低遥 黄绿条纹突变体的
光合色素比值也发生了变化遥 其中袁再圆尧再猿尧再缘 和 再远
的 悦澡造 葬 辕 遭 不同程度显著升高袁为正常植株的 员援 员员 耀
员援 员远 倍袁说明其 悦澡造 遭 降低幅度大于 悦澡造 葬曰再源 的 悦澡造
葬 辕 遭显著降低袁为正常植株的 愿怨援 员猿豫 袁表明其 悦澡造 葬降
低幅度大于悦澡造 遭曰再员 的 悦澡造 葬 辕 遭与正常植株无显著性
差异遥 远 份黄绿条纹突变体的 悦澡造 辕 悦葬则 均显著低于正
常植株袁为正常植株的 苑远援 员苑豫 耀 怨源援 愿愿豫 袁说明其 悦澡造
含量降低幅度大于 悦葬则遥 悦澡造 辕 悦葬则 在部分黄绿条纹突
变体如 再员 和 再猿尧再圆 和 再源 之间具有显著性差异遥
源 份完全黄化突变体渊再苑 耀 再员园冤的光合色素含量
均显著降低袁且显著低于黄绿条纹突变体遥 其 悦澡造 葬尧
悦澡造 遭尧悦澡造和 悦葬则含量分别仅为正常植株的 员员援 怨员豫 耀
员缘援 怨源豫 尧愿援 苑园豫 耀 员猿援 怨缘豫 尧员园援 怨源豫 耀 员缘援 圆圆豫 和
圆圆郾 园远豫 耀圆愿援 怨源豫 遥 再员园 的光合色素含量最低袁悦澡造 葬尧
悦澡造 遭和 悦澡造含量分别为 员援 怨愿尧园援 远猿 和 圆援 远员 皂早窑渊员园园早
云宰冤 原员袁显著低于 再苑 耀 再怨曰悦葬则 含量仅为 园援 苑苑 皂早窑
渊员园园早 云宰冤 原员袁显著低于 再苑 和 再愿遥 源 份完全黄化突变
体的 悦澡造 葬 辕 遭 均显著升高袁为正常植株的 员援 员猿 耀 员援 猿苑
倍曰悦澡造 辕 悦葬则 显著降低袁为正常植株的 源怨援 缘远豫 耀
远圆郾 源猿豫 遥 悦澡造 葬 辕 遭和 悦澡造 辕 悦葬则在部分完全黄化突变体
之间也具有显著性差异袁如 再员园 的 悦澡造 葬 辕 遭达到 猿援 员缘袁
再怨 的 悦澡造 辕 悦葬则为 源援 圆苑袁显著高于其它突变体遥
表 员摇 文心兰黄化突变体和正常植株的叶片光合色素含量及比值
栽葬遭造藻 员摇 悦燥灶贼藻灶贼泽 葬灶凿 则葬贼蚤燥泽 燥枣 责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 责蚤早皂藻灶贼泽 蚤灶 造藻葬增藻泽 燥枣 曾葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 葬灶凿 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼 燥枣 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
材料
酝葬贼藻则蚤葬造泽
光合色素含量
悦燥灶贼藻灶贼泽 燥枣 责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 责蚤早皂藻灶贼泽 辕 咱皂早窑渊员园园早 云宰冤 原员 暂
光合色素比值
砸葬贼蚤燥泽 燥枣 责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 责蚤早皂藻灶贼泽
悦澡造 葬 悦澡造 遭 悦澡造 悦葬则 悦澡造 葬 辕 遭 悦澡造 辕 悦葬则
晕孕 员远援 远圆 园援 愿员葬 苑援 圆源 园援 猿猿葬 圆猿援 愿缘 员援 员猿葬 猿援 源怨 园援 员怨葬 圆援 猿园 园援 园圆凿 远援 愿源 园援 园缘葬
再员 员源援 缘猿 园援 猿缘遭 远援 圆远 园援 圆源遭 圆园援 愿园 园援 缘愿遭 猿援 圆员 园援 员圆遭 圆援 猿圆 园援 园源凿 远援 源怨 园援 园远遭糟
再圆 员员援 怨圆 园援 缘员糟 源援 远苑 园援 员怨糟 员远援 缘怨 园援 苑园糟 猿援 园员 园援 猿员糟 圆援 缘缘 园援 园员糟 缘援 缘猿 园援 猿猿糟凿
再猿 怨援 源员 园援 圆员凿 猿援 远远 园援 猿员凿 员猿援 园苑 园援 缘员凿 圆援 缘员 园援 员远凿 圆援 缘愿 园援 员远糟 缘援 圆员 园援 员猿凿
再源 远援 源园 园援 源源藻 猿援 员圆 园援 圆员藻 怨援 缘圆 园援 远源藻 员援 缘猿 园援 员缘藻 圆援 园缘 园援 园员藻 远援 圆源 园援 员怨遭
再缘 缘援 圆猿 园援 圆源枣 员援 怨苑 园援 员苑枣 苑援 圆园 园援 源员枣 员援 猿苑 园援 员圆枣 圆援 远远 园援 员园糟 缘援 圆愿 园援 员缘凿
再远 源援 怨员 园援 猿源枣 员援 愿苑 园援 员怨枣 远援 苑怨 园援 缘圆枣 员援 圆缘 园援 圆园枣 圆援 远猿 园援 园愿糟 缘援 缘愿 员援 猿员糟凿
再苑 圆援 远缘 园援 员员早 园援 怨源 园援 园缘早 猿援 缘怨 园援 员远早 员援 园员 园援 园缘早 圆援 愿圆 园援 园猿遭 猿援 缘缘 园援 猿圆枣
再愿 圆援 远圆 园援 园猿早 员援 园员 园援 员园早 猿援 远猿 园援 员猿早 园援 怨缘 园援 员远早 圆援 远园 园援 圆员糟 猿援 愿愿 园援 源怨藻枣
再怨 圆援 缘源 园援 员缘早 园援 愿怨 园援 园远早澡 猿援 源猿 园援 圆员早 园援 愿员 园援 园愿澡 圆援 愿远 园援 园猿遭 源援 圆苑 园援 远愿藻
再员园 员援 怨愿 园援 员猿澡 园援 远猿 园援 园远澡 圆援 远员 园援 员怨澡 园援 苑苑 园援 园远澡 猿援 员缘 园援 园怨葬 猿援 猿怨 园援 园圆枣
摇 摇 注院晕孕院 正常植株曰再员 耀 再远院 黄绿条纹突变体曰再苑 耀 再员园院 完全黄化突变体曰同列不同小写字母表示在 园援 园缘 水平差异显著
晕燥贼藻院晕孕院 晕燥则皂葬造 责造葬灶贼曰再员 耀 再远院 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 赠藻造造燥憎 泽贼则藻葬噪 造藻葬增藻泽曰再苑 耀 再员园院 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 憎澡燥造藻 赠藻造造燥憎 造藻葬增藻泽曰阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻
泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬贼 园援 园缘 造藻增藻造
苑源愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
圆援 圆摇 突变体叶片叶绿素合成中间产物含量的变化
如图 圆 所示袁与正常植株相比袁远 份黄绿条纹突变
体的叶绿素合成中间产物含量发生了显著变化遥 其中
注院晕孕院 正常植株曰再员 耀 再远院 黄绿条纹突变体曰再苑 耀 再员园院 完全黄化突变体曰粤蕴粤院 d 原氨基酮戊酸曰孕月郧院 胆色素原曰哉则燥早藻灶 芋院 尿卟啉原芋曰
悦燥责则燥早藻灶 芋院 粪卟啉原芋曰孕则燥贼燥 御院 原卟啉御曰酝早 原 孕则燥贼燥 御院 镁原卟啉御曰孕糟澡造院 原叶绿素酸曰不同小写字母表示在 园援 园缘 水平差异显著遥
晕燥贼藻院晕孕院 晕燥则皂葬造 责造葬灶贼曰再员 耀 再远院 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 赠藻造造燥憎 泽贼则藻葬噪 造藻葬增藻泽曰再苑 耀 再员园院 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 憎澡燥造藻 赠藻造造燥憎 造藻葬增藻泽曰粤蕴粤院 d 原
粤皂蚤灶燥造藻增怎造蚤灶蚤糟 葬糟蚤凿曰孕月郧院 孕燥则责澡燥遭蚤造蚤灶燥早藻灶曰哉则燥早藻灶 芋院 哉则燥责燥则责澡赠则蚤灶燥早藻灶 芋曰悦燥责则燥早藻灶 芋院 悦燥责则燥责燥则责澡赠则蚤灶燥早藻灶 芋曰孕则燥贼燥 御院 孕则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 御曰酝早
原 孕则燥贼燥 御院 酝早 原 孕则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 御曰孕糟澡造院 孕则燥贼燥糟澡造燥则燥责澡赠造造曰阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬贼 园援 园缘 造藻增藻造援
图 圆摇 文心兰黄化突变体和正常植株的叶片叶绿素合成中间产物相对含量渊豫冤
云蚤早援 猿摇 砸藻造葬贼蚤增藻 糟燥灶贼藻灶贼泽 渊豫冤 燥枣 蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬贼藻泽 枣燥则 糟澡造燥则燥责澡赠造造 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 蚤灶 造藻葬增藻泽 燥枣 曾葬灶贼澡葬
皂怎贼葬灶贼泽 葬灶凿 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼 燥枣 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
再员尧再圆尧再猿尧再缘 和 再远 呈现相同的变化趋势袁即 粤蕴粤尧
孕月郧尧哉则燥早藻灶 芋和 悦燥责则燥早藻灶 芋含量显著高于正常植
株袁而 孕则燥贼燥 御尧酝早 原 孕则燥贼燥 御和 孕糟澡造 含量显著低于正
常植株遥 由此推断袁这 缘 份黄绿条纹突变体叶片中叶
绿素的生物合成受阻袁受阻位点在合成中间产物含量
变化的拐点处袁即从 悦燥责则燥早藻灶 芋到 孕则燥贼燥 御之间的反
应遥 突变体 再源 具有不同的变化趋势袁即相对正常植
株袁粤蕴粤尧孕月郧尧哉则燥早藻灶 芋尧悦燥责则燥早藻灶 芋和 孕则燥贼燥 御含量
均显著升高袁而 酝早 原 孕则燥贼燥 御和 孕糟澡造含量显著降低袁说
明其叶绿素合成在由 孕则燥贼燥 御到 酝早 原 孕则燥贼燥 御之间的
反应受阻遥
源 份完全黄化突变体 再苑 耀 再员园 的叶绿素合成中
间产物含量也发生了显著变化袁并呈现一致的变化趋
势遥 与 正 常 植 株 相 比袁 粤蕴粤尧 孕月郧尧 哉则燥早藻灶 芋 和
悦燥责则燥早藻灶 芋含量均显著升高袁孕则燥贼燥 御尧酝早 原 孕则燥贼燥 御和
孕糟澡造 含量均显著降低袁表明其叶绿素合成在由
悦燥责则燥早藻灶 芋到 孕则燥贼燥 御之间的反应受阻遥
虽然 缘 份黄绿条纹突变体渊再员尧再圆尧再猿尧再缘 和 再远冤
和 源 份完全黄化突变体渊再苑 耀 再员园冤的叶绿素合成中间
产物呈现相同的变化趋势袁但其含量变化的幅度不甚
一致袁如 孕月郧 含量在黄绿条纹突变体和完全黄化突变
体之间具有显著性差异袁而在黄绿条纹突变体之间以
及完全黄化突变体之间差异不显著遥 孕则燥贼燥 御含量不
仅在黄绿条纹突变体和完全黄化突变体之间差异显
著袁在部分黄绿条纹突变体之间以及部分完全黄化突
愿源愿员
摇 员圆 期 文心兰黄化突变体的初步研究
变体之间也具有显著性差异遥
圆援 猿摇 突变体叶肉细胞和叶绿体超微结构的变化
叶肉细胞和叶绿体超微结构观察发现袁正常植株
叶肉细胞中的叶绿体数量较多袁形状规则袁呈纺锤形或
长椭圆形渊图 猿 原 粤冤遥 叶绿体基粒颜色较深袁基粒片
层排列有序且结构清晰袁嗜饿颗粒分散且数量较少
渊图 猿 原 月冤遥 黄绿条纹突变体的绿色叶片组织内袁叶肉
细胞和叶绿体的超微结构与正常植株相似遥
注院粤院 正常植株的叶肉细胞曰月院 正常植株的叶绿体曰悦院 黄色叶片组织的叶肉细胞曰阅 耀 云院 黄色叶片组织的叶绿体曰
悦匀院 叶绿体曰郧院 基粒片层曰韵院 嗜饿颗粒曰灾院 囊泡遥
晕燥贼藻院粤院 酝藻泽燥责澡赠造造 糟藻造造 燥枣 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼曰月院 悦澡造燥则燥责造葬泽贼 燥枣 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼曰悦院 酝藻泽燥责澡赠造造 糟藻造造 蚤灶 赠藻造造燥憎 责燥则贼蚤燥灶 燥枣 造藻葬增藻泽曰
阅 耀 云院 悦澡造燥则燥责造葬泽贼 蚤灶 赠藻造造燥憎 责燥则贼蚤燥灶 燥枣 造藻葬增藻泽曰悦匀院 悦澡造燥则燥责造葬泽贼曰郧院 郧则葬灶葬 造葬皂藻造造葬藻曰韵院 韵泽皂蚤燥责造蚤造蚤糟 早则葬灶怎造藻曰灾院 灾藻泽蚤糟葬援
图 猿摇 文心兰黄化突变体和正常植株的叶肉细胞与叶绿体超微结构
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 怎造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 皂藻泽燥责澡赠造造 糟藻造造 葬灶凿 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 枣则燥皂 曾葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 葬灶凿 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼 燥枣 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
黄绿条纹突变体的黄色叶片组织与完全黄化突变
体的叶片具有相似的超微结构袁叶肉细胞的叶绿体数
量少渊图 猿 原 悦冤遥 部分叶绿体形状与正常植株的相似袁
呈纺锤形或长椭圆形袁但其基粒片层结构少于正常植
株袁颜色较浅渊图 猿 原 阅冤遥 其余叶绿体发育异常袁多为
球形袁大小不一袁基质中含较多嗜饿颗粒和囊泡袁基粒
片层稀疏袁结构松散渊图 猿 原 耘冤遥 少数叶绿体的基粒片
层结构缺失渊图 猿 原 云冤遥 颜色较浅的黄色叶片组织中
含有更多的异常叶绿体遥
圆援 源摇 突变体 陨杂杂砸位点的变异
利用 远怨 条 陨杂杂砸引物对黄化突变体的遗传变化进
行分析袁结果发现袁其中 远苑 条引物在黄化突变体和正
常植株之间未呈现多态性袁引物 哉月悦愿圆苑 和 哉月悦愿怨苑
对黄化突变体和正常植株的扩增产物具有差异遥 与正
常植株相比袁引物 哉月悦愿圆苑 在 远 份黄绿条纹突变体和 源
份完全黄化突变体中均多扩增出 员 个约为 远园园 遭责 的
片断渊图 源 原 粤箭头所示冤遥 引物 哉月悦愿怨苑 对黄绿条纹
突变体 再缘 及完全黄化突变体 再苑 和 再愿 扩增的产物中
包含 员 个 圆园园 遭责左右的片段袁而在正常植株和其它突
变体中该片断缺失渊图 源 原 月箭头所示冤遥
猿摇 讨论
悦澡造 葬尧悦澡造 遭 和 悦葬则 是植物叶片中主要的光合色
素袁它们的含量和比例决定了叶片的颜色遥 叶色突变
体中 悦澡造 含量一般明显低于野生型袁还常伴随 悦葬则 含
怨源愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
注院粤院 哉月悦愿圆苑曰月院 哉月悦愿怨苑曰晕孕院 正常植株曰再员 耀 再远院 黄绿条纹突变体曰再苑 耀 再员园院 完全黄化突变体曰酝院 酝葬则噪藻则遥
晕燥贼藻院粤院 哉月悦愿圆苑曰月院 哉月悦愿怨苑曰晕孕院 晕燥则皂葬造 责造葬灶贼曰再员 耀 再远院 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 赠藻造造燥憎 泽贼则藻葬噪 造藻葬增藻泽曰
再苑 耀 再员园院 载葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 憎澡燥造藻 赠藻造造燥憎 造藻葬增藻泽曰酝院 酝葬则噪藻则援
图 源摇 文心兰黄化突变体和正常植株的 陨杂杂砸位点
云蚤早援 源摇 陨杂杂砸 造燥糟蚤 燥枣 曾葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 葬灶凿 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼 燥枣 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
量的降低遥 本研究中 员园 份黄化突变体的 悦澡造 和 悦葬则
含量均显著降低袁悦澡造降低程度大于 悦葬则遥 完全黄化突
变体的光合色素含量显著低于黄绿条纹突变体袁其中
再员园 的 悦澡造 含量仅为正常植株的 员园援 怨源豫 遥 叶色突变
体叶绿素含量的变化不仅体现在 悦澡造尧悦澡造 葬 和 悦澡造 遭
含量的减少袁其 悦澡造 葬 辕 遭 也常改变咱员愿暂 遥 大多数黄化突
变体如大麦咱员怨暂 尧水稻咱圆园暂 尧油菜咱远暂等的研究表明其 悦澡造
葬 辕 遭显著升高袁即 悦澡造 遭 降低程度大于 悦澡造 葬遥 本研究
的 缘 份黄绿条纹突变体和 源 份完全黄化突变体的
悦澡造 葬 辕 遭均显著升高遥 然而袁黄绿条纹突变体 再源 的
悦澡造 葬 辕 遭显著降低遥 曹莉等咱圆员暂在小麦中也发现了 悦澡造 葬
降低程度大于 悦澡造 遭的突变类型遥
叶绿素的生物合成从谷氨酸 渊 郧造怎 冤要粤蕴粤要
孕月郧要哉则燥早藻灶 芋要悦燥责则燥早藻灶 芋要孕则燥贼燥 御要酝早 原 孕则燥贼燥
御要孕糟澡造要悦澡造 葬要悦澡造 遭袁是由 圆园 多个基因编码的 员远
种酶参与的一系列酶学催化过程咱圆圆暂 遥 其中任何一步
发生变化都可能导致叶绿素含量的变化遥 迄今袁已在
植物中发现叶绿素合成在不同位点受阻的多种叶色突
变体遥 吕明等咱远暂报道芥菜型油菜黄化突变体的叶绿
素合成在 悦燥责则燥早藻灶 芋到 孕则燥贼燥 御的位点受阻遥 云葬造遭藻造
等咱圆猿暂报道大麦缺绿突变体叶绿素合成受阻于 孕则燥贼燥 御
到 酝早 原 孕则燥贼燥 御的反应遥 徐培洲等咱圆源暂发现水稻叶绿
素缺乏突变体的叶绿素合成在从 孕糟澡造 到 悦澡造蚤凿藻 的位
点受阻遥 这些研究表明叶绿素合成一旦受阻袁受阻位
点之前的中间产物都显著积累袁受阻位点之后的中间
产物则显著减少遥 本研究结果显示黄化突变体的叶绿
素合成受阻袁其中 缘 份黄绿条纹突变体和 源 份完全黄
化突变体受阻于 悦燥责则燥早藻灶 芋到 孕则燥贼燥 御的反应袁而黄
绿条纹突变体 再源 在由 孕则燥贼燥 御到 酝早 原 孕则燥贼燥 御的反应
受阻遥
叶绿体的发育大致可分为 猿 个阶段院第 员 阶段是
前质体时期袁内部无类囊体膜曰第 圆 阶段是单片层形成
期袁前质体内膜内陷形成单个类囊体片层曰 第 猿 阶段
是基粒形成期袁单个类囊体片层越来越多袁形成基粒袁
发育成正常叶绿体咱员愿暂 遥 叶色突变体的叶绿体或多或
少都发生了结构和数量上的改变遥 突变对叶绿体发育
影响的时期不同袁叶绿体结构的变化也不同遥 运怎泽怎皂蚤
等咱圆缘暂对斑马叶突变体 栽悦酝圆源愿 的叶绿体超微结构观
察显示袁正常叶色区域的叶绿体结构正常袁而黄色区域
中叶绿体形态异常袁类囊体膜系统明显紊乱遥 常青山
等咱员员暂发现菊花黄绿叶突变体的黄色细胞叶绿体形状
不规则袁缺乏正常的叶绿体膜袁无类囊体和淀粉粒袁嗜
饿颗粒较多遥 本研究中袁突变体的黄色叶片组织内叶
肉细胞的叶绿体减少袁叶绿体基粒片层结构减少曰部分
叶绿体发育异常袁基粒片层稀疏松散或缺失袁基质中含
较多嗜饿颗粒和囊泡袁表明突变对叶绿体发育的不同
阶段均产生了影响遥
前人研究表明袁植物叶色突变主要来源于叶绿素
生物合成和降解途径中的基因突变尧叶绿体发育相关
基因突变尧血红素代谢途径的基因突变以及编码其它
叶绿体蛋白的基因突变咱员愿暂 遥 各种基因突变通过不同
的调控方式袁直接或间接影响叶绿素的代谢途径袁引起
植物体内叶绿素含量的不同变化袁最终导致各异的叶
色突变表型遥 再源 具有不同于其余 缘 份黄绿条纹突变
体的 悦澡造 葬 辕 遭和叶绿素合成中间产物变化趋势袁而其
余 缘 份黄绿条纹突变体和 源 份完全黄化突变体也各自
园缘愿员
摇 员圆 期 文心兰黄化突变体的初步研究
呈现不同的光合色素和叶绿素合成中间产物含量变化
幅度袁由此表明它们可能来源于不同的基因突变遥
陨杂杂砸初步分析结果显示在黄化突变体和正常植株之
间存在 圆 个多态性位点遥 这些多态性位点是否与叶色
突变相关还有待进一步研究遥
源摇 结论
叶绿素合成受阻和叶绿体发育异常导致叶绿素含
量减少是本研究中文心兰体细胞无性系黄化突变体叶
片呈现黄色的主要原因遥 员园 份黄化突变体的叶片光
合色素和叶绿素合成中间产物含量呈现多样的变化趋
势和幅度袁表明它们可能属于不同的突变类型遥
参考文献院
咱 员 暂摇 允燥则早藻灶泽藻灶 允 匀袁允藻灶泽藻灶 匀 孕援 栽澡藻 泽责燥灶贼葬灶藻燥怎泽 糟澡造燥则燥责澡赠造造 皂怎贼葬贼蚤燥灶
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咱 圆 暂摇 砸藻凿凿蚤 栽 灾 灾 杂袁砸藻凿凿蚤 灾 砸援 云则藻择怎藻灶糟赠 葬灶凿 泽责藻糟贼则怎皂 燥枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造
皂怎贼葬灶贼泽 蚤灶凿怎糟藻凿 蚤灶 则蚤糟藻 遭赠 糟澡藻皂蚤糟葬造 皂怎贼葬早藻灶泽咱 允暂 援 栽澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 葬灶凿
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咱 猿 暂 摇 再怎 月袁 月藻灶灶蚤灶早 悦援 粤灶蚤燥灶蚤糟 造蚤责蚤凿泽 葬则藻 则藻择怎蚤则藻凿 枣燥则 糟澡造燥则燥责造葬泽贼
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咱允暂援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁圆园园苑袁员源缘渊员冤院圆怨 原 源园
咱 缘 暂 摇 粤泽葬噪怎则藻 再袁 匀蚤则燥澡葬泽澡蚤 栽袁 运蚤噪怎糟澡蚤 杂援 酝葬蚤扎藻 皂怎贼葬灶贼 造葬糟噪蚤灶早
糟澡造燥则燥责造葬泽贼 云贼泽再 藻曾澡蚤遭蚤贼 责造藻蚤燥贼则燥责蚤糟 凿藻枣藻糟贼泽 蚤灶 贼澡藻 遭蚤燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣
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咱 远 暂摇 吕明袁刘海衡袁毛虎德袁赵倩茹袁赵惠贤袁胡胜武援 芥菜型油菜黄
化突变体叶片叶绿素合成代谢变化咱 允暂援 西北植物学报袁圆园员园袁
猿园渊员员冤院圆员苑苑 原 圆员愿猿
咱 苑 暂摇 沈圣泉袁周祥胜袁吴殿星袁舒小丽袁叶红霞袁舒庆尧援 水稻黄叶标
记不育系的诱变选育及其应用咱允暂 援核农学报袁圆园园苑袁圆员渊圆冤院员园苑
原 员员园
咱 愿 暂摇 武立权袁沈圣泉袁王荣富袁舒庆尧援 水稻黄叶突变体光合特性的
日变化咱允暂 援核农学报袁圆园园苑袁圆员渊缘冤院源圆缘 原 源圆怨
咱 怨 暂摇 姜卫兵袁庄猛袁韩浩章袁戴美松袁花国平援 彩叶植物呈色机理及光
合特性研究进展咱允暂援园艺学报袁圆园园缘袁猿圆渊圆冤院猿缘圆 原 猿缘愿
咱员园暂摇 徐彬袁辛伟杰袁王广东袁郭维明袁文方德袁金剑平援 花烛离体培养
叶色变异株系的相关性状咱允暂 援 植物学通报袁圆园园远袁圆猿渊远冤院远怨愿 原
苑园圆
咱员员暂摇 常青山袁陈发棣袁滕年军袁张淑梅袁卢军刚袁陈素梅援 菊花黄绿叶
突变体不同类型叶片的叶绿素含量和结构特征比较咱允暂 援西北植
物学报袁圆园园愿袁圆愿渊怨冤院员苑苑圆 原 员苑苑苑
咱员圆暂摇 马华升袁姚艳玲袁忻雅袁陈文岳袁童建新袁崔海瑞援 大花惠兰组培
苗中叶色突变体的获得与 阅晕粤 鉴定咱 允暂 援浙江农业学报袁圆园园愿袁
圆园渊猿冤院员源怨 原 员缘猿
咱员猿暂 摇 袁丽钗袁李雪平袁彭镇华袁高健援 菲白竹组培苗白化尧绿化突变体
的超微结构及 员缘 个叶绿体编码基因的表达咱 允暂援 植物学报袁
圆园员园袁源缘渊源冤院源缘员 原 源缘怨
咱员源暂摇 欧阳彤袁陈胜袁汪凤珍援 文心兰规模化组培育苗关键技术研究
咱允暂 援 林业科学研究袁圆园园远袁员怨渊缘冤院远园远 原 远员员
咱员缘暂摇 喻敏袁胡承孝袁王运华援 低温条件下钼对冬小麦叶绿素合成前体
的影响咱允暂 援中国农业科学袁圆园园远袁猿怨渊源冤院苑园圆 原 苑园愿
咱员远暂摇 月燥早燥则葬凿 蕴援 孕燥则责澡赠则蚤灶 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽咱 允暂 援 酝藻贼澡燥凿泽 蚤灶 藻灶扎赠皂燥造燥早赠援 晕藻憎
再燥则噪院晕藻憎 再燥则噪 粤糟葬凿藻皂蚤糟 孕则藻泽泽袁员怨远圆院愿愿缘 原 愿怨缘
咱员苑暂 摇 匀燥凿早蚤灶泽 砸 砸袁灾葬灶 匀怎赠泽贼藻藻 砸 月援 砸葬责蚤凿 泽蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽 藻泽贼蚤皂葬贼蚤燥灶 燥枣
责则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 葬灶凿 酝早 原 责则燥贼燥责澡赠则蚤灶泽 蚤灶 澡蚤早澡藻则 责造葬灶贼泽咱 允暂 援 允燥怎则灶葬造
燥枣 责造葬灶贼 责澡赠泽蚤燥造燥早赠袁员怨愿远袁员圆缘渊猿 原 源冤院猿员员 原 猿圆猿
咱员愿暂摇 魏彦林袁施勇烽袁吴建利援 水稻核基因控制的叶色变异咱允暂援 核农
学报袁圆园员员袁圆缘渊远冤院员员远怨 原 员员苑愿
咱员怨暂摇 谭新星袁许大全袁汤泽生援 叶绿素缺乏的大麦突变体的光合作用
和叶绿素荧光咱允暂 援植物生理学报袁员怨怨远袁圆圆渊员冤院缘员 原 缘苑
咱圆园暂摇 胡忠袁梁汉兴袁彭丽萍援 一个黄绿色水稻突变体的光合作用特性
咱允暂 援 云南植物研究袁员怨愿员袁猿渊源冤院源源怨 原 源缘远
咱圆员暂摇 曹莉袁王辉袁孙道杰袁冯毅援 小麦黄化突变体光合作用及叶绿素
荧光特性研究咱允暂 援西北植物学报袁圆园园远袁圆远渊员园冤院圆园愿猿 原 圆园愿苑
咱圆圆暂摇 月藻葬造藻 杂 陨援 耘灶扎赠皂藻泽 燥枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽咱 允暂援 孕澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽
砸藻泽藻葬则糟澡袁员怨怨怨袁远园渊员冤院源猿 原 苑猿
咱圆猿暂 摇 云葬造遭藻造 栽 郧袁杂贼葬藻澡藻造蚤灶 蕴 粤援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 枣葬皂蚤造赠 燥枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造
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憎蚤贼澡 凿藻枣藻糟贼泽 蚤灶 贼澡藻 皂葬早灶藻泽蚤怎皂 原 蚤灶泽藻则贼蚤燥灶 泽贼藻责 燥枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造
遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁员怨怨源袁员园源渊圆冤院 远猿怨 原 远源愿
咱圆源暂 摇 徐培洲袁李云袁袁澍袁张红宇袁彭海袁林宏辉袁汪旭东袁吴先军援 叶
绿素缺乏水稻突变体中光系统蛋白和叶绿素合成特性的研究
咱允暂 援 中国农业科学袁圆园园远袁猿怨渊苑冤院员圆怨怨 原 员猿园缘
咱圆缘暂 摇 运怎泽怎皂蚤 运袁 运燥皂燥则蚤 匀袁 杂葬贼燥澡 匀袁 陨遭葬 运援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 扎藻遭则葬
皂怎贼葬灶贼 燥枣 则蚤糟藻 憎蚤贼澡 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 贼燥 造蚤早澡贼 泽贼则藻泽泽咱 允暂 援 孕造葬灶贼
悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁圆园园园袁源员渊圆冤院员缘愿 原 员远源
员缘愿员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员愿源缘 耀 员愿缘圆
栽澡藻 孕则藻造蚤皂蚤灶葬则赠 杂贼怎凿赠 燥枣 载葬灶贼澡葬 酝怎贼葬灶贼泽 蚤灶 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
宰粤晕郧 悦葬蚤鄄曾蚤葬摇 栽陨粤晕 宰藻蚤鄄憎藻蚤摇 栽陨粤晕 酝蚤灶摇 韵哉再粤晕郧 栽燥灶早摇 宰粤晕郧 云藻灶早鄄扎澡藻灶
渊砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 杂怎遭贼则燥责蚤糟葬造 云燥则藻泽贼则赠袁悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁云怎赠葬灶早袁在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员员源园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 糟澡造燥则燥责澡赠造造 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 怎造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻 憎藻则藻 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿 蚤灶 员园 曾葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 燥枣 韵灶糟蚤凿蚤怎皂
糟怎造贼蚤增葬则 耶酝蚤造造蚤燥灶早燥造凿泽爷 援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼院渊员冤栽澡藻 糟澡造燥则燥责澡赠造造渊悦澡造冤葬灶凿 糟葬则燥贼藻灶藻渊悦葬则冤 糟燥灶贼藻灶贼泽 燥枣 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡
赠藻造造燥憎 泽贼则藻葬噪 造藻葬增藻泽渊再员 耀 再远冤则藻凿怎糟藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 葬灶凿 葬糟糟燥怎灶贼藻凿 圆愿援 源苑豫 耀愿苑援 圆员豫 葬灶凿 猿缘援 愿圆豫 耀 怨员援 怨愿豫 燥枣 贼澡葬贼
燥枣 灶燥则皂葬造 责造葬灶贼 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造 葬 葬灶凿 糟澡造燥则燥责澡赠造造 遭渊悦澡造 葬 辕 遭冤蚤灶糟则藻葬泽藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 蚤灶 再圆袁再猿袁再缘
葬灶凿 再远袁 遭怎贼 凿藻糟则藻葬泽藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 蚤灶 再源援 栽澡藻 糟澡造燥则燥责澡赠造造 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 憎葬泽 遭造燥糟噪藻凿 葬贼 贼澡藻 则藻葬糟贼蚤燥灶泽 枣则燥皂
糟燥责则燥责燥则责澡赠则蚤灶燥早藻灶 芋渊悦燥责则燥早藻灶 芋冤贼燥 责则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 御渊孕则燥贼燥 御冤渊再员袁再圆袁再猿袁再缘 葬灶凿 再远冤袁葬灶凿 枣则燥皂 孕则燥贼燥 御 贼燥
酝早 原 责则燥贼燥责燥则责澡赠则蚤灶 御渊酝早 原 孕则燥贼燥 御冤渊再源冤 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 渊圆冤栽澡藻 悦澡造 葬灶凿 悦葬则 糟燥灶贼藻灶贼泽 燥枣 皂怎贼葬灶贼泽 憎蚤贼澡 憎澡燥造藻 赠藻造造燥憎
造藻葬增藻泽渊再苑 耀 再员园冤则藻凿怎糟藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 葬灶凿 葬糟糟燥怎灶贼藻凿 员园援 怨源豫 耀 员缘援 圆圆豫 葬灶凿 圆圆援 园远豫 耀 圆愿援 怨源豫 燥枣 贼澡葬贼 燥枣 灶燥则皂葬造
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葬灶凿 憎蚤贼澡 皂燥则藻 燥泽皂蚤燥责造蚤造蚤糟 早则葬灶怎造藻泽 葬灶凿 增藻泽蚤糟葬泽援 渊源冤栽憎燥 责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 造燥糟蚤 憎藻则藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 葬皂燥灶早 贼澡藻 曾葬灶贼澡葬 皂怎贼葬灶贼泽 怎泽蚤灶早
陨杂杂砸 责则蚤皂藻则 哉月悦愿圆苑 葬灶凿 哉月悦愿怨苑援 陨贼 憎葬泽 糟燥灶糟造怎凿藻凿 贼澡葬贼 赠藻造造燥憎 造藻葬增藻泽 燥枣 皂怎贼葬灶贼泽 则藻泽怎造贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 凿藻糟则藻葬泽藻 燥枣
糟澡造燥则燥责澡赠造造袁憎澡蚤糟澡 糟葬怎泽藻凿 遭赠 贼澡藻 遭造燥糟噪蚤灶早 燥枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿 贼澡藻 皂葬造枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 糟澡造燥则燥责造葬泽贼援
运藻赠 憎燥则凿泽院韵灶糟蚤凿蚤怎皂曰杂燥皂葬糟造燥灶葬造 灾葬则蚤葬贼蚤燥灶曰载葬灶贼澡葬 酝怎贼葬灶贼曰悦澡造燥则燥责澡赠造造曰悦澡造燥则燥责造葬泽贼 哉造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻曰陨杂杂砸
圆缘愿员