本研究以大花月季Vendela为试验材料,利用直接器官发生途径,对影响大花月季组培产业化快繁生产体系的关键环节进行了研究,以期为大花月季种苗组培产业化生产提供技术指导.结果表明:Vendela外植体最佳消毒处理方式是先用洗洁精溶液浸泡30min,75%的酒精处理40s后再用0.1%的氯化汞消毒处理10min;腋芽萌发诱导的最适宜培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA +0.05 mg·L-1 NAA + 蔗糖30 g·L-1;不定芽增殖的最适宜培养基为MS+1.2 mg·L-1 6-BA +0.05 mg·L-1 NAA + 30 g·L-1蔗糖;继代时每丛2个芽培养后期新生不定芽整齐度好,叶色浓绿,植株健壮,方便不定芽生根诱导材料选择;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.5 mg·L-1 IBA + 30 g·L-1蔗糖,且不定根的长度在0.5~1cm时移栽较容易,苗成活率可达95%以上,整个快繁体系达到组培苗产业化生产的要求.
全 文 ：核 农 学 报!"#$%!"&"$## $$’A# )$’A’
!"#$%&’"()#*’+&$,-$.*#’/#$&’0*.+%*+1
收稿日期!"#$(*$$*".!接受日期!"#$%*#.*$%
基金项目!农业部+引进国际先进农业技术, ""#$$ @G($# !地方合作项目+植物组培 B/-光源的应用和产业化研究, ""#$"W"$+##-#$#
作者简介!李坤峰!男!主要从事植物组织培养研究% /*0123$3Nf.H&’(A&4$H(8;J0
通讯作者!陈剑平!男!研究员!主要从事植物病毒学和组培产业化研究% /*0123$ 6Y;U95"##$4$"H8;J0
文章编号!$###*&..$""#$%#$#*$’A#*#&
O95:931月季产业化快繁体系研究
李坤峰$!"!陈志"!陈剑平$!"!季杭峰(
" $ 南京农业大学植保学院!江苏 南京!"$##A.*" 浙江省农业科学研究院!
浙江 杭州 ($##"$*( 杭州鸿雁电器有限公司!浙江 杭州!($##"(#
摘!要!本研究以大花月季 O95:931为试验材料!利用直接器官发生途径!对影响大花月季组培产业化快
繁生产体系的关键环节进行了研究!以期为大花月季种苗组培产业化生产提供技术指导’ 结果表明(
O95:931外植体最佳消毒处理方式是先用洗洁精溶液浸泡 (#025!’.R的酒精处理 %#P后再用 #Q$R的
氯化汞消毒处理 $#025&腋芽萌发诱导的最适宜培养基为 Z? K#Q. 0L%B@$H @+, K#Q#. 0L%B@$ E,,
K蔗糖 (# L%B@$&不定芽增殖的最适宜培养基为 Z? K$Q" 0L%B@$ H @+, K#Q#. 0L%B@$ E,, K(# L%
B@$蔗糖&继代时每丛 " 个芽培养后期新生不定芽整齐度好!叶色浓绿!植株健壮!方便不定芽生根诱导
材料选择&最适宜的生根培养基为 $T"Z? K#Q. 0L%B@$C+, K(# L%B@$蔗糖!且不定根的长度在 #Q. )
$;0时移栽较容易!苗成活率可达 A.R以上!整个快繁体系达到组培苗产业化生产的要求’
关键词!月季&快速繁殖&植物组织培养&器官发生&产业化
-SC$$#Q$$&HAT682PP58$##*&..$Q"#$%Q$#8$’A#
!!月季"@"1+*;.%+%1.1>1;o8#是蔷薇科蔷薇属植物!
被誉为+花中皇后,!极具观赏性和巨大的商业价值!
为此深受人们的喜爱!在世界各地广泛栽培 &$ @"’ % 大
花月季由于其花朵大!花型高雅优美!花色丰富!被广
泛用于园林造景和庭院美化等% 但目前!大花月季繁
殖以扦插为主!繁殖系数低!优良种苗供应远不能满足
市场需求!同时扦插繁殖种苗容易因病毒的积累造成
观赏性降低 &(’ % 为此!应用组织培养技术快速繁殖优
质种苗是一行之有效的措施%
自 $AH’ 年 ]23&%’首次报道蔷薇的组培研究以来!
不断有组织培养成功的报道% 张红 &.’报道外植体经
过表面消毒后!在培养过程中均有不同程度的褐化现
象!且基部茎段的褐化程度重于中部茎段% 诸多研究
建立了以月季腋芽为材料通过器官发生途径的快繁技
术体系 &H @&’ !以幼嫩叶片及合子胚为材料的通过诱导
愈伤分化途径的再生体系 &A @$"’以及叶片和茎段为材
料的月季体细胞胚胎发生途径 &$( @$H’ % 然而这些研究
局限于植株再生体系建立实验室阶段!存在组培苗再
生频率低(组培技术体系不稳定等问题!优质种苗生产
难以满足市场需求 &$’’ %
本研究以大花月季 O95:931为研究材料!对影响
组培快繁体系建立的关键环节进行研究!为建立大花
月季组培苗工厂化生产的关键环节提供技术支撑%
!"材料与方法
!#!"试验材料
本研究试验材料为浙江省农业科学院内种植月季
品种 O95:931"@"1& *;.%+%1.1.O95:931/#%
!#$"外植体选择"处理"表面消毒及接种
选取当年生健康枝条!剪去叶片!再将枝条切成
";0左右的带芽茎段% 处理好的茎段先用洗涤剂溶液
浸泡(清洗 (# 025!然后在自来水下流水冲洗 $U!用蒸
馏水清洗干净后移入超净工作台%
在超净工作台上!清洗干净的外植体先用 ’.R的
酒精消毒 "# )H# P!再用 #Q$R的氯化汞溶液消毒 H )
$" 025!具体设置如表 $ 所示!然后用无菌水清洗 .
次%
#A’$
!$# 期 O95:931月季产业化快繁体系研究
表 !"外植体消毒试验设计
%&’()!"R300)+)12/2)+3(3_&23,12+)&2:)12/,1%Z)1;)(&&
处理
FX91[095[
’.R酒精处理时间
FX91[095[
FX91[095[
," %# H
,( %# &
,% %# $#
,. %# $"
,H H# $#
!!接种时!先切除茎段两端与消毒剂接触的部分组
织!然后将处理好的经过表面消毒的茎段接种于初代
培养基%
!#F"腋芽的萌发及不定芽增殖
将经过表面消毒的带芽茎段接种到不同的诱导培
养基上进行腋芽伸长诱导!共设置 $# 个处理"表 "#!
切取培养 " )( 周后长约 " )(;0的腋芽接种到不定
芽诱导培养基"表 (#%
表 $"腋芽萌发诱导培养基
%&’()$"M00)82,0.(&125+,<29+)5-(&2,+/
,1&O3(&+N ’-;)(,15&23,1
处理
FX91[095[
激素种类及浓度
FMY915: IJ5;95[X1[2J5 JfY315[
LXJe[U X9L731[JXT"0L)B@$ #
H @+, E,,
+$ #Q## #Q##
+" #Q. #Q#$
+( #Q. #Q#.
+% #Q. #Q$#
+. #Q& #Q#$
+H #Q& #Q#.
+’ #Q& #Q$#
+& $Q# #Q#$
+A $Q# #Q#.
+$# $Q# #Q$#
!#K"每丛不同接种芽数增殖试验
起始接种芽数分别为每丛 $ 个芽(" 个和 ( 个生
长在一起的丛生芽!每瓶接种 ( 丛!每个处理接种 %
瓶!在 "Q( 小节筛选的最佳培养基中培养 %#: 后!每处
理随机抽取 $# 丛进行测试!( 次重复%
表 F"不定芽增殖培养基
%&’()F"M00)82,0.(&125+,<29+)5-(&2,+/,1
&;Q)12323,-/’-;/:-(23.(38&23,131;-823,1
处理
FX91[095[
激素种类及浓度
FMY915: IJ5;95[X1[2J5 JfY315[
LXJe[U X9L731[JXT"0L)B@$ #
H @+, E,,
I$ #Q% #Q#"
I" #Q% #Q#.
I( #Q% #Q$#
I% #Q& #Q#"
I. #Q& #Q#.
IH #Q& #Q$#
I’ $Q" #Q#"
I& $Q" #Q#.
IA $Q" #Q$#
I$# $QH #Q#.
!#P"继代次数对 Z)1;)(& 月季增殖倍数的影响
本研究从腋芽增殖诱导开始记为初代培养!以后
每次继代均采用单个芽为单位!记录每代每丛的不定
芽增殖数% 初代选取 ( 个腋芽进行增殖数记录!重复
( 次*以后每代从各自的继代增殖的不定芽中随机选
择 $ 丛求平均值后作为本代的增殖数%
!#G"不定芽生根诱导
将生长良好(株高 " )( ;0的健壮不定芽接种到
生根培养基上进行生根诱导!生根培养基的基本成份
为 $T"Z?!生根培养中主要对 C+,和 E,,对月季生根
的影响进行了测试!具体设置如表 % 所示%
!#]"组培苗移栽
将生根良好的组培苗洗去根部残留的培养基后直
接移栽到基质中!温度 "&^!湿度 &.R!" 个月后统计
移栽成活率%
$A’$
核!农!学!报 "& 卷
表 K"生根诱导培养基
%&’()K"M00)82,0.(&125+,<29+)5-(&2,+/,1
+,,231;-823,1
处理
FX91[095[
培养基成份
Z9:270P
-$ $T"Z?
-" $T"Z? K#Q#. 0L)B@$ E,,
-( $T"Z? K#Q$ 0L)B@$ E,,
-% $T"Z? K#Q. 0L)B@$ E,,
-. $T"Z? K$Q# 0L)B@$ E,,
-H $T"Z? K$Q. 0L)B@$ E,,
-’ $T"Z? K#Q#. 0L)B@$ C+,
-& $T"Z? K#Q$ 0L)B@$ C+,
-A $T"Z? K#Q. 0L)B@$ C+,
-$# $T"Z? K$Q# 0L)B@$ C+,
!#W"试验环境"设置及数据处理
$Q&Q$!试验环境!培养基$本研究基本培养基为 Z?
K蔗糖 (# L)B@$ K琼脂 ’Q# L)B@$! Y]值 .Q&% 培养
基灭菌条件为 $## NV1!$"$^!"# 025%
培养环境$植物材料培养温度为""( h"#^!光源
为荧光灯 "V]CBCV?!FB- (HdT&%# #!光照强度 .#
"0J3)0@")P@$!光照时间 $H U%
表 P"Z)1;)(& 外植体消毒试验结果
%&’()P"R300)+)12/2)+3(3_&23,12+)&2:)12/,1%Z)1;)(&&
编号
EJ8
酒精消毒时间
FX91[095[
氯化汞消毒时间
FX91[095[
污染率
VJ37[2J5 X1[9TR
褐化率
+XJe525LX1[9TR
成活率
?7X\2\13X1[9TR
萌芽情况
,=231XM
<7: 93J5L1[2J5
$ "# $# ’HQ’ (Q( "#Q# 正常伸长
" %# H A#Q# #Q# $#Q# 正常伸长
( %# & %(Q( HQ’ &(Q( 正常伸长
% %# $# $#Q# HQ’ &(Q( 正常伸长
. %# $" .Q’ %#Q# .%Q( 褐化严重(芽长势差
H H# $# HQ’ %(Q( .#Q# 褐化严重(芽长势差
$Q&Q"!试验设置!外植体消毒阶段每个处理 .# 个茎
段*腋芽萌发诱导阶段每个处理 $# 瓶!每瓶接种 $ 个
外植体! ( 次重复*不定芽增殖阶段每个处理 . 瓶!每
瓶接种 ( 个不定芽!( 次重复*不定芽生根阶段每个处
理接种 . 瓶!每瓶接种 H 个不定芽!( 次重复%
$Q&Q(!数据处理!使用 -V?"O’Q#.#统计分析软件
包对数据进行方差分析",ESO,#!对不同处理的效果
差异利用 -75;15/P新复极差法进行多重比较%
$"结果与分析
$#!"Z)1;)(& 外植体消毒体系探索
不同消毒剂及处理时间对 O95:931外植体的消毒
效果见表 .% 表 . 数据表明!在 ’.R酒精处理时间一
定时!随着氯化汞处理时间的延长!外植体成活率呈先
逐步升高!然后降低的趋势!表明在一定条件下延长氯
化汞处理时间可有效降低污染率!但时间过长又会对
材料造成毒害!褐化率升高!影响成活率% 本研究中!
氯化汞处理 $# 025 的消毒效果最好!腋芽成活率为
&(Q(R% 氯化汞处理 H 025 消毒效果最差!污染率达
A#R!成活率只有 $#R%
表 . 数据还表明!在氯化汞处理时间一定时!随着
酒精处理时间的延长!外植体污染率呈现下降趋势!腋
芽成活率先升后降!但褐化率呈现加速上升趋势% 结
果显示!酒精处理时间为 %# P时效果最好!腋芽成活
率为 &(Q(R!污染率最低"$#R左右#!继续延长酒精
消毒时间对进一步降低污染率效果有限!但外植体褐
化率上升较快导致死亡率上升!且过长的酒精处理时
间不利于后期腋芽的萌发%
!!综合以上分析结果!本研究认为!外植体先用
’.R的酒精处理 %#P后再用 #Q$R的氯化汞溶液消毒
处理 $#025 为最佳的消毒方法%
$#$"不同激素组合对腋芽萌发的影响
O95:931腋芽在不同的培养基中萌芽率及长势情
况详见表 H% 在相同 E,,浓度下! H @+,浓度 #Q.
0L)B@$时萌芽率达到最高!随着 H @+,浓度的增加!
腋芽萌芽率逐步降低% 当 H @+,浓度一定时!随着
E,,浓度的升高!萌芽率呈逐步下降的趋势% 综上可
知腋芽萌发诱导的最适宜培养基为 Z? K#Q. 0L)B@$
H @+, K#Q#. 0L)B@$ E,, K(# L)B@$蔗糖%
"A’$
!$# 期 O95:931月季产业化快繁体系研究
表 G"不同培养基对腋芽诱导的影响
%&’()G"M00)82/,0;300)+)12:);3-: ,1&O3(&+N ’-;31;-823,1
H @+,T
"0L)B@$ #
E,,T
"0L)B@$ #
萌芽率
W1[9Jf<7: L9X0251[2J5TR
芽长势情况
+7:PP[1[7P:9P;X2Y[2J5
#Q# #Q## A# h$Q’ 1 芽伸长慢!长势一般
#Q. #Q#$ AHQ’ h#QH 1 芽伸长快!长势好
#Q. #Q#. &# h$Q’ < 芽伸长快!长势好
#Q. #Q$# .# h$Q’ f 芽伸长快!长势一般
#Q& #Q#$ HHQ’ h$Q. ; 芽伸长快!长势一般
#Q& #Q#. .HQ’ h"Q. : 芽伸长慢!芽长势一般
#Q& #Q$# %# h$Q’ f 芽伸长慢!长势差
$Q# #Q#$ .(Q( h(Q$ 9 芽伸长慢!长势差
$Q# #Q#. %(Q( h"Q( L 芽伸长慢!长势差
$Q# #Q$# (# h"QH U 芽伸长慢!长势差
!!注$萌芽率为 平均值 h标准差% 每列中有相同字母表示差异不显著"4_#Q#.# % 下同%
EJ[9$ W1[9Jf<7: 93J5L1[2J5 _Z915Ph ?-8Z915PfJ3Je9:
$#F"不同激素组合对不定芽增殖的影响
不同激素组合对 O95:931不定芽增殖的影响如表
’ 所示!当 H @+,浓度分别为 #Q% 和 $Q" 0L)B@$时!不
同 E,,浓度处理间均不存在显著差异*当 H @+,浓
度为 #Q& 0L)B@$时! EE,浓度 #Q$ 和 #Q#. 0L)B@$与
#Q#" 0L)B@$处理下的不定芽增值效果存在显著差异!
但二者间差异不显著*而当 E,,浓度为 #Q#. 0L)B@$
时! H @+,浓度为 #Q& 和 $Q" 0L)B@$处理之间差异不
显著!其余处理间差异均达到显著%
表 ’ 还显示!H @+,的浓度一定时!E,,浓度为
#Q#. 0L)B@$时!不定芽整体长势较 #Q#" 和 #Q$ 0L)
B@$处理下的材料好*E,,浓度一定时!H @+,浓度为
$Q" 0L)B@$时不定芽增殖效果最好!当 E,,浓度为
#Q#. 0L)B@$!H @+,浓度为 $QH 0L)B@$的处理组不
定芽增殖倍数最高!但丛生芽整体长势较 H @+,浓度
为 $Q" 0L)B@$处理下培养材料差!且有畸形芽出现%
结合不定芽增殖倍数(生长情况及生产成本等因素!本
研究认为 Z? K$Q" 0L)B@$ H @+, K#Q#. 0L)B@$
E,,是 O95:931不定芽增殖最佳培养基%
表 ]"不同培养基对不定芽增殖的影响
%&’()]"M00)82/,0;300)+)12.(&125+,<29+)5-(&2,+/,1&;Q)12323,-/’-;:-(23.(38&23,1
H @+,T
"0L)B@$ #
E,,T
"0L)B@$ #
平均增殖倍数
,\9X1L9X9Y32;1[2J5 X1[9
芽生长情况
-9P;X2Y[2J5 JfY315[P[1[7P
#Q% #Q#" $QH% h#Q&$ : 不定芽健壮(增殖率低
#Q% #Q#. $Q(H h#Q.# : 不定芽长势好(叶片发黄!增殖率低
#Q% #Q$ $Q’( h#QH. : 不定芽长势差(增殖率低
#Q& #Q#" "Q#A h#Q’# : 不定芽长势一般(增殖率一般
#Q& #Q#. (Q(H h#QH’ <; 不定芽健壮(增殖率一般!长势良好
#Q& #Q$ (Q#A h#Q&( ; 不定芽长势差(部分叶片发黄
$Q" #Q#" (Q%. h$Q#% ; 不定芽长势一般(部分叶片发黄枯死
$Q" #Q#. %Q#A h#Q&( <; 不定芽健壮(增殖率高!长势良好
$Q" #Q$ (Q## h#Q’’ ; 不定芽长势差(叶片发黄
$QH #Q#. .Q#A h$Q.& 1 不定芽长势一般(部分芽畸形
(A’$
核!农!学!报 "& 卷
$#K"每丛不同接种芽数对增殖的影响
不同起始接种芽数对 O95:931不定芽增殖的影响
如表 & 所示!随着起始每丛接种芽数的增多!不定芽数
量逐步增多!差异达到显著!起始 ( 个不定芽一丛获得
最高的不定芽数!但是不定芽增殖系数随着起始接种
的增多逐步减小!并逐步趋于稳定%
不同起始不定芽接种数量对整丛最高株高(不定
芽茎粗均有显著的影响!( 株 $ 丛的最高株高显著高
于 $ 株 $ 丛的最高株高!而茎粗结果则相反*其余处理
间差异不显著% 实际培养过程中!起始接种 $ 个芽的
处理组后期不定芽高差别较大!整齐度差!小芽较多*
每丛为 ( 个芽的处理组不定芽有一部分叶片皱缩(芽
畸形*每丛为 " 个芽的处理组不定芽大小相对整齐!而
且在空间利用率上接种 " 个芽为一丛比接种 $ 个芽为
一丛的组空间利用率高且比接种 ( 个芽为一丛的芽整
体长势好!也方便后期不定芽生根诱导!因此!研究认
为!接种 " 个芽为一丛为 O95:931增殖最优继代方案%
表 W"不同的接种芽数对不定芽增殖的影响
%&’()W"M00)82/,0;300)+)1231323&(1-:’)+,0/9,,2/,1%Z)1;)(&& :-(23.(38&23,1
接种芽数
C52[213570<9X
Jf25J;731[2J5
不定芽数量
EJ8Jf
1:\95[2[2J7P<7:P
增殖系数
VXJ32f9X1[2J5
Jf073[2Y39
最高苗高
V315[U92LU[T;0
苗高度差
]2LU[
:2f9X95;9T;0
株粗
?[90P
:2109[9XT00
不定芽长势情况
-9P;X2Y[2J5
JfY315[P[1[7P
$ (Q& h$Q# ; (Q& h$Q#1 (Q% h#Q( < $Q% h#QH1 $QA" h#Q%# 1 大小不整齐!瓶内空间剩余
" .Q$ h#Q’< "QH h#Q’< (Q’ h#Q" 1< #Q’ h#Q(< $Q’H h#Q"% 1< 相对整齐!充分利用瓶内空间
( ’Q( h$Q.1 "Q. h$Q.< (Q’ h#Q( 1 $Q" h#QA1 $Q’( h#Q(’ < 部分叶片皱缩!生长拥挤
$#P"继代次数对 Z)1;)(& 月季增殖倍数的影响
继代次数对月季增殖的影响如图 $ 所示!结果表
明!随着继代次数的增加!O95:931增殖系数首先有一
个急剧降低的过程!经过 % 代培养过后!增殖系数逐步
稳定在 "Q. 左右!经过连续 $# 代培养表明!本研究所
建立的 O95:931增殖体系稳定!初步达到组培苗产业
化生产需求%
$#G"不同激素处理对 Z)1;)(& 生根的影响
不同激素对 O95:931生根的影响如表 A 所示!数
据表明!对于 O95:931生根诱导!不同处理的 C+,和
E,,在不定根数量方面无显著差异!但生根率上!C+,
处理下的组培苗显著高于 E,,处理下的组培苗% 不
同 C+,处理对 O95:931生根影响差异不显著!但综合
生根(组培苗长势情况分析!在 C+,#Q. 0L)B@$时苗生
长健壮(整齐(叶片呈深绿色!苗整体长势较其他处理
组较好!因此!本研究认为 $T"Z? KC+,#Q. 0L)B@$处
理组为 O95:931最佳的生根培养基%
由于 O95:931诱导所生的不定根均无须根!不定
图 !"继代次数对增殖系数的影响
4356!"%9)310(-)18),02+&1/0)+23:)/
,1%Z)1;)(&& :-(23.(38&23,1
根较长时不易移栽且易折断!本研究结果表明!不定根
的长度在 #Q. )$;0 "图 " @:#时移栽较容易!苗成活
率可达 A.R以上"图 " @9#%
F"讨论
建立组培快繁体系的首要目标是得到干净材料!
本研究结果表明!O95:931茎段外植体最佳的消毒方法
组合为 ’.R酒精 %# PK#Q$w氯化汞 $# 025% 氯化汞
使用时间短"$& 025#污染率较高!氯化汞使用时间长
"%$" 025#外植体褐化较严重!而且不利于外植体萌
芽!与李纯佳等 &$’’研究大花香水月季用吐温 @"# 与
氯化汞溶液消毒 ’ )A 025 和 +1J等 &$H’研究 ?1015[U1
时用 ’#R的酒精 (# PK氯化汞溶液 $" 025 有一定的
差异!这可能与本研究所用材料生境(基因型(取材季
节及材料的生理状态有关%
植物生长调节剂在植物组织培养中起着很重要的
作用!在 H @+,(E,,对 O95:931腋芽萌发的研究中发
现!高浓度的 H @+,"%#Q& 0L)B@$ #(E,,"%#Q$ 0L
)B@$#均会抑制 O95:931外植体的腋芽的萌发!这与崔
光荣 &’’研究月季月月红有一定的差异!其认为 Z? K
%A’$
!$# 期 O95:931月季产业化快繁体系研究
!!!! 表 C"生长素及其浓度对%Z)1;)(&&生根的影响
%&’()C"M00)82,0&-O31/&1;8,18)12+&23,1,1+,,2315 31;-823,1,0%Z)1;)(&&
培养基
Z9:270
生根率
WJJ[25LX1[9TR
每株根数
E70<9XJfXJJ[PY9XY315[39[
苗长势
-9P;X2Y[2J5 JfY315[P[1[7P
$T"Z? %$Q’ h$AQ$ ;: $QA h#Q’ < 长短不齐(
$ T"Z? K#Q#. 0L)B@$ E,, .%Q" h$AQ$ ;: HQ’ h(QA 1 长短不齐
$ T"Z? K#Q$ 0L)B@$ E,, ’.Q# h$"Q. 1<; ’Q( h"Q’ 1 长短不齐(基部有愈伤组织形成
$ T"Z? K#Q. 0L)B@$ E,, .&Q( h($Q. <;: &Q$ h(Q% 1 长短不齐(叶片部分发黄
$ T"Z? K$Q# 0L)B@$ E,, (’Q. h$"Q. : ’Q" h"Q. 1 长短不齐!叶片部分发黄
$ T"Z? K$Q. 0L)B@$ E,, H"Q. h"$Q’ <;: .QH h$Q% 1 短粗变形!叶片整体发黄甚至枯死
$ T"Z? K#Q#. 0L)B@$ C+, ’#Q& h$AQ$ 1<;: .QA h"Q% 1 长短不齐
$ T"Z? K#Q$ 0L)B@$ C+, H’QA h$%Q’ 1<;: HQ( h(Q% 1 健壮(整齐
$ T"Z? K#Q. 0L)B@$ C+, $##Q# h#Q# 1 ’QA h$Q& 1 健壮(整齐(叶片深绿
$ T"Z? K$Q# 0L)B@$ C+, A$Q’ h’Q" 1< ’Q’ h(Q$ 1 部分畸形(叶片发黄
注$1$外植体茎段*<$腋芽伸长*;$不定芽增殖情况*:$不定芽生根情况*9$移栽苗*f$移栽苗开花
EJ[9$1$ /=Y315[P*<$ +7: 93J5L1[2J5*;$ +7: 073[2Y32;1[2J5*:$ WJJ[25LY315[39[*9$ V37LY315[*f$ VJ[Y315[f3Je9X25L8
图 $"不同的酒精处理时间对茎段的影响
4356$"%9))00)82/,0;300)+)12&(8,9,(.+,8)//315 23:),1;3/310)823,1
$Q" 0L)B@$ H @+, K#Q( 0L)B@$ E,, K(# L)B@$蔗
糖为最佳的诱导腋芽伸长的培养基%
本研究认为 O95:931不定芽增殖的最适宜培养基
为 Z? K$Q" 0L)B@$H @+, K#Q#. 0L)B@$ E,, K(#
L)B@$蔗糖!在过高浓度的 H @+,培养基中!O95:931
不定芽增殖率高虽有一定增加!但不定芽纤细(植株矮
小且叶片出现畸形现象!且丛生芽整体长势较差!这与
马雪等 &$&’对树状月季 "##% @% 研究结果相差较大!其
认为Z? K"Q. 0L)B@$ H @+, K#Q$ 0L)B@$ E,,为最
佳的增殖培养基!但报道未提到培养材料的长势!而本
研究的目的是建立适合大花月季种苗产业化生产的组
培快繁技术体系!因此最佳增殖培养基的筛选是在结
合增殖效率与培养材料长势的前提下确定的%
植物组织培养过程中!尽管不同植物材料可允许
.A’$
核!农!学!报 "& 卷
的最大继代次数变化有很大不同!但往往随着继代次
数的增加会导致后代变异增加而失去商品性% 如王正
询等 &$A’研究表明!随着继代次数增加!香蕉组培苗畸
变的几率大大增加*周万海等 &"#’研究表明!继代不超
过 H% 次!不同代数间的葡萄试管苗在增殖率(生根率
和成苗率之间差异不显著*蒲秀琴等 &"$’研究表明!东
方百合组培苗继代次数在 ( 代时最优*朱海生等 &""’研
究显示!明草莓叶盘离体继代培养 (# 次以内能稳定
遗传% 在本研究中!随着继代次数的增加!O95:931增
殖倍数整体呈先下降然后逐步趋于稳定的趋势% 但与
-1\251B3JM: 等 &"(’研究 @"1& 4+$1.*& ‘7&%/;.%& 经由
愈伤组织分化出的不定芽结果有一定差异!其研究结
果表明!随着继代次数的增加!愈伤分化成不定芽的能
力下降!且培养 $" 周后终止产生不定芽% 而本研究不
定芽增殖系数虽在前期有下降过程!但随后增殖效率
趋于稳定!而且本研究采用直接器官发生途径获得再
生植株!未经过愈伤诱导及愈伤分化诱导!初步结果认
为!对于月季组织培养!直接器官发生途径在培养代数
上优于间接器官发生途径% 张志勇等 &"%’研究表明!铁
皮石斛组织培养长期继代会导致种性退化!但并未指
出适宜的培养代数!虽然本研究获得 O95:931组培苗
经过 $# 代培养!仍能保持母本的特性!但是对于培养
材料能够培养多少代仍需要进一步进行研究!一方面
对组培生产种苗品质进行保证!另一方面为降低生产
成本提供数据支持%
在对每丛不同起始接种芽数研究发现!随着起始
接种芽数的增多!不定芽数量逐步增多!但是增殖系数
先有少量降低!然后逐步趋于稳定% 本研究结果显示!
接种 " 个芽为一丛的组为 O95:931最佳继代选择!在
空间利用率上接种 " 个芽为一丛的组比接种 $ 个芽为
一丛的组空间利用率高!而且比接种 ( 个芽为一丛的
组芽整体长势好!后期生根诱导时!不定芽利用率高!
在已有月季研究文献中尚未见到此方面报道%
在已有关于月季组培的相关文献中!刘会超等 &A’
对粉和平月季快繁体系建立研究认为粉和平月季生根
诱导 (#: 后才能开始进行移栽*张圣芸 &".’研究月季丛
中笑(红双喜(桔红潮等时报道幼芽在生根培养基上经
过 " 周左右诱导出现根原基!在幼根尚未长出时既出
瓶种植!但其成活率只有 ’%Q"R% 本研究中 O95:931
月季只需要诱导生根 "#: 左右就可以进行移栽幼苗!
此时不定根根长度约为 #Q. )$ ;0!比刘会超等报道
的移栽时间提前了 $#:% 研究还发现控制根的长度在
#Q. )$ ;0时移栽较容易!这比张圣芸的研究中观察
根原基的出现为移栽条件要容易控制!且组培苗移栽
成活率为 A.R!达到工厂化生产育苗的要求%
K"结论
综上所述!对于 O95:931最佳组培快繁体系的建
立!最佳消毒处理方式是先用 ’.R的酒精处理 %#P后
再用 #Q$R的氯化汞消毒 $#025*腋芽萌发诱导的最适
宜培养基为 Z? K#Q. 0L)B@$ H @+, K#Q#. 0L)B@$
E,, K(# L)B@$蔗糖*不定芽增殖的最适宜培养基为
Z? K$Q" 0L)B@$H @+, K#Q#. 0L)B@$ E,, K蔗糖
(# L)B@$*继代时接种 " 个芽为一丛为最佳接种方式*
最适宜的生根培养基为 $T"Z? K#Q. 0L)B@$ C+, K
(# L)B@$蔗糖!最适宜的移栽时机以不定根长度介于
#Q. )$ ;0之间为宜!整个快繁体系达到产业化生产
要求%
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